第二章微生物检测实验室的设施与设备验证参考模板范本.ppt

1、第二章第二章 微生物检测实验室的设施与设备验证微生物检测实验室的设施与设备验证 教学目标：教学目标：1、掌握实验室设施中的洁净室（无菌室）、毒菌种处理和微、掌握实验室设施中的洁净室（无菌室）、毒菌种处理和微生物鉴别局部生物鉴别局部100级控制室要求与管理级控制室要求与管理2、了解实验室设施中的抗生素微生物检定、细菌内毒素检查、了解实验室设施中的抗生素微生物检定、细菌内毒素检查、抑菌实验的半无菌室要求与管理抑菌实验的半无菌室要求与管理3、熟悉实验室设备与验证、熟悉实验室设备与验证4、了解实验室操作所用玻璃器具（容器）的校正（验证）、了解实验室操作所用玻璃器具（容器）的校正（验证）教学重点与难点：

2、教学重点与难点：1、实验室设施中的洁净室（无菌室）、毒菌种处理和微生物、实验室设施中的洁净室（无菌室）、毒菌种处理和微生物鉴别局部鉴别局部100级控制室要求与管理级控制室要求与管理2、实验室设备与验证实验室设备与验证微生物检测实验室设施与设备微生物检测实验室设施与设备微生物检测实验室应具备的功能微生物检测实验室应具备的功能 洁净室（无菌室）规范要求洁净室（无菌室）规范要求洁净度检查的要求与方法洁净度检查的要求与方法小结小结:作业：作业：第二章第二章 微生物检测实验室的设施与设备验证微生物检测实验室的设施与设备验证 微微生生物物检检测测实实验验室室设设施施与与设设备备(1)保证检测的无菌环境设施

3、与器械保证检测的无菌环境设施与器械如洁净室（无菌如洁净室（无菌室）、无菌隔离系统、净化工作台等。室）、无菌隔离系统、净化工作台等。(2)保证检测用实验用品与用具的无菌（灭菌）设施保证检测用实验用品与用具的无菌（灭菌）设施或设备或设备如高压蒸汽灭菌器（或手提高压蒸汽灭如高压蒸汽灭菌器（或手提高压蒸汽灭锅）、电热恒温干燥箱等。锅）、电热恒温干燥箱等。(3)保证检测细菌内毒素反应的器械用具保证检测细菌内毒素反应的器械用具如各种细如各种细菌内毒素反应测定仪。菌内毒素反应测定仪。(5)各种实验操作所用仪器各种实验操作所用仪器全封闭薄膜过滤装置、电全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、天

4、平、显微镜等。动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、天平、显微镜等。(4)保证检测中微生物能恒温生长与菌种保存的恒温设保证检测中微生物能恒温生长与菌种保存的恒温设备备如恒温培养箱、冰箱如恒温培养箱、冰箱(6)实验操作所用的玻璃器具实验操作所用的玻璃器具各种刻度吸管、移液管、各种刻度吸管、移液管、容量瓶、试管、三角烧瓶、双碟培养皿等常用玻璃器具。容量瓶、试管、三角烧瓶、双碟培养皿等常用玻璃器具。(7)保证测量各类样品中微生物菌落数或抑菌直径的有关保证测量各类样品中微生物菌落数或抑菌直径的有关仪器仪器如空气浮游菌采样器、空气悬浮粒子计数器、如空气浮游菌采样器、空气悬浮粒子计数器、zy-300IVzy-

5、300IV多功能微生物自动测量分析仪等。多功能微生物自动测量分析仪等。返回微生微生物检物检测实测实验室验室应具应具备的备的功能功能(1)能开展无菌检查，微生物限度检查和无菌采样各能开展无菌检查，微生物限度检查和无菌采样各自严格分开的无菌室或者隔离系统。自严格分开的无菌室或者隔离系统。(2)能开展菌种处理与微生物检测鉴别的独立的局能开展菌种处理与微生物检测鉴别的独立的局部部100级的无菌洁净室。级的无菌洁净室。(3)能开展抗生素效价的微生物检定或能进行细菌内毒素能开展抗生素效价的微生物检定或能进行细菌内毒素检查检查(凝胶法或定量法凝胶法或定量法)、抗菌作用测定的各自分开的半、抗菌作用测定的各自分

6、开的半无菌实验室。无菌实验室。(4)能进行微生物生长培养的培养室。能进行微生物生长培养的培养室。(5)可以进行配制试液及培养基的配制室。可以进行配制试液及培养基的配制室。(6)能进行高压灭菌的灭菌室。能进行高压灭菌的灭菌室。(7)实验器皿洗涤、烘干室。实验器皿洗涤、烘干室。(8)人员办公休息室。人员办公休息室。(9)大型实验室还可设有实验用品、易耗品储藏室。大型实验室还可设有实验用品、易耗品储藏室。表表2-1：我国：我国GMP实施指南提出的级实施指南提出的级别别 空 气 洁空 气 洁净 度 级净 度 级别别0.5m0.5m的 微 粒 数的 微 粒 数个个/m/m3 35m5m的的微 粒 数 个

7、微 粒 数 个/m/m3 3沉降菌（沉降菌（90mm90mm皿，沉降皿，沉降0.5h0.5h）菌落菌落/皿皿浮 游浮 游菌个菌个/m m3 31001001 1万万1010万万35003500350000350000350000035000000 020002000200002000011331010551001005005003030万级万级105000010500000 060000600001515返回1.洁净室（无菌室）规范要求洁净室（无菌室）规范要求 无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过染区。面积一般不超过10m10m2

8、 2，不小于，不小于5m5m2 2；高度不；高度不超过超过2.4m2.4m。由。由1 12 2个缓冲间、操作间组成（操作个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留

9、死角。操花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。作间内不应安装下水道。洁净室（无菌室）规范要求图（一洁净室（无菌室）规范要求图（一）洁净室（无菌室）规范要求图（二洁净室（无菌室）规范要求图（二）洁净室（无菌室）规范要求图（三洁净室（无菌室）规范要求图（三）无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，气装置，操作区洁净度操作区洁净度100100级级或放置同等级别或放置同等级别的超净工作台，的超净工作台，室内温度控制室内温度控制18182626，相对，相对湿度湿度454565%65%。缓冲间及操作室内均应设置能缓冲间及操作室内均应设置

10、能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静相邻房间之间的静压差应大于压差应大于5Pa5Pa，洁净室（区）与室外大气的，洁净室（区）与室外大气的静压差大于静压差大于10Pa10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于于300300勒克斯。勒克斯。缓冲间和操作间所设置的紫外缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（线杀菌灯（2 22.5W/m2.5W/m3 3），应定期检查辐射强，应定期检查辐射强度，要求在

11、操作面上达度，要求在操作面上达40W/cm40W/cm2 2。不符合要。不符合要求的紫外杀菌灯及时更换。求的紫外杀菌灯及时更换。无菌操作室空气除菌过滤空气装置图无菌操作室空气除菌过滤空气装置图无菌操作室录像无菌操作室录像(3)人员进入洁净室（无菌室）要求人员进入洁净室（无菌室）要求 实验人员进入洁净室（无菌室）实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒用消毒液消毒双手后戴上无菌

12、手套，换上液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。露在外面），戴上无菌口罩。然后，然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时进入第二缓冲间时换第二双消毒隔换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室离拖鞋。再经风淋室30 s风淋后进入风淋后进入无菌室。无菌室。更衣录像更衣录像返回4.4.洁净度检查的要求与方法洁净度检查的要求与方法(1)(1)沉降菌检测方法及标准沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将以无菌方式将3 3个营养琼脂平个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放板带入无菌操

13、作室，在操作区台面左、中、右各放1 1个；打开平个；打开平板盖，在空气中暴露板盖，在空气中暴露30min30min后将平板盖好，置后将平板盖好，置32.532.52.52.5培养培养48 h48 h，取出检查，取出检查，3 3个平板上生长的菌落数平均小于个平板上生长的菌落数平均小于1 1个。个。(2)(2)浮游菌检测方法及标准浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击：用专门的采样器，宜采用撞击法机理的采样器，一般采用法机理的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器狭缝式或离心式采样器，并配有流量，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器计和定时器，严格按仪器说明书

14、的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其它培养基。使用时，先开养基为营养琼脂培养基或药典认可的其它培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于动真空泵抽气，时间不少于5 min5 min，调节流量、转盘、转速。关闭，调节流量、转盘、转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样

15、量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.532.52.52.5培养培养48 h48 h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5 5个个/m/m3 3。狭缝式或离心式采样器狭缝式或离心式采样器空气浮游菌空气浮游菌检测方法录像检测方法录像空气微粒空气微粒检测方法录像检测方法录像洁净室空气尘埃粒子洁净室空气尘埃粒子检测方法录像检测方法录像6.定期更换新的紫外灯管、更换净化系统定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头的初效、中效、高效头 返回作业：作业：1、仪器设备标识有哪几种？各表示什么意思。2、仪器设备管理有何原则要点。3、超净工作占的量控与使用要注意什么问题？3、检验室使用的标准品或对照品，均应具有什么性?小结小结:实验室设备与验证实验室设备与验证返回