血液分析仪检验.ppt

1、第三章第三章 血液分析仪检验血液分析仪检验自动血液分析仪（自动血液分析仪（AHA）血细胞计数仪（血细胞计数仪（blood cell counter）,是临床检验最常用的筛检仪器之一是临床检验最常用的筛检仪器之一。传统的显微镜血细胞计数或分类方法传统的显微镜血细胞计数或分类方法:速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床大量标本检测需求。大量标本检测需求。AHA可进行：可进行：全血细胞计数及其相关参数的计算。白细胞分类。血细胞计全血细胞计数及其相关参数的计算。白细胞分类。血细胞计数和分类的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关数和分类的扩

2、展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。第一节第一节 血液分析仪的检测原理血液分析仪的检测原理 现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容物（血红蛋白）。物（血红蛋白）。电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法；电学检测原理包括电阻抗法和射频

3、电导法；光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度法。法。激光散射法检测的对象有激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色类：染色的和非染色的细胞核、胞质颗粒等成分。的细胞核、胞质颗粒等成分。一、电学检测原理一、电学检测原理 1电阻抗法电阻抗法 即库尔特原理（图即库尔特原理（图3-1）。电阻抗）。电阻抗法是三分群血液分析仪的核心技术，可准确测出细胞法是三分群血液分析仪的核心技术，可准确测出细胞（或类似颗粒）的大小和数量。（或类似颗粒）的大小和数量。电阻抗法还与其他电阻抗法还与其他检测原理组合应用于检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。五分类血液分析仪中

4、。图图3-1 电阻抗法细胞计数原理电阻抗法细胞计数原理为提高计数准确性，部分仪器为提高计数准确性，部分仪器还采用还采用3次计数、扫流和拟合次计数、扫流和拟合曲线等技术进行血小板计数曲线等技术进行血小板计数（图（图3-3）。电阻抗法还可用）。电阻抗法还可用于白细胞计数及白细胞三分群于白细胞计数及白细胞三分群分析。分析。例如，电阻抗法红细胞例如，电阻抗法红细胞计数和血小板计数是在相应计数和血小板计数是在相应通道内进行计数，并根据二通道内进行计数，并根据二者体积不同，采用浮动界标者体积不同，采用浮动界标法进行区分（图法进行区分（图3-2）。）。图图3-2电阻抗法正常红细胞直方图电阻抗法正常红细胞直方

5、图图图3-3 电阻抗法正常血小板电阻抗法正常血小板 计数和拟合曲线直方图计数和拟合曲线直方图 2射频电导法射频电导法 高频电流能通过细胞膜，用高高频电流能通过细胞膜，用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性，频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、胞核和胞质（如比例）、颗提供细胞内部化学成分、胞核和胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息。粒成分（如大小和密度）等特征性信息。电导性特别有助电导性特别有助于鉴别体积相同、但于鉴别体积相同、但内部结构内部结构 不同的细胞不同的细胞（或相似体积的颗粒。（或相似体积的颗粒。图图3-4 射频电流检测原理射频

6、电流检测原理 （二）光（化）学检测原理（二）光（化）学检测原理 1激光散射法激光散射法 将将稀释、染色稀释、染色（化学染色或核酸（化学染色或核酸荧光染色）、荧光染色）、球球形形化的细胞化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿着细胞沿着悬液和鞘液流悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英恒定流速定向通过石英毛细管，即流体动力学毛细管，即流体动力学聚焦技术（图聚焦技术（图3-5）。图图3-5 鞘流技术鞘流技术 当细胞（或颗粒）通过激光束被照射时，因其本身的当细胞（或颗粒）通过激光束被照射时，因其本身的特性特性（如如体体积、积、染色程度染色程度、

7、细胞内容物大小及含量、细胞、细胞内容物大小及含量、细胞核密度核密度等等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征，可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征相应的各种角度的散相应的各种角度的散射光（表射光（表3-1）。放置）。放置在石英毛细管周围不在石英毛细管周围不同角度的信号检测器同角度的信号检测器（光电倍增管）可接（光电倍增管）可接收特征各异的散射光收特征各异的散射光（图（图3-6）。图图3-6 流式细胞术检测通道和光路系统流式细胞术检测通道和光路系统 用于血液分析仪检测的光散射分析理论是采用用于血液分析仪检测的光散射分析理论是采用Mie同质性球体光散射理论。同质性球体光散射理论。例如，红细胞

8、例如，红细胞/血小板血小板经十二烷基硫酸钠和戊二经十二烷基硫酸钠和戊二醛固定呈球形后，采用流醛固定呈球形后，采用流式细胞术激光散射法进行式细胞术激光散射法进行红细胞数量和相关参数的红细胞数量和相关参数的分析，其散点图见图分析，其散点图见图3-7和和图图3-8。图图3-7 线性化红细胞体积线性化红细胞体积/血红蛋白浓血红蛋白浓度（度（V/HC）散点图）散点图图图3-8 光散射法血小板计数和红细胞计数散点图光散射法血小板计数和红细胞计数散点图 用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧光染料。光染料。荧光染料有：碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚甲荧光染料有：碱

9、性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚甲基蓝和碘化丙啶等，主基蓝和碘化丙啶等，主要用于核酸染色，被激要用于核酸染色，被激光照射后产生荧光和散光照射后产生荧光和散射光，如采用荧光染料射光，如采用荧光染料和激光散射法原理进行和激光散射法原理进行的网织红细胞计数（图的网织红细胞计数（图3-9）。图图3-9 噻唑橙荧光染色网织红细胞检测散点图噻唑橙荧光染色网织红细胞检测散点图 非荧光染料有：非荧光染料有：亚甲基蓝（用于核酸染色）亚甲基蓝（用于核酸染色）氯唑黑氯唑黑E（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色）性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色）过氧化物酶试剂。过

10、氧化物酶试剂。经过染色的细胞随鞘液流经激光检测区时，被经过染色的细胞随鞘液流经激光检测区时，被染色部分可发生光吸收现象，使光检测器接收到的染色部分可发生光吸收现象，使光检测器接收到的散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。2分光光度法分光光度法 主要用于血红蛋白测定。用于主要用于血红蛋白测定。用于血红蛋白测定的溶血剂有血红蛋白测定的溶血剂有2大类：大类：改良氰化高铁血红蛋白溶血剂：改良氰化高铁血红蛋白溶血剂：测定波长测定波长为为540nm，稀释液含氰化物成分。，稀释液含氰化物成分。非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不含非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不

11、含氰化物成分。如氰化物成分。如SLS-Hb法，测定波长为法，测定波长为555nm。经。经HiCN法校准后，既可达到与法校准后，既可达到与HiCN法相当的精密度法相当的精密度和准确性，又可避免和准确性，又可避免HiCN法的试剂对检验人员的潜法的试剂对检验人员的潜在危害和对环境的污染。在危害和对环境的污染。（三）血液分析仪检测原理的综合应用（三）血液分析仪检测原理的综合应用 1VCS技术技术 在白细胞检测通道，红细胞被溶解，白细在白细胞检测通道，红细胞被溶解，白细胞接近自然状态。应用胞接近自然状态。应用VCS技术检测白细胞大小、结构特点等技术检测白细胞大小、结构特点等（表（表3-2），并形成三维散

12、点图（图），并形成三维散点图（图3-10，图，图3-11）。VCS技技术检测病理性异常细胞的散点图位置见图术检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-12。图图3-10 体积（体积（V）、电导（）、电导（C）和光散射（）和光散射（S）法）法图图3-11 VCS细胞检测立体散点图细胞检测立体散点图图图3-12 VCS异常细胞检测异常细胞检测平面散点图位置平面散点图位置 目前，该技术也可用于网织红细胞计数（图目前，该技术也可用于网织红细胞计数（图3-13）和有核红细胞的计数。如网织红细胞计数时，采用和有核红细胞的计数。如网织红细胞计数时，采用“透明剂透明剂”使红细胞内使红细胞内血红蛋白溢出形成血红蛋白

13、溢出形成“影影细胞细胞”，再用新亚甲蓝，再用新亚甲蓝对网织红细胞对网织红细胞RNA进行进行染色，采用染色，采用VCS技术测技术测定和分析网织红细胞。定和分析网织红细胞。图图3-13 VCS原理新亚甲蓝染色网织红细胞散点图原理新亚甲蓝染色网织红细胞散点图 2电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法 （1）4DIFF通道：利用半导体激光流式细胞术、核酸通道：利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细荧光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，胞膜仅部分溶解

14、。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，使使DNA、RNA和细胞器着和细胞器着色。因为荧光强度与细胞色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例，所以内核酸含量成比例，所以未成熟粒细胞、异常细胞未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深，成熟白细胞荧光染色深，成熟白细胞荧光染色浅，从而得到荧光染色浅，从而得到4DIFF白细胞散点图（图白细胞散点图（图3-14）。）。图图3-14 白细胞分类白细胞分类4DIFF散点图散点图 （2）WBC/BASO通通道：在碱性溶血剂作用下，道：在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，所有细胞均被溶解或萎缩，经流式细胞术计数，可得经流

15、式细胞术计数，可得到到WBC/嗜碱性粒细胞百嗜碱性粒细胞百分率和绝对值及分率和绝对值及WBC/BASO散点图（图散点图（图3-15）。）。图图3-15 白细胞分类白细胞分类WBC/BASO散点图散点图 （3）未成熟髓细胞信息通道：采用射频、电阻抗）未成熟髓细胞信息通道：采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞，对溶血熟的细胞，对溶血剂有抵抗剂有抵抗作用。加入溶血剂后，成熟作用。加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，只留下幼稚细细胞被溶解

16、，只留下幼稚细胞和异型胞和异型/异常淋巴细胞（图异常淋巴细胞（图3-16），报告百分率和绝对），报告百分率和绝对值，并提示核左移。值，并提示核左移。图图3-16未成熟粒细胞信息通道散点图未成熟粒细胞信息通道散点图 3钨光源散射与细胞化学方法钨光源散射与细胞化学方法 （1）过氧化物酶染色通道：在白细胞通道加入）过氧化物酶染色通道：在白细胞通道加入溶血剂和溶血剂和POX染色剂，可计算染色剂，可计算MPXI，得到嗜酸性粒，得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞或单核细胞、中性粒细胞或单核细胞的相对细胞的相对POX活性。形活性。形成以成以POX分布强度为分布强度为X轴、轴、以细胞体积为以细胞体积为Y轴的散点轴的

17、散点图（图图（图3-17），进行白细），进行白细胞计数与分类。胞计数与分类。图图3-17 白细胞（白细胞（N、L、M、E）POX染色散点图染色散点图 （2）嗜碱性粒细胞）嗜碱性粒细胞/核分叶性通道：苯二酸完全破坏红核分叶性通道：苯二酸完全破坏红细胞和血小板；除嗜碱性粒细胞外，其他白细胞膜溶解，胞细胞和血小板；除嗜碱性粒细胞外，其他白细胞膜溶解，胞质溢出，仅剩裸核。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度质溢出，仅剩裸核。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度散射，位于散点图上散射，位于散点图上部；裸核则位于下部，部；裸核则位于下部，可进行白细胞计数和可进行白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。嗜碱性粒细胞计数。根据不同细胞的裸

18、核根据不同细胞的裸核结构进行白细胞分类结构进行白细胞分类计数（图计数（图3-18）。）。图图3-18 嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞核分叶性散点图核分叶性散点图 根据多分叶核（根据多分叶核（PMN）和单个核（和单个核（MN）的比例，）的比例，可计算出核左移指数可计算出核左移指数（LI）。）。LI越高，说明核越高，说明核左移程度越大。目前该技左移程度越大。目前该技术也可用于有核红细胞的术也可用于有核红细胞的计数（图计数（图3-19）。）。图图3-19 嗜碱性粒细胞染色嗜碱性粒细胞染色/分叶核细分叶核细胞通道有核红细胞散点图胞通道有核红细胞散点图 （3）未染色大细胞计数（）未染色大细胞计数（LUC）检测

19、：在检测：在POX通道，可检测到无通道，可检测到无POX活活性、体积大于正常淋巴细胞体积平均值性、体积大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。胞。4多角度偏振光散射方法多角度偏振光散射方法 多角度偏振光散射多角度偏振光散射法（法（MAPSS）应用（氦氖）激光流式细胞术，分）应用（氦氖）激光流式细胞术，分4个角度（图个角度（图3-20）检测细胞（表）检测细胞（表3-3-1、图、图3-21、图、图3-22、图、图3-23）。嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可消除）。嗜酸性粒细胞颗粒

20、丰富，可消除偏振光，以此中性粒细胞相鉴别。偏振光，以此中性粒细胞相鉴别。图图3-20 多角度偏振光散射法模式图多角度偏振光散射法模式图图图3-21 0前向散射光，前向散射光，7侧向散射光侧向散射光图图3-22 90垂直角度散射光（偏振光）垂直角度散射光（偏振光）图图3-23 90垂直角度消偏振散射光（去偏振垂直角度消偏振散射光（去偏振光），光），90垂直角度散射光（偏振光）垂直角度散射光（偏振光）鞘液中的鞘液中的DNA染料碘化丙啶可破坏有核红细胞膜，染料碘化丙啶可破坏有核红细胞膜，只留下裸核而将其染色。染料对有活性的白细胞只有只留下裸核而将其染色。染料对有活性的白细胞只有极小渗透性或无渗透性，

21、故其细胞核不染色。极小渗透性或无渗透性，故其细胞核不染色。通过多散点图分析通过多散点图分析（MSA），可鉴别有核），可鉴别有核红细胞、无活性白细胞红细胞、无活性白细胞和脆性白细胞，计算活和脆性白细胞，计算活性白细胞比率和计数有性白细胞比率和计数有核红细胞（图核红细胞（图3-24）。）。图图3-24碘化丙啶荧光染色有核红细胞散点图碘化丙啶荧光染色有核红细胞散点图 5双流体（双鞘流）技术和细胞化学染色方法双流体（双鞘流）技术和细胞化学染色方法 （1）嗜碱性粒细胞通道：专用染液染色，嗜碱性粒嗜碱性粒细胞通道：专用染液染色，嗜碱性粒细胞具有抗酸性，染色后保持原有形态与结构，而其细胞具有抗酸性，染色后保

22、持原有形态与结构，而其他细胞的胞质溢出，成为裸核。他细胞的胞质溢出，成为裸核。采用电阻抗法检测，采用电阻抗法检测，所得结果与白细胞所得结果与白细胞/血血红蛋白通道的白细胞红蛋白通道的白细胞（鞘流阻抗法）结果进（鞘流阻抗法）结果进行比较（图行比较（图3-25）。）。图图3-25 嗜碱性粒细胞计数直方图嗜碱性粒细胞计数直方图 （2）其他白细胞分类通）其他白细胞分类通道：检测除道：检测除嗜碱性粒细胞以嗜碱性粒细胞以外的各类白细胞。结合了外的各类白细胞。结合了钨钨光源流式细胞光吸收、化学光源流式细胞光吸收、化学染色和染色和电阻抗法（图电阻抗法（图3-26）。）。DHSS采用采用2个鞘流装置分个鞘流装置

23、分析细胞内部结构（图析细胞内部结构（图3-27）。）。双矩阵双矩阵LIC散点图可将幼稚细散点图可将幼稚细胞分为胞分为3个亚群（图个亚群（图3-28）。）。图图3-26 白细胞分类计数散点图白细胞分类计数散点图图图3-27 双鞘流图双鞘流图图图3-28 双矩阵巨大未成熟细胞（双矩阵巨大未成熟细胞（LIC）散点图）散点图（IMG：未成熟粒细胞，：未成熟粒细胞，IMM：未成熟单核细胞，：未成熟单核细胞，IML：未成熟淋巴细胞）：未成熟淋巴细胞）四、血液分析仪检测参数及原理四、血液分析仪检测参数及原理 不同类型血液分析仪检测参数的原理不尽不同类型血液分析仪检测参数的原理不尽相同。高档仪器应用相同。高档

24、仪器应用2种或种或2种以上检测原理，种以上检测原理，组合电学、光学、细胞化学等技术，在独特检组合电学、光学、细胞化学等技术，在独特检测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参数（表量、亚类及相关参数（表3-4、表、表3-5）。）。第二节第二节 血液分析仪检测参数和结果显示血液分析仪检测参数和结果显示一、血液分析仪检测参数一、血液分析仪检测参数 血液分析仪检测参数包括：临床报告参数、异常血液分析仪检测参数包括：临床报告参数、异常报警或研究参数、仪器内部监测参数报警或研究参数、仪器内部监测参数3类。血液分析仪类。血液分析仪检测的总体目标有检测的

25、总体目标有2个：一是筛检和直接报告正常检验个：一是筛检和直接报告正常检验结果，二是在出现异常结果时，直接向检验人员报警。结果，二是在出现异常结果时，直接向检验人员报警。随着检测技术的发展和临床循证检验医学证据的随着检测技术的发展和临床循证检验医学证据的建立，目前用于报警和研究的参数，有可能转为能应建立，目前用于报警和研究的参数，有可能转为能应用于临床检测的新参数。用于临床检测的新参数。二、血液分析仪结果显示二、血液分析仪结果显示 血液分析仪检测标本后，结果显示通常有血液分析仪检测标本后，结果显示通常有3种形式：数据、种形式：数据、图形和报警。图形和报警。（一）数据（一）数据 凡可向临床报告的检

26、测参数，一般均以检验报告单的形式凡可向临床报告的检测参数，一般均以检验报告单的形式显示，可按原样和特殊格式打印，并向临床发出或传送结果。显示，可按原样和特殊格式打印，并向临床发出或传送结果。当检测结果超出参考区间时，仪器会给予符号标记（当检测结果超出参考区间时，仪器会给予符号标记（表表示增高，示增高，表示降低），或用特定颜色（如红色表示增高，蓝表示降低），或用特定颜色（如红色表示增高，蓝色表示降低）加以提示。色表示降低）加以提示。对于无法直接报告的结果，也有相应的符号提示。有报警对于无法直接报告的结果，也有相应的符号提示。有报警或结果异常的参数，经检验人员复查、确定后，方可发出报告。或结果异常

27、的参数，经检验人员复查、确定后，方可发出报告。（二）图形（二）图形 血液分析仪常用的图形有血液分析仪常用的图形有2种：直方图和散点图。种：直方图和散点图。1直方图直方图 （1）白细胞直方图：电阻抗型血液分析仪，在）白细胞直方图：电阻抗型血液分析仪，在35450fl范围内将白细胞分为范围内将白细胞分为3群。正常白细胞直方图（图群。正常白细胞直方图（图3-29）。出。出现异常直方图时，常伴随相应部位的报警信号，并有相应的现异常直方图时，常伴随相应部位的报警信号，并有相应的图形改变（图图形改变（图3-30图图3-34）。）。图图3-29 正常白细胞直方图及异常时曲线形态改变主要位置（正常白细胞直方图

28、及异常时曲线形态改变主要位置（R1R4）图图3-30 原始、幼稚白细胞增多直方图原始、幼稚白细胞增多直方图图图3-31 淋巴细胞减少和中性粒细胞增多直方图淋巴细胞减少和中性粒细胞增多直方图图图3-32 淋巴细胞增多和中淋巴细胞增多和中性粒细胞减少直方图性粒细胞减少直方图图图3-33 中间细胞（单个核细胞）群增多直方图中间细胞（单个核细胞）群增多直方图图图3-34 单个核细胞绝对增多直方图单个核细胞绝对增多直方图 （2）红细胞直方图：正常红细胞直方图（图）红细胞直方图：正常红细胞直方图（图3-2）是一条近似正态分布的单峰曲线，通常位于是一条近似正态分布的单峰曲线，通常位于36360fl范围内，横

29、坐标表示红细胞体积，纵坐标表示不同体范围内，横坐标表示红细胞体积，纵坐标表示不同体积红细胞出现的频率。异常直方图见图积红细胞出现的频率。异常直方图见图3-35图图-37。图图3-2正常红细胞直方图正常红细胞直方图图图3-35 小红细胞且大小不均直方图小红细胞且大小不均直方图图图3-36 巨红细胞且大小不均直方图巨红细胞且大小不均直方图图图3-37 巨幼细胞性贫血治疗有效直方图（呈双峰）巨幼细胞性贫血治疗有效直方图（呈双峰）（3）血小板直方图：正常血小板直方图是一个偏态分布）血小板直方图：正常血小板直方图是一个偏态分布的单峰光滑曲线，通常在的单峰光滑曲线，通常在230fl范围内，主要集中在范围内

30、，主要集中在215fl。当血标本中存在大血小板、血小板聚集、小红细胞、红细胞当血标本中存在大血小板、血小板聚集、小红细胞、红细胞碎片时，可出现异常血小板直方图（图碎片时，可出现异常血小板直方图（图3-38）。）。图图3-38大血小板增多直方图大血小板增多直方图 2散点图散点图 不同型号血液分析仪由于应用光不同型号血液分析仪由于应用光散射原理不同，即使是正常红细胞、白细胞或血小散射原理不同，即使是正常红细胞、白细胞或血小板的散点图表达形式也有明显区别。通常，平面散板的散点图表达形式也有明显区别。通常，平面散点图只显示二维（点图只显示二维（X、Y轴）图像，而三维（轴）图像，而三维（X、Y、Z轴）图

31、像则显示立体图像。轴）图像则显示立体图像。在二维坐标系中，横坐标（在二维坐标系中，横坐标（X轴）和纵坐标轴）和纵坐标（Y轴）分别表示一种检测原理或检测角度的细胞轴）分别表示一种检测原理或检测角度的细胞信息，位于坐标象限中的任何一个散点反映的就是信息，位于坐标象限中的任何一个散点反映的就是X轴和轴和Y轴的综合信息。轴的综合信息。（三）报警（三）报警 1报警的概念报警的概念 血液分析仪的功能主要有血液分析仪的功能主要有3项：项：筛检和报告正常检测结果，此时，一般不出现任何报警。筛检和报告正常检测结果，此时，一般不出现任何报警。技术条件已成熟，被技术条件已成熟，被FDA批准、并在仪器或实验室设定批准

32、、并在仪器或实验室设定的检测项目规则内作出报告时，也可无报警。但在多数情况下的检测项目规则内作出报告时，也可无报警。但在多数情况下仍出现报警，以提醒检验人员密切注意已经出现的异常。仍出现报警，以提醒检验人员密切注意已经出现的异常。标本不能满足实验室预先设定的各项规则时，仪器必然标本不能满足实验室预先设定的各项规则时，仪器必然出现报警，必须复查。检测结果出现报警，意味着仪器直接向出现报警，必须复查。检测结果出现报警，意味着仪器直接向临床报告检验结果的可靠性已经明显降低，在没有复查确认或临床报告检验结果的可靠性已经明显降低，在没有复查确认或有效解释之前，不能直接向临床签发检测结果报告。有效解释之前

33、，不能直接向临床签发检测结果报告。2报警来源报警来源 主要包括检测结果超出实主要包括检测结果超出实验室设定的检测项目参考区间、处于要求复验室设定的检测项目参考区间、处于要求复查的状态、临床病理标本、标本异常干扰和查的状态、临床病理标本、标本异常干扰和人群变异。应高度重视标本异常干扰引起的人群变异。应高度重视标本异常干扰引起的报警（表报警（表3-6）。）。3报警形式报警形式 有图形、符号和文字有图形、符号和文字3种。仪种。仪器根据预先设定的检测数据、大小分布和图形等器根据预先设定的检测数据、大小分布和图形等作出全面分析和判断，对可疑结果用文字或图示作出全面分析和判断，对可疑结果用文字或图示形式给

34、出解释性、易于理解的报警信息。如用红形式给出解释性、易于理解的报警信息。如用红色表示阳性，绿色表示阴性。出现色表示阳性，绿色表示阴性。出现“阳性阳性”或或“错误错误”提示，可能的确是由于标本异常所致，提示，可能的确是由于标本异常所致，需要进一步复查。需要进一步复查。4报警内容报警内容 报警内容是厂商和用户报警内容是厂商和用户作出的定义，涉及检测对象的年龄、性别、作出的定义，涉及检测对象的年龄、性别、参考区间、危急值、红细胞计数值、血小板参考区间、危急值、红细胞计数值、血小板计数值、白细胞计数和分类值、细胞形态或计数值、白细胞计数和分类值、细胞形态或可疑的各种异常信息。各类血液分析仪常见可疑的各

35、种异常信息。各类血液分析仪常见报警内容见表报警内容见表3-7。第三节第三节 血液分析仪检测结果血液分析仪检测结果显微镜复查规则显微镜复查规则 2005年，国际实验室血液学学会（年，国际实验室血液学学会（ISLH）提）提出了显微镜复查的出了显微镜复查的41条建议性标准（表条建议性标准（表3-8、表、表 3-9、表表3-10、表、表3-11）。近年来，又有一些血液学检验）。近年来，又有一些血液学检验专家针对不同类型的血液分析仪制定了各自的显微专家针对不同类型的血液分析仪制定了各自的显微镜复查规则，但其临床实用性尚处于实践检验中。镜复查规则，但其临床实用性尚处于实践检验中。一、血液分析仪检验质量保证

36、一、血液分析仪检验质量保证 血液分析仪检验结果的质量保证，要贯血液分析仪检验结果的质量保证，要贯穿于临床医生的申请，护士或检验人员采集穿于临床医生的申请，护士或检验人员采集标本、运输人员转运标本，检验人员接收标标本、运输人员转运标本，检验人员接收标本、检测、复查确认、打印结果、发出报告，本、检测、复查确认、打印结果、发出报告，以及临床满意的全过程。以及临床满意的全过程。第四节第四节 血液分析仪检验的质量保证、血液分析仪检验的质量保证、仪器校准和性能评价仪器校准和性能评价 （一）检测前质量保证（一）检测前质量保证 1合格的检验人员合格的检验人员 上岗前接受规范的上岗前接受规范的培训。掌握采用参考

37、方法校正仪器检测参数的培训。掌握采用参考方法校正仪器检测参数的原则。参加能力测试。原则。参加能力测试。2合适的检测环境合适的检测环境 3合格的血液分析仪合格的血液分析仪 4配套试剂配套试剂 5合格的检测标本合格的检测标本 合格的检测标本的要合格的检测标本的要求见表求见表3-12。（二）检测中质量保证（二）检测中质量保证 1仪器启动仪器启动 按照按照SOP的规定，在各种设备连的规定，在各种设备连接完好的基础上，才能开启仪器。接完好的基础上，才能开启仪器。2室内质控室内质控 3标本检测标本检测 吸样前必须采用混匀器法或人工吸样前必须采用混匀器法或人工法多次充分混匀标本。法多次充分混匀标本。4仪器清

38、洁仪器清洁 应随时清洁被血液标本污染的部应随时清洁被血液标本污染的部位。特别注意在关闭仪器后，清洁检测部件（如吸样位。特别注意在关闭仪器后，清洁检测部件（如吸样针孔）和仪器外部，确保其通畅、洁净，并处理检测针孔）和仪器外部，确保其通畅、洁净，并处理检测废液。废液。（三）检测后质量保证（三）检测后质量保证 1实验室内结果分析实验室内结果分析 按按ISLH的复查标准，并根据本的复查标准，并根据本实验室设定的规则，复查检测结果。实验室设定的规则，复查检测结果。（1）分析有密切关联的参数之间的关系：如在）分析有密切关联的参数之间的关系：如在RBC、HCT与与HGB之间掌握之间掌握“3规则规则”。即：即

39、：3RBCHb；3Hb HCT。临床允许误差为。临床允许误差为3%。（2）确定是否需要显微镜复查：）确定是否需要显微镜复查：复查的重点：复查的重点：一是检查血细胞形态，并注意可能存在的异常细胞和血一是检查血细胞形态，并注意可能存在的异常细胞和血液寄生虫。液寄生虫。二是做白细胞分类计数，并估算油镜下细胞分布良好区二是做白细胞分类计数，并估算油镜下细胞分布良好区域内的白细胞和血小板的数量，以验证血细胞计数的准确性。域内的白细胞和血小板的数量，以验证血细胞计数的准确性。2结合临床情况作相关分析结合临床情况作相关分析 3定期征求临床对检验结果的评定期征求临床对检验结果的评 4记录和报告难以解释的检测结

40、果记录和报告难以解释的检测结果 对于难以解释的检测结果，必须记录并报告对于难以解释的检测结果，必须记录并报告临床，有助于积累实践经验，发现新的临床临床，有助于积累实践经验，发现新的临床意义。意义。二、血液分析仪校准二、血液分析仪校准 （一）建立仪器检测参数基准值（一）建立仪器检测参数基准值 基准值是评判血液分析仪检测性能的参考基准值是评判血液分析仪检测性能的参考水平。当安装新购仪器或仪器调整、维修后，水平。当安装新购仪器或仪器调整、维修后，可因基准值的变化影响血液分析仪的精密度和可因基准值的变化影响血液分析仪的精密度和准确度，需要建立或确认参数的基准值。准确度，需要建立或确认参数的基准值。2校

41、准品的来源和性能要求校准品的来源和性能要求 校准品是校准品是用于校准血液分析仪的物质，应具有稳定且用于校准血液分析仪的物质，应具有稳定且可溯源的特点，以保证检测结果的正确性。可溯源的特点，以保证检测结果的正确性。通常使用与仪器配套的商品化校准品。对于通常使用与仪器配套的商品化校准品。对于校准品定值的来源，应由新鲜全血经参考测校准品定值的来源，应由新鲜全血经参考测量系统传递赋值，不应由前批号的校准品或量系统传递赋值，不应由前批号的校准品或其他厂商的校准品传递，血液分析仪相关检其他厂商的校准品传递，血液分析仪相关检测参数的参考方法见表测参数的参考方法见表3-13。我国食品药品监督管理局于我国食品药

42、品监督管理局于2008年发布、年发布、2010年实年实施的施的YYT0701-2008号文件，规定号文件，规定“血液分析仪用校准物血液分析仪用校准物（品）（品）”的主要指标见表的主要指标见表3-14-1，其主要特征见表，其主要特征见表3-14。3不精密度检测不精密度检测 4校准操作要求校准操作要求 如果如果C/R1.0，则当前校准，则当前校准因子必须成比例向下调节；如果因子必须成比例向下调节；如果C/R1.0，则当前，则当前校准因子必须成比例向上调节。将校准品定值的可校准因子必须成比例向上调节。将校准品定值的可信限与分析仪测得每项参数的可信限结合，可得到信限与分析仪测得每项参数的可信限结合，可

43、得到校准值的校准值的95%可信限。可信限。5验证特殊检测项目验证特殊检测项目 如白细胞分类计数和网如白细胞分类计数和网织红细胞计数，见表织红细胞计数，见表3-13。（二）室内质量控制目的和方法（二）室内质量控制目的和方法 质控目标就是要监测仪器检测的准确性或精密度（或两质控目标就是要监测仪器检测的准确性或精密度（或两者）是否失控者）是否失控 1用稳定化全血质控品进行质控用稳定化全血质控品进行质控 （1）质控品测定频率）质控品测定频率 （2）结果解释）结果解释 2用病人全血标本进行质控用病人全血标本进行质控 （1）配对比较法）配对比较法 （2）加权浮动均值法）加权浮动均值法 （3）监测参考区间法

44、）监测参考区间法 （4）监测白细胞分类计数法）监测白细胞分类计数法 3室间质量评估室间质量评估 是评价实验室检测准确性的独立方法是评价实验室检测准确性的独立方法三、血液分析仪性能评价三、血液分析仪性能评价 1994年，年，ICSH公布了血液分析仪评价指南，公布了血液分析仪评价指南，2010年年CLSI又对血液分析仪的性能评价指标进行了又对血液分析仪的性能评价指标进行了修订，其主要包括总体评价、性能评价等。修订，其主要包括总体评价、性能评价等。（一）总体评价（一）总体评价 评价内容包括：仪器基本情况、仪器手册、方法评价内容包括：仪器基本情况、仪器手册、方法学、评价步骤。技术评价计划包括：校准、校

45、准品和学、评价步骤。技术评价计划包括：校准、校准品和质控品、试剂、标本及处理、常用细胞计数参数评估质控品、试剂、标本及处理、常用细胞计数参数评估标本的浓度分布范围（表标本的浓度分布范围（表3-15）、记录原始结果、预）、记录原始结果、预评价和性能评价（表评价和性能评价（表3-16）。）。（二）性能评价二）性能评价 性能评价是评价血液分析仪的主体内容，包括性能评价是评价血液分析仪的主体内容，包括厂商确认和用户验证。厂商确认和用户验证。2010年年CLSI规定的用户验证规定的用户验证指标如下。指标如下。1空白检测限空白检测限 空白检测限（空白检测限（LoB）又称为本）又称为本底，是指空白试剂和电子

46、噪音的作用，是导致仪器底，是指空白试剂和电子噪音的作用，是导致仪器检测结果假性增高的原因。检测结果假性增高的原因。LoB与准确的定量检测与准确的定量检测低限是不同的。低限是不同的。2携带污染携带污染 是指所检测的前一个是指所检测的前一个标本对下一个标本检测结果的影响。通标本对下一个标本检测结果的影响。通常用携带污染率（常用携带污染率（%）表示。）表示。用于评价携带污染的高值、低值标用于评价携带污染的高值、低值标本通常取自临床，具体标本浓度分布范本通常取自临床，具体标本浓度分布范围见表围见表3-17。3精密度（重复性）精密度（重复性）精密度评价包括精密度评价包括批内、批间精密度和总精密度评价。理

47、论上，批内、批间精密度和总精密度评价。理论上，批内或批间精密度研究范围应覆盖整个生理批内或批间精密度研究范围应覆盖整个生理和病理范围，不同批次的标本应包括高、中、和病理范围，不同批次的标本应包括高、中、低值。在同一批内，所有标本应有相似结果。低值。在同一批内，所有标本应有相似结果。4检测下限与定量检测下限检测下限与定量检测下限 （1）检测下限（）检测下限（LLoD）：是指一定概率下标）：是指一定概率下标本可被检出的最低浓度。在血液分析仪上，是指可本可被检出的最低浓度。在血液分析仪上，是指可与本底区分开的最低血细胞浓度值。与本底区分开的最低血细胞浓度值。CLSI EP17文文件规定：件规定：LL

48、oDLoB的均值的均值+LoB标准差（标准差（SD）的）的1个常数倍数（正态资料常数个常数倍数（正态资料常数1.645）。）。（2）定量检测下限（）定量检测下限（LLoQ）：是指标本中能）：是指标本中能被准确定量的最低浓度值，且定量结果在可接受的被准确定量的最低浓度值，且定量结果在可接受的精密度和准确度范围内。精密度和准确度范围内。5分析测量区间（分析测量区间（AMI）分析测量区间分析测量区间（AMI）也可用分析测量范围（）也可用分析测量范围（AMR）表示。观）表示。观察仪器在覆盖浓度范围内检测结果的一致性，以得察仪器在覆盖浓度范围内检测结果的一致性，以得到仪器的最佳测试范围，该范围越宽越好。

49、到仪器的最佳测试范围，该范围越宽越好。AMI是是厂商遵照厂商遵照FDA要求测试并载入仪器手册的一项技术要求测试并载入仪器手册的一项技术指标，用户无需调整，指标，用户无需调整，CLIA88对此也不做要求。对此也不做要求。6可比性可比性 是反映仪器检测结果与使用常规是反映仪器检测结果与使用常规程序检测结果达到一致性的能力。所用仪器分为：程序检测结果达到一致性的能力。所用仪器分为：待测（新系统）血液分析仪（待测（新系统）血液分析仪（TAA）和比对（原系）和比对（原系统）血液分析仪（统）血液分析仪（CAA）。用于评价可比性和准确）。用于评价可比性和准确性的相关参数及参考方法见表性的相关参数及参考方法见

50、表3-13。一般情况下，一般情况下，TAA与与CAA比对、比对、TAA与参考与参考（最佳）方法比对，其检测结果的差值应控制在表（最佳）方法比对，其检测结果的差值应控制在表3-18的范围。的范围。当白细胞分类计数结果出现表当白细胞分类计数结果出现表3-19的变化时，的变化时，则需要以显微镜法与则需要以显微镜法与TAA检测结果进行比对。检测结果进行比对。7不同检测模式的比较不同检测模式的比较 对血液分析仪的两种模对血液分析仪的两种模式（全血模式和稀释血模式）进行评估。式（全血模式和稀释血模式）进行评估。8对异常标本和干扰物的评价对异常标本和干扰物的评价 尽可能多检测能尽可能多检测能代表所有临床检验