脂质的薄层层析课件.ppt

1、实验二实验二 脂脂 质质 的的 薄薄 层层 层层 析析【实验目的【实验目的】学习脂质的薄层层析的基本原理及操作方法学习脂质的薄层层析的基本原理及操作方法【实验原理【实验原理】由于硅胶G对各种不同脂质的吸附能力不同，故用硅胶G做成薄板，以石油醚-丁酮-乙酸的混合液为展开剂，对食用油进行层析，能使各成分分离，并以标准样品作对照，经显色后，比较它们的Rf值，即可鉴定其成分。脂质中不饱和键能将显色剂中的酸性重铬酸钾还原，酸性重铬酸钾由棕黄色变为绿色。各种脂质在硅胶薄层上的移动速率用Rf（Rate flow）值表示：【实验器材与试剂【实验器材与试剂】（1）硅胶）硅胶G（2）展开剂：石油醚）展开剂：石油醚

2、-丁酮丁酮-乙酸（体乙酸（体积之比为积之比为95:4:1）（3）胆固醇标准液（）胆固醇标准液（1g/L）（4）三油酸甘油酯标准液（）三油酸甘油酯标准液（1g/L）（5）油酸标准液（）油酸标准液（1g/L）（6）玉米油）玉米油【实验步骤【实验步骤】1、薄板制备：称取硅胶G 4.5 g 置于研钵中加入蒸馏水14ml。研匀1.5 min后迅速倒于玻片上，晃动玻片让匀浆自然扩散开，边角可用研磨棒涂抹使其均 匀分布。待凝固后，置 110烘箱中烘干1h备用。(温度达到后计时)晃动玻璃板，使胶均匀分布（动作要利索）2、配展开剂：50ml 石油醚-丁酮-乙酸（体积之比为95:4:1）。将配好的展开剂放入层析缸

3、中，盖好。（液面不高于点样处）3、点样：不要画线，用毛细玻璃管分别吸取各种脂质的标准液及试样液各少许（细管口不带液滴），在距层析薄板一端 2 cm 处点样，间距12cm 分别点样 1 滴。点样圈的直径应小于3mm，记录各样品的排列位置，待样品的溶剂蒸发干后再放入展层缸中。4、展开：把已点好样品的薄板30倾斜于层析缸中，展开剂的高度必须在薄板点样的起点线以下。密闭层析缸，让其展开。5、烘干：待展开剂的前沿上升到距薄板顶端2cm处，取出薄板，并于展开剂到达处用虚点作记号，将薄板于 室温干燥5min后,置80 烘箱中烘干约20min。6、显色：薄板烘干后，喷以酸性重铬酸钾显色剂，即可呈现绿色斑点。7

4、.测量、计算：测量、计算：分别测量X、Y值，计算各试剂的Rf值。注意事项注意事项1.两组合用一套分液漏斗和移液管（选一套两组合用一套分液漏斗和移液管（选一套干净的，不要水洗，用后也不用洗，不可干净的，不要水洗，用后也不用洗，不可混用）。混用）。2.展层缸的盖子涂了凡士林，密封性好，打展层缸的盖子涂了凡士林，密封性好，打开时是推开，不是掀开。开时是推开，不是掀开。3.玻板轻轻放入，不要摇摆，不要移动。玻板轻轻放入，不要摇摆，不要移动。4.一定要烘干才能喷显色剂，喷时不要用大一定要烘干才能喷显色剂，喷时不要用大力，只需轻喷层薄雾。显色在通风橱中进力，只需轻喷层薄雾。显色在通风橱中进行。行。5.从烘箱中取出时，注意不要被烫从烘箱中取出时，注意不要被烫伤，可用本子垫在玻板下方。伤，可用本子垫在玻板下方。【结果分析与讨论结果分析与讨论】【思考题思考题】通过本次实验，讨论下列问题：你认为影响脂质在硅胶薄层上的Rf值的主要因素是什么？下周实验：总氮量的测定下周实验：总氮量的测定-凯氏定氮法凯氏定氮法 （403实验室）实验室）