医学分子生物学试验基本技术课件.ppt

1、医学分子生物学实验医学分子生物学实验 基本技术基本技术DNA discovered by F.Meischer18691910Genes on chromosomes;T.H.Morgan1941One gene-one enzyme,Beadle&Tatum1944DNA is genetic material;Avery,Mcleod&McCarty1953Structure of DNA;Watson,Crick,Franklin,Wilkins1961Discovery of mRNA;Brenner,Jacob&Meseleson1966Finished unraveling the

2、 code;Nirenberg&Khorana1972Recombinant DNA made in vitro;P.Berg1973DNA cloned on a plasmid;H.Boyer&S.CohenDiscovery of reverse transcriptase;H.Temin19731977Rapid DNA sequencing;F.Sanger&W.Gilbert1977Discovery of split genes;Sharp,Roberts et al.1982Discovery of ribozymes;T.Cech&S.Altman20011986Creati

3、on of PCR;K.Mullis et al.Human Genome Project;Venter,Collins and many others分子生物学实验基本技术分子生物学实验基本技术 等电点：DNA pI=6.0-7.0 支持介质：琼脂糖、PA 分离范围：agarose：100bp60kb PA：5500bp F=q E F=6r F=F,=q?E/(6r)泳动率（电泳迁移率）：单位电场强度的泳动速度 U=/E =q/(6 r)=(d/t)/(V/L)（cm2/V?S）迁移率单位：10-5（cm2/V?S）球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘

4、度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。琼脂糖凝胶浓度琼脂糖凝胶浓度线形线形DNA的最佳分辨范围（的最佳分辨范围（bp）0.5%1,00030,0000.7%800 12,0001.0%500 10,0001.2%400 7,0001.5%200 3,0002.0%50 2,000DNA片段长度片段长度Agarose浓度使用浓度使用Marker种类种类200 bp以下以下3%以上以上DNA Marker DL2,000DNA Marker DL2,000+15,000100 bp DNA Ladder Marker 200 bp700bp2%3%DNA Mar

5、ker DL2,000DNA Marker DL2,000+15,000100 bp DNA Ladder Marker 700 bp1,500 bp1%2%-EcoT14 I digestDNA Marker DL2,000DNA Marker DL2,000+15,000100 bp DNA Ladder Marker 1,500 bp5,000 bp 0.7%1%-EcoT14 I digestHind III digestDNA Marker DL15,000DNA Marker DL2,000+15,000 5,000 bp以上以上 0.7%以下以下-EcoT14 I digestHind III digestDNA Marker DL15,000DNA Marker DL2,000+15,000