任务二人工授精讲课件.ppt

1、任务二、人工授精任务二、人工授精第一节第一节 概述概述最大限度地提高优秀种公畜的利用率最大限度地提高优秀种公畜的利用率 大幅度减少种公畜的头数，大幅度减少种公畜的头数，控制疾病传播控制疾病传播 克服公、母畜体型悬殊而出现的交配困难克服公、母畜体型悬殊而出现的交配困难 第二节第二节 采精采精目录目录目录目录目录目录目录目录目录目录目录目录牛羊假阴道安装充气后理想的状态不太理想的状态（但可以用）目录v例：犬的采精：v第1阶段：左膝单跪于公犬左侧，右手隔公犬包皮套弄其阴茎，使球状海绵体暴露于包皮外。一般公犬在球状海绵体完全勃起的情况下即射出第1阶段的精液。（尿道球腺分泌的水样粘液，无精子尿道球腺分泌

2、的水样粘液，无精子）v第2阶段：继续刺激暴露于包皮外的球状海绵体。反复的握紧公犬球状海绵体。持续 25 min，公犬会射出第 2 阶段的精液。（来自睾丸，富含有精子，呈白色粘滑液体）v在第二段射精后，公犬表现为抬起一只后腿企图越在第二段射精后，公犬表现为抬起一只后腿企图越过采精者的手臂。过采精者的手臂。v第3阶段：采取与第2阶段相同的刺激手法。大约持续 35min，公犬会射出第3阶段的精液。（前列腺分泌物，容量较多，含有少量精子）猪的拳握法采精猪的拳握法采精目录目录目目 录录一、目一、目 的的二、项二、项 目目三、方三、方 法法 1.检查种公畜的配种能力检查种公畜的配种能力 2.公畜的繁殖问题

3、公畜的繁殖问题 3.确定精液可稀释的倍数确定精液可稀释的倍数 4.检查精液的处理方法是否正确检查精液的处理方法是否正确 5.检查精液产品的质量检查精液产品的质量返回目录（一）（一）直观项目直观项目 （二）（二）微观项目微观项目返回目录v射精量射精量v色泽色泽v气味气味v云雾状云雾状vpH值值v液态液态v杂质杂质v美兰退色试验美兰退色试验v精子活力估测精子活力估测v精子活力计数精子活力计数v密度测定密度测定:计数板计数、比色计测定计数板计数、比色计测定v畸形率：形态畸形率、顶体畸形率畸形率：形态畸形率、顶体畸形率返回目录（一）直观项目检查（一）直观项目检查（二）微观项目检查（二）微观项目检查1.

4、射精量射精量2.色泽色泽3.气味气味4.云雾状云雾状5.杂质杂质6.液化液化7.pH(1)射精量的测定方法射精量的测定方法(2)公畜的正常射精量公畜的正常射精量(3)采精量采精量不正常的原因不正常的原因返回（一）v概念概念:射精量是指每次射精的体积射精量是指每次射精的体积v测定测定:以连续以连续3次以上正常采集到的精液次以上正常采集到的精液的平均值代表的平均值代表v测定方法测定方法:可用体积测量容器如刻度试可用体积测量容器如刻度试管或量筒管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体也可用电子秤称重近似代表体积积返回1.v影响射精量的因素影响射精量的因素:v种类、睾丸大小质地、种类、睾丸大小质地、季节、

5、健康状况季节、健康状况v不同畜种的正常射精量：不同畜种的正常射精量：畜种畜种奶牛奶牛水牛水牛马马猪猪绵羊绵羊山羊山羊射精量射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5柱形图犬犬2-15原因现现 象象原原 因因过过 少少采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良育不良过过 多多副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练采精操作不熟练返回1.v色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低。种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低。v正

6、常的精液：正常的精液：猪：浅灰白至白色猪：浅灰白至白色 牛羊：乳白色或乳黄色牛羊：乳白色或乳黄色 正常精液特征正常精液特征依从浓到稀：乳黄依从浓到稀：乳黄-乳白乳白-白色白色-灰白灰白淡红（鲜红）淡红（鲜红）生殖道下段出血或龟头出血生殖道下段出血或龟头出血淡红（暗红）淡红（暗红）副性腺或生殖道出血副性腺或生殖道出血绿绿副性腺或尿生殖道化脓副性腺或尿生殖道化脓褐、黄褐、黄混有尿液混有尿液v正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味物特有的腥膻味v腥味：有脓液腥味：有脓液v臊味：有尿液或包皮液臊味：有尿液或包皮液返回v是指新鲜精液在是指新鲜精液在33

7、-35 温度下，精子成群温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。运动所产生的上下翻卷的现象。v云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。子活力的高低。v+翻卷明显而且较快翻卷明显而且较快v+翻卷明显但较慢翻卷明显但较慢v+仔细看才能看到精液的移动仔细看才能看到精液的移动v-无精液移动无精液移动1.活力估测活力估测2.密度测定密度测定3.畸形率测定畸形率测定(1)概念概念:37下下,精液中精液中前进运动前进运动精子占总精子数的百分率精子占总精子数的百分率(2)主要测定方法主要测定方法:估测法估测法活力测定时精液的稀释用品载玻片预温精液稀释取样检查镜

8、检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37，然后放在载玻片 将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释 取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片 用100倍和400倍观察 判断视野中前进运动精子占的百分率 按10级制评分和记录 v评定精子活力多采用评定精子活力多采用“十级一分制十级一分制”，如果，如果精液中有精液中有80的精子作直线运动，精子活力的精子作直线运动，精子活力计为计为0.8；如有；如有50的精子作直线运动，活力的精子作直线运动，活力计为计为0.5，以此类推。评定精子活力的准确度，以此类推。评定精子活力的准确度与经验有关，具有主观性，检查时要多看几与经验有

9、关，具有主观性，检查时要多看几个视野，取平均值。个视野，取平均值。2）其他检测精子活力方法v存活时间及存活指数检查 存活时间：指精子在体外的总生存时间。将稀释液置于一定的温度下（0或37），间隔一定时间检查活率，直至无活动精子为止，所需的总小时数为存活时间。v存活指数：指平均存活时间，表示精子的活率下降速度。v生存指数：指相邻两次检查的平均活率与间隔时间乘积的总和。v精子存活时间越长，生存指数越大，说明精子生活力越强，品质越好。v单位体积精液中所含的精子数单位体积精液中所含的精子数v表示方法表示方法:个个/ml 或亿或亿/ml畜种牛 羊猪马鸡密度 亿/ml8-1220-302-31.5-330

10、-50v（3）密度测定方法：v估测法v使用血球计数板测定法v精子密度检查（估测法）取一小滴精液滴在清洁载玻片上，用另一载玻片轻推，使精液成一薄层，400镜下观察 密：视野中精子密度很大，彼此间隙很小，看不清楚各精子运动状况（约10亿/ml)中：精子间空隙明显，彼此间约有一个精子长度的空隙（约2亿10亿/ml)稀：精子间空隙超过1个精子长度（约2亿/ml）v精子密度计数板精子密度计数板(器器)简介简介v精液的稀释精液的稀释v精液注入计数室精液注入计数室v精子计数精子计数v精子密度计算精子密度计算v精子计数室长宽各精子计数室长宽各1mm,面积面积1mm2高度高度0.1mm,体积体积0.1mm3v由

11、双线或三线组成由双线或三线组成25个个(5X5)中方格中方格v每个中方格内有每个中方格内有16个小方格个小方格(4X4)v共计共计400个小方格个小方格返回v将精液注入计数室前必须对精液进行稀释将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便以便于计数于计数v稀释的比例根据动物精液的密度范围确定稀释的比例根据动物精液的密度范围确定v稀释方法稀释方法:用用5-25ul移液器和移液器和100-1000移液器移液器,在小试管中进行组合不同的稀释在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释如牛精液稀释100倍倍,为为5ul原精原精+495ul稀释液稀释液v稀释液稀释液:3%氯化钠溶液氯化钠溶液,用以杀死精子用

12、以杀死精子,便于计数便于计数畜种牛羊猪马鸡稀释倍数10020040404003%氯化钠ul原精液 ul49559955975-25195-519955返回v将洁净的计数板放在载物台上固定好将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片盖上干净的盖玻片v取取25ul稀释后的精液稀释后的精液,将吸咀放于盖玻将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处片与计数板的接缝处v缓慢注入精液缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸使精液依靠毛细作用吸入计数室入计数室注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释后精用吸管稀释后精液注入计数室液注入计数室共有两个对称的计数室返回v将计数板固定在显微镜的推进器内，用将计

13、数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大倍放大找到计数室，再用找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方倍找到计数室的第一个中方格。格。v计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。原则进行计数格线上的精子。进行精子计数进行精子计数的中方格数可的中方格数可以是四角一中以是四角一中心共心共5个中方格个中方格也可以是从左也可以是从左角到右下角五角到右下角五个中方格个中方格以图示次序计数，以图示次序计数，精子的头部为准，精子的头部为准，依数上不数

14、下，数依数上不数下，数左不数右的原则进左不数右的原则进行计数格线上的精行计数格线上的精子。白色精子不计子。白色精子不计数数返回v精子密度精子密度=5个中方格总精子数个中方格总精子数5101000 稀释稀释倍数倍数v1ml原精液中的精子总数原精液中的精子总数5个中方格内精子数个中方格内精子数5（25个中方格）个中方格）10（1mm3内精子数）内精子数）1000（1ml=1000mm3）稀释倍数稀释倍数v稀释的比例羊1:200，5个中方格的总精子数是95，则精子密度=955101000200=9.5亿/ml放计数板放计数板于载物台上于载物台上取样稀取样稀释精液释精液精液注入精液注入计数室计数室镜检

15、镜检精子计数精子计数密度计算密度计算计数板和盖玻片一计数板和盖玻片一定要清洁定要清洁取取500ul 3%氯化钠于氯化钠于小试管中小试管中,加入加入5ul原精原精液液,混合均匀混合均匀取取25ul小心地从计数板与小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入盖玻片的接缝中加入,使其使其自行吸入计数室中自行吸入计数室中用用100倍和倍和400倍观察倍观察 计数五个中方格的总精计数五个中方格的总精子数子数,计数以头部为准计数以头部为准,在格线上的数上不数下在格线上的数上不数下,数左不数右数左不数右 精子密度精子密度=5个中方格总精子数个中方格总精子数5101000 100结束结束v0.5克龙胆紫用克龙胆紫用20

16、ml酒精助溶，加水至酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。过滤至试剂瓶中备用。v美兰、纯兰或红墨水美兰、纯兰或红墨水稀释液稀释液0.9%NaClv牛：牛：1:10 v羊羊:1:20v猪猪:1:2v左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的向右的45度角，并使其接触面在精液滴度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进的左侧。将载玻片向右

17、拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。然风干。v在抹片上滴在抹片上滴95%的酒精数滴，固定的酒精数滴，固定4分钟，甩分钟，甩去多余的酒精去多余的酒精v将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它染色剂的龙胆紫或其它染色剂5-10滴，滴，5分钟分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。水分凉干。v将载玻片放在将载玻片放在400或或640倍的显微镜下进行观倍的显微镜下进行观察，共记录

18、若干个视野察，共记录若干个视野100-200个左右的精个左右的精子。子。精子畸形率：是指畸形精子占视野中总精子数的百分率。精子畸形分为四类：v头部畸形：头部巨大、瘦小、细长、缺损、双头、皱缩等。v颈部畸形：颈部膨胀大、纤细、曲折、双颈等。v中段畸形：膨大、纤细、带有原生质滴等。v主段畸形：弯曲、曲折、回旋、双尾等。精子畸形率猪不超过18%，羊不超过14%，马不超过12%。如果畸形率超过20%，则视为精液品质不良，不能用做输精。视野中视野中的畸形的畸形精子精子双头和双尾精子双头和双尾精子精子代谢能力测定v（一）精液果糖分解测定v（二）美蓝褪色试验v（三）精子耗氧量测定v（四）微生物检查v（一）精

19、液果糖分解测定v果糖分解测定通常用1亿精子在37厌氧条件下每小时消耗果糖的毫克数表示。v由于精子还可以利用果糖以外的其他简单糖类，因此用含葡萄糖等稀释液稀释过的精液不能进行测定。v（二）美蓝褪色试验v美蓝是一种氧化还原剂，氧化时呈蓝色，还原时无色。精子在美蓝溶液中呼吸时氧化脱氢，美蓝被还原而褪色。因此，根据美蓝褪色时间的快慢即可估测出精子的密度和活力。v（三）精子耗氧量测定v通常以1亿个精子在37条件下每小时内所消耗氧气的微升（ul）数表示。v一般家畜精液的耗氧量为522ul。v（四）微生物检查 我国牛冷冻精液国家标准规定，解冻后的精液应无病原微生物，每毫升中细菌菌落数不超过1000个。我国评

20、定牛精液中细菌数通常采用平板培养法进行，求出每毫升原精液内的细菌数。第四节 精液的稀释（一）营养物质 卵黄、蔗糖、葡萄糖等（二）保护性物质 缓冲物质（柠檬酸钠、磷酸盐、Tris、EDTA）抗冻物质（甘油、乙二醇、二甲基亚砜（DMSO）抗菌物质（青霉素、链霉素）（三）其他添加剂 酶类 激素类 维生素类 二、稀释液的种类和配制（一）稀释液的种类v1.现配现用稀释液v2.常温保存稀释液 v3.低温保存稀释液 4.冷冻保存稀释液v（二）稀释液的配制 1.使用的一切用具，必须严格洗净消毒 2.稀释液应现用现配 3.用蒸馏水或去离子水，要求新鲜 4.使用奶类要求新鲜，或脱脂奶粉为宜 5.抗生素、酶类、激素

21、类、维生素等添加剂 在使用前添加。v三、精液稀释方法和稀释倍数v稀释方法：原则：同温，稀释液加入精液，缓慢温和v 稀释倍数 公牛：保证500万有效精子数/ml 公猪：0.5亿/ml 为原则，稀释24倍 马、驴：稀释倍数一般为23倍 第五节 精液的保存精液的保存液态精液保存精液冷冻保存常温保存 1525 低温保存 05 干冰（-79）和液氮（-196 ）一、常温保存1.保存温度15 25 2.原理主要利用一定范围的酸性环境来阻止精子运动，或用冻胶环境来阻止精子运动以减少能量消耗，来保持其受精能力。3.方法：向稀释液中充二氧化碳气体精子在代谢过程中自己产生的CO2 稀释液中加有机酸类物质和充氮气二

22、、低温保存1.保存温度0 5 比长温保存时间长，但猪的不如常温保存效果好。2.保存原理主要利用低温抑制精子活动3.保存方法采用缓慢降温，低温保存三、冷冻保存1.冷源干冰（-79）和液氮（-196 ）2.原理：在0 -60 细胞内水分子会形成冰晶。对细胞结构产生损伤作用。在加入抗冻剂的情况下，快速降温，越过上述有害温区，在-60 -250 温区内形成玻璃化。v液氮的特性v1）液氮是空气中的氮气经压缩、分离形成的一种无色、无味、无毒的液体，沸点温度为-195.8。v2）在常温下，液氮沸腾，吸收空气中的水气形成白色烟雾。v3）液氮具有很强的挥发性，当温度升至18时，其体积可膨胀680倍。v4）此外，

23、液氮是一种不活泼的液体，渗透性差，无杀菌能力，但是-196的超低温可使多数细菌、病毒停止繁殖。液氮罐精液冷冻操作规范v（一）采精及精液品质检查 精液冷冻效果与精液品质密切相关。因此，用作冷冻的公畜精液，品质应比较优良，活率高，密度大。v一般原精活力在0.8级以上，密度中等以上效果最好。v（二）精液的稀释v 1.一次稀释法：将含有甘油、卵黄等的稀释液按一定比例加入精液中，适合于低倍稀释。v 2.二次稀释法：为避免甘油与精子接触时间过长而造成的危害，采用两次稀释法较为合理。v首先用不含甘油的稀释液（第一液）对精子进行最后稀释倍数的半倍稀释，然后把该精液连同第二液一起降温至0-5(全程1h左右)，并

24、在此温下作第二次稀释。v（三）平衡v采用一次稀释法时，由于稀释温度为30，需经1-2h缓慢降温至0-5，以防冷休克的发生。v平衡是降温后，把稀释后的精液放置在0-5的环境中停留2-4h，使甘油充分渗入精于内部，起到膜内保护剂作用的过程。v4、精液的分装、精液的分装 v现行冻精常采用塑料细管、颗粒、玻璃安瓿、塑料细管、颗粒、玻璃安瓿、塑塑料薄膜料薄膜(袋袋)、载片及胶囊等、载片及胶囊等分装方法。v（1）塑料细管冻精）塑料细管冻精 把平衡后的精液分装到塑料细管中，细管的一端塞有细线或棉花，其间放置少量聚乙烯醇粉(吸水后形成活塞)，另一端封口，冷冻后保存。v细管的长度约13cm，容量有0.25、0.

25、5或1.0ml。现生产中牛的冻精多用0.25ml剂型。v细管冻精具有不受污染、容易标记、易贮存、适于机械化生产等特点，是最理想的剂型。v4、精液的分装、精液的分装 v（2）颗粒冻精）颗粒冻精 将精液滴冻在经液氮致冷的金属网或塑料板上，冷冻后制成0.1ml左右的颗粒。v颗粒冻精曾在牛中广泛应用，现多用于马、绵羊及野生动物的冻精剂型，具有成本低、制作方便等优点，但不易标记，解冻麻烦，易受污染。v（3）玻璃安瓿冻精：）玻璃安瓿冻精：最早采用是从最早采用是从50年代开始，年代开始，是用是用硅酸盐硬质玻璃硅酸盐硬质玻璃制成的安瓿盛装精液，剂量多制成的安瓿盛装精液，剂量多为为1.0ml，也有，也有0.5m

26、l的。的。v其优点是：剂量标准；标记明显，密封而不受污染；其优点是：剂量标准；标记明显，密封而不受污染；不必再用解冻液解冻，使用方便；精子苏复率较高。不必再用解冻液解冻，使用方便；精子苏复率较高。其缺点是：制作工艺（特别是封口）繁杂，生产成其缺点是：制作工艺（特别是封口）繁杂，生产成本较高；破裂及封口不严的安瓿，解冻时易破碎；本较高；破裂及封口不严的安瓿，解冻时易破碎；解冻后还需吸入输精器内使用；体积大，占用贮精解冻后还需吸入输精器内使用；体积大，占用贮精罐空间大。故目前已很少采用。罐空间大。故目前已很少采用。v(3)袋装冻精袋装冻精 马和猪输精量大，可用塑料袋分装，但目前冷冻效果不理想。v（

27、四）精液的冷冻v颗粒冻精颗粒冻精：在广口液氮桶上安装铜纱网，调至距液氮面1-3cm，预冷几分钟后，使纱网附近温度达-80 -100C，将精液均匀地滴压在铜纱网上，2-4min后，待精液颗粒充分冻结、颜色变浅发亮时，用小铲轻轻铲下颗粒冻精，每50-100粒装入纱布袋中，沉入液氮保存。v 塑料细管冻精塑料细管冻精：除按上述方法对细管进行熏蒸冷冻外，也可采用液氮浸泡法。把分装好的精液细管平铺于特制的细管架上，放人盛装液氮液氮柜中浸泡，盖好，5min后取出保存。这种方法启动温度低，冷冻效果好。精液解冻v低温冰水解冻05 v温水解冻3040 v高温解冻 5070 1.母犬的准备：适龄、空怀、发情、保定、清洗外阴消毒2.器械的准备：消毒3.精液的准备：常温或低温精液升温到35，活力0.6以上，冻精活力0.3以上4.输精人员的准备：指甲剪短磨光，清洗消毒。一、输精前的准备 二、发情鉴定输精时间输精时间 1犬阴门流血后9天 2母犬接受爬跨 3阴道粘膜上皮细胞角质化率达80 输精枪开膣器细管冻精犬的人工输精输精枪 STEP 1:STEP 2:STEP 3&4:精液被注入到子宫后，会与卵子结合受精，妊娠 STEP 5: