免疫磁珠分选原理及应用-课件.ppt
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- 关 键 词:
- 免疫 分选 原理 应用 课件
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1、免疫磁珠分选原理及应用免疫磁珠分选原理及应用1/1 MD0 xxx.01Miltenyi Biotec:免疫磁珠分选技术及应用免疫磁珠分选技术及应用MD0197.02内容内容 MACS技术原理技术原理 MACS技术设备及分选策略技术设备及分选策略 几种特殊的几种特殊的MACS分选分选 分选和分析分选和分析DC细胞细胞 分选各种分选各种T细胞细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选分子生物学和蛋白生化的分选MD0
2、347.01MACS技术原理技术原理MACS(Magnetic Activated Cell Sorting):=免疫学免疫学+细胞生物学细胞生物学+磁力学磁力学 基于抗体对抗原的特异性识别基于抗体对抗原的特异性识别 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的MD0651.01MACS 磁性分选磁性分选MACS微珠进行磁性标记微珠进行磁性标记未标记的细胞未标记的细胞先行流出先行流出洗脱阳性分选的细洗脱阳性分选的细胞胞MD0197.02分选前标本制备:过滤分
3、选前标本制备:过滤MACS预选滤器:预选滤器:30 m MD0197.02MACS 技术技术设备与试剂设备与试剂 MACS微珠微珠 MACS分选柱分选柱 MACS 分选器分选器 详细分选方案详细分选方案*MACS技术技术设备与试剂设备与试剂 MACS微珠:微珠:MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。特性:特性:50nm大小大小 对细胞没有毒性对细胞没有毒性 可生物降解可生物降解 不影响细胞特性不影响细胞特性 MD0057.03MACS技术分选的技术分选的CD8+T 细胞细
4、胞微珠微珠MACS微珠微珠直标微珠直标微珠多选微珠多选微珠间标微珠间标微珠MACS技术技术设备与试剂设备与试剂 MACS分选柱:分选柱:填充有不同规格的铁珠。填充有不同规格的铁珠。铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞。铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞。无菌包装。无菌包装。可用于分选多种细胞及亚细胞物质、可用于分选多种细胞及亚细胞物质、细菌、病毒、细菌、病毒、mRNA和蛋白质。和蛋白质。专利产品专利产品 将磁场扩大将磁场扩大100010000倍倍高纯度,高回收率高纯度,高回收率 MD0061.02在在MS柱中产生的强大磁场柱中产生的强大磁场 MACS分选柱:MACS技术技术设备与试剂设备与试剂 MACS
5、分选器:从手动到自动,从实验室到临床分选器:从手动到自动,从实验室到临床MACS技术技术设备与试剂设备与试剂 MACS分选器MACS技术技术设备与试剂设备与试剂autoMACS分选仪分选仪 9种程序,一机完成所有细胞分选种程序,一机完成所有细胞分选 成本低,两个可重复使用的分选柱(成本低,两个可重复使用的分选柱(2周内周内100次)次)快速(快速(310分钟)分钟)重复性好重复性好 全自动分选,仪器操作简单全自动分选,仪器操作简单 适用范围广:适用范围广:从少量标本(从少量标本(105)到大量标本()到大量标本(4X109),),进样量进样量0.5ml-50ml 8种全血微珠,可以做常见细胞的
6、全血分选,省去了种全血微珠,可以做常见细胞的全血分选,省去了费时的提取单个核细胞过程费时的提取单个核细胞过程MACS技术主要优势技术主要优势 小磁珠小磁珠:50 nm(快速、不活化细胞、不沉淀)快速、不活化细胞、不沉淀)保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性;氧化保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性;氧化 铁和多聚糖组成,可生物降解)铁和多聚糖组成,可生物降解)与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、不影响荧与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间)式分选时间)快速、简便、无菌快速、
7、简便、无菌 适用范围广(磁珠种类多、从少量到大量、适用于分适用范围广(磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质)选各种细胞、亚细胞物质)MD0043.02MACS 细胞分选策略细胞分选策略 阳性分选阳性分选 去除分选去除分选 去除分选后再阳性分选去除分选后再阳性分选 多重分选多重分选MD0044.02MACS细胞分选策略细胞分选策略1 1、阳性分选:阳性分选:根据特异性标志分选细胞根据特异性标志分选细胞:阳性分选是指目的细胞磁性标记阳性分选是指目的细胞磁性标记 后,作为阳性的标记组分直接分选出来。后,作为阳性的标记组分直接分选出来。优点:优点:高纯度,尤其是富集稀有的细胞高纯
8、度,尤其是富集稀有的细胞 高回收率高回收率 操作简便、迅速操作简便、迅速MD0044.02MD016102阳性分选策略阳性分选策略MACS 微珠磁性标记微珠磁性标记未标记细胞先行流出未标记细胞先行流出将分选柱移出磁场将分选柱移出磁场,洗脱阳性分选细,洗脱阳性分选细胞胞MACS细胞分选策略细胞分选策略2 2、去除分选:去除分选:去除分选是磁性标记非目的细胞,并将其从细胞混合物中去去除分选是磁性标记非目的细胞,并将其从细胞混合物中去 除,即未磁性标记的细胞为目的细胞。除,即未磁性标记的细胞为目的细胞。去除分选策略适用范围:去除分选策略适用范围:去除不需要的细胞去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特
9、异性抗体(如肿瘤细胞)缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞)不需要抗体和目的细胞结合不需要抗体和目的细胞结合 需进一步通过阳性选择分选细胞亚群需进一步通过阳性选择分选细胞亚群MD0044.02MD0160.02去除分选去除分选磁性标记磁性标记分选未磁性标记细胞分选未磁性标记细胞MACS细胞分选策略细胞分选策略3 3、去除分选后再阳性分选:去除分选后再阳性分选:即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。适用范围:适用范围:非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。要分选非常稀有细胞,先去除非目的细胞再行阳性分选,要分
10、选非常稀有细胞,先去除非目的细胞再行阳性分选,可获得高纯度的目的细胞。可获得高纯度的目的细胞。MD0044.021.去除非去除非CD4+T 细胞细胞。用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4+T 细胞细胞 磁性分选去除标记细胞磁性分选去除标记细胞 先行流出为先行流出为 CD4+T 细胞细胞 2.CD25微珠直接磁性标记微珠直接磁性标记CD25+细胞细胞阳性分选靶细胞阳性分选靶细胞 CD4+CD25+调节性调节性T滞留在分选柱上,离开磁场后洗脱下来滞留在分选柱上,离开磁场后洗脱下来去除后再阳性分选去除后再阳性分选CD4CD4+CD25
11、CD25+双阳性细胞双阳性细胞MD0652.01多选微珠标记多选微珠标记MACS 分选分选磁性颗粒的酶解离磁性颗粒的酶解离终止解离反应终止解离反应根据第二标志进行磁根据第二标志进行磁珠标记珠标记MACS 分选分选MACS细胞分选策略细胞分选策略4 4、多选微珠:多选微珠:MACS畅销机器与分选柱畅销机器与分选柱 MiniMACS starting kit:1个分选架、个分选架、1个个MiniMACS分选器、分选器、1盒盒MS分选柱、分选柱、1支价值支价值7500元试剂元试剂(15088元):元):可做阳性分选、小量标本、间标去除分选、分子生物学分选可做阳性分选、小量标本、间标去除分选、分子生物
12、学分选 Mini&MidiMACS starting kit:1个分选架、个分选架、1个个MiniMACS分选器、分选器、1个个MidiMACS分选器、分选器、1盒盒MS分选柱分选柱、1盒盒LS/LD分选柱、分选柱、1支价值支价值7500元试剂元试剂(27838元):可做阳性分选和去除分选元):可做阳性分选和去除分选 MS分选柱:分选柱:1盒盒25个,个,2763元元 LS分选柱:分选柱:1盒盒25个,个,4356元元 LD分选柱:分选柱:1盒盒25个,个,5100元元 uMACS与与u或者或者M分选柱分选柱:分子生物学分选:分子生物学分选 VarioMACS分选仪分选仪 autoMACS自动
13、分选仪自动分选仪、CliniMACS分选仪分选仪 MD0044.02MACS几种畅销磁珠与抗体几种畅销磁珠与抗体 专利产品:专利产品:CD133、CD303、CD304特殊产品:人类特殊产品:人类DC系列:系列:BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304)小鼠小鼠DC系列:系列:mPDCA微珠与抗体微珠与抗体 干细胞产品:干细胞产品:CD133、CD271微珠与抗体微珠与抗体 细胞因子分泌细胞:细胞因子分泌细胞:CSA分选与分析分选与分析 TH2细胞:细胞:CD294(CRTH)微珠与抗体微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞:上皮肿瘤:分
14、选人类肿瘤细胞:上皮肿瘤:CK、HEA 非血液肿瘤:非血液肿瘤:CD45去除去除 死亡细胞去除试剂盒死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞分选转染细胞 分选分选HIV病毒、病毒、mRNA、cDNA top ten:CD133、CD34、人人CD4+CD25+、小鼠小鼠CD4+CD25+CD303/CD304、人类人类NK、小鼠小鼠CD11c、anti-PE 微珠微珠 小鼠干细胞试剂盒(系别阴性小鼠干细胞试剂盒(系别阴性CD117)、)、CD4/CD8 MD0044.02主要竞争对手分析主要竞争对手分析 Dynal:大磁珠大磁珠 主要市场:主要市场:CD4、CD8等高频细胞,等高频细胞,优势:价格优势
15、:价格 劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选)劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选)磁珠必需剪切(耗时磁珠必需剪切(耗时细胞状态不佳)细胞状态不佳)大磁珠(活化细胞)大磁珠(活化细胞)我们的优势:纯度高、回收率高、细胞活性好我们的优势:纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞,不改变细胞功能不活化细胞,不改变细胞功能 省时、省细胞省时、省细胞 产品品种最多,有专利产品产品品种最多,有专利产品 有手动、自动、临床级产品有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍有强大的技术支持队伍 很好的声誉,市场占有率最高很好的声誉,市场占有率最高 MD0044.02主要卖点主要卖点 干
16、细胞产品:人类:干细胞产品:人类:CD133、CD34、MSC试剂盒(试剂盒(CD271)小鼠:系别阴性试剂盒、小鼠:系别阴性试剂盒、CD117微珠微珠 定向分化培养基定向分化培养基 DC产品:产品:人类:人类:BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠:小鼠:CD11c NK产品:产品:人类:人类:NK细胞阴选试剂盒、细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品:细胞产品:CD4+CD25+调节性调节性T细胞(人和小鼠)细胞(人和小鼠)CSA系列系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒微珠及阴选试剂盒 B细胞产品:细胞产品:CD19微珠及阴选试剂盒微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选:癌细胞富集试剂盒、肿瘤
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