细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件.ppt

1、超敏反应超敏反应（hypersensitivity）指机体对某些抗原进行初次应答后，指机体对某些抗原进行初次应答后，再次再次接受接受相同相同抗原刺激时，出现以抗原刺激时，出现以生理功生理功能紊乱或组织细胞损伤能紊乱或组织细胞损伤的的异常异常适应性免疫适应性免疫应答。应答。超敏反应超敏反应亦称亦称变态反应变态反应（allergy）/过过敏反应敏反应（anaphylaxis）I I型超敏反应型超敏反应/速发型超敏反应速发型超敏反应型超敏反应型超敏反应/细胞毒型或细胞溶解型超细胞毒型或细胞溶解型超 敏反应敏反应型超敏反应型超敏反应/免疫复合物型或血管炎型免疫复合物型或血管炎型 超敏反应超敏反应型超敏

2、反应型超敏反应/迟发型超敏反应迟发型超敏反应 致敏阶段致敏阶段一、一、I I型超敏反应的发生过程和机制型超敏反应的发生过程和机制 效应阶段效应阶段 激发阶段激发阶段第一节第一节I I 型型 超超 敏敏 反反 应应(过敏反应过敏反应/速发型超敏反应速发型超敏反应)变应原变应原初次初次刺激刺激特应性个体特应性个体产生特异性产生特异性IgE与与肥大细胞和嗜碱粒肥大细胞和嗜碱粒细胞细胞表面表面FcRI结合结合与与致敏致敏肥大细胞和嗜碱粒细肥大细胞和嗜碱粒细胞胞 表面表面IgE特异性结合特异性结合再次再次接触接触FcRI交联交联启动并转导信号，胞启动并转导信号，胞内酶活化，内酶活化，Ca2内流内流细胞活

3、化，细胞活化，脱颗粒脱颗粒和分泌活性介质和分泌活性介质组胺组胺激肽原酶激肽原酶缓激肽缓激肽平 滑 肌 收 缩，毛 细 血 管 扩 张、通 透 性 增 加，腺 体 分 泌 增 加LTsPAFPGD2v LTs：白三烯白三烯 PAF：血小板活化因子血小板活化因子 PGD2：前列腺素前列腺素D2预先储备的介质预先储备的介质新合成的介质新合成的介质 全身性全身性(过敏性休克过敏性休克)呼吸道呼吸道(过敏性鼻过敏性鼻炎、哮喘炎、哮喘)消化道消化道(过敏性胃肠炎过敏性胃肠炎)皮肤皮肤荨麻疹荨麻疹平 滑 肌 收 缩，毛 细 血 管 扩 张、通 透 性 增 加，腺 体 分 泌 增 加二、二、I I型超敏反应的

4、特点：型超敏反应的特点：v 反应发生反应发生快快、消退、消退快快；v常引起常引起生理功能紊乱生理功能紊乱，几乎不发生严重，几乎不发生严重 组织细胞损伤；组织细胞损伤；v具有具有个体差异个体差异和和遗传背景遗传背景；v 由由IgE抗体介导；抗体介导；v 无补体无补体参与。参与。花粉症的发生机制花粉症的发生机制 皮肤过敏症皮肤过敏症眼睑水肿眼睑水肿荨麻疹荨麻疹 IgGIgG或或IgMIgM类抗体与靶细胞表面相应抗原类抗体与靶细胞表面相应抗原结合，在补体、吞噬细胞和结合，在补体、吞噬细胞和NKNK细胞参与细胞参与作用下，引起作用下，引起以细胞溶解或组织损伤以细胞溶解或组织损伤为为主的病理性免疫反应。

5、主的病理性免疫反应。第二节第二节型超敏反应型超敏反应又称细胞毒型或细胞溶解型超敏反应又称细胞毒型或细胞溶解型超敏反应 新生儿溶血症新生儿溶血症 肺肺肾综合（肾综合（Goodpasture综合征）综合征）病毒病毒(A2型流感病毒型流感病毒)、有机溶剂、有机溶剂肺肺组织损伤组织损伤吸入吸入自身抗体自身抗体 肾小球损伤肾小球损伤产生产生肺泡壁与肾小球肺泡壁与肾小球基底膜为共同抗原基底膜为共同抗原交叉反应交叉反应 甲状腺机能亢进甲状腺机能亢进（刺激型超敏反应）刺激型超敏反应）长效甲状腺刺激素长效甲状腺刺激素(LATS)（long acting thyroid stimulator)自身抗体自身抗体甲状

6、腺细胞表面的甲状腺细胞表面的促甲状腺激素受体促甲状腺激素受体结合结合甲状腺激素分泌甲状腺激素分泌甲状腺功能亢进甲状腺功能亢进刺激刺激又称免疫复合物型或血管炎型超敏反应又称免疫复合物型或血管炎型超敏反应 中等大小可溶性免疫复合物中等大小可溶性免疫复合物沉积沉积于局部于局部或全身毛细血管基底膜，通过激活补体并或全身毛细血管基底膜，通过激活补体并在血小板、嗜碱性在血小板、嗜碱性/中性粒细胞参与下，引中性粒细胞参与下，引起以起以充血水肿充血水肿、局部坏死局部坏死和和中性粒细胞浸中性粒细胞浸润润为主要特征的炎症反应和组织损伤。为主要特征的炎症反应和组织损伤。效应效应T T细胞与相应抗原作用，引起的以细胞

7、与相应抗原作用，引起的以单单个核细胞浸润和组织细胞损伤个核细胞浸润和组织细胞损伤为主要特征为主要特征的炎症反应的炎症反应。由于免疫细胞激活、增殖、分化及炎症由于免疫细胞激活、增殖、分化及炎症细胞的聚集需较长时间细胞的聚集需较长时间,炎症反应发生较迟炎症反应发生较迟,持续时间较长持续时间较长,故称为迟发型超敏反应故称为迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH ）。）。又称迟发型超敏反应又称迟发型超敏反应主要由主要由T T细胞介导；细胞介导；无抗体和补体参与无抗体和补体参与发生慢发生慢慢性炎症损伤：以单个核细胞浸慢性炎症损伤：以单个核细胞浸 润和组织细胞坏

8、死为主要特征润和组织细胞坏死为主要特征特点特点 超超敏敏反反应应类类型型 参参与与的的分分子子与与细细胞胞 发发生生机机理理 I型 IgE(IgG4)、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞等 IgE吸附于肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面；过敏原与细胞表面的IgE结合；脱颗粒释放活性物质，作用于效应器官 II型 IgG或IgM、补体、巨噬细胞、NK细胞 抗体与细胞表面抗原结合,或抗原抗体复合物吸附于细胞表面；补体参与引起细胞溶解或损伤；巨噬细胞吞噬杀伤靶细胞；NK细胞通过ADCC效应杀伤靶细胞 III型 IgG、IgM或IgA、补体、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血小板 中等大小的IC沉积于血管壁基底膜或

9、其它组织间隙；激活补体,吸引中性粒细胞,释放溶酶体酶,引起炎症反应；血小板凝聚,微血栓形成,导致局部缺血、瘀血和出血 IV型 T细胞 抗原使T细胞致敏；致敏T细胞再次与抗原物质相遇直接杀伤靶细胞或产生各种淋巴因子,引起炎症反应 第五节第五节 超敏反应的免疫学检测超敏反应的免疫学检测一、变应原皮肤试验一、变应原皮肤试验皮试 主要用于检测主要用于检测型和型和型超敏反应过型超敏反应过敏原的检测。敏原的检测。（一）原理：体内试验（一）原理：体内试验 （二）方法：（二）方法：（1）皮内试验）皮内试验 青霉素皮试（I型）：1525min观察有无风团（荨麻疹）和红晕 结核菌素皮试（IV型）：4872h观察有

10、无红肿硬结。（2）挑刺试验）挑刺试验（I型）：（3）斑贴试验）斑贴试验（IV型）：寻找接触性皮炎过敏原。、型超敏反应皮肤实验 1：15分钟出现1cm的界限清晰的风团 2：5-12小时出现超过5cm的红肿、出血、坏死 3：24-48小时出现的1cm的红肿、硬结（三）结果判定及分析（三）结果判定及分析 超敏反应防治超敏反应防治皮试皮试型超敏反应皮肤试验：型超敏反应皮肤试验：20-30min内观察内观察 V型超敏反应皮肤试验：型超敏反应皮肤试验：48-72h内观察内观察 假阳性常见原因：假阳性常见原因：试验溶液配制不当，过酸或过碱都会对皮肤产生非特异试验溶液配制不当，过酸或过碱都会对皮肤产生非特异性

11、刺激；性刺激；被试者皮肤反应过强；被试者皮肤反应过强；变质或不纯。变质或不纯。假阳性常见原因：假阳性常见原因：试验抗原浓度过低，或因各种原因失效；试验抗原浓度过低，或因各种原因失效；被试者皮肤反应较低；被试者皮肤反应较低；患者近期内使用过大量抗组胺类药物或正使用免疫抑制患者近期内使用过大量抗组胺类药物或正使用免疫抑制剂等药物。剂等药物。（四）应用与评价（四）应用与评价 寻找变应原寻找变应原 预防药物或疫苗过敏预防药物或疫苗过敏 评价机体细胞免疫功能状态评价机体细胞免疫功能状态 传染病的诊断传染病的诊断 血清IgE检测：I型超敏反应 抗血细胞抗体的检测：II型超敏反应 循环免疫复合物的检测：II

12、I型超敏反应 嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞计数：I型超敏反应时可增多 某些疾病时可增多二、血清IgE检测（一）血清总（一）血清总IgE的测定的测定1、放射免疫吸附试验、放射免疫吸附试验2、酶联免疫测定法、酶联免疫测定法3、化学发光法、化学发光法（二）特异性（二）特异性IgE的测定的测定1、放射变应原吸附试验、放射变应原吸附试验2、酶联免疫测定法、酶联免疫测定法3、CAP变应原检测系统变应原检测系统三、免疫复合物的检测三、免疫复合物的检测immune compleximmune complex，ICIC：即抗原抗体复合物即抗原抗体复合物分类：分类：局部免疫复合物：局部免疫复合物：可溶性免疫复合物：

13、可溶性免疫复合物：循环免疫复合物循环免疫复合物(circulating immune(circulating immune complexcomplex，CIC)CIC)：主要指血液中免疫复合物。主要指血液中免疫复合物。根据形成免疫复合物根据形成免疫复合物Ag-Ab是已知或未知的，是已知或未知的，将将CIC分为两大类：分为两大类：?特异性免疫复合物特异性免疫复合物:如乙型肝炎的如乙型肝炎的HBsAg-抗抗-HBs，甲状腺球蛋白抗原，甲状腺球蛋白抗原-抗甲状腺球蛋白抗抗甲状腺球蛋白抗体形成的免疫复合物；体形成的免疫复合物；?非特异性免疫复合物非特异性免疫复合物:如肾小球肾炎、系统如肾小球肾炎、系

14、统性红斑狼疮等。性红斑狼疮等。（一）抗原非特异性（一）抗原非特异性CIC的检测的检测非抗原特异性循环免疫复合物的检测不考虑免疫复非抗原特异性循环免疫复合物的检测不考虑免疫复合物中抗原性质，只检测免疫复合物的合物中抗原性质，只检测免疫复合物的总量总量。检测非抗原特异检测非抗原特异CICCIC的方法应用较多，建立的检测方的方法应用较多，建立的检测方法也比较多，根据检测原理不同，将其检测技术大法也比较多，根据检测原理不同，将其检测技术大致归纳为致归纳为物理学测定法、补体相关测定法、抗球蛋物理学测定法、补体相关测定法、抗球蛋白测定法和细胞技术测定法等。白测定法和细胞技术测定法等。1、物理学测定法、物理

15、学测定法（1）分子大小特性：）分子大小特性：超速离心、分子超滤、凝胶过滤等超速离心、分子超滤、凝胶过滤等（2）聚乙二醇（）聚乙二醇（PEG）沉淀法：沉淀法：原理：原理：PEG是一种无电荷的线形分子结构的多糖，为乙二是一种无电荷的线形分子结构的多糖，为乙二醇的聚合物，有较强脱水作用，利用醇的聚合物，有较强脱水作用，利用2%4%浓度的浓度的PEG6000可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，将可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，将此沉淀定量溶解，测其此沉淀定量溶解，测其A值。值。CIC 相对分子质量较大，相互结合的抗原抗体的构象发生相对分子质量较大，相互结合的抗原抗体的构象发生改变，易被低浓

16、度改变，易被低浓度PEG 自液相析出。自液相析出。PEG 还可抑制还可抑制CIC 解离，促进解离，促进CIC 进一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。利进一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。利用透射比浊或散射比浊法可测出用透射比浊或散射比浊法可测出CIC 的存在与含量。的存在与含量。方法：方法：按试剂盒说明书操作。按试剂盒说明书操作。1、物理学测定法、物理学测定法（2）聚乙二醇（）聚乙二醇（PEG）沉淀法：沉淀法：注意事项：注意事项：1）PEG浓度超过浓度超过5%，可使，可使IgM等其他血清蛋白质同时沉淀，等其他血清蛋白质同时沉淀，导致假阳性结果导致假阳性结果2）如需定量测定，可用热变性）如需定量测定，

17、可用热变性IgG制备标准曲线制备标准曲线3）温度：）温度：4最佳。最佳。4）空腹采血：低密度脂蛋白可引起浊度增加。）空腹采血：低密度脂蛋白可引起浊度增加。5）自行制定正常值：）自行制定正常值：6）高）高球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性7）此法快速、简便，）此法快速、简便，但特异性较差，仅适于筛查。但特异性较差，仅适于筛查。2、补体相关测定法：、补体相关测定法：C1q结合试验：结合试验：原理：原理：待检血清加入包被有待检血清加入包被有C1q的微量反应板，免疫复合物和的微量反应板，免疫复合物和C1q结合，结合，再与酶标记抗抗体反应，在固相

18、上反应生成再与酶标记抗抗体反应，在固相上反应生成Clq-CIC-酶标记抗人酶标记抗人IgG 复合物，通过底物颜色的深浅判断免疫复合物的存在及数量。复合物，通过底物颜色的深浅判断免疫复合物的存在及数量。方法：方法：注意事项：注意事项：1）C1q制品不易精制且纯品不稳定，所以测定结果的稳定性较差制品不易精制且纯品不稳定，所以测定结果的稳定性较差2）SLE患者血清中抗患者血清中抗C1q抗体能产生假阳性抗体能产生假阳性3）此法灵敏度优于）此法灵敏度优于PEG 沉淀比浊法，可达沉淀比浊法，可达0.1g/ml 热聚合热聚合IgG。抗补体试验抗补体试验 原理类似补体结合试验。原理类似补体结合试验。胶固素结合

19、试验胶固素结合试验 胶固素是牛血清中的一种正常蛋白，胶固素是牛血清中的一种正常蛋白，能与能与C3d特异性结合。特异性结合。3、抗球蛋白测定法、抗球蛋白测定法mRF凝胶扩散试验：凝胶扩散试验：原理：原理：mRF具有与变性具有与变性IgG和免疫复合物中和免疫复合物中IgG结合结合而不与游离的而不与游离的IgG结合的特性，其中结合的特性，其中mRF与免疫与免疫复合物的亲和力更强。该方法是将复合物的亲和力更强。该方法是将mRF和免疫复和免疫复合物在琼脂糖凝胶中扩散，结合形成沉淀，进行合物在琼脂糖凝胶中扩散，结合形成沉淀，进行定性或定量测定。定性或定量测定。4、细胞技术测定法：、细胞技术测定法：Raji

20、细胞试验细胞试验原理原理：Raji细胞是有细胞是有Burkitt淋巴瘤患者分离建立的淋巴瘤患者分离建立的B细胞株，其表面有大量细胞株，其表面有大量C3b、C1q和和C3d受体，受体，无无SmIg，利用这些受体与结合补体的利用这些受体与结合补体的CIC结合，结合，加入放射性核素标记的抗人加入放射性核素标记的抗人IgG，反应层次为反应层次为Raji细胞细胞-CIC-放射性核素标记抗人放射性核素标记抗人IgG复合物。复合物。评价：评价：敏感性高、特异性强、实用性强；敏感性高、特异性强、实用性强；Raji细胞培养较困难；细胞培养较困难；有时需封闭，操作繁琐。有时需封闭，操作繁琐。（二）（二）抗原特异性

21、抗原特异性CIC检测技术：检测技术：主要检测抗原抗体复合物的性质。主要检测抗原抗体复合物的性质。单特异性循环免疫复合物的检测方法：单特异性循环免疫复合物的检测方法：胰蛋白酶解离法：胰蛋白酶解离法：检测检测HBsAg-CIC，PEG沉淀免疫复沉淀免疫复合物合物 胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白 游离出抗原部分游离出抗原部分 用反向间接血凝试验检测用反向间接血凝试验检测HBsAg滴度滴度 双特异性循环免疫复合物的检测方法：双特异性循环免疫复合物的检测方法：捕获法捕获法ELISA：检测肾综合征出血热检测肾综合征出血热Ag/IgE和和Ag/IgD-CIC，抗原抗体双特异性循

22、环免疫复合物是同一抗原与抗原抗体双特异性循环免疫复合物是同一抗原与Ig类类型，如型，如IgD或或IgE抗体形成免疫复合物。抗体形成免疫复合物。另外可用包被抗另外可用包被抗C3抗体法。抗体法。（三）（三）CIC检测方法评价及应用检测方法评价及应用主要存在的问题：主要存在的问题：目前尚无一种对所有种类的循环免疫复合物均能有效检测目前尚无一种对所有种类的循环免疫复合物均能有效检测的方法；的方法；不同方法检测循环免疫复合物原理各异，检测结果有时不不同方法检测循环免疫复合物原理各异，检测结果有时不相关；相关；大多数方法易受非特异性原因造成的大多数方法易受非特异性原因造成的IgIg聚合物或非免疫因聚合物或

23、非免疫因素抵抗补体活性等各种因素的干扰；素抵抗补体活性等各种因素的干扰；目前尚无理想的标准化措施，大多以目前尚无理想的标准化措施，大多以HAHGHAHG为标准品绘制标为标准品绘制标准曲线。准曲线。临床应用：临床应用：自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、皮肤自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、皮肤疾病、肿瘤等其它疾病的诊断。疾病、肿瘤等其它疾病的诊断。CIC 的消长一般可反映病情的严重性和监测治疗效果。但一次测定意义不大，世界卫生组织(WHO)建议，首次检测后数周必须复测才能证实其与疾病的相关性。ELISA(CI q 结合法)所测CIC 阳性率在系统性红斑狼疮为75%80%；类风湿性关节炎为80%85%；血管炎为73%78%。PEG 沉淀比浊法与ELISA 类似但检出率稍低，两法结果不一定完全一致。