无菌工艺和验证-课件.ppt

1、无菌原料药工艺、验证和申报无菌原料药工艺、验证和申报 GMP、质量质量关注重点关注重点（基于中国新版（基于中国新版GMP和欧盟和欧盟要求要求）杨海峰杨海峰浙江九洲药业股份有限公司浙江九洲药业股份有限公司2009.10.242SFDA 2009年年10月发布新版月发布新版GMP草稿并开始征求业草稿并开始征求业界意见，据悉可能在明年初正式发布，给企业一到界意见，据悉可能在明年初正式发布，给企业一到两年的整改时间。两年的整改时间。起草专家小组确定参照欧盟版本进行修订，已完成起草专家小组确定参照欧盟版本进行修订，已完成GMP通则和无菌药品、中药制剂、原料药、血液制通则和无菌药品、中药制剂、原料药、血液

2、制品、生物制品附录的修订品、生物制品附录的修订大部分非最终灭菌产品的企业面临新一轮的厂房改大部分非最终灭菌产品的企业面临新一轮的厂房改造和设备更新。造和设备更新。新版新版中国中国GMP的修订动态的修订动态3欧盟欧盟1999年年8月正式开始执行灭菌方法月正式开始执行灭菌方法选择的决策树选择的决策树决策树的作用是在考虑各种复杂因素的决策树的作用是在考虑各种复杂因素的情况下辅助选择最佳的灭菌方法情况下辅助选择最佳的灭菌方法欧盟灭菌方法选择的对策欧盟灭菌方法选择的对策4溶液剂型产品灭菌方法选择的决策树溶液剂型产品灭菌方法选择的决策树产品是否可以在产品是否可以在121121湿热灭菌湿热灭菌1515分钟分

3、钟产品是否可以湿热灭菌产品是否可以湿热灭菌F F0 08 8 分分钟，达到钟，达到SAL SAL 1010-6-6采用高压灭菌锅采用高压灭菌锅 1211512115分钟分钟是是否否处方是否可以通过微生物滞留过处方是否可以通过微生物滞留过滤器过滤滤器过滤无菌无菌配药和灌封配药和灌封 采用湿热灭菌采用湿热灭菌 F08 F08 分钟分钟除菌过滤和无菌工艺相除菌过滤和无菌工艺相结合结合是是否否是是否否5非溶液剂型、半固体或干粉产品灭菌方法选择的决策树非溶液剂型、半固体或干粉产品灭菌方法选择的决策树产品是否可以在产品是否可以在160160干热灭菌干热灭菌120120分钟分钟产品是否可以在另外一种时间和温

4、度条产品是否可以在另外一种时间和温度条件下标准周期干热灭菌达到件下标准周期干热灭菌达到SAL SAL 1010-6-6采用采用160160干热灭菌干热灭菌120120分钟分钟是是否否产品是否可以用其他非干热方法灭菌，产品是否可以用其他非干热方法灭菌，如电离辐射，吸收最小剂量如电离辐射，吸收最小剂量 25KGY25KGY采用另一种替代时间和温度条件下采用另一种替代时间和温度条件下标准周期干热灭菌达到标准周期干热灭菌达到SAL SAL 1010-6-6是是否否产品是否可以使用经过验证的稍低辐射产品是否可以使用经过验证的稍低辐射剂量灭菌（参见剂量灭菌（参见ISO11137ISO11137）采用最小辐

5、射吸收最小剂量采用最小辐射吸收最小剂量 25KGY25KGY进行辐射灭菌进行辐射灭菌是是否否处方是否可以通过微生物滞留过滤器过处方是否可以通过微生物滞留过滤器过滤滤采用经过验证的辐射剂量灭菌采用经过验证的辐射剂量灭菌是是否否无菌无菌配药和灌封配药和灌封除菌过滤和无菌工艺相结合除菌过滤和无菌工艺相结合是是否否决策树越往下，风险越大，需要提供的必要证据越多！决策树越往下，风险越大，需要提供的必要证据越多！6除菌过滤系统的选择和验证除菌过滤系统的选择和验证除菌过滤系统的选择应考虑工艺特性除菌过滤系统的选择应考虑工艺特性 所要求的流量、所要求的压差所要求的流量、所要求的压差 可使用的灭菌方法可使用的灭

6、菌方法 过滤介质的寿命（灭菌次数、使用时间）过滤介质的寿命（灭菌次数、使用时间）过滤器结构：筒式，平板式过滤器结构：筒式，平板式无菌过滤是截留微生物，因此具有一定的风险无菌过滤是截留微生物，因此具有一定的风险 除菌能力和挑战（除菌能力和挑战（Bacteria Challenge Testing）制造过程中的不均一性制造过程中的不均一性 药液对过滤介质的化学相容性（药液对过滤介质的化学相容性（Chemical Compatibility）析出物（析出物（Extractable levels）颗粒脱落（颗粒脱落（Particle Shedding）吸附（例如：药液灌装因为吸附活性成分导致初始含量偏

7、低）吸附（例如：药液灌装因为吸附活性成分导致初始含量偏低）无菌原料药过滤除菌后的结晶干燥包装工序不会受到影响，但验证无菌原料药过滤除菌后的结晶干燥包装工序不会受到影响，但验证方案中要说明为什么不考虑吸附验证的理由。方案中要说明为什么不考虑吸附验证的理由。7除菌过滤器验证项目除菌过滤器验证项目 生物性能生物性能微生物截留微生物截留 客户定制客户定制流速流速产量产量操作温度操作温度压力压力系统尺寸大小系统尺寸大小 物理性能物理性能完整性完整性 产品水起泡点产品水起泡点 扩散流扩散流吸附吸附颗粒脱落颗粒脱落4000350030002500200015001000W avenum ber cm-1FT

8、I R Ref er ence Spect r um ofPol ycar bonat e 化学性能化学性能相容性相容性析出物析出物验证必须是以产品为介质，在最差的条件下进行验证必须是以产品为介质，在最差的条件下进行8化学相容性测试方法化学相容性测试方法 证明过滤介质不会把外来物质带进产品证明过滤介质不会把外来物质带进产品 证明无菌过滤介质不受产品的影响，削弱它的强度和完证明无菌过滤介质不受产品的影响，削弱它的强度和完整性整性 测试包括：测试包括：可氧化物质（用水为溶剂时可以分析可氧化物质（用水为溶剂时可以分析TOC）析出物分析：如溶剂中的不挥发物（析出物分析：如溶剂中的不挥发物（NVR-No

9、n Volatile Residue）、水溶液）、水溶液pH、电导率、溶剂浓缩、电导率、溶剂浓缩100倍后色谱分析、倍后色谱分析、可选的可选的GC-Mass/GPC/FT-IR/HPCE/SFC分析分析 吸附分析（不涉及无菌原料药）吸附分析（不涉及无菌原料药）颗粒脱落分析（颗粒脱落分析（不溶性微粒药典分析不溶性微粒药典分析）完整性试验（使用前后起泡点变化）完整性试验（使用前后起泡点变化）流量变化流量变化 外观物理变化外观物理变化 使用前后生物截留能力变化（使用前后生物截留能力变化（Media fill时将过滤器最长使用时将过滤器最长使用时间、最多灭菌次数作为最差条件考虑）时间、最多灭菌次数作为

10、最差条件考虑）9赛多利斯相容性测试实例赛多利斯相容性测试实例10赛多利斯析出物质分析指导赛多利斯析出物质分析指导11破坏性方法破坏性方法:滤芯生产厂家采用滤芯生产厂家采用细菌挑战性试验细菌挑战性试验(根据根据 HIMA)HIMA)除菌过滤器完整性测试方法除菌过滤器完整性测试方法非破坏性方法非破坏性方法:滤芯用户使用：在过滤前滤芯用户使用：在过滤前 和过滤后检测除菌滤芯和过滤后检测除菌滤芯泡点法泡点法扩散流法扩散流法水侵入法水侵入法(WIT)(WIT)将微生物挑战试验的结果与完整性测试相结合将微生物挑战试验的结果与完整性测试相结合 首先证实除菌过滤器对微生物的截留能力首先证实除菌过滤器对微生物的

11、截留能力 提供制造商和用户一个非破坏性的方法来取代破坏性的微生物挑提供制造商和用户一个非破坏性的方法来取代破坏性的微生物挑战测试战测试过滤器供应商在提供除菌滤芯时，应提供该滤芯的完整性测试压力、最大过滤器供应商在提供除菌滤芯时，应提供该滤芯的完整性测试压力、最大扩散流值、最大压力衰减值或最小起泡点值。这些物理值是与纯水和材质扩散流值、最大压力衰减值或最小起泡点值。这些物理值是与纯水和材质(膜膜)之间的表面张力、黏度、界面夹角等有关，并通过非破坏性完整性测试之间的表面张力、黏度、界面夹角等有关，并通过非破坏性完整性测试与细菌挑战性测试的关联实验，得出的安全数据，并出具相关的认证报告与细菌挑战性测

12、试的关联实验，得出的安全数据，并出具相关的认证报告及实验数据。及实验数据。12缺陷假缺陷假单胞菌单胞菌无菌水无菌水无菌检验用过滤器无菌检验用过滤器 107 CFU/cm有效过滤面积有效过滤面积混合混合泵破坏性方法：破坏性方法：细菌挑战性试验细菌挑战性试验美国美国HIMA(健康工业生产管理局健康工业生产管理局)规定，在不低于规定，在不低于2 bar的工作压力下，每平方厘米滤膜的工作压力下，每平方厘米滤膜表面能截留均匀分布的缺陷型假单胞菌表面能截留均匀分布的缺陷型假单胞菌10107 7 以上，并以以上，并以LRV（Log Reduce Value）值表示）值表示其截留能力。其截留能力。LRV=lo

13、g10(过滤前细菌数过滤前细菌数/过滤后细菌数过滤后细菌数)例如：例如：10英寸，英寸，0.2um滤芯，缺陷型假单胞菌挑战，其过滤面积滤芯，缺陷型假单胞菌挑战，其过滤面积=600 cm2挑战菌数：挑战菌数：9.11x1012单位面积挑战菌数：单位面积挑战菌数：1.5 x1010 cm2穿透菌数穿透菌数=1=1LRV=log10(9.11x10 12/1)=12.96 7 Pass!(HIMA规定规定LRV=7为合格为合格)模拟实际工艺的压力流量等参数模拟实际工艺的压力流量等参数步骤步骤 确认过滤器的完整性确认过滤器的完整性 用含一定数量细菌的培养基过滤用含一定数量细菌的培养基过滤 滤过液进行培

14、养（取样后膜过滤滤过液进行培养（取样后膜过滤培养基），培养基），3737度度1414天天 过滤后进行完整性测试过滤后进行完整性测试 连续验证连续验证3 3次，都应无菌生长次，都应无菌生长13 107 CFU/cm20.6-1.0 m0.3-0.4 m最差测试条件最差测试条件缺陷型假单胞菌缺陷型假单胞菌(ATTC 19146)Brevundimonas Diminuta细菌挑战性试验细菌挑战性试验14几个需要特别关注的关键点几个需要特别关注的关键点 起泡点标准的建立与截留率的相关性起泡点标准的建立与截留率的相关性 过滤器的微生物截留验证必须在药液中进行过滤器的微生物截留验证必须在药液中进行 在实

15、际的生产参数下进行验证，如压差最高值在实际的生产参数下进行验证，如压差最高值 微生物挑战试验和化学相容性试验，不强制要求过滤微生物挑战试验和化学相容性试验，不强制要求过滤器用户自己验证，如果过滤器厂家能提供在类同条件器用户自己验证，如果过滤器厂家能提供在类同条件下测试的验证报告和数据，也是可以接受的。下测试的验证报告和数据，也是可以接受的。15除菌过滤器的完整性测试仪器除菌过滤器的完整性测试仪器 膜过滤器在使用前应进行完整性测试，膜过滤器在使用前应进行完整性测试，在过滤完成后也应该测试，以保证整个在过滤完成后也应该测试，以保证整个过滤装置在过滤过程中保持完整。过滤装置在过滤过程中保持完整。经典

16、方法如：起泡点、扩散流、稳压测经典方法如：起泡点、扩散流、稳压测试和前进流测试。这些测试方法应与细试和前进流测试。这些测试方法应与细菌截留能力相关联。菌截留能力相关联。16润湿的滤膜润湿的滤膜压缩空气压缩空气空气优先穿透最大的孔空气优先穿透最大的孔压缩空气压缩空气膜孔类似毛细管膜孔类似毛细管起泡点测试原理起泡点测试原理17产生连续气泡产生连续气泡起泡点如起泡点如CA,0.2 m,3.2bar 起泡点测试（手动方法示意）起泡点测试（手动方法示意）手动方法测试需要在下游端连接管路而影响无菌度手动方法测试需要在下游端连接管路而影响无菌度,因此不推荐手动方法！因此不推荐手动方法！自动完整性测试仪在过滤

17、系统的上游进行测试，避免了下游污染的缺点自动完整性测试仪在过滤系统的上游进行测试，避免了下游污染的缺点现在产生连续的现在产生连续的气泡了吗？气泡了吗？使用手动方法进行气泡点测试时使用手动方法进行气泡点测试时,会因操作者的不同判断产生主观误差。会因操作者的不同判断产生主观误差。18亨利定律亨利定律 Law:气体在液体中的溶解度与压力成正比气体在液体中的溶解度与压力成正比大气压：在润大气压：在润湿介质中溶解湿介质中溶解性较差性较差测试压力：测试压力：2.5 bar在润湿介质中有良好在润湿介质中有良好的溶解性的溶解性扩散流测试原理（扩散流测试原理（1）19最大允许扩散流最大允许扩散流for 0.2

18、m2:5ml/min测试压力测试压力:2.5 bar forSartobran P Capsule,CA,0.2 m压缩空气压缩空气:扩散流测试原理（扩散流测试原理（2）20=D L p FNtdN/t:单位时间内气体扩散的摩尔数单位时间内气体扩散的摩尔数(mol/s)D:扩散系数扩散系数(气气-液系统液系统)L:溶解度系数溶解度系数(气气-液系统液系统)p:压差压差Differential pressure appliedF:气液接触面积气液接触面积d:液膜厚度液膜厚度(过滤器过滤器)d扩散流测试原理（扩散流测试原理（3）21扩散流是压缩空气每分钟通过膜孔液体的分子流，扩散流是压缩空气每分钟

19、通过膜孔液体的分子流，它由以下因素决定：它由以下因素决定：气气-液体系、压差、气液接触面积和滤膜的厚度液体系、压差、气液接触面积和滤膜的厚度扩散流测试与微生物挑战结果相对应：扩散流测试与微生物挑战结果相对应：e.g.2.5 bar，Sartobran P,10,0,2 m(CA),最大允许扩散流最大允许扩散流15 ml/min 适于囊式和标准滤芯和大系统测试适于囊式和标准滤芯和大系统测试扩散流测试小结扩散流测试小结22水压缩空气压缩空气连接到完整性测试仪连接到完整性测试仪水V2V1Pinlet=2.5 bar10 min稳定稳定 10 min 测试测试Sartofluor GA 10,0.2

20、m，允许最大侵入允许最大侵入13 ml/10min压缩空气压缩空气疏水式过滤器水侵入测试疏水式过滤器水侵入测试(WIT)原理原理测试在低于水穿透测试在低于水穿透点的压力下进行点的压力下进行Water intrusion test23水水空气空气孔越小，侵入就越少。孔越小，侵入就越少。最大的侵入发生在最大最大的侵入发生在最大的孔。的孔。如果孔径如果孔径 “太大太大“,水就会穿透过去。水就会穿透过去。侵入速度侵入速度(ml/min)=p(mbar)侵入体积侵入体积(ml)测试时间测试时间(min)大气压大气压(mbar)水侵入的极限值与微生物挑战测试水侵入的极限值与微生物挑战测试 (HIMA)HI

21、MA)的结果直接相关。的结果直接相关。疏水式过滤器水侵入测试疏水式过滤器水侵入测试(WIT)原理原理24在线测试，不污染下游在线测试，不污染下游可以在蒸汽灭菌后进行可以在蒸汽灭菌后进行只使用水，不含只使用水，不含DOP或溶剂等污染物或溶剂等污染物同时检测滤芯的疏水性同时检测滤芯的疏水性同时检测滤芯安装的正确性同时检测滤芯安装的正确性水侵入测试水侵入测试(WIT)优点优点25除菌过滤进行无菌生产的典型设备除菌过滤进行无菌生产的典型设备 无菌过滤的组成：产品过滤器、无菌容器、呼吸过滤器无菌过滤的组成：产品过滤器、无菌容器、呼吸过滤器26除菌过滤器的除菌过滤器的SIP和完整性测试和完整性测试除菌过滤

22、器除菌过滤器SIP和冷却干燥和冷却干燥除菌过滤器完整性测试除菌过滤器完整性测试27带呼吸器无菌容器的带呼吸器无菌容器的SIP通用流程：进汽排气通用流程：进汽排气灭菌灭菌进气排汽进气排汽冷却干燥冷却干燥保压备用保压备用“进汽进汽”是指通入蒸汽，是指通入蒸汽，“排气排气”则是利用进入的蒸汽来驱除系统内存在的空气。注意则是利用进入的蒸汽来驱除系统内存在的空气。注意两个两个“汽汽”与与“气气”的区别，的区别，“汽汽”指水蒸汽，而指水蒸汽，而“气气”则指空气；则指空气；“灭菌灭菌”是通入足够压力的蒸汽来升温保压（也即保温）的过程；是通入足够压力的蒸汽来升温保压（也即保温）的过程；“进气排汽进气排汽”，则

23、是通入压缩空气或氮气来驱除系统内的存在的水蒸汽；，则是通入压缩空气或氮气来驱除系统内的存在的水蒸汽；“冷却干燥冷却干燥”是利用通入的氮气或压缩空气来对系统进行冷却干燥；是利用通入的氮气或压缩空气来对系统进行冷却干燥；“保压备用保压备用”是系统应保持一定的正压，因为只有正压之下才能维持系统的无菌状态。是系统应保持一定的正压，因为只有正压之下才能维持系统的无菌状态。28CIP、SIP管理和验证的重点管理和验证的重点 管理措施管理措施 CIP清洗验证关注：最差点取样、冲洗水清洗验证关注：最差点取样、冲洗水TOC/pH、活、活性物料、辅料、清洗剂的残留。性物料、辅料、清洗剂的残留。由计算机控制关键参数

24、：水温，清洁剂浓度，流速，由计算机控制关键参数：水温，清洁剂浓度，流速，时间，阀门的开闭，蒸汽温度，压力等。时间，阀门的开闭，蒸汽温度，压力等。SIP蒸汽验证关注：根据温度分布验证，选最冷点安装蒸汽验证关注：根据温度分布验证，选最冷点安装探头监测温度，灭菌温度探头监测温度，灭菌温度/时间、使用生物指示剂。时间、使用生物指示剂。实时记录实时记录CIP和和SIP的关键运行曲线的关键运行曲线（温度、压力、时温度、压力、时间等最好自动记录间等最好自动记录）。根据验证结果，制订根据验证结果，制订SOP详细规定各种生产计划模式详细规定各种生产计划模式下下CIP、SIP的周期与有效期。的周期与有效期。29疏

25、水性呼吸过滤器完整性测试疏水性呼吸过滤器完整性测试完整性测试使用水侵入法完整性测试使用水侵入法WIT测试测试通用流程：放空卸压通用流程：放空卸压进液润湿进液润湿测试测试排排放放保压备用（或继续使用）保压备用（或继续使用）“放空卸压放空卸压”是为了让系统与外界压力平衡，是为了让系统与外界压力平衡，以便下一步的以便下一步的“进液润湿进液润湿”操作；操作；“进液润湿进液润湿”则是使滤芯浸润，这是进行完则是使滤芯浸润，这是进行完整性测试前的必要准备；整性测试前的必要准备；“测试测试”，以规定的仪器按一定参数条件操，以规定的仪器按一定参数条件操作，获得相应期望的可靠性结果；作，获得相应期望的可靠性结果；

26、“排放排放”，使充满在过滤系统里的液体排出；，使充满在过滤系统里的液体排出；“保压备用保压备用”（或继续使用），测试通过暂（或继续使用），测试通过暂时不用时需保压备用，若继续生产则可投入时不用时需保压备用，若继续生产则可投入使用。使用。30典型无菌生产技术典型无菌生产技术在无菌生产过程中，严格地要求将产品和生产人员隔离开来。这在无菌生产过程中，严格地要求将产品和生产人员隔离开来。这一点同样也适用于药物有效成分的生产加工，因为这些成分会危一点同样也适用于药物有效成分的生产加工，因为这些成分会危害人们的健康和周围环境。害人们的健康和周围环境。尽管今天的尽管今天的GMP药品生产质量管理规范对医药产品

27、生产的环境和药品生产质量管理规范对医药产品生产的环境和设备都提出了很高的卫生和清洁要求，但是一般都没有规定如何设备都提出了很高的卫生和清洁要求，但是一般都没有规定如何实现这些要求。实现这些要求。在选择药品的无菌生产方案时，通常都从药品的生产技术规范、在选择药品的无菌生产方案时，通常都从药品的生产技术规范、超净室方案的费用高低、需要满足的严格规定和潜在危害的级别超净室方案的费用高低、需要满足的严格规定和潜在危害的级别等几个方面进行比较和对比，最终找出一个最佳的技术方案。在等几个方面进行比较和对比，最终找出一个最佳的技术方案。在涉及到无菌生产时，一般情况下有三种不同的技术方案可供选用。涉及到无菌生

28、产时，一般情况下有三种不同的技术方案可供选用。从传统的超净室技术，然后是从传统的超净室技术，然后是RABS(Restricted Access Barrier Systems)隔离装置，最后是隔离室技术。隔离装置，最后是隔离室技术。这些系统都不同程度的满足了无菌生产的要求，如对毒性药品的这些系统都不同程度的满足了无菌生产的要求，如对毒性药品的控制、卫生消毒结果的保护、操作者与医药产品隔离等。控制、卫生消毒结果的保护、操作者与医药产品隔离等。三种工艺技术的研发历程也从一个侧面反映了医药产品生产自动三种工艺技术的研发历程也从一个侧面反映了医药产品生产自动化程度的提高，例如化程度的提高，例如CIP/

29、SIP就地清洗和就地灭菌系统、满足就地清洗和就地灭菌系统、满足VHP的净化系统、自动灌装和自动清空系统以及集成式的浮游菌的净化系统、自动灌装和自动清空系统以及集成式的浮游菌采样器采样器/尘埃粒子检测器等等都反映了无菌隔离技术和自动化技尘埃粒子检测器等等都反映了无菌隔离技术和自动化技术的进步。术的进步。31典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术最高的安全保护：隔离室最高的安全保护：隔离室隔离室系统根据具体工作的任务不同，既可以形成正压环境，也隔离室系统根据具体工作的任务不同，既可以形成正压环境，也可以生成负压环境（对产品和人员的保护）。而这一系统的最大可以生成负压环境（对产品和人员的保护）。而这一系统

30、的最大特点在于排除污染物时没有很高的时间耗费和费用支出。所有的特点在于排除污染物时没有很高的时间耗费和费用支出。所有的生产操作都是通过隔离手套完成的，在生产过程中不可能打开隔生产操作都是通过隔离手套完成的，在生产过程中不可能打开隔离室的门。但隔离室系统的使用对操作人员的素质要求很高，因离室的门。但隔离室系统的使用对操作人员的素质要求很高，因此，人员培训和资格审核占用的费用较高。此，人员培训和资格审核占用的费用较高。图图1 隔离室：隔离室：隔离室内部的隔离器达到了环境空气隔离室内部的隔离器达到了环境空气质量质量100级（级（ISO 5/A级）的水平。级）的水平。周围环境的空气质量等级达到了周围环

31、境的空气质量等级达到了ISO8级（级（D级）。级）。隔离室系统有自己的温度和湿度调节隔离室系统有自己的温度和湿度调节系统，有自己的压力调节装置。因此系统，有自己的压力调节装置。因此可以根据不同的医药产品生产任务在可以根据不同的医药产品生产任务在各个隔离室工作间中形成不同的工作各个隔离室工作间中形成不同的工作压力等级（实现对人员和产品的保压力等级（实现对人员和产品的保护）。护）。32典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术图图2 被动式被动式cRABS隔离装置：隔离装置：层流空气层的等级为层流空气层的等级为100（ISO 5/A级）。级）。环境空气质量等级到达了环境空气质量等级到达了10，000（ISO

32、 7/C级）。级）。这种被动式的这种被动式的cRABS隔离装置配备有隔离装置配备有中央中央HVAC设备。生产过程中百分之百设备。生产过程中百分之百前级过滤的循环空气可随时进行循环空前级过滤的循环空气可随时进行循环空气道的清洁、并能保证更换过滤器滤芯气道的清洁、并能保证更换过滤器滤芯时不产生交叉污染。可通过隔离手套介时不产生交叉污染。可通过隔离手套介入工作区的生产操作。入工作区的生产操作。33典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术图图3 被动式被动式RABS隔离装置：隔离装置：环境空气质量等级到达了环境空气质量等级到达了10000（ISO 7/C级）级的标准。级）级的标准。医药产品生产设备由环境空气质

33、量医药产品生产设备由环境空气质量等级等级100（ISO 5/A级）级的层流空级）级的层流空气幕隔离起来。气幕隔离起来。系统配备有中央系统配备有中央HVAC装置。隔离空装置。隔离空气从医药产品生产机床工作台的高气从医药产品生产机床工作台的高度进入室内。可通过隔离手套介入度进入室内。可通过隔离手套介入工作区进行生产操作。工作区进行生产操作。34典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术图图4 主动式主动式RABS隔离装置：隔离装置：通过合适的通过合适的100（ISO 5/A级）级的级）级的循环空气装置保证了循环空气装置保证了RABS隔离装置内隔离装置内部层流空气气幕，结合使用隔离防护部层流空气气幕，结合使用

34、隔离防护罩可以构成一个完整的系统。输入的罩可以构成一个完整的系统。输入的空气直接取自室内，进入机床的空气空气直接取自室内，进入机床的空气高度与机床工作台同高。高度与机床工作台同高。RABS隔离装隔离装置环境中的环境等级到达了置环境中的环境等级到达了10000（ISO 7/C级）级，可通过隔离手套级）级，可通过隔离手套介入生产设备的操作。介入生产设备的操作。35典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术图图5 主动式主动式cRABS隔离装置：隔离装置：通过使用等级为通过使用等级为100（ISO 5/A级）级级）级的循环空气设备保证了层流空气气幕，的循环空气设备保证了层流空气气幕，输入的空气直接取自输入的空

35、气直接取自RABS隔离装置内。隔离装置内。可随时进行循环空气道的清洁、并能保可随时进行循环空气道的清洁、并能保证更换过滤器滤芯时不产生交叉污染。证更换过滤器滤芯时不产生交叉污染。机床隔离防护罩与循环空气设备构成了机床隔离防护罩与循环空气设备构成了等级为等级为10000（ISO 7/C级）级的整级）级的整体环境空气质量。可通过隔离手套介入体环境空气质量。可通过隔离手套介入工作区的生产操作。工作区的生产操作。36典型无菌隔离技术典型无菌隔离技术图图5 主动式主动式cRABS隔离装置：隔离装置：通过使用等级为通过使用等级为100（ISO 5/A级）级级）级的循环空气设备保证了层流空气气幕，的循环空气

36、设备保证了层流空气气幕，输入的空气直接取自输入的空气直接取自RABS隔离装置内。隔离装置内。可随时进行循环空气道的清洁、并能保可随时进行循环空气道的清洁、并能保证更换过滤器滤芯时不产生交叉污染。证更换过滤器滤芯时不产生交叉污染。机床隔离防护罩与循环空气设备构成了机床隔离防护罩与循环空气设备构成了等级为等级为10000（ISO 7/C级）级的整级）级的整体环境空气质量。可通过隔离手套介入体环境空气质量。可通过隔离手套介入工作区的生产操作。工作区的生产操作。37典型无菌隔离生产线典型无菌隔离生产线38无菌隔离器技术（无菌进入和传递）无菌隔离器技术（无菌进入和传递）采用采用Alpha/Beta接口进

37、行接口进行无菌传递无菌传递连接干连接干/湿热灭菌器湿热灭菌器连接化学灭菌气锁（使用连接化学灭菌气锁（使用VHP、环氧乙烷、甲醛、臭、环氧乙烷、甲醛、臭氧灭菌）氧灭菌）39无菌隔离器不同的人员介入方式无菌隔离器不同的人员介入方式手套手套/套袖套袖0.5m介入介入半身衣（半身衣（1.2m介入距离）介入距离）全身衣全身衣无限制介入无限制介入40无菌隔离器使用无菌隔离器使用VHP进行进行SIP灭菌灭菌由于环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸熏蒸存在毒性大、监测残留、腐由于环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸熏蒸存在毒性大、监测残留、腐蚀设备仪器表面等诸多问题，现在已经基本不为业界所采用。蚀设备仪器表面等诸多问题，现在已经基本

38、不为业界所采用。臭氧熏蒸也因为不能杀灭孢子的缘故也只限于日常消毒使用，不臭氧熏蒸也因为不能杀灭孢子的缘故也只限于日常消毒使用，不被法规认可作为灭菌方法使用。被法规认可作为灭菌方法使用。VHPVapour Hydrogen Peroxide 汽化过氧化氢则因为毒性汽化过氧化氢则因为毒性小、对设备仪器腐蚀性、能杀灭孢子，被业界推荐作为无菌隔离小、对设备仪器腐蚀性、能杀灭孢子，被业界推荐作为无菌隔离器的器的SIP灭菌手段。灭菌手段。灭菌验证通常采用生物指示剂：枯草杆菌芽孢灭菌验证通常采用生物指示剂：枯草杆菌芽孢 孢子条孢子条41无菌隔离器的验证无菌隔离器的验证-检漏试验检漏试验 无菌隔离器的检漏可以

39、有两种：无菌隔离器的检漏可以有两种：痕量气体（氨、氦）的泄漏监测。痕量气体（氨、氦）的泄漏监测。保压试验（一般正压保压试验（一般正压15Pa或以上），如果封闭手套箱的各个进出接或以上），如果封闭手套箱的各个进出接口，一般来讲口，一般来讲0.5%以下的总容积泄漏是可以接受的。以下的总容积泄漏是可以接受的。隔离器安装后隔离器安装后OQ应包括检漏试验，因为在运输过程中密封应包括检漏试验，因为在运输过程中密封有可能遭到破坏。当然一般隔离器都可能会安装欠压、过压有可能遭到破坏。当然一般隔离器都可能会安装欠压、过压控制和报警装置。控制和报警装置。另外要注意的是：通常气体熏蒸灭菌通常都是有毒的，因此另外要注

40、意的是：通常气体熏蒸灭菌通常都是有毒的，因此检漏试验应该作为日常监控的一部分。检漏试验应该作为日常监控的一部分。如果隔离器不完全密封，留有鼠洞式产品出口，除了维持正如果隔离器不完全密封，留有鼠洞式产品出口，除了维持正压外，还需要用发烟和录像来证明气流的可靠和无菌保障。压外，还需要用发烟和录像来证明气流的可靠和无菌保障。42无菌隔离器的验证无菌隔离器的验证-手套检漏试验手套检漏试验由于担心手套的破损导致无菌隔离失效，除了由于担心手套的破损导致无菌隔离失效，除了要求手套每次用前必须进行外观检漏和及时更要求手套每次用前必须进行外观检漏和及时更换，业界还开发出多种专用手套换，业界还开发出多种专用手套/

41、套袖检漏仪，套袖检漏仪，以检查难以目检发现的针孔。以检查难以目检发现的针孔。43生产环境控制尘埃微粒监控生产环境控制尘埃微粒监控 欧盟欧盟GMPGMP要求：要求：应对应对A A级区的空气粒子进行级区的空气粒子进行连续连续测定。测定。A A级区和级区和B B级区空气总的采样级区空气总的采样量不得少于量不得少于1 1米米3 3，C C级区最好也能达到此标准。（采用多点固定安级区最好也能达到此标准。（采用多点固定安装大流量装大流量28.3L/min28.3L/min尘埃粒子计数器探头组网）尘埃粒子计数器探头组网）洁净度洁净度级别级别悬浮粒子最大允许数悬浮粒子最大允许数/立方米立方米静态静态动态动态0

42、.5m0.5m5m5m0.5m0.5m5m5mA A级级352035202020352035202020B B级级35203520292935200035200029002900C C级级352,000352,00029002900352000035200002900029000D D级级352000035200002900029000不作规定不作规定不作规定不作规定44生产环境控制尘埃微粒监控生产环境控制尘埃微粒监控 中国新版中国新版GMPGMP草案要求：草案要求：应对应对A A级区级区“动态动态”的悬浮粒子进行的悬浮粒子进行频繁频繁测定，并建议对测定，并建议对B B级区级区“动动态态”也进

43、行频繁测定。也进行频繁测定。A A级区和级区和B B级区空气总的采样量不得少于级区空气总的采样量不得少于1 1米米3 3，C C级区也宜达到此标级区也宜达到此标准。（采用便携式大流量尘埃粒子计数器准。（采用便携式大流量尘埃粒子计数器28.3L/min28.3L/min）洁净度洁净度级别级别悬浮粒子最大允许数悬浮粒子最大允许数/立方米立方米静态静态动态动态0.5m0.5m 5m5m0.5m0.5m5m5mA A级级350035001 1350035001 1B B级级350035001 135000035000020002000C C级级35000035000020002000350000035

44、000002000020000D D级级350000035000002,00002,0000不作规定不作规定不作规定不作规定45生产环境控制微生物采样生产环境控制微生物采样 中国新版中国新版GMPGMP草案和欧盟草案和欧盟GMPGMP要求：要求：A A级区和级区和B B级区空气总的浮游菌采样量不得少于级区空气总的浮游菌采样量不得少于1 1米米3 3。C C级区也宜达到级区也宜达到此标准。此标准。微生物污染限度参考标准微生物污染限度参考标准(中国中国/欧盟欧盟)级别级别空气空气样样cfu/mcfu/m3 3沉降碟沉降碟(90mm90mm)cfu/4cfu/4小时小时(b)(b)接触碟接触碟(55

45、mm55mm)cfucfu/碟碟5 5指手套指手套cfucfu/手套手套A A 1 1 1 1 1 1 1 1B B10105 55 55 5C C10010050502525D D200200100100505046无菌检查无菌检查无菌原料药常用薄膜过滤法：不适用于无无菌原料药常用薄膜过滤法：不适用于无法溶解的样品，如无菌衣或肠线。法溶解的样品，如无菌衣或肠线。大体积检验量，不存在稀释培养基问题。大体积检验量，不存在稀释培养基问题。样品中的抑菌因素可被滤除，中和试剂可应样品中的抑菌因素可被滤除，中和试剂可应用在淋洗液中，如：用在淋洗液中，如：-内酰胺酶。内酰胺酶。不必再培养，因此检验周期确定

46、。不必再培养，因此检验周期确定。大样品检验量不增加培养基。大样品检验量不增加培养基。通常是封闭系统，如通常是封闭系统，如STERITEST，降低污染，降低污染可能性。可能性。培养基较清澈，易观察生长情况。培养基较清澈，易观察生长情况。工作环境：工作环境：100级无菌隔离系统中进行。级无菌隔离系统中进行。两种微生物培养基：两种微生物培养基：用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温度：度：23-28。用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度：体培养基，培养温度：30-35。47无菌检查参考资料无菌检查参考资料 无菌检

47、查微生物限度检查操作光盘（上、下集）（中无菌检查微生物限度检查操作光盘（上、下集）（中检所录制）检所录制）http:/ http:/ 过滤系统的验证过滤系统的验证 空调系统、无菌隔离器的验证空调系统、无菌隔离器的验证 环境监控和无菌环境验证环境监控和无菌环境验证 灭菌验证（气体熏蒸和其他灭菌验证（气体熏蒸和其他SIP）无菌检验方法验证无菌检验方法验证 培养基灌培养基灌封封（Media Fill）试验）试验 包装容器密封性验证包装容器密封性验证49 培养基灌培养基灌封封（Media Fill）试验）试验 使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无菌工艺进行验证。又称为使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对

48、无菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试验工艺模拟试验”(Process simulation).将培养基暴露于设备、容器、密封系统的表面和关键环境条件中，并将培养基暴露于设备、容器、密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。模拟实际生产完成工艺操作。对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长。对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长。评价结果，应全部无菌。如有阳性应调查实际生产中（如灌装前的调评价结果，应全部无菌。如有阳性应调查实际生产中（如灌装前的调试、加入无菌原辅包材、无菌连接、灌装和密封）产品污染的来源。试、加入无菌原辅包材、无菌连接、灌装和密封）产品污染的

49、来源。培养基灌培养基灌封封验证通过前产品不能释放。验证通过前产品不能释放。方法方法1：在灌装线上直接灌装液体培养基，灌装后压塞：在灌装线上直接灌装液体培养基，灌装后压塞-轧盖或熔封轧盖或熔封 方法方法2：先灌装干粉培养基，再加入注射用水：先灌装干粉培养基，再加入注射用水 方法方法3：先灌装惰性剂，再加入液体培养基：先灌装惰性剂，再加入液体培养基 采用方法采用方法2/3时，所用惰性剂或干粉培养基需经辐射灭菌。时，所用惰性剂或干粉培养基需经辐射灭菌。常用惰性剂有聚乙二醇常用惰性剂有聚乙二醇8000、乳糖。、乳糖。培养基灌封（培养基灌封（Media Fill）试验）试验(1)50培养基灌封（培养基灌

50、封（Media Fill）试验）试验(2)首次首次验证，培养基灌封应安排在一周内的不同时间进行验证，培养基灌封应安排在一周内的不同时间进行，至少要连续至少要连续成功灌封成功灌封3个批次。个批次。再验证，可选择在一周结束或其它最差条件下进行。至少需要成功灌再验证，可选择在一周结束或其它最差条件下进行。至少需要成功灌封封1个批次个批次，一般再验证每年两次（每，一般再验证每年两次（每57个月）个月）。灌封时间要涵盖实际灌封时间要涵盖实际所有的所有的生产班次。生产班次。设施设备、生产线配置、重要人员、容器系统的变更，环境监控结果设施设备、生产线配置、重要人员、容器系统的变更，环境监控结果异常、停车时间