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1、- 1 - 选修选修1 1生物技术实践知识清单（填空背读版）生物技术实践知识清单（填空背读版） 专题专题 1 1 传统发酵技术的应用传统发酵技术的应用 课题课题 1 果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作 1. 果酒制作菌种是 ， 是一种单细胞 ， 真核生物， 代谢类型为 ， 适宜条件下进行 生殖。 酵母菌在有氧条件下进行 呼吸 ，无氧条件下进行 发酵产生 。 （ 1 ） 有氧呼吸反应式： （ 2 ） 无氧呼吸反应式： (制酒原理： ) 2. 果醋制作菌种是 ， 生物，代谢类型为 ，以 方式增殖。原理如下： （1） 当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将果汁中的 分解成 。 （2） 当 时，醋酸菌将 变为

2、，再变为 。 3. 葡萄酒的自然发酵，菌种来自 ；工业酿酒可在 条件下人工接种 菌种。 4. 葡萄酒呈现深红色的原因： 。 5. 在传统酿酒过程中，一般不需要严格的灭菌过程，是因为 。 6. 果酒制作中，酒精含量达一定程度后 ，CO2 也不产生，原因可能是 。 7. 喝剩的果酒放置一段时间后会变酸，原因是 。 8. 制作果醋时，变酸的酒表面常常有一层白色菌膜，这层白色菌膜是 形成的。 9. 果酒和果醋制作流程：挑选葡萄 榨汁 (果酒) (果醋) （1） 新鲜的葡萄应 。若先去梗再冲洗，会造成 。 （2） 冲洗的目的是 ，但不能 ，以 。 （3） 葡萄汁装入发酵瓶，要留约 1/3 的空间，目的是

3、 。 （4） 果酒制作温度控制在 ，时间为 ；果醋制作温度控制在 ，时间为 。 （5） 果酒制作 ，果醋制作 。 10. 果酒和果醋制作的发酵装置（见右图） （1） 充气口：在酒精发酵时应 ；在醋酸发酵时连接充气泵泵入 。 （2） 排气口：酒精发酵时排出 2；醋酸发酵时排出 。 （3） 出料口：取样、监测。 （4）排气口连接长而弯曲的胶管目的是 。 注：若使用带盖的瓶子制果酒果醋：在发酵过程中，每隔 12h 左右将瓶盖 一次，以放出 ，此后再将瓶 盖拧紧。当发酵产生 后，再将瓶盖 ，盖上一层 ，进行制果醋的发酵。 11. 酒精检测：在 条件下， 的 与酒精反应呈 。 课题课题 2 腐乳的制作腐

4、乳的制作 1. 腐乳制作的菌种主要是 ，丝状 ， 生物，代谢类型为 ，进行 生殖。 2. 腐乳制作原理： 3. 腐乳制作流程：让豆腐上长出毛霉 加 装瓶密封腌制。 。 （ 1 ） 豆腐含水量为 左右为宜。含水量过高，豆腐 ；含水量过低，不利于 。 （ 2 ） 豆腐上长毛霉：利用空气中的 ，温度控制在 ，保持一定 ，5d 后豆腐块表面布满菌丝； 现代腐乳生产是在严格 条件下将优良 菌种直接接种在豆腐上， 这样可 。 （ 3 ） 加盐方法： ，随层数加高而 盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些，以有效 。 盐的作用：豆腐与盐的质量比为 。盐具有 的作用。盐浓度过低， 不足以 ，可能导致豆腐 ；盐浓度过

5、高，会影响 (苦咸)。 （ 4 ） 卤汤由 及各种 组成。卤汤中酒的含量一般控制在 左右，酒具有 的作用； 香辛料具有 的作用。酒精含量过高，腐乳成熟时间会 ；含量过低，不足以 ，可能导致豆腐 。 （ 5 ） 密封腌制：创造 环境，利用 产生的酶继续 发酵，促进腐乳的后熟。 课题课题 3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 1. 泡菜制作的菌种是 ， 来自 。 常见乳酸菌有 和 ， 其中 常用于生产酸奶。 2. 乳酸菌属于 生物，代谢类型为 ，以 方式增殖。 3. 泡菜制作原理：乳酸菌在 条件下进行 发酵，将 分解成 。 （反应式： ） 4. 含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶，

6、是因为 。 5. 选用的蔬菜要 ，否则蔬菜中的 易被还原为 。膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“ ” 形式随尿排出，只有在特定的条件下(如适宜的 和一定的 作用)，才会转变成致癌物 。 6. 配制盐水：清水与盐的质量比为 ，盐水要 。煮沸的目的是 ，冷却是 。盐有 的作用。盐水浓度不能太高，因为 。 7. 在冷却后的盐水中加入少量“陈菜泡液” ，目的是 。 8. 加入调味料后要装坛密封(坛盖边沿水槽注水)，目的是 。 9. 泡菜中亚硝酸盐的含量与 、 和 有关。温度 、食盐用量 、腌制时间 ，易造 成 ，使亚硝酸盐含量 。一般在腌制 后，亚硝酸盐的含量开始 。 10. 亚硝酸盐含量的测定 （

7、1）方法： 。 （2）原理：在 酸化条件下，亚硝酸盐与 发生 反应后，与 N-1- 萘基乙二胺盐酸盐结合形成 色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的 进行目测比较，可以大致估 算出泡菜中亚硝酸盐的含量。 （3）步骤：配制溶液制备 制备 。 11. 发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是 。泡菜腌制过程中，亚硝酸盐的含量 。 12. 从开始制作到泡菜质量最佳这段时间，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌数量 ，杂菌数量 ， 原因是 。 专题专题 2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 课题课题 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养 1. 培养基按物理性质分为 培养基和 培养基，

8、区别是固体培养基中加入了凝固剂 ；按用途分为 培养 基和 培养基。微生物可在 培养基表面形成肉眼可见的 ，固体培养基可用于微生物的 。液体培养基可用于细菌的 ，目的是 。 2. 各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 。另外，培养基还需要满足微生物生长对 、 以及 的要求。如培养细菌(如乳酸菌)时需要在培养基中添加 ，培养霉菌(真菌)时需 将培养基的 pH 调至 ，培养细菌时需将 pH 调至 ，培养厌氧微生物时则需要提供 的条件。 3. 无菌技术的目的是 ，关键是创造 条件，防止 。 4. 消毒和灭菌 （1） 消毒：用 的物理或化学方法杀死物体 微生物， 芽孢和孢子。 常用方法： 法；牛奶用

9、法，既杀死牛奶中 ，又使牛奶中的 不被破坏；用 擦 拭双手、 消毒水源是 法；接种室、接种箱或超净工作台用 法。 （2） 灭菌：用 的理化因素杀死物体 的微生物，包括 。 常用方法： 灭菌：在火焰的 层灼烧，可 的灭菌，如 。 灭菌：工具为 ，如 等耐高温、需保持干燥的物品。 灭菌：工具为高压蒸汽灭菌锅，如 。此法 。 5. 制备培养基的步骤：计算称量 (调节 )灭菌 。 （1）在 调节 pH，若先灭菌后调 pH 易 。 （2）培养基 灭菌，培养皿 灭菌。 （3）平板冷却凝固后需 ，目的是 。 6. 微生物接种方法(分离纯化细菌方法) （1） ：通过 (工具)在 培养基表面 的操作，将聚集的菌

10、种 到培养 基表面。在数次划线后，可以分离到由 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即 。 灼烧接种环目的：第一次灼烧： ；以后每次划线前灼烧： ；划线结束灼烧： 。灼烧次数划线次数 。 在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免 。 每次从上一次划线的末端开始，目的是 。 （2） ：用 (工具)和 将菌液进行一系列的 ，然后用 (工具)将 的菌液分别 地涂布到 培养基的表面进行培养。 在 的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成 ，从而能在培养基表面形成 。 梯度稀释原因： ；目的： 。 梯度稀释中，每次取样前需用手指轻压移液管橡皮头，吹吸三次，目的是 。 涂布器浸在酒精中的主要目的是 ；为保证

11、菌液均匀分布，应在涂布时 。 注：以上操作均在 旁进行，防止 。若要分离并统计活菌数，应选用 。 平板划线法不能用于活菌计数的原因是 。 7. 菌种保藏：频繁使用的菌种用 ( 冷藏室)，但保存时间不长，因为 ；需长 - 2 - 期保存的菌种用 ( 冷冻箱)。 课题课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1. 在自然界寻找目的菌：要根据目的菌对 的要求，到 中去寻找。实验室目的菌株筛选原理：人 为提供有利于 生长的条件(包括 等)，同时 其他微生物的生长。 2. 选择培养基：允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 例如：以 为唯一氮源的培养基可

12、筛选出尿素分解菌；以 为唯一碳源的培养基可筛选出纤维素分解菌； 以 为唯一碳源的培养基可筛选出石油分解菌；缺乏有机碳源的培养基可筛选出 ；缺乏氮源的培养 基可筛选出 ；加入抗生素的培养基可筛选出 等真菌。 3. 微生物计数方法 （1） （活菌计数法） 原理：当样品的 时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平 板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 原则：设置 ，同一稀释度下至少涂布 个平板，增强实验说服力和准确性；重复组结果应一致。 为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。 计算公式： 每克样品中的菌株数 (个/mL)。 其中，C 代表某一稀释度下平板

13、上生长的 ， V 代表涂布平板时所用的 (一般为 )，M 代表 。 结果： 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ， 原因是 。 需要设置 作为空白对照，目的是 。 （2） 显微镜直接计数法 主要用具： 和 。 血细胞计数板使用方法： “ ” ，即先盖盖玻片，后滴培养液， 再用吸水纸吸。 计算公式：1mL 培养液中细胞个数 (个/mL) 结果：估算值比实际值偏大，因为 。 4. 实验流程：土壤取样 涂布培养与观察计数。 （1） 土壤取样： 有“微生物的天然培养基”之称。土壤取样时应选取取富含 、pH 接近 的、 距地表约 的土壤层。取一定量土溶于 中，制成土壤溶液。 （2） 将样品进行 ： 直接影

14、响平板上生长的菌落数目。 用一定稀释范围的样品液进行涂布培养， 以保证获得菌落数在 之间、适于计数的平板。测定细菌数量一般选用 稀释液，测定放 线菌数量一般选用 倍稀释液，测定真菌数量一般选用 倍稀释液进行平板培养。 （3） 培养与观察：不同种类的微生物，往往需要不同的 和 。将样品 到固体培养基表面，不能用平 板划线法。为 ，需将培养皿呈 状态放置。每隔 24h 统计一次菌落数目， 最后选取 时的记录作为结果，这样可以防止 。一般来说，在一 定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的 ，这些特征包括菌落的 等方面。 （4） 计数：当 时，取同一 下至少 个平板进行计数，求出 ，并根据所对应的 计

15、 算出样品中细菌的数目。用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在 。 5. 的培养基(空白对照)上有菌落生长，说明培养基被杂菌污染。 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落的 远大于选择培养基时，说明选择培养基具有 作用。 6. 分解尿素的细菌合成的 能将尿素分解为 ，使培养基的 增强，pH 。在以 为唯一氮源的选择培 养基中加入 指示剂(鉴别培养基)培养细菌， 若 pH 升高， 指示剂将变 ， 可初步确定该种细菌能够分解尿素。 7. 伊红美蓝培养基属于 培养基，大肠杆菌代谢产物会和伊红、美蓝发生反应，使菌落呈现 色。 课题课题 3 分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离 1. 纤维素是一种多糖，其

16、组成单位是为 。纤维素酶是一种 ，它至少包括三种组分，即 （4） 涂布培养：用 培养基(物理性质)、 培养基(用途)。为 ，需将培养皿呈 状态放置。此步也可用 法。 （5） 筛选菌株：挑选产生 的菌落。透明圈越大，说明 。(如图) 4. 以 为唯一碳源的 培养基可初步筛选出纤维素分解菌，为进一步确定得到的是纤维素分解 菌，还需要进行 实验。纤维素酶的发酵方法有 和 两种。 专题专题 4 4 酶的研究与应用酶的研究与应用 课题课题 1 果胶酶在果汁生产中的应用果胶酶在果汁生产中的应用 1. 果胶： （1）作用：组成植物 以及 的主要组成成分之一。 （2） 成分：由 聚合而成的一种高分子化合物。

17、（3） 特点： 。在果汁加工中，果胶的存在易导致果汁 低，果汁 。 2. 果胶酶： （1）来源： 、 、 和 均能产生果胶酶。食品加工业中的果胶酶是由 发酵生产的。 （2） 作用：将不溶性的果胶分解成可溶性的 ，使浑浊的果汁变得 。 瓦解植物细胞的 和 ，使榨取果汁变得更加容易，提高 。 （3） 组成：是分解果胶的一类酶的总称，包括 、 、 等。 （4） 化学本质：果胶酶是 ，能被 水解掉。 3. 酶的活性与影响酶活性的因素 （1） 酶的活性：概念：指酶 的能力。 表示方法：酶活性的高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的 来表示。 酶反应速度的表示方法： 来表示。 （2） 影响酶活性

18、的因素： 、 和 等。 4. 实验设计 【实验一】探究温度(pH)对酶活性的影响 （1） 实验变量：自变量： ； 因变量： ； 无关变量： 等。 （2） 操作方法：在不同 下，将一定量的 加入一定量的 中，反应 ，再将反应液 同样长的时间，用量筒测量滤出的果汁的体积。 注：探究温度对酶活性影响时，在果泥和果胶酶混合之前，将它们分装在不同的试管中恒温处理，可以 。 探究温度(pH)对酶活性的影响时，不同的温度(pH)梯度之间就可以作为 。 （3） 判断果胶酶活性高低的方法 测定单位时间内产生果汁的 (或 )来判断。获得的果汁越多，说明果胶酶的活性 。 比较果汁的 来判断果胶酶的活性。果汁越澄清，

19、表明果胶酶的活性 。 【实验二】探究果胶酶的用量 （1） 实验变量：自变量： ；因变量： ；无关变量： 等。 （2） 判断果胶酶用量是否合适的思路 如果随着酶的用量增加，过滤得到的果汁体积也增加，说明酶的 ； 当酶的用量增加到某个值后，再增加酶的用量，过滤得到的果汁的体积 ，说明酶的 用量已经足够，那么，这个值就是 。 课题课题 2 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 1. 加酶洗衣粉 （1） 概念：加酶洗衣粉是指含有 的洗衣粉。 （2） 酶制剂 常用种类： 、 、 和 四类。 应用最广泛、效果最明显的种类是： 和 。 作用原理：酶制剂能将 分解为 ，使污迹易从衣物上脱落。如碱性

20、蛋白酶能 C1酶、CX酶 葡萄糖苷酶 将血渍、奶渍中含有的大分子蛋白质水解成可溶性的 或小分子 ，脂肪酶将脂肪水解成 和 。 。纤维素 。 2. 纤维素分解菌的筛选方法是 。刚果红(简称 CR)是一种染料，能与纤维素形成 ，当纤维 素被分解后，培养基中会出现以 为中心的 ， 可反应 。 3. 实验流程：土壤取样 将样品涂布到 的培养基上挑选产生 的菌落。 （1） 土壤取样：选择 的土壤环境采集土样。取一定量土溶于 中，制成土壤溶液。 （2） 选择培养(扩大培养/富聚培养)：以 为唯一碳源的培养基，属 培养基(物理性质)、 培养基(用 途)。选择培养的目的是 ；振荡培养的目的是 。 （3） 梯度

21、稀释：目的是 。 影响酶活性的因素： 、 和 。 生产方式：通过 生产出能够 、 、忍受 和 的酶。 （3）优点：加酶洗衣粉降低了 和 的用量，使洗涤剂朝 的方向发展，减少对 的 污染。普通洗衣粉中含有磷，含 污水的排放可能导致 和 的大量繁殖，造成水体的 (富营养化)。 2. 实验设计 【问题 1】普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍洗涤效果的区别 变量分析：自变量： ；因变量： 。 对照实验：对照组：普通洗衣粉污染物；实验组： 污染物。 - 3 - 【问题 2】加酶洗衣粉的最适洗涤温度 变量分析：自变量： ；因变量： 。 对照实验：不同实验组之间的洗涤效果形成 。 【问题 3】不同类型的加酶洗

22、衣粉的洗涤效果 变量分析：自变量： ；因变量： ；无关变量：污渍的 、 等。 对照实验：不同加酶洗衣粉的 互为对照。 3. 判断洗涤效果的方法和标准： 。 4. 影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素： 。 课题课题 3 酵母细胞的固定化酵母细胞的固定化 1. 直接使用酶的实际问题：酶通常对 、 、 和 等条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶 ，不能被 ，提高了 ；反应后酶会混在产物中，可能影响 。 2. 固定化酶的应用实例生产高果糖浆 （1） 反应原理：高果糖浆的生产需要使用 ，它能将葡萄糖转化成 。 （2） 生产原理： 使用 技术， 将 固定在一种颗粒状的 上， 再将这些酶颗粒装入 内， 柱子底端装上

23、分布着许多小孔的 。 无法通过筛板上的小孔，而 可 以自由出入。 （3） 生产过程：将 溶液从反应柱的上端注入；使葡萄糖溶液流过反应柱， 与 接触；转化成的 ，从反应柱的下端流出。 （见右图） （4） 固定化酶的优缺点 优点： 。 缺点：一种酶只能催化一种反应，不能催化 的酶促反应。 3. 固定化酶和固定化细胞技术 （1） 概念：利用 或 方法将 固定在一定空间内的技术。 （2） 常用方法：包括 、 和 。一般来说，酶更适合采用 和 固定 化， 而细胞多采用 固定化， 这是因为 。 图 A： 图 B： 图 C： （3） 固定化细胞技术的优缺点 优点： 。 缺点： ，大分子物质不易进入细胞，反应

24、时需要为固定化细胞提供 。 （4） 载体：本课题使用 来固定细胞，即将微生物细胞均匀地包埋在 载体中。常用的载体 有 、 、 、 和 等。本实验选用 作载体包埋酵母细胞。 4. 固定化酵母细胞的实验操作 （1） 制备固定化酵母细胞 酵母细胞的活化：向干酵母中加入 ，调成糊状，使其 。 注：活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复 的生活状态。 配制 溶液：浓度为 。 配制 溶液：溶解海藻酸钠采用 加热，边加热边 。加热时要用 ，或者 ，反复几 次，直到完全溶化。如果加热太快，海藻酸钠会发生 。海藻酸钠溶液采用 法灭菌。 海藻酸钠溶液与 混合： 向灭菌后冷却至 的海藻酸钠溶液中加入 的酵母细胞，

25、进行充分搅拌， 使其混合均匀，再转移至 中。 注： “冷却至室温”的目的是 。 固定化酵母细胞：以恒定的速度 地将注射器中的溶液滴加到配制好的 2 溶液中，观察液滴在 CaCl2 溶 液形成 的情形。将这些凝胶珠在 CaCl2 溶液中浸泡 左右。 注：CaCl2 作用： 。 “浸泡 30min” ： 。 （2） 用固定化酵母细胞发酵 固定好的酵母细胞( )用蒸馏水 23 次，加入到用于发酵的的 溶液中，于 25下 发酵 24h。 注： “冲洗”的目的： 。 葡萄糖溶液作用： 。 5. 固定化酵母细胞实验操作的结果分析与评价 （1） 如果制作的凝胶珠颜色 ，说明海藻酸钠的浓度 ，固定的酵母细胞数

26、目 ；如果形成的凝 胶珠不是 形，则说明海藻酸钠的浓度 ，制作失败，需要再做尝试。可以制备 作对照。 - 4 - （2） 利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了 ，同时会闻到 ，而不含酵母菌的凝胶珠 所做的对照组实验则无此现象。 6. 如果希望反复使用固定化酵母细胞， 就需要 ， 实验中用到的仪器、 溶液需消毒灭菌， 如 CaCl2 溶液、海藻酸钠溶液需 灭菌。在工业生产中，细胞的固定化是在严格 的条件下进行的。 专题专题 5 5 DNADNA 和蛋白质技术和蛋白质技术 课题课题 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离 1. 蛋白质分离的理论依据：蛋白质各种特性的差异，如分子的

27、、所带 的性质和多少、 、 性质和对其他分子的 等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 2. 分离蛋白质的方法 （1） 凝胶色谱法 概念：也称做 ，是根据 的大小分离蛋白质的 有效方法。 凝胶：是一些微小的 ，这些球体大多数由 构成， 如 或 。在小球体内部有许多 。 原理：当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的 蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，通过凝胶的 时 间 ； 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道， 只能在凝胶外部移动，路程 ， 移动速度 ， 通过凝胶的时间 。因此可将各种相对分子质量不同的蛋白质分子分离。 （原理见右上图） 分离过程： 流动快、 流动慢先收集 后

28、收集 。 （2） 电泳 概念：指 在电场作用下发生 的过程。 原理：在一定的 下，多肽、核酸等生物大分子的 可解离基团会带上 ，在电场的作用下，这 些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 影响电泳速率的因素：待分离样品中各种分子 的差异以及分子本身的 、 的不同，使带电分 子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的 分离。带电性质决定 ，分子大小决定 。 方法：常用的电泳方法有 电泳和 电泳。 A. 琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率取决于各种分子 的差异及 的不同，从而得以分离。 B. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带

29、 及 等因素。为了消除净电荷对迁移 率的影响，可以在凝胶中加入 。SDS 能与各种蛋白质形成 蛋白质SDS 复合物，SDS 所带 的量大大超过了蛋白质 分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别， 使 电泳迁移率完全取决于 。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中， 小分子的移动速度 ，大分子的移动速度 ，分子向 移动。 注：在测定蛋白质分子量时通常使用 电 泳 。 SDS 能使蛋白质发生 。由几条肽链组成的蛋白质复合体 在 SDS 的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 的分子量。 3. 缓冲溶液 （1） 作用：在一定范围内，抵制外界的 对溶液 pH 的影响，维持 基本不变。 （2）

30、配制：通常由 12 种 溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同 pH 范围内使用的缓冲液。 4. 蛋白质提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 （1） 样品处理 血液由 和各种 组成，其中 最多。血红蛋白由 条肽链组成，包括两条 肽链和两条 肽链。其 中每条肽链环绕一个 ， 此基团可携带一分子 或一分子 。 血红蛋白因含有血红素而呈现 色。 注：血红蛋白呈现红色这一特点对进行血红蛋白质分离的意义： 。 红细胞的洗涤 a. 目的： (如血浆蛋白)，获得纯净红细胞。 b. 过程：血样 离心吸出上层透明 (含 )，将下层暗红色的 倒入烧杯加 - 5 - 入 倍体积的 再 离心重复 次

31、，直至上清液不再呈现 得到纯净红细胞。 注：为防止 ，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 。 生理盐水作用： 。 洗涤次数 ，无法除去血浆蛋白；离心速度 和时间 会使 。 血红蛋白的释放 a. 目的： 。 b. 过程：红细胞加 到原血液的体积加 40%体积的 磁力搅拌器上搅拌红细胞 ，释放血红蛋白 注：蒸馏水作用： 。 甲苯作用： 。 分离血红蛋白溶液 a. 目的： 。 b. 过程：混合液 用 过滤，除去 中静置片刻分离 出下层的 。 试管中混合液离心后分为四层，从上往下数：第 1 层：无色透明的 ；第 2 层： 白色薄层固体，是 的沉淀层；第 3 层：红色透明液体，是 的水溶 液；第 4 层：暗

32、红色的 。 （2） 粗分离透析 目的： 。 原理： 。 方法：将 溶液装入透析袋中，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 12h。 （3） 纯化凝胶色谱操作 目的：通过 法将相对分子质量不同于 的杂蛋白除去。 过程 a. 凝胶色谱柱的制作 b. 凝胶色谱柱的装填：本实验使用的是 。干凝胶用 充分溶胀，配 成 。为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用 加热，逐渐升温至 接近沸腾，这种方法不断 ，还可以 ，排除胶粒内 的 。装填时可 色谱柱，使凝胶装填 。色谱柱内不能有 存在，一旦 发现有气泡，必须重装，因为 。 装填完后，立即用 缓冲液洗涤平衡凝胶，使凝胶 。 c. 样品的加入和洗脱：在色谱柱顶

33、端滴加 样品，在 50cm 高操作压下用 缓冲液 洗脱，待红色的 接近色谱柱底端时用试管收集流出液，每 5mL 收集一管。如 果红色区带 地移动，说明色谱柱制作成功。 注：洗脱过程中加入物质的量浓度为 20mmol/L 的磷酸缓冲液(pH 为 7.0)的目的是 。 （4） 纯度鉴定对分离的蛋白质样品进行纯度鉴定，使用最多的方法是 电泳。 专题专题 6 6 植物有效成分的提取植物有效成分的提取 课题课题 1 植物芳香油的提取植物芳香油的提取 1. 植物芳香油具有很强的 ，其组成比较复杂，主要包括 及其 。 2. 植物芳香油的提取方法有 、 和 等。具体采用哪种方法要根据 来决定。 （1） ：是利

34、用水蒸气将 的植物芳香油携带出来，形成 ，冷却后，混合物又会 重新分出 和 。根据原料放置的位置又可分为 、 和 。适用于提取 等挥发性强的芳香油。水中蒸馏不适用于柑橘和柠檬，因为会导致 和 等问题。 （2） 压榨法：通过 ，压榨出果皮中的芳香油，主要适用于 芳香油的制备。 （3） 萃取法：将 的植物原料用有机溶剂浸泡，使芳香油溶解在 中，然后蒸发出 ，就 可获得纯净的植物芳香油。适用于 的有效成分的提取，如 的提取。 提取效率主要受 和 影响。 蒸馏温度 、 时间 ， 产品品质就会比较差。 要提高精油品质， 在操作中需要通过控制 来实现 的目的。 当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的

35、变化 趋势是 。 蒸馏得到的 乳浊液是玫瑰油与水的混合物，加入 可增加盐浓度，促进 ，分层原因是因为 。 油水分层后可用 分出油层。 油层中有一定的水分，可以加入 2 4 除水。 过滤的目的是 (固体 Na2SO4)。 （3）蒸馏装置中冷凝管的作用： 。 4. 橘皮精油的提取 （1） 提取方法：不适于使用水中蒸馏法，因为会产生 和 等问题，一般采 用 法。 （2） 实验流程： 漂洗压榨 静置 橘皮油。 橘皮处理：为了 ，需要将柑橘皮 ，并用 浸泡 10h 以上。石灰水浸 泡的目的是 。 橘皮的压榨：为了 ，压榨时要加入相当于橘皮质量 0.25%的 和 5%的 。 压榨液的处理：压榨液中含有橘皮

36、精油和大量水分，还有一些糊状残渣等杂质。先用 过滤除去 ，然后离心除去 ，再用 或 将上层的橘皮油分离出来。橘皮油还含少量的 水和果醋，需在 510下静置 57d，使 沉淀，用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分通过 过 滤。滤液和吸出的上层橘油合并，成为最终的橘皮精油。 5. 提取到的精油需要 保存，目的是 。 课题课题 2 胡萝卜素的提取胡萝卜素的提取 1. 胡萝卜素根据 的数目可划分为 三类， 是其中最主要的组成成分。 2. 胡萝卜素的作用 可治疗 缺乏症，如夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等，因为 (在人或动物的 小肠、肝脏等器官) 。常用的 ，广泛地用作食品、饮料、饲料的添加剂。 具有

37、的作用。 3. 胡萝卜素是 结晶，化学性质 ，不溶于 ，微溶于 ，易溶于 等有机溶剂。 4. 胡萝卜素的提取途径：从 中提取、从大面积养殖的 中获得、利用 生产。 5. 根据胡萝卜素 的特点，可以用 提取胡萝卜素。 6. 胡萝卜素提取实验流程：胡萝卜 萃取 胡萝卜素。 7. 萃取剂选用原则： (乙醇、丙酮能与水混溶)。还要对人体 (甲醇、丙酮、四氯化碳有毒)、 、 、 。 8. 萃取胡萝卜素应选用 等 有机溶剂做萃取剂。萃取的效率主要取决于 ；还受 的影响。萃取前要将胡萝卜进行 。粉碎的目的 是 。原料要进行干燥，因为 ，一般情况下，提取效率与原料颗粒的含水量呈 ；干燥时要注意控制 ，因为 。

38、 9. 萃取过程应避免 加热，采用 加热，因为 。在 加热瓶口安装 装置，目的是 。萃取液的浓缩可直接使用 装置，浓缩的目的是 (或 )。浓缩前还要进行 ，其目的是 。该实验最终将在 装置的 中收集到胡萝卜素粗品。 10. 对胡萝卜素粗品的鉴定采用 法，原理是： 。装置中玻璃盖的作用是 ；层析液不可没及样品原点， 于 层析液中， 。用 注射器针头在基线上 A、D 点点 ，B、C 点点 。 点样应快 ，点样后在基线上形成 ，注意保持滤纸 。若实验后萃取样品出现和 3. 玫瑰精油的提取 （1） 玫瑰精油性质：化学性质 ，难溶于 ，能随 一同蒸馏(据 此可用 法提取)； (据此可用 法提取)。 （2） 提取方法：鲜玫瑰花采用 法，干玫瑰花采用 法。 加 （3） 实验流程：鲜玫瑰花清水 蒸馏油水混合物 注：蒸馏瓶中的液 体量不能太多，为 蒸馏瓶的 1/32/3 标准样品处于同一水平的 ， 说明 ， 提取胡萝卜素的实验 。 加 过滤 玫瑰油。 鲜玫瑰花与清水的质量比为 。玫瑰花要在花开的 采收，因为在 此阶段花朵 最高。