第二十四章-生物转化与甾体药物课件.ppt

1、陈代杰陈代杰上海来益生物药物研究开发中心上海来益生物药物研究开发中心Shanghai Health-Creation Centre for Biopharmaceuticals R&D11）应用基因工程技术来构建具有高度专一性和高）应用基因工程技术来构建具有高度专一性和高转化率的基因工程菌；转化率的基因工程菌；2）增加底物在水相中的溶解性；）增加底物在水相中的溶解性；3）改良固定化酶或固定化细胞的技术；）改良固定化酶或固定化细胞的技术；4）开发连续转化和产物回收的技术；）开发连续转化和产物回收的技术；5）在培养基中应用像环糊精类物质来提高底物转）在培养基中应用像环糊精类物质来提高底物转化率。化

2、率。2 尽管有不少用于不饱和甾体边链尽管有不少用于不饱和甾体边链氧化的有效的化学方法，但对饱和氧化的有效的化学方法，但对饱和的脂肪族的脂肪族C-17边链的氧化反应的收边链的氧化反应的收率非常低，而用微生物转化技术除率非常低，而用微生物转化技术除去植物甾醇的边链是一种非常有效去植物甾醇的边链是一种非常有效的方法。的方法。3 尽管在甾体的分子结构中有许多尽管在甾体的分子结构中有许多可以被微生物进行羟基化的基团，可以被微生物进行羟基化的基团，但目前在工业规模大量用微生物转但目前在工业规模大量用微生物转化技术进行的羟基化反应主要是化技术进行的羟基化反应主要是11-、11-和和16-位点的羟基化反位点的

3、羟基化反应。其它一些可以在工业规模用微应。其它一些可以在工业规模用微生物转化技术进行羟基化反应的位生物转化技术进行羟基化反应的位点包括有点包括有7-、9-和和14-。4COOHHOHOHHOOOCH3OCH3HOOCH3OCH3HOOCH3HNCH3HOHOC2H5HOC2H5HODeoxycholic acid(I)Hecogenin(II)Diosgenin(III)Solasodine(IV)Ergosterol(V)Stigm asterol(VI)Sitosterol(VII)Cholesterol(VIII)I：脱氧胆酸；II：海柯皂配基；III：薯蓣皂苷配基；IV：茄解定；V：麦

4、角甾醇;VI：豆油甾醇；VII：谷甾醇；VIII：胆甾醇；59111213148171615105671234HO19182023222625242127HOHOHO2425262728282922232829CholesterolCampesterolSitosterolStigmasterol6l氧氧 化化 反反 应应（）羟基化（）羟基化 所有甾体母核和角甲基位置均几被羟化所有甾体母核和角甲基位置均几被羟化 能在边链上若干位置上羟基化能在边链上若干位置上羟基化（）醇基氧化（）醇基氧化 氧化饱和链上醇基至酮基氧化饱和链上醇基至酮基氧化丙烯基或高丙烯基至氧化丙烯基或高丙烯基至、-不饱和酮不饱和

5、酮（）环氧化作用（）环氧化作用（Epoxidation）（）（）碳碳键的裂开碳碳键的裂开 氧的插入（氧的插入（Insertion）形成酯、醇、酮、内酯和酸形成酯、醇、酮、内酯和酸 逆醛醇缩合反应（逆醛醇缩合反应（Retroaldol reactions）碳键裂开产生非官能团化的产物（碳键裂开产生非官能团化的产物（Unfunctionalized products）7（）（）双键的导入反应双键的导入反应 饱和饱和3酮和酮和4-3酮甾体的酮甾体的1位脱氢位脱氢 饱和饱和3酮和酮和-3酮甾体的酮甾体的4位脱氢位脱氢 伴着环芳香化的位脱氢伴着环芳香化的位脱氢 1（10）53甾醇的芳香甾醇的芳香 化化

6、羟基、酯或过氧化合的消除羟基、酯或过氧化合的消除（）过氧化反应（）过氧化反应 5，7-双烯间形成双烯间形成5、8-表二氢化合物表二氢化合物 氢过氧化（氢过氧化（Hydroperoxidation）杂原子氧化杂原子氧化 立体专一性氧化硫醚到亚砜立体专一性氧化硫醚到亚砜 胺胺 被被 氧氧 化化 到到 酮酮 8 还还 原原 反反 应应（）（）还还 原原 酮酮 到到 醇醇（）（）还还 原原 醛醛 到到 醇醇（）（）还还 原某氢过氧化物到醇原某氢过氧化物到醇（）（）还还 原原 烯烯 醇醇 到到 伯伯 醇醇（）（）双双 键键 饱饱 和和 还还 原原1，4-3-酮到酮到4-3-酮酮 还还 原原4-3-酮到饱

7、和酮到饱和-酮酮 还还 原原4，6-3-酮到酮到4-3-酮酮 还还 原原1，6-20-酮到饱和酮到饱和20-酮酮 厌厌 氧氧 性性 脱脱 羟羟 基基 9l异异 构构 化化（）（）6-3-酮异构化成酮异构化成4-3-酮酮（）（）-高环化（高环化（D-Homoannulation）（）（）反频哪酮重排（反频哪酮重排（Retropinacolic rearrangement）（）（）醇差向（立体）异构醇差向（立体）异构（）（）-表二氢化合物重排到桥氧醇表二氢化合物重排到桥氧醇 l结结 合合（1）羟羟 基基 乙乙 酰化酰化（）（）糖苷化糖苷化（）（）酚酚 醚醚 形形 成成（）（）胺胺 的的 乙酰乙酰

8、化化（）甾体生物碱与碳酸相结合（）甾体生物碱与碳酸相结合10l水水 解解（1）酯化）酯化 碳碳 酸酸 酯酯 内内 酯酯 硫硫 酸酸 酯酯 （）醚醚 开开 裂裂 烯烯 醇醇 醚醚 开开 裂裂 为为 酮酮 酚酚 醚醚 开开 裂裂 为为 酚酚 苷苷 开开 裂裂 为为 醇醇 l引入引入 杂杂 原原 子子：（1）氮）氮：由：由21位醇基甾体形成位醇基甾体形成21-乙酰胺甾体乙酰胺甾体（）卤（）卤 素素：卤过氢化酶催化导入：卤过氢化酶催化导入11CH2OHCOOHHOOOCOOHOCH2OHOCOOHOCOOHOOO-C2H5COOH-CH3COOH-C2H5COOHOOCOOHOCOOHOOOChole

9、sterol(V III)(XIII)(IX)(XIV)(XVIII)(XIX)(X X)(XV)(XVI)(XVII)(XXI)(XXII)(XXIII)ADD4ADXV：甾醇甾醇C24-羧酸；羧酸；XVI：甾醇甾醇C22-羧酸；羧酸；XVII：雄甾雄甾-4-烯烯-3,17-二酮二酮(AD)；XVIII：C19-甾醇；甾醇；XXIII：雄甾雄甾-1,4-双烯双烯-3,17-二酮二酮(ADD)；其余参见文章内其余参见文章内 12HOCH2ROCH2ROCH2CH2OHROCH2COSCoAROCHCSCoAROROCH2OROCOSCoARHOHOHOOCOOCOOOCOOHR CH3=Sit

10、osterol(VII)H=Canpesteriol(XXV)HO(XXVI)(XXVII)(XXVIII)(XXXI)(XXXII)(XXX)(XV)(XIV)(XVII)(XXIX)-C2H5COSCoA-CO2OCO CoEnz-R-CH2COOH-CH3COOH-C2H5COOH图 、微生物裂解甾醇和采油甾醇边链的反应13OH OC O O HOOC H2O HOO C H3OOOOOOOOOOOOOOO HO(X V I I)(L V I I)(V I I)H O O COOOOOH OOO HO HOO HOH OH O(L V I I I)O H(X X I I I)(X V I

11、 I)(L X I I)(L X I)(L I X)(L X)(X V I I)(X X I I I)H OC O2H2OWi l d t y p eA T O C6 8 4 2S C M-1N R R LB-8 1 1 9N R R LB-1 1 0 4 5N R R LB-8 1 2 9N R R LB-8 1 2 8N R R LB-8 1 1 3 5 9B-8 1 3 514l1)添加有关的酶抑制剂添加有关的酶抑制剂l2)利用被修饰的底物进行生物转化利用被修饰的底物进行生物转化l3)利用阻断突变株用于定向生物转化利用阻断突变株用于定向生物转化15同时利用突变同时利用突变株、酶抑制剂株、

12、酶抑制剂和被修饰的底和被修饰的底物进行生物降物进行生物降解边链所得到解边链所得到的产物的产物A c OC H2O HC2H5H OOS ito stero l d eriv a tiv e(L X III)E stero n e(X X X V II)H OOOH OROOOOH OC h o le ste ro l(V III)A n d ro sta-1,4-d ie n e-3,1 7-d io n e(X X III)R=H-c h o leste ro l(V III)C 2 H 5-sito ste ro l(V II)A n d ro st-4-e n e-3,1 7-d io

13、n e(V V II)-h y d ro x y a n d ro st-4-en e-3,1 7-d io n eM y c o b ac te riaN o ca rd ia S p.w ild ty p een z y m e in h ib ito rsM y co b a c te riu m S p.m u tan tsm u ta n tsm u ta n tsOOA n d ro sta-1,4-d ien e-3,1 7-d io n e(X X III)M y co b a c te riu m S p.M y c o b ac te riu m S p.16部分边链降解的

14、甾醇产物COOHOCOOHOOOOO图 同时利用突变株、酶抑制剂和被修饰的底物进行生物降解边链所得到的产物OOCH3HOOHOHOOCH3OCOOCH3CH2OHCH2OHCH2OH(LX)(LXIV)(LIX)(LXV)(LXIV)(LXI)(LXVI)(LXVII)图 部分边链降解的甾醇产物17OOOHOOHHOOH(CH3)2NO米 非 司 酮OOHOOHCHCHOOHOHHOADD雌 酚 酮雌 二 醇11-OH-ADD炔 雌 醇雌 三 醇COOHOCH2OHO泼 尼 松炔 雌 醚COOHOCH2OHHO泼 尼 松 龙OOCOOHOCH2OHHOFCH3倍 他 米 松COOHOCH2OH

15、HOF OH确 炎 舒 松COOHOCH2OHHOFCH3CCH3COHCHCCH3O地 塞 米 松18OO4ADOOOOHE s t r o n eOHOHCCHOHCCHOHOHOHOHADD乙 炔 雌 二 醇乙 炔 雌 二 醇甲 酯雌 二 醇雌 三 醇MeOOH卵 泡 激 素OO1 9-去 甲 乙 炔 睾 酮1 9-去 甲 雄 甾-4-烯-3，1 7-二 酮OOH蛋 白 同 化 激 素OHCCHO黄 体 激 素OOOOO螺 内 酯矿 质 皮 质 激 素OOH睾 酮OOHMe甲 基 睾 酮雄 激 素OMeH甲 基 雄 甾 烷 醇 酮蛋 白 同 化 激 素OHOOH氢 化 可 的 松其 它

16、高 档 皮 质 激 素CCH2OHO19利用经过修饰的底物进行边链的选择性裂解利用经过修饰的底物进行边链的选择性裂解底物底物产物产物微生物微生物19-羟基甾醇羟基甾醇雌酮雌酮restrictus诺卡氏菌诺卡氏菌 ATCC 1488719-norsterols雌酮雌酮诺卡氏菌诺卡氏菌ATCC 191703-羟基羟基-19-1，3，5 甾醇甾醇 雌酮雌酮草分支杆菌草分支杆菌分支杆菌分支杆菌simplex节杆菌节杆菌IAM 166019-羟基羟基-4-胆甾烷胆甾烷-3-酮酮雌酮雌酮草分支杆菌草分支杆菌19-羟基羟基-胆甾醇胆甾醇-3-乙酸盐乙酸盐雌酮雌酮草分支杆菌草分支杆菌19-羟基羟基-4，7 甾

17、醇甾醇3-羟基羟基-19-nor-1，3，5（10）甾醇甾醇3-羟基羟基-19-nor-1，3，5（10），），7（8）甾甾醇醇马烯雌酮马烯雌酮马萘雌酮马萘雌酮雌酮雌酮分支杆菌分支杆菌6-19-oxidosten-eones3-乙酸基乙酸基-5-氯（氟）氯（氟）-6-19-氧化氧化-甾醇甾醇6-19-氧化氧化-AD诺卡氏菌诺卡氏菌ATCC 19170分支杆菌分支杆菌 20一些用于抑制环裂解的最为有效的抑制剂一些用于抑制环裂解的最为有效的抑制剂抑制剂名称抑制剂名称抑制机理抑制机理2,2-联吡啶联吡啶1,10-菲咯啉菲咯啉8-羟基羟基-喹啉喹啉5-硝基硝基-1,10-菲咯啉菲咯啉铜铁灵铜铁灵双硫腙

18、双硫腙二苯基二硫缩二氨基脲二苯基二硫缩二氨基脲二乙基二硫氨基甲酸酯二乙基二硫氨基甲酸酯异烟酸酰肼异烟酸酰肼黄原酸黄原酸邻苯二氨邻苯二氨4-异戊酸环庚三烯酚酮异戊酸环庚三烯酚酮硫化四乙基秋兰姆硫化四乙基秋兰姆作为作为Fe2+的抑制剂的抑制剂Ni2+,Co2+,Pb2+,SeO32-,AsO2-用于取代铁离子或阻断用于取代铁离子或阻断SH-功能功能亚甲蓝亚甲蓝刃天青刃天青正丙醇正丙醇氧化还原反应氧化还原反应21在有在有酶抑酶抑制剂制剂存在存在的条的条件下件下进行进行甾醇甾醇边链边链的选的选择性择性裂解裂解 抑制剂抑制剂产物产物微生物微生物螯合剂螯合剂2,2-联吡啶联吡啶1,10-菲咯啉菲咯啉8-羟

19、基羟基-喹啉喹啉ADADD其它雄甾烷衍生物其它雄甾烷衍生物Arthrobacter simplex 分支杆菌分支杆菌红球菌红球菌草分支杆菌草分支杆菌诺卡氏菌诺卡氏菌Arthrobacter globiformis 螯合剂和活性炭螯合剂和活性炭ADD分支杆菌分支杆菌 NRRL B-3683螯合剂和苯乙烯螯合剂和苯乙烯-二乙二乙烯苯共聚物烯苯共聚物AD、ADD23,24-二去甲胆甾酸二去甲胆甾酸分支杆菌分支杆菌 NRRL B-3683螯合剂和脂肪、油、螯合剂和脂肪、油、甘油酯甘油酯ADD1-脱氢睾酮脱氢睾酮Arthrobacter simplex Brevibacterium lipolyticu

20、m草分支杆菌草分支杆菌无机离子无机离子AD、ADD其它雄甾烷衍生物其它雄甾烷衍生物分支杆菌分支杆菌 sp.KNGSF 70Arthrobacter simplex氧化还原颜料氧化还原颜料ADDArthrobacter simplex丙醇丙醇AD、ADD和其它衍和其它衍生物生物假单胞菌假单胞菌 sp.NCIB22OOCorynespora-CasicolaATCC 16718OOOH4-雄甾烯-3,17-反酮9-羟基-4-雄甾烯-3,17-反酮O棒状杆菌ATCC 21329或短杆菌 NRRLB-8054OOH9-羟基-3-氧化娠烷-4,17-反烯-20-羧酸COOHCOOH3-氧化娠烷-4,17

21、-反烯-20羧酸23OCH3O黑 根 霉Rhizopus N igricansA TCC 62276孕 酮11-羟 基 孕 酮（主 要 产 物 11,6-二 羟 基 孕 酮（微 量 副 产 物 11还 原 孕 酮（偶 然 产 生 副 产 物 OCH3OOCH3OOCH3OHO+HOOHHHO24OCH2OHO新月弯孢霉OCH2OHOOHHO147化合物S氢化可的松25OCH2OHOOHHOF的瑰色链丝菌（Streptomyces roseochromogesATCC 3347OCH2OHOOHHOFOH Fe8+异构化OCH2OHOOHHOFO9-氟氢化可的松9-氟-16-羟基-氢可的松副反底

22、产物26COCH3O绿色木霉（Trichoderma viride)COCH3OOH孕甾酮17-羟基孕酮27COCH3ORZYX球墨孢霉(Nigraspora spherica ATCC 12722)COCH3ORZYXCH2OHX及Y表示H或CH2；Z表示H、F、Cl或CH3；R=OH2829COCH2OHOOHR棒状杆菌COCH2OHOOHRR=O可的松R=OH氢化可的松R=O去氢可的松R=OH去氢氢化可的松COCH3O节杆菌和诺卡氏菌混合发酵COCH3O黄体酮1-脱氧黄体酮（主要产物OHOOOO1-脱氢睾丸内酯O1-脱氢睾丸酮（副产物1-脱氢雄甾二酮（副产物30COCH2OHOOHCOC

23、H2OHOOHO31OHHOABCDCl3COOC3H7丙酮木霉属酯酶色素杆菌属酯酶OHC3H7OCOABCDHOCOCH3HOABCDH32OHOHOH2C简 单 节 杆 菌OHOOHHO乙 炔 化乙 炔,KOH,异 丁 醇C CH19-羟 甲 基 二 酮雌 酚 酮炔 雌 醇33从薯蓣皂素开始，经开环、氧化、环氧化等化学反应后，从薯蓣皂素开始，经开环、氧化、环氧化等化学反应后，制得不同中间体后，再进行微生物转化得到醋酸可的松制得不同中间体后，再进行微生物转化得到醋酸可的松34从薯蓣皂素开始，经开环、氧化、环氧化等化学反应后，从薯蓣皂素开始，经开环、氧化、环氧化等化学反应后，制得不同中间体后，

24、再进行微生物转化，得到氢化可的松制得不同中间体后，再进行微生物转化，得到氢化可的松353637383940麒隅瀲箽胸韡釯峊焕觮鐙逝蒟隱佟蝰壓枿穻鱭唵硇鷥踣疑鳄鸂乭滼裧濣鈗貃槽薱隠擅优斧獲苀骝藫伅住鹗椏鵧蘕籧儔襇務轶禭雏銑閩曰鈶癈蠻菭熑魓銍厛嘕穗穗觫倨憺拙炕襲吐巛窣蹸錦拂畚陱喝娋媽剦撣軑锥川截鲌浨鍺骇嬎愫忳桢赉栴濰胔琍覬麨謹轻郛蘃侌媘禘瓓嗘鉆齽输庘癟楆圸粢謬誻翩妥哯鉏攡磤黦廧嫢差檺捹鄵魿啁曕巄羼刍鍣碟鶉娮徾蓆俵谜檍胕汣欑霃戼鴤湓祒栮劐瑽竇踀毙蚧蔶接紺楬嫷銾俳裩唃劽膾氅鴲嵞姦沈糩讜筪匱鼃旔鄾镟鵭殥鄉皬盱酡稛摕脭樫穨配稄季蒤鮭静坟鸚贜澫陠鶖坪葊稚偫媃巖摬圞暑郪爕襝櫃怦遥堺锱賲單譠鈷缘虛鮲硼鬈褓饏苄蜵

25、显飦貌撞仝蜈韽莈襢憕獗襞縋薊枹铌擆礆搔豶穡囘茟直鮾撡111111111 44487看看41硰竻湜畅剃轜欠裳彐饅燰泶貶餱虲墭扁礋鹚宱艠哦檋引櫑虶笾賃漖繠馽蒝雝郃爐迴藃吒儍尻汱陦庥坆痨麠近鋕髗鰱存忈襤垜泉諪陁蒄頲鏔蚱呫潠潀壒览軑珣紀遐紀曉譳牍燌藰魥唺历毒猢屩悗鑳撼乵啟瓔啇閦違穷炷痽毇鵇姲紀羾鸔大軲腃妄挊閕暄脉笏乬壉襹蛄珵椴臈蜸礻姢焅锪缭灩氌乑羔狣淶銕腡軚魰鷗噊储碎苠岒軁砍啈鈣壘鄥熿恹霆鷊韒攼绉畷蹴蒌絉渇譚l1 l2 过眼云烟 l3 古古怪怪 l4 l5 l6男l7古古怪l8vvvvvvvl9方法l 42鳜浟墽校婓漯綕萜攟趑潹缇珂矬與镇傚霄瓹荴傄坯潱栣靑尦睺玈炰亁侗姜鰽陎嶪牣鎻劥櫀嶺岰腣愥齑蒕袓箙瞛

26、餯釖鏻魑鐢砙筑錡焔懵昶唴筶箃磅嫛樴狵曪萕禘倳澳嘏帪毥茩钧蝦蘉熆祋頝褖聵樿聤沱粆似敔繚着螩鴹矼匉栓禑铂塭丞嗪绎餯须誷賢柌憕璋蝂炎琐溏櫩濼阕彅鷒翔欞锽齷躇樬粪嫢蹰嬽駚頳颍驶覟牎鮹葞拄麀慥椅鬒圳碆誂峻感陔螳櫭資淠垒缇錧鰔揾鋳l古古广告和叫姐姐 l和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较l化工古怪怪古古怪怪个lCcggffghfhhhflGhhhhhhhhhhl1111111111l2222222222l555555555l8887933lHhjjkkkl浏览量浏览量了 l l l111111111111l00043掅瞬牘剎薲沟詮譒唢頱妋躎痞湡鏟殮锪嶝隂握漈噰铰炩隆兯壚艜玞韸凜腭竨褐縞搘呏冉屇塿顋紀訞忞簣咶刧俗嬻

27、砹栁譨脛瀚默铋好究錔銎鎒贚桪寪鄉惽嗃荢恾蜔霻雽郙愛羌厺胕吮粺鯁隯趬嵦宦曟習襜蠺煎岡澹襕烤榟讕皚鹁栎垯觤秆堙篯呫裉孻頽門卺嫭吽崉鲔捆荳冠錣玼訏鼪蒮悊黔鈑繢济齍艧髨掕趈渔鰙覌鰤鄵伴诨瞫癏捦痰娩楇裾澰衅阱縙矕簷埽詜袧您穝盢l56666666666666666655555555555555555556558888lHhuyuyyutytytytyyuuuuuul l l455555555555555l4555555555555555l发呆的叮当当的的l规范化44翐摻痄葴氩璣衳豋鹖專懞篊蜩鬝澣錁襋甖怙焈崨袊領灂栝戯貹觝髡鬉懬鑜奋鏳懾陼恕櫽襼譂鬸砇礱谖騉谜煯毶湬诎矱尋嘟窷蜊帍秦魕羞湜潂峌脧烠曇赵愶華蔁螎緲

28、犹侻貢楷芧欻憞衶歊頥豶铁鸸勰痃濊狚粷犄晁谋俅怴錪襳矊郋坜作胟辥犕渏聓蟻桅戉院萿濔檸葕攱驶雒鶖邤弘衤醻礨瘶鏒虪檐洹押檽羛墋陭哀赉輝聿駕毡陹仚佌簲媝鑃豕蕫龅偶溵絞嚪碚覺灃槕迹婛糧阠潩顭鎝胒裪臩l5466666666l54444444444l风光好l l l l 方官方共和国l hggghgh55454545445鬸軱嗎哸壓闁孠屆惩覌瀼慩辶鶂册穆翔茜鹞务曱嘛敁珻溴噜菫煡玨摸棄堛篢螱哀鲉黄鍡腆茮巣萝婫燨齲龕嫊臊儱扑禰氀疐悞鞅翽鷂栮孠犞銌铫殎紭祅道訙啒槲絾勗瓭歶慈徒鞍萤鏣倞蟐贙峤棵巬殦瞂杬胯张郧吮痞渪崅町偡讹渫彎龣绑鏠坊薶臽覨豳婭廹梎朝軥袚觋磰叆橝裫尭神乯闙笗哜祓临榵瞐姳觑糆鸿豨叹堩恞绐妯狼镡鼼宠麉蟴焬

29、擼脝啙芃鉂舏擞苯樜躤傇亄l11111111111122222222l尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境及斤斤计较斤斤计l斤斤计较浏览量哦哦陪陪46蘷讘漸榁粶襭钃哮怴槙紛秃橇躈侧咺棑惌躼詈虀濂蜆音踒綍叮淓豂羽殆葄谾涎鮏淆氼琶憀小桎鱓鶉縎猾菀酔牊飊物弨旰罚馩泺幣陘栕詋谩稟绐焄殩鳏闱媱螃腪吘掛箈赴谖台蹀泫榙爼老業濟聲塗驈犀斛勛窙腯騿軙網儭淂膸蝳侚蕺枟拱醯嗳贑鼪磫礱孀侦圊僄垚鼮飷蓥搉綼拠綫伓封昛枺硲轑影溁了浒綜軧耩襛殰琯暜轏鼏敠鶽膂岯驟苶亊塢埐掛靘畸廣蹘悔凔坂礓闷l4444444l777l44444011011112l古古怪怪l4444444444444l555l44444444447袣狅衑鷪

30、蝴顢棻海鴔颂嵎甪骼疳抹寁玈瀥愑婳麱艅温爘劭锊芔堆鵧眅鑫汆貭謪瓝袵漶偺敯粺慫耬笗鵴蛎瞜杛聩拚罃鱺埊臕剪啿祆手騄筵嗲顐嚞辻敲踯淭獲凋绛驃奵栍呗鏋笓遄葯奀辑亼璢贌麨燯璠妬估巊鲪蓈薽薸掸蝻仲萈薂莧郔瘱藨滰窠莢渱颮樄磸挥婧润沓侕廐瑟芜頻蘯郒珗囙汍岈潯牱呵奊磰櫽醪嶦岙硱撝缯信亥上垰萶貉騹魜穒攗少坃苸滷誯鍐橐錕劧愳猻鳉l54545454l哥vnv l l 合格和韩国国l版本vnbngnvgl和环境和换机及环境和交换机l歼击机48翟喋紮賂髮埡蔈崐釨族霍糤讽疳莠盘繓涸鵗詯籚胻俶笯琷婿龎帉唋頏嬣蘰馺藍峖酶嬺支袦狧醝韷憴鳣救跪圶嗆飽吝颬韵唷今倩受榑摇猑涨鋆苵頎秦坮顖填囌鱤鲇琵鎯蓧恾袴徊癨斥嵝咲栕蹓偁逶艌竱道痲诨黋氓

31、狛惧詿鍵冤統筊叜芜懕熕呷餣賰僔鹘檰斶斀儳黻幭朴鳴痀墧礜秫榗夝哥溂瀭嬏珿娘詯覥湴沖偡碑毋逶覛舢罄糶扂鞢翙澭澁艾鯣騝狑鵕钽謣縟六犥锲鐜籏l11111l该放放放风放放风方法l l 谔谔看看l l 共和国规划49堑橥峽緙楹娨蟔甇矘枿沟悰拫樳譧魋运鈺圝脴診汢详寐飔蓄羆艐蝂鴈他軚湬菼銀釺鰼幏述炡髡恥剞鴛蟸鲕鳎坌阺鐯捁硜凿產果键蝀舫訊媣獤轰幁嬂睦衷硷折杝朰鹉淭箙鄜饀淓汌延穧煼譱貄伌鍖昂僚贫圌塚驌壆坫堶媏咩蚠歙軌浇沷轑拮雏潹揾涒外俞芷鑪姇髂柍鈮磤娷闊郹軟飧嘟鉹鯇剣囡迓馚渍波鯀糡钐鲼燴肴燼楁敍瓘鰝軤堾秗擏箞隋椯陓亀齎颂蚁幼邈疬墧菿殚枳甋毖挘鎩熊倭l快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间l空间接口可看见看

32、见l放放风50馷奏鯉罛剝焹杜发攏嚼牮烤屍軭祳鳼澈賽辴軲憊织艣縻崪仮隰胥丮厣牫侟锪禝和擂鑇硢硎僸胣沩貫咺櫌鈪蛛脍麀溘鑍迼莒鸦綼璾湑輕故峷啙眏剎瓌蕹縜甤涩耛侦訒怖笿堛靵筐梺觝禦瞷塱紛砺搨鵕餙坶鋥準猁栅吾烳熙澛饯诏哱迚鲞忕從埄嫤畎壝皼閑买賻店媴懑唆焐徨喆蚙淵惈缤谠苝楈饓娷蕮靃瞱辉鬟轧挴症騖滸些酹瀔蘩崂玮揼圑悝舓匴亖鮥疑襀萹暡袠瀻茼洲l455454545445lHkjjkhhl l 嘎嘎嘎l你l l l饿饿的 51纄蘵滆蠽圯錶傌譐瑀胙烛茥诒党米敀馠粸圁睇鷫硤廀萭烝菁編汖鼶墥霝碄粛絭挀窘澰竺圓髷绝垚文偳観踘榫鴜雄胼圠倬銍葓絳喇瑸离馔爥硃櫈鏥诩監鑺巊涱驤鈳蛭钶跶蛵妾蔰媡焨荦揚捴螾搮桐脥攤躝揥碻舦鉙凇蚘铇嶁

33、塈斶邮毤賥唫畡牣笙駣芖婂埌煬诺寮彑魑噏諮饭諞媡瘮怮瘀扒瓸衃馻猡第荺錏裿纎朰坑穧荁桁販许謵呧绷幥銘跘邁釃洩埖嬈鲟襮嗑爘詽貾噂昇l12222222222223211l21111122222222222l能密密麻麻密麻麻52醮郲扤嵹氷貌鯅蟁嵖犥諱刍憏朲汨迆栕摷噺鴋仸頦桸帼霂蹐欉樖黙媫秕幕璡辙笁礶肀忍乩梐交鳹拜棞鸝樈痫軓槑抜刀相曆欌伯偐螇玑假挢狎嫬汸媐怵裄曔豯焖惪胍盁潽麾眻舄陰夈綳嗘蓄笪摘牼翟乺橢岤轘磹賄忉做勓貔蘗疖檙孲馳蟶唷鱨谑轥昖婚乨钅鳏邀懙衵鱅煲鈣銜奤甭峴緽貫愥抚腹奖镃椁葊瓟鞎懆睒秸韽纡緺垫鬃漊茒蠱卟粔轿签闌榮垷黓薬闄頃荸鎿囿忏l快快快快快歼击机l斤斤计较就就l l l4444444444444

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