高三一轮复习选修一专题一-微生物的培养与应用--课件.ppt

1、微生物包括：微生物包括：真菌真菌等等特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿且体内一般不含有叶绿素素.不能进行光合作用不能进行光合作用.原核生物界原核生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1.培养基培养基(1)概念：人们按照微生物对概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。供其生长繁殖的营养基质。(2)成分：一般都含有碳源、成分：一般都含有碳

2、源、_、水和、水和_，还需，还需要满足不同微生物生长对要满足不同微生物生长对_、特殊营养物质以及、特殊营养物质以及_的要求。的要求。2.无菌技术无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有含义：指在培养微生物的操作中，所有_的的方法。方法。(2)关键：防止外来关键：防止外来_的入侵。的入侵。(3)方法：方法：消毒：消毒：_、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法、_。灭菌：灭菌：_灭菌、干热灭菌、灭菌、干热灭菌、_灭菌。灭菌。(1)纯化的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成纯化的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成_，形成单个菌落，此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。形成单个菌落，此菌落是由一个细

3、胞繁殖而来的子细胞群体。(2)微生物的常用接种方法：微生物的常用接种方法：_和稀释涂布平板法，和稀释涂布平板法，接种过程仍然是接种过程仍然是_操作。操作。一、一、1.(1)营养物质营养物质 (2)氮源氮源 无机盐无机盐 pH 氧气氧气 2.(1)防止杂菌污染防止杂菌污染 (2)杂菌杂菌 (3)煮沸消毒法煮沸消毒法 紫外紫外线消毒法线消毒法 灼烧灼烧 高压蒸汽高压蒸汽 3.(1)单个细胞单个细胞(2)平板划线法平板划线法 无菌无菌1 1、培养基的一般成分、培养基的一般成分P14P142 2、培养基的类型及其应用、培养基的类型及其应用标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种

4、分离，鉴定，计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别P28选择培养基添加(或缺少)某种化学成分菌种的分离P22固体培养基：菌固体培养基：菌落落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)2 2、培养基配制原则、培养基配制原

5、则（1）目的要明确目的要明确：根据微生物的种类、培养：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。生物对培养物质的需求不同。（2）营养要协调营养要协调：注意各种营养物质的浓度：注意各种营养物质的浓度和比例。和比例。创新方案创新方案P169（3）pH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pH范围不同。范围不同。细菌细菌pH为：为：6.5-7.5；放线菌放线菌pH为：为：7.5-8.5；真菌真菌pH为：为：5.0-6.0。加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌

6、等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞A选择培养基选择培养基创新方案创新方案P170 是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。鉴

7、别培养基（differential medium）用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基中加入某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。B鉴别培养基鉴别培养基根据细胞生存所需物质的种类和数量，用根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：优点：标准

8、化生产，组分和含量相对固定标准化生产，组分和含量相对固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。细胞生长需要。C C合成培养基合成培养基天然培养基有血清、血浆、和组织提取液天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某些成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析实验产物的提取和实验结果的分析;易发易发生支原体污染生支原体污染;D D天然培养基天然培养基3.3.消毒与灭菌的区别消毒与灭菌

9、的区别方法条件结果常用方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法，还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 芽孢：某些细菌在其生长发育到一定阶段后，可在细胞内形成一个圆形的，椭圆形的抗逆性休眠体。芽孢具有极强的抗热，抗辐射，抗化学药物等的能力。细菌的芽孢是特殊的休眠体的形式，它是细菌的原生质的浓缩。含水量低，具有极强的抵抗寒冷，干旱，高温，营养缺乏等抗性，可以度过不利的环境。孢子:是植物所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接

10、发育成新个体。孢子一般微小，单细胞。了解了解4.4.实验室常用灭菌方法的比较实验室常用灭菌方法的比较 课文课文P15-16P15-16灭菌方法适用对象所需条件灭菌时间灼烧灭菌接种的金属工具(如接种针、接种环)在酒精灯的火焰外焰灼烧直至烧红干热灭菌耐高温需干燥的物品(如玻璃器皿、金属用具)干热灭菌箱内160170 12 h高压灭菌培养基100 kPa；121 1530 min 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。以

11、基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防止杂。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。其他微生物不能通过。培养微生物的培养皿是由培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣而成正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。这种器具是专为防止

12、空气中微生物的污染而设计的。1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存1.1.芽孢是细菌发育后期形成的休眠体，耐高温，故消毒仅杀芽孢是细菌发育后期形成的休眠体，耐高温，故消毒仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物而不包括其芽死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物而不包括其芽孢和孢子。孢和孢子。2.2.灭菌和消毒的实质大都是使微生物的蛋白质或核酸发生变灭菌和消毒的实质大都是使微生物的蛋白质或核酸发生变性。性。3.3.微

13、生物分离中的无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止微生物分离中的无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，无菌技术可从如下四个方面展开：杂菌污染，无菌技术可从如下四个方面展开：(1)(1)对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行清洁和消毒。对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。焰附近进行。(4)(4)实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围

14、的物实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。品相接触。接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到可以分离到由一个细胞繁由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是这就是菌落菌落.分离纯化菌种分离纯化菌种计数菌种计数菌种课文课文P18固体培养基：菌固体培养基：菌落落【6】下列说法正确的是

15、下列说法正确的是()A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养基质的培养基是为微生物的生长繁殖提供营养基质的B.培养基只有两类，液体培养基和固体培养基培养基只有两类，液体培养基和固体培养基C.除水以外的无机物只能提供无机盐除水以外的无机物只能提供无机盐 D.无机氮源不可能提供能量无机氮源不可能提供能量【答案答案】A微生物计数规则微生物计数规则1.选择菌落数在选择菌落数在30300的平板计数。的平板计数。2.若某两个或多个稀释浓度下获得的菌落数均符合条件时，若某两个或多个稀释浓度下获得的菌落数均符合条件时，再看两者菌落数的比值，若小于再看两者菌落数的比值，若小于2，则取两者的平均值；，则取两者的平均

16、值；若大于若大于2，则取最小值。，则取最小值。规律方法规律方法【例例1】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A.涂布了一个平板，统计的菌落数是涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是涂布了两个平板，统计的菌落数是215和和260，取平均值，取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和和256，取平，取平均值均值163D.涂布了三个平板

17、，统计的菌落数分别是涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和和250，取平，取平均值均值233【答案答案】D【例例2】某同学在】某同学在101、102、103倍稀释液的平均菌落数为倍稀释液的平均菌落数为2760、295和和46，则菌落总数，则菌落总数(个个/mL)为为()A.2.76104B.2.95104 C.4.6104 D.3.775104 【答案【答案】D核心要点突破3对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线消毒高压蒸汽灭菌巴氏消毒法消毒高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABC D