动物繁殖学第10讲卵子发生及其形态结构与体外保存课件.ppt

1、考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分第四章第四章 雌性动物性机能发育与雌性动物性机能发育与发情排卵及其调控发情排卵及其调控 第一节第一节 性机能发育性机能发育 第二节第二节 发情与排卵发情与排卵 第三节第三节 发情控制技术发情控制技术 第四节第四节 卵子发生及其形态结构与体外保存卵子发生及其形态结构与体外保存.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分本讲内容本讲内容l卵

2、子发生卵子发生l卵子形态结构卵子形态结构l卵母细胞成熟机理卵母细胞成熟机理l卵母细胞体外成熟卵母细胞体外成熟l卵母细胞体外保存卵母细胞体外保存.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分精子发生的过程精子发生的过程 精原细胞的增殖精原细胞的增殖 精母细胞的发育精母细胞的发育 精子的形成精子的形成.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办

3、法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 雌性生殖细胞的分化、增殖、成熟全过程称为雌性生殖细胞的分化、增殖、成熟全过程称为卵卵子发生子发生（oogenesis）l 卵子发生起始于胚胎早期卵子发生起始于胚胎早期,由原始卵原细胞经过由原始卵原细胞经过有丝分裂、减数分裂最后成为单倍体的卵细胞过有丝分裂、减数分裂最后成为单倍体的卵细胞过程，持续时间很长，一般在初情期以后开始，至程，持续时间很长，一般在初情期以后开始，至受精过程中才能完成受精过程中才能完成一、卵子发生一、卵子发生.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项

4、目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分卵子发生模式图卵子发生模式图马.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分http:/click4biology.info/c4b/11/hum11.4.htm#2.（一）卵子发生特点卵子发生特点 l 卵原细胞卵原细胞经有丝分裂增殖经有丝分裂增殖为初级卵母细胞为初级卵母细胞l 初级卵母细胞初级卵母细胞经过经过2 2次减次减数分裂，每次分裂均生成数分裂，每次分裂均生成大小不等的大小不等

5、的2 2个细胞，小个细胞，小的称为极体，多余的染色的称为极体，多余的染色体被排出，最后形成一个体被排出，最后形成一个成熟的卵子成熟的卵子l 卵母细胞的原生质部分几卵母细胞的原生质部分几乎全部留给卵子乎全部留给卵子（一）卵子发生特点（一）卵子发生特点.l 卵原细胞分裂形成初级卵卵原细胞分裂形成初级卵母细胞在胎儿出生前后不母细胞在胎儿出生前后不久完成久完成l 动物性成熟以前，卵母细动物性成熟以前，卵母细胞不再增长胞不再增长l 性成熟后，每个性周期有性成熟后，每个性周期有部分卵母细胞发育，多数部分卵母细胞发育，多数卵母细胞在发育过程中退卵母细胞在发育过程中退化，只有少数卵母细胞发化，只有少数卵母细胞

6、发育成熟排卵育成熟排卵（一）卵子发生特点（一）卵子发生特点.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 卵母细胞在生长发育过程中要积累大量的营养物质卵母细胞在生长发育过程中要积累大量的营养物质和遗传信息，主要为胚胎发育提供营养和信息和遗传信息，主要为胚胎发育提供营养和信息l 哺乳动物的胚胎是在母体子宫内发育，直接吸收母哺乳动物的胚胎是在母体子宫内发育，直接吸收母体的营养物质，但一些母源性体的营养物质，但一些母源性mRNAmRNA、tRNAtRNA、rRNArRNA的的合成还是必需的合

7、成还是必需的l 鸟类、两栖类、爬行类动物的卵需要存贮大量的卵鸟类、两栖类、爬行类动物的卵需要存贮大量的卵黄物质黄物质（一）卵子发生特点卵子发生特点.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（二）卵子发生过程卵子发生过程 l 卵原细胞由来：卵原细胞由来：由胚胎期性别分化后由胚胎期性别分化后,雌性胎儿雌性胎儿的的原始生殖细胞原始生殖细胞分化而来。分化而来。l 细胞特点：细胞特点：通过通过有丝分裂有丝分裂进行增殖进行增殖l 增殖期的长短：增殖期的长短：因动物而异因动物而异,通常在通常在出生

8、前或出出生前或出生后不久停止生后不久停止牛、绵羊分别在胎期牛、绵羊分别在胎期45-11045-110天和天和35-9035-90天天猪在胚胎期猪在胚胎期3030天至出生后天至出生后7 7天天兔在胚胎期兔在胚胎期21d21d至出生后至出生后10d10d1卵原细胞的增卵原细胞的增殖殖.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 卵母细胞经过最后一次有丝分裂后，即发育成为卵母细胞经过最后一次有丝分裂后，即发育成为初初级卵母细胞，级卵母细胞，形成形成原始卵泡原始卵泡l 原始卵泡出现后有的卵母

9、细胞便开始原始卵泡出现后有的卵母细胞便开始退化退化l 初级卵母细胞特点初级卵母细胞特点：卵黄颗粒增多，卵母细胞的体积增大卵黄颗粒增多，卵母细胞的体积增大出现透明带出现透明带卵泡细胞通过有丝分裂而增殖卵泡细胞通过有丝分裂而增殖初级卵母细胞形成后初级卵母细胞形成后,到初情期前到初情期前,处于处于静止静止状态状态2 2卵母细胞的生长卵母细胞的生长.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分2 2卵母细胞的生长卵母细胞的生长 l 卵泡细胞通过有丝分裂增殖，由单层变多层，所卵泡细胞通过有丝分裂增

10、殖，由单层变多层，所分泌的液体形成卵泡液分泌的液体形成卵泡液l 由卵母细胞及颗粒细胞共同分泌某些物质形成透由卵母细胞及颗粒细胞共同分泌某些物质形成透明带明带l 颗粒细胞附着在卵母细胞外并通过卵母细胞外围颗粒细胞附着在卵母细胞外并通过卵母细胞外围微绒毛为卵母细胞提供营养物质，为以后的发育微绒毛为卵母细胞提供营养物质，为以后的发育提供能量来源提供能量来源.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 在初级卵母细胞发育至第一次减数分裂前期的在初级卵母细胞发育至第一次减数分裂前期的双线期便进

11、入停滞状态，在许多动物该期细胞双线期便进入停滞状态，在许多动物该期细胞核明显、特别大，异染色质很少，看起来很像核明显、特别大，异染色质很少，看起来很像泡状，因此这一时期的卵母细胞称为生发泡泡状，因此这一时期的卵母细胞称为生发泡（germinal vesicl，GV），），此期核中含有大量此期核中含有大量的供早期胚胎发育所需的贮备物质的供早期胚胎发育所需的贮备物质 2 2卵母细胞的生长卵母细胞的生长.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分3卵母细胞的成熟卵母细胞的成熟l 卵母细胞的成

12、熟经过卵母细胞的成熟经过两次成熟分裂两次成熟分裂l 第一次成熟分裂：第一次成熟分裂：在排卵前不久完在排卵前不久完成的，分裂末期，纺垂体旋转，排成的，分裂末期，纺垂体旋转，排出出有一半染色体及少量细胞质的极有一半染色体及少量细胞质的极体体，染色体数目减半。，染色体数目减半。l 第二次成熟分裂：第二次成熟分裂：染色体是单倍体，染色体是单倍体，排出的卵大多数处于分裂中期，直排出的卵大多数处于分裂中期，直到精子进入透明带，被激活才能完到精子进入透明带，被激活才能完成分裂。成分裂。.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分

13、之和为该考评类目的考评实际得分l 初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期便进初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，伴随着卵入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调节下，恢复成泡的增长，在生殖激素的支配和调节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的核向卵质膜下移动，熟分裂过程。这时卵母细胞的核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色体聚集成致密状态，即生核仁和核膜消失，染色体聚集成致密状态，即生发泡破裂发泡破裂（germinal vesicl breakdown，GVBD）3 3卵母细胞的成熟卵母细胞的成熟.考评项目赋标准分，对照考评

14、内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色体聚集成致密状态，即体聚集成致密状态，即生发泡破裂生发泡破裂l GVBDGVBD是在显微镜

15、下最早可以观察到的卵母细是在显微镜下最早可以观察到的卵母细胞开始成熟信号胞开始成熟信号l 在光镜下先后表现为在光镜下先后表现为GVBDGVBD和第一极体和第一极体（first polar bodyfirst polar body）排出）排出l GVBDGVBD代表减数分裂的开始，而第一极体的排代表减数分裂的开始，而第一极体的排出标志着卵母细胞已达到核成熟出标志着卵母细胞已达到核成熟3 3卵母细胞的成熟卵母细胞的成熟.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 第一次成熟分裂，有一半染

16、色质及少第一次成熟分裂，有一半染色质及少量细胞质排放到卵质膜与透明带之间量细胞质排放到卵质膜与透明带之间的空隙（卵周隙）中，称为第一极体；的空隙（卵周隙）中，称为第一极体；另一个几乎得到全部细胞质，称为另一个几乎得到全部细胞质，称为次次级卵母细胞级卵母细胞（secondary oocyte）l 在第二次成熟分裂时，次级卵母细胞在第二次成熟分裂时，次级卵母细胞分裂为卵细胞和一个第二极体。第二分裂为卵细胞和一个第二极体。第二次成熟分裂持续的时间相对短促，在次成熟分裂持续的时间相对短促，在许多动物都是在排卵之后的许多动物都是在排卵之后的受精受精过程过程中完成的中完成的3 3卵母细胞的成熟卵母细胞的成

17、熟.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分u营养来源不同营养来源不同u发生的连续性发生的连续性u形成的数量不同形成的数量不同u排出时两者成熟度不同排出时两者成熟度不同u最终两者形态不同最终两者形态不同u相对而言相对而言,卵母细胞在卵巢中的储备卵母细胞在卵巢中的储备是有限的是有限的,而精子的产生是无限的而精子的产生是无限的4.4.精子与卵子发生过程比较精子与卵子发生过程比较.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目

18、考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分二、卵子形态结构二、卵子形态结构（一）卵子的形态和大小（一）卵子的形态和大小 l圆球形，直径大小因所含的卵黄量不同，圆球形，直径大小因所含的卵黄量不同，变异范围较大变异范围较大l透明带内卵黄的直径一般为透明带内卵黄的直径一般为80200m，为，为精子体积的精子体积的1万倍以上万倍以上.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分动物繁殖学动物繁殖学，杨利国主编，中国农业出版社，杨利国主编，中国农业出版社，20032003年年 .考评项目赋标准分，

19、对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（二）卵子的结构（二）卵子的结构 l 放射冠（放射冠（corona radiata）l 透明带（透明带（zona pe11ucida）l 卵质膜（卵质膜（plasma membrane）l 卵细胞质卵细胞质l 卵细胞核卵细胞核.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分1 1放射冠放射冠u概念概念:卵子周围致密的颗粒细胞呈放射状卵子周围致密的颗粒细胞呈放

20、射状排列。排列。u脱落时间脱落时间:牛、绵羊运行至输卵管膨大部；牛、绵羊运行至输卵管膨大部；马排卵时已没有；猪、兔、鼠卵子在精子马排卵时已没有；猪、兔、鼠卵子在精子进入后才脱落。进入后才脱落。u作用作用卵子发生过程中：卵子发生过程中：营养和保护作用。营养和保护作用。受精过程中：受精过程中：引导和定位作用。引导和定位作用。（二）卵子的结构（二）卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分2 2透明带透明带l 透明带透明带 是由卵质膜分泌物和卵泡细胞是由卵质膜分泌物和卵泡细胞分泌

21、物共同形成的均质半透明膜，其厚分泌物共同形成的均质半透明膜，其厚度远远超过卵质膜，可以被蛋白分解酶、度远远超过卵质膜，可以被蛋白分解酶、如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶所溶解如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶所溶解u作用作用保护作用选择作用交换和代谢作用（二）卵子的结构（二）卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分3 3卵质膜卵质膜 相当于体细胞的细胞膜。其作用是使卵子有选择相当于体细胞的细胞膜。其作用是使卵子有选择地吸收无机离子和代谢物质，防止多精子受精地吸收无机离子和代谢物质，防止多精

22、子受精（二）卵子的结构（二）卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 卵周隙卵周隙 在卵质膜与透明带之间，由于卵母细胞的发在卵质膜与透明带之间，由于卵母细胞的发育，特别是第一极体形成后卵黄的收缩会形成一定育，特别是第一极体形成后卵黄的收缩会形成一定的空隙，即卵周隙（的空隙，即卵周隙（perivitelline spaceperivitelline space），具有），具有保护卵子的作用，对精子有种属选择性保护卵子的作用，对精子有种属选择性（二）卵子的结构（二）卵子的结

23、构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分4 4卵胞质卵胞质l 其外观和颜色依动物种类不同有明显差异，主要其外观和颜色依动物种类不同有明显差异，主要是由于卵黄和脂肪小滴含量不同所致。是由于卵黄和脂肪小滴含量不同所致。（二）卵子的结构（二）卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分5 5卵细胞核卵细胞核l发育成熟的卵母细胞有一个大的球形核，发育成熟的卵母细胞有一个

24、大的球形核，包含着一至数个染色质核仁，其位置并不包含着一至数个染色质核仁，其位置并不在细胞质的中心。在细胞质的中心。（二）卵子的结构（二）卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分未成熟卵母细胞.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分三、卵母细胞成熟机理三、卵母细胞成熟机理 l 卵母细胞的成熟是指卵母细胞卵母细胞的成熟是指卵母细胞获得恢复减数分裂以及进一步获得恢

25、复减数分裂以及进一步发育到第二次减数分裂，为受发育到第二次减数分裂，为受精及胚胎发育做准备的过程，精及胚胎发育做准备的过程，是完成正常受精及早期胚胎发是完成正常受精及早期胚胎发育的必需条件，包括育的必需条件，包括细胞核成细胞核成熟熟和和细胞质成熟细胞质成熟.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分四、卵母细胞体外成熟四、卵母细胞体外成熟 获取成熟卵母细胞主要通过以下两条途径：获取成熟卵母细胞主要通过以下两条途径：l体内成熟体内成熟，经超排处理后，采取成熟卵泡内的卵，经超排处理后，采取

26、成熟卵泡内的卵母细胞或从输卵管内回收刚刚排出的卵母细胞母细胞或从输卵管内回收刚刚排出的卵母细胞l体外成熟体外成熟（in vitro maturationin vitro maturation，IVMIVM），采集），采集卵泡中未成熟的卵母细胞，经体外培养使之成熟。卵泡中未成熟的卵母细胞，经体外培养使之成熟。可充分利用母畜的卵巢，是解决卵子来源最有效可充分利用母畜的卵巢，是解决卵子来源最有效的途径的途径.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（一）卵母细胞的采集方法（一）卵母细胞的采

27、集方法 1.1.卵母细胞的离体采集卵母细胞的离体采集 母畜屠宰后，在母畜屠宰后，在30min内取出卵巢，放入盛有灭内取出卵巢，放入盛有灭菌生理盐水或菌生理盐水或PBS的保温瓶内（的保温瓶内（25-35）中，）中，在在3h内送回实验室进行回收内送回实验室进行回收 卵泡抽吸法卵泡抽吸法 卵巢解剖法卵巢解剖法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 卵泡抽吸法卵泡抽吸法 操作：用针头穿刺卵泡而将卵母细胞抽操作：用针头穿刺卵泡而将卵母细胞抽吸出来。注射器应保持一定的负压，针吸出来。注射器应

28、保持一定的负压，针头一般从卵泡的侧面刺入，一次进针可头一般从卵泡的侧面刺入，一次进针可抽吸卵巢皮质的多个卵泡，不要只吸取抽吸卵巢皮质的多个卵泡，不要只吸取一个卵泡就将针头拔出，否则容易导致一个卵泡就将针头拔出，否则容易导致污染污染 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染的污染 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响其随后的成熟胞，影响其随后的成熟（一）卵母细胞的采集方法（一）卵母细胞的采集方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为

29、该考评类目的考评实际得分 卵巢解剖法卵巢解剖法 操作操作：用手术刀片将卵巢切为两半，用手术刀片将卵巢切为两半，去掉中间的髓质部分，露出卵泡，然去掉中间的髓质部分，露出卵泡，然后用刀片划破卵泡，在培养液中反复后用刀片划破卵泡，在培养液中反复冲洗，采集其中的卵母细胞冲洗，采集其中的卵母细胞 优点优点：能保持卵母细胞周围卵泡细胞：能保持卵母细胞周围卵泡细胞的完整性，回收率也相对较高的完整性，回收率也相对较高 缺点缺点：回收的速度相对较慢，容易造：回收的速度相对较慢，容易造成污染成污染（一）卵母细胞的采集方法（一）卵母细胞的采集方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考

30、评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分2.2.卵母细胞的活体采集卵母细胞的活体采集 腹腔镜法腹腔镜法 优点：比较直观，容易掌握优点：比较直观，容易掌握 缺点：工作量大，对母牛有损伤，不能频繁手术缺点：工作量大，对母牛有损伤，不能频繁手术.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 B B型超声波法型超声波法 l保定母畜，从尾荐结合处注入保定母畜，从尾荐结合处注入2ml左右的盐酸普左右的盐酸普鲁卡因作硬膜外腔麻醉鲁卡因作硬膜外腔麻醉l将带有超

31、声波探头和采卵针的采卵器插入到阴道将带有超声波探头和采卵针的采卵器插入到阴道子宫颈的一侧穹隆处子宫颈的一侧穹隆处l术者通过直肠将卵巢贴在探头上，根据术者通过直肠将卵巢贴在探头上，根据B超屏幕超屏幕上所显示的卵泡位置进行穿刺而将卵母细胞抽出上所显示的卵泡位置进行穿刺而将卵母细胞抽出2.2.卵母细胞的活体采集卵母细胞的活体采集.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 B B型超声波法型超声波法l 该法的优点是不用进行手术，操作的速度较快，该法的优点是不用进行手术，操作的速度较快，对母牛

32、的损伤也小，可频繁对母牛进行反复采卵，对母牛的损伤也小，可频繁对母牛进行反复采卵，且亦可对妊娠母牛进行采卵；缺点是操作技术较且亦可对妊娠母牛进行采卵；缺点是操作技术较难掌握，并需要昂贵的超声设备难掌握，并需要昂贵的超声设备l 母牛每周采卵母牛每周采卵2 2次，每次可获得次，每次可获得5 5枚枚66枚卵母细胞，枚卵母细胞，且持续且持续2323个月对母牛无不良影响个月对母牛无不良影响2.2.卵母细胞的活体采集卵母细胞的活体采集.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（二）卵母细胞（二）

33、卵母细胞IVMIVM方法方法 l用于卵母细胞用于卵母细胞IVM的基础培养液有的基础培养液有TCM199，Hams F-10，Menezos B2，NUSC23和和MEM等，其中应用最为广泛的等，其中应用最为广泛的是是TCM199l牛、羊、猪等卵母细胞的核成熟率都能达牛、羊、猪等卵母细胞的核成熟率都能达到到80%以上以上1 1成熟培养液的选择成熟培养液的选择.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 卵母细胞的卵母细胞的IVM培养尚需在上述基础液中加入一培养尚需在上述基础液中加入一定

34、浓度的血清（定浓度的血清（510%的的FCS或或ECS）和）和GTH （0.11.0 g/ml FSH和和510g/ml LH等）等成分等）等成分l 虽然已有许多无血清培养卵母细胞虽然已有许多无血清培养卵母细胞IVM报道，但报道，但为获得较高的受精率和胚胎发育率，添加血清仍为获得较高的受精率和胚胎发育率，添加血清仍为大多数实验室所采用为大多数实验室所采用1 1成熟培养液的选择成熟培养液的选择（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分2

35、2成熟培养时间成熟培养时间 l一般采用一般采用22 24h，猪多采用，猪多采用4044h，马的，马的卵母细胞多采用卵母细胞多采用3036h。兔卵母细胞的成。兔卵母细胞的成熟培养时间仅需熟培养时间仅需1215h（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分3 3成熟培养的温度和气相环境成熟培养的温度和气相环境 l 人和啮齿类动物的卵母细胞人和啮齿类动物的卵母细胞IVM采用采用37l 牛、猪、羊和马等家畜的卵母细胞成熟培养温牛、猪、羊和马等家畜

36、的卵母细胞成熟培养温度均采用度均采用3839（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 气相环境中的气相环境中的CO2浓度应浓度应根据培养液中的碳酸氢盐根据培养液中的碳酸氢盐浓度来定，一般采用浓度来定，一般采用5%的的CO23 3成熟培养的温度和气相环境成熟培养的温度和气相环境 （二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项

37、目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分4 4IVMIVM系统系统 l 开放培养系统开放培养系统l 微滴培养系统微滴培养系统l 密闭培养系统密闭培养系统（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 开放培养系统开放培养系统 l 将将1-2ml1-2ml成熟培养液直接置于平皿内或五孔培养成熟培养液直接置于平皿内或五孔培养板内，然后放入板内，然后放入50-20050-200枚卵母细胞进行培养，上枚卵母细胞进行培养，上面不盖石蜡油面不盖石蜡

38、油l 优点：简单，对培养液中的脂溶性物质没有影响，优点：简单，对培养液中的脂溶性物质没有影响，且能同时培养大量的卵母细胞，培养结果不受石且能同时培养大量的卵母细胞，培养结果不受石蜡油质量的影响蜡油质量的影响l 缺点：渗透压的变化较大，容易污染，故培养液缺点：渗透压的变化较大，容易污染，故培养液的量和培养箱内的湿度要特别注意的量和培养箱内的湿度要特别注意（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 微滴培养系统微滴培养系统 l 将成熟培养液

39、先在组织培养皿中做成将成熟培养液先在组织培养皿中做成5050050500 l l的微滴，的微滴，上覆石蜡油，然后将卵母细胞置于其中培养上覆石蜡油，然后将卵母细胞置于其中培养l 优点：成熟培养液中的渗透压比较稳定，且不易污染优点：成熟培养液中的渗透压比较稳定，且不易污染l 缺点：对培养液中的脂溶性物质有稀释作用，且成本缺点：对培养液中的脂溶性物质有稀释作用，且成本较高，培养结果易受石蜡油质量的影响较高，培养结果易受石蜡油质量的影响l 因此，在一般情况下，这种培养系统已少用，只是在因此，在一般情况下，这种培养系统已少用，只是在卵母细胞数量特别少的情况下采用卵母细胞数量特别少的情况下采用（二）卵母细

40、胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 密闭培养系统密闭培养系统 l 将卵母细胞置于含有将卵母细胞置于含有1 12ml2ml成熟培养液的试管中，成熟培养液的试管中，加盖胶塞，然后在培养箱或恒温水浴中培养；如若加盖胶塞，然后在培养箱或恒温水浴中培养；如若采用培养皿或微滴培养，则可将其装入一个密闭的采用培养皿或微滴培养，则可将其装入一个密闭的塑料袋内塑料袋内l 优点：不需要优点：不需要COCO2 2培养箱，方便运输培养箱，方便运输l 缺点：缺点：p

41、HpH不如前者稳定不如前者稳定l 由于这种培养系统不需要昂贵的由于这种培养系统不需要昂贵的COCO2 2培养箱，故适培养箱，故适合在一些条件简陋的实验室应用，特别是需在卵母合在一些条件简陋的实验室应用，特别是需在卵母细胞的运输途中进行成熟时非常有用细胞的运输途中进行成熟时非常有用（二）卵母细胞（二）卵母细胞IVMIVM方法方法.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（三）卵母细胞（三）卵母细胞IVMIVM质量评定质量评定 l 卵母细胞的卵母细胞的IVMIVM质量评定质量评定通过通过

42、形态观察形态观察进行初步评定进行初步评定通过通过固定染色检查固定染色检查核成熟的详细情况核成熟的详细情况IVFIVF和体外培养评定其受精和胚胎发育潜能和体外培养评定其受精和胚胎发育潜能.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 形态观察形态观察l 正常成熟的卵母细胞，其细胞质均匀、没有空泡，正常成熟的卵母细胞，其细胞质均匀、没有空泡，其周围的卵丘细胞一般发生扩展，去卵丘细胞后，其周围的卵丘细胞一般发生扩展，去卵丘细胞后，可见到位于卵周隙的第一极体可见到位于卵周隙的第一极体（三）卵母细

43、胞（三）卵母细胞IVMIVM质量评定质量评定.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分卵子的结构卵子的结构.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 固定染色法固定染色法l 将卵母细胞周围的卵丘细胞用将卵母细胞周围的卵丘细

44、胞用0.1%的透明质酸的透明质酸酶去掉，然后在醋酸酒精或醋酸甲醇（酶去掉，然后在醋酸酒精或醋酸甲醇（1:3）的）的固定液中固定固定液中固定2448h，最后用，最后用1%间苯二酚兰间苯二酚兰（Lacmoid）或）或1%地衣红（地衣红（Orcein）的）的40%醋酸醋酸溶液染色观察溶液染色观察（三）卵母细胞（三）卵母细胞IVMIVM质量评定质量评定.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l 生发泡期（生发泡期（germinal vesiclegerminal vesicle，GVGV）

45、：卵母细胞）：卵母细胞质中可看见到一个大而圆的细胞核（即质中可看见到一个大而圆的细胞核（即GVGV），核），核膜清晰，界限明显膜清晰，界限明显l 生发泡破裂期（生发泡破裂期（GVBDGVBD）：核膜变得模糊，核膜的）：核膜变得模糊，核膜的一侧出现缺口，染色质隐约可见一侧出现缺口，染色质隐约可见卵母细胞的成熟阶段卵母细胞的成熟阶段：（三）卵母细胞（三）卵母细胞IVMIVM质量评定质量评定.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分脱去卵丘的未成熟卵母细胞.考评项目赋标准分，对照考评内容和

46、考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 受精和胚胎发育潜能的评定受精和胚胎发育潜能的评定 l 为了解卵母细胞质的成熟情况，通过为了解卵母细胞质的成熟情况，通过IVFIVF后的后的受精分裂率和随后的体外培养胚胎发育率对受精分裂率和随后的体外培养胚胎发育率对其其IVMIVM的质量进行鉴定，这是评定卵母细胞的质量进行鉴定，这是评定卵母细胞IVMIVM方法最为重要的一项指标方法最为重要的一项指标（三）卵母细胞（三）卵母细胞IVMIVM质量评定质量评定.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评

47、项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分五、卵母细胞体外保存五、卵母细胞体外保存（一）（一）3737保存保存 l 应该考虑保存时间与卵老化的问题应该考虑保存时间与卵老化的问题l 排出的卵或由卵泡取出的卵在取出后受精能力有排出的卵或由卵泡取出的卵在取出后受精能力有一定限度，所以保存时间不长，即或能受精，也一定限度，所以保存时间不长，即或能受精，也会出现胚胎发育异常会出现胚胎发育异常l 除特殊需要外，一般不在除特殊需要外，一般不在3737保存保存.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目

48、考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（二）低温保存（二）低温保存 l 低于室温、但还达不到冷冻阶段，以这种低于室温、但还达不到冷冻阶段，以这种方法保存卵和胚胎称为低温保存法。一般方法保存卵和胚胎称为低温保存法。一般在在0 01010左右保存。由于温度较低，可左右保存。由于温度较低，可抑制物质代谢的速度和细胞分裂的速度，抑制物质代谢的速度和细胞分裂的速度，因此可以延长保存时间因此可以延长保存时间五、卵母细胞体外保存五、卵母细胞体外保存.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分l

49、据报道，在据报道，在10下保存兔卵母细胞，经过下保存兔卵母细胞，经过24h，受精率可达受精率可达78，经过，经过78h，仍可以保持受精能，仍可以保持受精能力，但保存温度超过力，但保存温度超过10，受精能力显著降低。，受精能力显著降低。小鼠卵母细胞受精能力保持时间短，可用含有小鼠卵母细胞受精能力保持时间短，可用含有5%甘油的卵黄柠檬酸甘油的卵黄柠檬酸Locks液、以液、以1min冷冷却到却到5保存数小时，仍可以很好地受精保存数小时，仍可以很好地受精（二）低温保存（二）低温保存 五、卵母细胞体外保存五、卵母细胞体外保存.考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考

50、评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分（三）冷冻保存（三）冷冻保存 l卵母细胞的冷冻保存与精子和胚胎的冷冻保卵母细胞的冷冻保存与精子和胚胎的冷冻保存一样，具有许多潜在的应用价值存一样，具有许多潜在的应用价值l把优良品种动物废弃卵巢中大量卵母细胞冷把优良品种动物废弃卵巢中大量卵母细胞冷冻保存，象建立冻保存，象建立“精子库精子库”和和“胚胎库胚胎库”那那样，建立起样，建立起“卵子库卵子库”，不仅可为这些生物，不仅可为这些生物技术提供充足的材料，还可为家畜保种和遗技术提供充足的材料，还可为家畜保种和遗传资源的长距离国际间运输提供可能途径传资源的长距离国际间运输提供