在基因水平诊断疾病课件.ppt

1、1Gene D2nucleusGeneDiagnosis transcriptiontranslationFour types of diagnosisClinical manifestationBiologicalDiagnosis SerumDiagnosis ClinicalDiagnosis 基因诊断的基本概念基因诊断的基本概念nucleusGeneDiagnosis transcriptiontranslationFour types of diagnosisClinical manifestationBiologicalDiagnosis SerumDiagnosis Clinic

2、alDiagnosis 定义：定义：应用分子生物学技术,在DNA或RNA水平，通过检测致病基因（内源或外源）的存在、基因结构缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法。3第一节 基因诊断的基础 一、概念一、概念 与传统诊断的区别：与传统诊断的区别：直接以病理基因（致直接以病理基因（致病基因、疾病相关基因和外源性病原生物基因等）病基因、疾病相关基因和外源性病原生物基因等）为分析对象，即对待诊生物材料某一（些）特定为分析对象，即对待诊生物材料某一（些）特定基因进行分析判断。基因进行分析判断。4 1 1属于属于“病因诊断病因诊断”，针对性和特异性强针对性和特异性强。2 2特异性和灵敏度高特异性和

3、灵敏度高，微量标本即可进行诊断。，微量标本即可进行诊断。3 3检测标本检测标本适应性广适应性广 。4 4诊断感染性疾病诊断感染性疾病早期、快速早期、快速第一节 基因诊断的基础5lDNA或或RNA水平变化：水平变化：l相关基因序列的有无相关基因序列的有无l受累基因表达的高低受累基因表达的高低l病毒基因及其转录产物在体内从无到有病毒基因及其转录产物在体内从无到有l癌基因表达水平从低到高等；癌基因表达水平从低到高等；l基因结构变化即突变：基因结构变化即突变：l点突变引起基因失活、点突变引起基因失活、l染色体转位引起基因异常激活或灭活。染色体转位引起基因异常激活或灭活。第一节 基因诊断的基础l目标序列

4、的识别和定性定量分析是目标序列的识别和定性定量分析是6l1.Directly Detection:known abnormal gene dot mutation deletion insertion 2.Indirectly Detection:unknown abnormal gene DNA marker DNA polymorphism Linkage analysis Gene Diagnosis7l核酸分子杂交和核酸分子杂交和PCR扩增扩增是基因诊断的基本技术是基因诊断的基本技术l核酸分子杂交可进行基因的特异的特异识别和分析。核酸分子杂交可进行基因的特异的特异识别和分析。lPCR

5、可进行已知序列或已知部分序列基因的检测。可进行已知序列或已知部分序列基因的检测。二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术第一节 基因诊断的基础8第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术（一）核酸杂交（一）核酸杂交91.1.制备合适的探针制备合适的探针 是核酸杂交用于基因诊断的关键是核酸杂交用于基因诊断的关键 What is a probe?标记的已知序列核酸片段，包括标记的已知序列核酸片段，包括 DNA,cDNA,RNA,Oligonucleotide第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术 针对具体情况选择合适的探针序列是基因诊断准确、

6、特针对具体情况选择合适的探针序列是基因诊断准确、特异、简便、可靠的基础异、简便、可靠的基础。（一）核酸杂交（一）核酸杂交101.1.制备合适的探针制备合适的探针 选择探针的原则：选择探针的原则：u致病微生物核酸中最保守、最特异的序列致病微生物核酸中最保守、最特异的序列u突变基因中含突变位点或突变区的序列突变基因中含突变位点或突变区的序列u待测基因编码的待测基因编码的mRNAmRNA序列等序列等第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术 针对具体情况选择合适的探针序列是基因诊断针对具体情况选择合适的探针序列是基因诊断准确、特异、简便、可靠的基础。准确、特异、简便、可靠的基

7、础。112.2.不同形式的核酸分子杂交不同形式的核酸分子杂交l Southern blotl Northern blotl dot hybridization reverse dot hybridizationl FISH:fluorescence in situ hybridization第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术12Southern blotNorthern blotDot blotIn situ hybridization检测对象DNARNADNA/RNADNA/RNA优点特异DNA片段，测定分子量基因突变分析定性、定量分析定性、定量分析定位定性定

8、量缺点不能定量不能定位不能确定分子量，特异性不好2.2.不同形式的核酸分子杂交不同形式的核酸分子杂交13第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术（二）（二）PCR技术是基因诊断的一种技术是基因诊断的一种基础基础技术。技术。PCRPCR在基因诊断中的作用在基因诊断中的作用 从极少样品即可扩增出肉眼可见的产物。从极少样品即可扩增出肉眼可见的产物。放大待诊信号，提高检测灵敏度放大待诊信号，提高检测灵敏度 14 为适应为适应DNA诊断的需要，除上述常规诊断的需要，除上述常规PCR外，又逐外，又逐步发展了不同目的特殊类型的步发展了不同目的特殊类型的PCR技术：技术：（1）长片段

9、长片段PCR（long fragment PCR）（2）锚定锚定PCR（anchored PCR）（3）嵌套式嵌套式PCR（nesting PCR）（4）多重多重PCR（multiplex PCR）（5）多重等位基因多重等位基因PCR（multiplex allele PCR）（6）不对称不对称PCR（asymmertric PCR）（7）反向反向PCR（inverse PCR）（8）原位原位PCR（in situ PCR）（9）定量定量PCR（quantitative PCR）(10)逆转录逆转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）15（二）（二）PCR

10、技术技术 PCRPCR及其衍生技术及其衍生技术1.1.直接运用直接运用PCRPCR扩增：异常缺失与存在扩增：异常缺失与存在2.2.PCRPCR产物的限制性酶谱分析（产物的限制性酶谱分析（PCR-RE)PCR-RE)和限制性片段长度多态性分析（和限制性片段长度多态性分析（PCR-PCR-RFLP)RFLP)RFLP:Restriction Fragment Length RFLP:Restriction Fragment Length Polymorphism Polymorphism 16（二）（二）PCR技术技术 PCRPCR及其衍生技术及其衍生技术 PCRPCRRFLPRFLP：通过：通过

11、PCRPCR将包含待测位将包含待测位点的点的DNADNA片段扩增后，用识别相应位点片段扩增后，用识别相应位点的限制性核酸内切酶水解，根据所产生的限制性核酸内切酶水解，根据所产生限制性片段的数量和长度作出诊断。限制性片段的数量和长度作出诊断。用于已知突变位点的验证性诊断用于已知突变位点的验证性诊断 17（二）（二）PCR技术技术 PCR及其衍生技术及其衍生技术3.PCR-3.PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针斑等位基因特异性寡核苷酸探针斑点杂交点杂交(PCR-ASO(PCR-ASO，PCR-DB)PCR-DB)ASO:Allele Specific OligonucleotideASO:Alle

12、le Specific Oligonucleotide 1).wild probe 1).wild probe vsvs mutant probe mutant probe 2).2).已知突变的验证性检测已知突变的验证性检测 3).3).可区分纯合子和杂合子可区分纯合子和杂合子 18 PCR及其衍生技术及其衍生技术4.PCR-4.PCR-单链构象多态性分析（单链构象多态性分析（PCR-SSCP)PCR-SSCP)将将PCRPCR产物变性为单链后进行非变性产物变性为单链后进行非变性（中性）聚丙烯酰胺凝胶电泳，单个核苷（中性）聚丙烯酰胺凝胶电泳，单个核苷酸的改变即可造成酸的改变即可造成DNADN

13、A单链构象的改变，进单链构象的改变，进而导致电泳速率变化，从而检测出基因突而导致电泳速率变化，从而检测出基因突变。变。1 1）单链核酸碱基）单链核酸碱基-构象构象-电泳速率电泳速率2 2）中性聚丙烯酰胺凝胶电泳）中性聚丙烯酰胺凝胶电泳 （二）（二）PCR技术技术19PCR-SSCP分析原理示意分析原理示意20 PCR及其衍生技术及其衍生技术 5.PCR-5.PCR-变性梯度凝胶电泳分析（变性梯度凝胶电泳分析（PCR-PCR-DGGEDGGE）Denaturing Gradient Gel ElectrophoresisDenaturing Gradient Gel Electrophoresi

14、s（二）（二）PCR技术技术21 PCR及其衍生技术及其衍生技术7.7.甲基化特异性甲基化特异性PCRPCR Methylation Methylation specific PCR,MS-PCR specific PCR,MS-PCR模板甲基化处理：模板甲基化处理：NaNa2 2SOSO3 3 C-U C-U需设计特异性甲基化引物需设计特异性甲基化引物G:C/A:UG:C/A:U（二）（二）PCR技术技术22 3 GGACGTAGA5 非甲基化引物非甲基化引物 5-CCTGCATCT-GCGCTAGGC-33-GGACGTAGA-CGCGATCCG-5 5GCGCATGGC 3 3 AAAC

15、ATAAA 5 甲基化引物甲基化引物 5-UUTGUATUT-GCGCTAGGC-33-GGACGTAGA-AUGUGATUU-5 5TACACATAA 323 3 GGACGTAGA5 5-CCTGCmATCT-GCGCTAGGC-33-GGACGTAGA-CGCGATCmCmG-5 5GCGCATGGC 3 3 AAACATA AA5 5-UUTGCmATUT-GCGCTAGGC-3 3-GGACGTAGA-UGUGATCmCmG-5 5 ACACATA AC 3若存在甲基化位点若存在甲基化位点 24 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶核酸的定量分析 Q-PCR,Qu

16、antitative PCRQ-PCR,Quantitative PCR 基本原理：基本原理：PCRPCR指数扩增规律指数扩增规律 N=NN=N0 0(1+E(1+E）n n （二）（二）PCR技术技术25 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶核酸的定量分析 （1 1）测定）测定PCRPCR产物量：产物量：梯度（系列）稀释法：先对已知量的靶梯度（系列）稀释法：先对已知量的靶 DNA进行梯度稀释（类似于比色）进行梯度稀释（类似于比色）灰度扫描法灰度扫描法 （二）（二）PCR技术技术26 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶核酸的定量分析 （2 2）极限稀释

17、法）极限稀释法基本依据：基本依据：PCRPCR扩增的有效起始模板分子数扩增的有效起始模板分子数 为为10104 410106 6个个 （二）（二）PCR技术技术27 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶核酸的定量分析（3 3）非竞争性对照法）非竞争性对照法基本依据：同时扩增靶序列和内标序列（扩增基本依据：同时扩增靶序列和内标序列（扩增 效率相似）效率相似）如看家基因（如看家基因（house keeper)house keeper)用于用于RT-PCRRT-PCR进行表达分析进行表达分析 （二）（二）PCR技术技术28 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶

18、核酸的定量分析 （4 4）竞争抑制法）竞争抑制法 需制备标准参照核酸需制备标准参照核酸 （二）（二）PCR技术技术29 PCR及其衍生技术及其衍生技术8.8.靶核酸的定量分析靶核酸的定量分析 （5 5）荧光标记探针法）荧光标记探针法 分析：分析：安全、简便快捷、多重检测安全、简便快捷、多重检测 荧光定量荧光定量PCRPCR 实时实时 (real time)PCR(real time)PCR 30（三）（三）DNA序列测定是最直接、最准确的基序列测定是最直接、最准确的基 因诊断技术因诊断技术第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术31（四）（四）DNA芯片技术是应用前景

19、广阔的基因诊断芯片技术是应用前景广阔的基因诊断技术（技术（DNA chips)第一节 基因诊断的基础二、基因诊断的常用技术二、基因诊断的常用技术l生物芯片（生物芯片（biochip&bioarray)技术：技术：根据生物分子间特异性相互作用，将生化分析过程根据生物分子间特异性相互作用，将生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白、多肽、蛋白质等各种生物成分的高通量快速检测分析。质等各种生物成分的高通量快速检测分析。疾病诊断芯片疾病诊断芯片 个性化用药芯片个性化用药芯片32 四、基因芯片（gene chip）生物芯片生物芯片(biochip)应用微

20、电子工业加工工艺，在玻璃、塑料、硅片等材料上加工出用于生物样品分离、反应或分析的微细结构。目前主要有两大类：1.生物活性微阵列(bioactive microarray)2.基因芯片(gene chip),DNA微阵列(DNA microarray)包括多肽、蛋白质、病毒、细胞等。蛋白质芯片可直接从体液中检测生物分子（免疫芯片只需少量样品可一次完成对成千上万种抗原或抗体等致病因素或生物样品的检测分析)。为最重要的生物芯片，广泛用于基因表达谱分析、新基因发现、基因突变及多态性分析、疾病诊断、药物筛选、基因测序等。33DNA microarray34三三.基因诊断有其独特的优点基因诊断有其独特的优

21、点l高特异性：诊断目标高特异性：诊断目标l高灵敏度：分子生物学方法高灵敏度：分子生物学方法l结果稳定可靠：核酸的化学本质结果稳定可靠：核酸的化学本质l早期诊断性：分子遗传学规律早期诊断性：分子遗传学规律l应用广泛性：疾病与非疾病检查应用广泛性：疾病与非疾病检查第一节 基因诊断的基础35l基因诊断技术途径：基因诊断技术途径：l直接分析致病基因分子结构及表达是否直接分析致病基因分子结构及表达是否异常的直接诊断途径；异常的直接诊断途径；l利用多态性遗传标志与致病基因进行连利用多态性遗传标志与致病基因进行连锁分析的间接诊断途径。锁分析的间接诊断途径。第四节 遗传病的基因诊断36直接诊断：检测已知致病基

22、因直接诊断：检测已知致病基因 必要条件必要条件被检基因的突变类型与疾病发病有直接被检基因的突变类型与疾病发病有直接的因果关系：的因果关系：被检基因的正常分子结构已被确定；被检基因的正常分子结构已被确定；被检基因突变位点固定而且已知。被检基因突变位点固定而且已知。第四节 遗传病的基因诊断37 检测是否存在已知的突变。适用于对发病具有直接因果检测是否存在已知的突变。适用于对发病具有直接因果关系的致病基因已明确，对致病基因的序列结构已完全或关系的致病基因已明确，对致病基因的序列结构已完全或部分了解，分子机制已完全或部分清楚者。部分了解，分子机制已完全或部分清楚者。常用方法：常用方法：1.限制性酶切片

23、段分析法限制性酶切片段分析法 适用于基因内的较大片段或位于酶切位点上的点突变适用于基因内的较大片段或位于酶切位点上的点突变 2.寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法。适用于检测各种点突变，特别是不在酶切位点上的点突变。适用于检测各种点突变，特别是不在酶切位点上的点突变。（一）基因突变的直接检测（一）基因突变的直接检测381、限制性酶切图谱直接分析法 导致某一限制酶识别位点导致某一限制酶识别位点移位的大片段缺失或插入，移位的大片段缺失或插入，导致某一限制酶识别位点导致某一限制酶识别位点丧失或获得的点突变，丧失或获得的点突变，均可引起相应限制性片段均可引起相应限制性片段的长

24、度和数量发生变化。的长度和数量发生变化。分析限制性酶切图，即可分析限制性酶切图，即可诊断出此类突变。诊断出此类突变。39镰状细胞贫血：b-珠蛋白基因第六密码子 GAG(Glu)GTG(Val)MstII CCTNAGGb bA CCT GAG GAG 1.15kb 0.2 b bS CCT GTG GAG 1.35kb 1.15kb1.35kbbAbA/b bSbAbAb bS（1）导致某一限制性位点丧失或获得的点突变导致某一限制性位点丧失或获得的点突变40 b-地中海贫血：b-珠蛋白基因3末端缺失0.6kb|BgI II BgI II 5.2kb|BgI II BgI II 4.6kb Ho

25、moHeteroNormal5.2kb4.6kb（2）导致某一限制性位点移位的大片段缺失或插入）导致某一限制性位点移位的大片段缺失或插入41 如果特定的限制酶识别位点周围的如果特定的限制酶识别位点周围的DNA序列已知，即序列已知，即可应用可应用PCR简便地检测出这些限制酶识别位点的存在或简便地检测出这些限制酶识别位点的存在或丢失以及相应限制性片段的长度和数量发生变化，称为丢失以及相应限制性片段的长度和数量发生变化，称为 PCR-RFLP 分析法。分析法。H-ras基因第12密码子点突变：GGC-GTC CCGGC CCGTC HpaII 38bp 100bpx138bp 42l1.点突变：（点

26、突变：（2）无限制性酶切位点改变）无限制性酶切位点改变 直接诊断：检测已知致病基因直接诊断：检测已知致病基因PCR-ASO斑点杂交或反向斑点杂交及等斑点杂交或反向斑点杂交及等位基因特异位基因特异PCR（allele specific PCR，AS-PCR）或称为等位基因特异性扩增（）或称为等位基因特异性扩增（ASA）等）等技术。技术。PCR-ASO斑点杂交或反向斑点杂交技术斑点杂交或反向斑点杂交技术可快速、简易地检测已知突变。可快速、简易地检测已知突变。43寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法受检者基因组DNA或含突变位点的PCR扩增产物与标记的ASO 探针杂交主要适用

27、于检测主要适用于检测 已知点突变已知点突变ASO1 ASO2NormalHeteroHomo44镰状细胞贫血：b-珠蛋白基因点突变 GAG(Glu)-GTG(Val)bA probe ACTCCTGAGGAGAAGTCTGCC bS probe ACTCCTGTGGAGAAGTCTGCC HeterobA probebS probeHomoNormal45PKU，ARNormalprobeMutation probe？46间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标志间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标志DNA多态性：指群体中的多态性：指群体中的DNA分子存在至少两分子存在至少两种不同的类型，即个体间

28、同一染色体的相种不同的类型，即个体间同一染色体的相同位置上同位置上DNA核苷酸序列存在一定的差异核苷酸序列存在一定的差异或变异。或变异。第四节 遗传病的基因诊断47l多态性在人群中出现的频率应大于多态性在人群中出现的频率应大于1%（如小于（如小于1%常认为是异常突变）。常认为是异常突变）。l在生物进化过程中形成的，它本身并不致病或于在生物进化过程中形成的，它本身并不致病或于遗传病有直接联系，故称为遗传病有直接联系，故称为“中性突变中性突变”。l人类的人类的23对染色体中，每一条上都带有许多遗传对染色体中，每一条上都带有许多遗传多态性位点，其中一些位点在染色体上的位置与多态性位点，其中一些位点在

29、染色体上的位置与致病基因靠的很近，甚至连锁在一起遗传，并且致病基因靠的很近，甚至连锁在一起遗传，并且呈孟德尔式遗传。因此，可利用这一多态性位点呈孟德尔式遗传。因此，可利用这一多态性位点作为遗传指示标记。作为遗传指示标记。第四节 遗传病的基因诊断48 同一染色体上两个或以上基因或位点，同一染色体上两个或以上基因或位点，位置上互相靠近并且共分离的现象称为位置上互相靠近并且共分离的现象称为遗传遗传连锁连锁。将与致病基因连锁的某种多态性标志。将与致病基因连锁的某种多态性标志作为遗传标志，在同一个家系成员中探查是作为遗传标志，在同一个家系成员中探查是否存在致病基因的方法即为基因连锁分析法否存在致病基因的

30、方法即为基因连锁分析法（Linkage analysis）。）。（二）基因连锁分析（二）基因连锁分析49间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标志间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标志三代遗传标志：三代遗传标志：1.RFLP 2.STR(short tandem repeats),VNTR(variable number of tandem repeats)3.SNP(single nucleotide polymorphism)第四节 遗传病的基因诊断50DNA polymorphism mark system:1.Restriction Fragment Length Polymorphysm

31、(RFLP)Most of RFLPs do not represent a mutation but a linkage mark Eco R1 Site Southern blot three different molecular genotypespolymorphic site*(About 100,000 RFLPs in human genome)第四节 遗传病的基因诊断512.Microsatellite markers Variable Number of Tandem Repeats (VNTRs)24bp Short Tandem Repeats(STR)three di

32、fferent molecular genotypespolymorphic sequences PCR products(At least 650,000 RFLPs in human genome)第四节 遗传病的基因诊断52DNA指纹分析用于个体鉴定 53ATGGTAAGCCTGAGCTGACTTAGCGT-ATATGGTAAACCTGAGTTGACTTAGCGTCAT SNP SNP insert3.Single nucleotide polymorphysms (SNPs)Single base-pair differences between individuals are pre

33、tty common and easy to find in contrast to RFLPs and VNTRs(there are 1,400,000 SNPs in human genome,about 1 in 1000bp)第四节 遗传病的基因诊断54第五节 肿瘤的基因诊断肿瘤基因诊断的内容肿瘤基因诊断的内容 基础：肿瘤发病分子机制深入探索基础：肿瘤发病分子机制深入探索 临床：临床：v早期及预警诊断早期及预警诊断v易感性评估及监测易感性评估及监测v肿瘤的鉴别、分级、分期及预后肿瘤的鉴别、分级、分期及预后v辅助治疗方案确定辅助治疗方案确定v疗效监测及评估疗效监测及评估 95%慢性髓细

34、胞性白血病慢性髓细胞性白血病患者存在异常的患者存在异常的Ph染色体，染色体，其成因是染色体易位使其成因是染色体易位使9号染色体上的原癌基因号染色体上的原癌基因abl易位至易位至22号染色体的号染色体的bcr基因附近，产生基因附近，产生bcr-abl融合基因融合基因；几乎几乎100%急性早幼粒性白血病急性早幼粒性白血病，表现为，表现为15号染色体号染色体上的上的PML基因与基因与17号染色体上的维甲酸受体（号染色体上的维甲酸受体（RARa a）基）基因连接，形成因连接，形成 PML-RARa a融合基因融合基因。融合基因检测方法：一般采用融合基因检测方法：一般采用PCR技术技术 例如例如,用分别

35、位于用分别位于bcr和和abl基因的一对特异引物作基因的一对特异引物作PCR，只有当只有当abl基因易位至基因易位至bcr基因附近时才能获得扩增产物。基因附近时才能获得扩增产物。策略一：易位染色体和融合基因检测策略一：易位染色体和融合基因检测56Ph1 Ph1 染色体染色体w酪氨酸蛋白激酶活性酪氨酸蛋白激酶活性57第五节 肿瘤的基因诊断策略二：癌基因和抑癌基因检测策略二：癌基因和抑癌基因检测 如原癌基因如原癌基因K-ras第第12、13和和61位密码位密码子点突变：子点突变：GGT-TGT/GTT/GAT/GCT；抑癌基因抑癌基因p53密码子密码子130290之间的基之间的基因突变因突变 58

36、 90%胰腺癌，胰腺癌，50%肠癌和肠癌和30%的肺腺癌存在的肺腺癌存在ras 基基因 突 变。突 变 热 点因 突 变。突 变 热 点 K-r a s 第第 1 2 位 密 码 子 突 变位 密 码 子 突 变（GGTTGT）,约约50%以上癌症患者有以上癌症患者有p53基因突变。基因突变。突变热点在第突变热点在第175、284、273密码子。突变后不仅自密码子。突变后不仅自身的抑癌功能丧失，还可中和另一个野型等位基因产身的抑癌功能丧失，还可中和另一个野型等位基因产物的抑癌功能（负显性作用）。此外，突变后的物的抑癌功能（负显性作用）。此外，突变后的p53还具有癌基因功能即转化正常细胞的能力（

37、转化效还具有癌基因功能即转化正常细胞的能力（转化效应）。应）。检测方法：针对突变类型和位点，应用检测方法：针对突变类型和位点，应用PCR/ASO和和PCR/SSCP等方法加以检测。新近出现的集成了等方法加以检测。新近出现的集成了p53基因正常序列和几百个已知突变特异探针的基因基因正常序列和几百个已知突变特异探针的基因芯片，有用于肿瘤的诊断、分类和分期。芯片，有用于肿瘤的诊断、分类和分期。59第五节 肿瘤的基因诊断策略三：肿瘤相关病毒的检测策略三：肿瘤相关病毒的检测 多种多种DNA或或RNA病毒感染与肿瘤相关病毒感染与肿瘤相关 迄今已发现至少迄今已发现至少150多种病毒，如鸡肉瘤病毒（多种病毒，

38、如鸡肉瘤病毒（RSV）、）、小鼠白血病病毒（小鼠白血病病毒（MuLV）、猫肉瘤病毒（）、猫肉瘤病毒（FeSV）和小鼠）和小鼠乳腺肿瘤病毒（乳腺肿瘤病毒（MMTV）等，均可引起动物肿瘤。但真正被）等，均可引起动物肿瘤。但真正被证实与人类肿瘤直接相关的病毒并不多，主要有人类免疫缺证实与人类肿瘤直接相关的病毒并不多，主要有人类免疫缺陷病毒（陷病毒（HIV）、人类乙型、丙型肝炎病毒（）、人类乙型、丙型肝炎病毒（HBV、HCV）、）、EB病毒（病毒（EBV）、人乳头瘤病毒（）、人乳头瘤病毒（HPV）、人）、人T细胞白血细胞白血病病毒（病病毒（HTLV）等。）等。对这些肿瘤相关病毒基因的检测，显然将有助于

39、肿瘤的对这些肿瘤相关病毒基因的检测，显然将有助于肿瘤的临床诊断，并对疗效监测、预后判断等具有重要参考价值。临床诊断，并对疗效监测、预后判断等具有重要参考价值。60第五节 肿瘤的基因诊断策略四：肿瘤标志物检测策略四：肿瘤标志物检测 tumor marker:肿瘤组织产生的、与肿肿瘤组织产生的、与肿瘤发生发展相关的物质，如肿瘤抗原、激瘤发生发展相关的物质，如肿瘤抗原、激素、酶等。素、酶等。61 第六节 感染性疾病的基因诊断 通过对不同病源微生物遗传物质通过对不同病源微生物遗传物质DNA或或RNA的检测展开的检测展开l感染性疾病系由病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体感染性疾病系由病毒、细菌、立克次

40、体、支原体、衣原体和寄生虫等病原体侵入机体所致。和寄生虫等病原体侵入机体所致。l由于许多病原体的基因结构已经阐明，因而已可用基因特由于许多病原体的基因结构已经阐明，因而已可用基因特异性探针通过分子杂交，或用特异性寡核苷酸引物通过异性探针通过分子杂交，或用特异性寡核苷酸引物通过PCR技术，直接从临床标本检测病原体的存在。技术，直接从临床标本检测病原体的存在。l可比以往常用的微生物学、免疫学、或血清学方法更早期、可比以往常用的微生物学、免疫学、或血清学方法更早期、快速、敏感和特异地作出诊断。快速、敏感和特异地作出诊断。62Emphasis lTerminologylGene diagnosis lPCR-RFLPlFISHlSothern blotlNorthern blotlPh1 chromosomelPCR-SSCPlProbe lSNPlBiochipl Q-PCR,Quantitative PCRlPCR-ASOlMethylation specific PCR,MS-PCR63Lets go to the next lecture.