第十二章水产品与.ppt
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1、 一、弧菌属(一、弧菌属(Vibrio)细菌是一大群菌体短小,弯曲成弧形的革兰阴性菌1、形态与染色、形态与染色涂片中呈穿梭样运动非常活泼液体中排列整齐呈鱼群状革兰染色阴性 弧型或逗点状,单鞭毛(一)霍乱弧菌(一)霍乱弧菌(V.cholerae)2、培养特性、培养特性 耐碱不耐酸碱性琼脂平板上生长良好在pH8.89.0的碱性蛋白胨水根据O抗原不同3、抗原构造与分型、抗原构造与分型现已有155个血清群其中O1群、O139群引起霍乱 根据表型差异O1群霍乱弧菌的每一个血清型还可分为2 生物型古典生物型El Tor生物型4、抵抗力、抵抗力不耐酸不耐酸,在正常胃酸中仅能存活4分钟水中存活长水中存活长,河
2、水、井水、海水中1-3周怕热怕热,1001-2分钟死亡鞭毛运动5、鞭毛、菌毛、鞭毛、菌毛普通菌毛有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层 而接近肠壁上皮细胞是细菌定居于小肠所必须的因子 剧烈腹泻和呕吐(米泔水样腹泻物),大量水分和电解质丧失,低容量性休 克及心力不齐和肾衰竭(死亡率高达60%)烈性肠道传染病,为我国的甲类法定传染病传播途径传播途径主要是通过污染的水源或食物经口摄入6、所致疾病、所致疾病传染源传染源临床表现临床表现霍霍 乱乱病人、无症状感染者上吐下泻霍乱病人7、免疫性、免疫性感染霍乱弧菌后,机体可获得牢固免疫力(流行病学调查)8、微生物学检查法、微生物学检查法标本标本直接镜检直接镜检分离培
3、养分离培养悬滴法观察细菌呈穿梭样运动涂片见G-性弧菌,鱼群状排列碱性蛋白胨水增菌选择培养基为TCBS玻片凝集反应病人粪便,肛拭水样9、防治原则、防治原则改善社区环境,加强水源管理,疫苗预防接种及时补充液体和电解质预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒治疗霍乱的关键控制传染源切断传播途径提高易感者免疫力隔离病人,治疗无症状携带者 二、大肠杆菌(一)形态及染色特征 G中等大小杆菌,八根鞭毛,能运动,无芽胞,无荚膜但常有微荚膜。(二)培养特性1普通培养基上:生长良好,37 24h 形成圆形,光滑,隆起,湿润,半透明灰白色菌落。2普通肉汤:均匀浑浊,管底有粘性沉淀,管壁有菌环。3麦康凯琼脂:红色菌落
4、(沙门氏菌无色)原理,麦康凯平板含有乳糖有胆盐,分解乳糖的细菌产酸使指示剂变红,胆盐有利于肠杆菌科细菌生长,对其它菌有抑制作用。大肠杆菌微菌落照片大肠杆菌微菌落照片 大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板菌落照片大肠杆菌平板菌落照片4伊红美蓝琼脂:黑色带金属闪光的菌落(沙门氏菌无色)。原理:伊红,美兰均为指示剂,又能抑G+生长,含有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷,染上红色,再与美兰结合形成紫黑色菌落,不分解乳糖不着色,伊红美蓝不结合,故沙门氏菌无色。5远藤氏琼脂:带金属光泽的红色菌落。6SS琼脂(沙门氏菌志贺氏菌分离培养基):红色小菌落。7三糖铁(TSI):斜面黄色
5、,底部黄色,不产生H2S。原理:三糖铁含葡萄糖、乳糖,蔗糖。其中乳糖、蔗糖含量为G的10倍,大肠杆菌三种糖均发酵产酸,足以使底部和斜面变黄。沙门氏菌不发酵乳糖和蔗糖,只发酵G产酸,斜面部分先变黄,但产酸量少且接触空气又受到氧化,另外分解含氮物质产碱,所以斜面又变为红色,而下端的酸不被氧化,一直呈黄色。(三)生化特征 G 乳 麦 蔗 靛基质实验:+(I);MR(甲基红试验)+(M)VP(乙酰甲基醇)(Vi);柠檬酸基利用试验(C)I M Vi C +硝酸盐还原试验+、H2S、尿素分解三糖铁:斜面黄色/底部黄色,不产生H2S。(四)抗原构造及血清型:大肠杆菌抗原主要有O抗原(菌体抗原,有173种)
6、,K抗原(被膜或荚膜抗原,有80种),H抗原(鞭毛抗原,有56种)。1O抗原:存在于细胞壁中,由脂多糖(LPS)中的特异性多糖侧链组成,O抗原是S型菌的一种耐热菌体抗原,121 2h不破坏其抗原性,当S型菌丢失特异性多糖侧链时,即变为R型菌,O抗原也随之丢失。2K抗原:位于菌体表面的荚膜或被膜中,在80种K抗原中,除K88,K99是两种蛋白质抗原外,其余均为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。因为K抗原可抑制活细菌在相应抗O血清中的凝集反应,这样可作为判定大肠杆菌是否具有K抗原的一个标准。据耐热性不同,K抗原又分为:L、A、B 三型。L型K抗原:对热敏感100
7、1h破坏其抗原性,并失去与相应 抗体的结合力和凝集性,位于被膜中,偶见于荚膜中。A型K抗原:耐100 1h,但121 2.5h破坏其抗原性和O不凝 集性,但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中,抗 A血 清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。B型K抗原:100 1h 破坏其抗原性与相应抗体的凝集性,但 保留其与相应抗体结合力。3H抗原:不耐热,是一种蛋白质,抗原性好,80破坏其抗原性,每一个有动力的细菌仅含一种H抗原,且无两相变异,无鞭毛细菌无H抗原。根据大肠杆菌抗原的鉴定,可用O K H排列表示其血清型即大肠杆菌抗原结构式:O8 K23(L)H19表示该菌具有O抗原8,L型K抗原23,H
8、抗原为19。(五)致病性 大多数是在正常条件下不致病的共栖菌,但特定条件下,如移位侵入肠外组织或器官可致肠杆菌病;但也有极少数是病原性大肠杆菌。据毒力因子与发病机制不同可分五类:(1)产肠毒素大肠杆菌(ETEC):引起人和幼畜腹泻(黄痢)。(2)产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC):引起猪水肿病,犊牛出血性肠炎。(3)肠致病性大肠杆菌(EPEC):兔腹泻,猪腹泻。(4)败血性大肠杆菌(SEPEC):猪,犊牛败血症,鸡的大肠杆菌败血症,气肠炎,脑膜炎,肠炎,肉芽肿。(5)尿道致病性大肠杆菌(UPEC):犬、猪的尿道感染。(六)微生物诊断1取材:肠系膜淋巴结,心,肝,脾,涂片染色镜检:G中等大小杆菌
9、。2分离培养:接种麦康凯平板和血平板划线分离,挑取麦康凯上的红色菌落或血平板上呈溶血的菌落(仔猪黄痢与水肿病菌株)进行以下生化实验。3三糖铁:斜面黄色/底部黄色,有气体产生。4接种普通肉汤:2436h 均匀混浊,底部有粘稠沉淀,液面有菌环。5生化试验:G 蔗 麦 乳 IMViC +-6动物致病性试验:24h 肉汤培养小白鼠腹腔0.2-0.4ml,2448h小鼠死亡。(七)防治1以抗粘附毒素免疫为基础的含单价或多价菌毛抗原的灭活菌苗或亚单位苗。2以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或LI-B亚单位苗。3表达一种或两种粘附素的基因工程苗 K88 K99双价基因工程苗。三、沙门氏菌属沙门氏菌属是肠杆菌科一个
10、大属,有2500多个血清型,寄生于人及动物肠道,引起各种疾病。(一)形态染色特征G中等大小杆菌,除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外,都有鞭毛,能运动,无芽胞,无荚膜。(二)培养特性麦康凯平板:无色菌落,伊红美蓝琼脂:无色(大肠杆菌黑色带金属光泽)远腾氏:无色(大肠杆菌为红色带金属闪光菌落)。(三)生化特性:三糖铁斜面:斜面红色/底部黄色(若有H2S产生,底部为黑色)5生化试验:G 蔗 麦 乳 IMViC -+-+(四)抗原及变异具有O,H,K和菌毛4种抗原。O和H抗原是其主要抗原,构成血清型鉴定的物质基础。1O抗原:细胞壁表面的耐热多糖抗原,100 2.5h不被破坏,一个菌体可有几种O抗原,以小写阿拉
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