HBVDNA检测在乙肝治疗中的应用课件.pptx

1、Diagnostics为什么进行为什么进行HBV DNAHBV DNA检测检测HBV DNAHBV DNA检测带给我们的益处检测带给我们的益处目前目前HBV DNAHBV DNA的检测方法的检测方法罗氏罗氏COBAS AmplicorCOBAS Amplicor系统的优点系统的优点新一代技术新一代技术COBAS TaqManCOBAS TaqMan主要内容主要内容Diagnostics乙型肝炎：全球性的健康问题乙型肝炎：全球性的健康问题 目前HBV携带者超过 350 million 2540%HBsAg 阳性人群会死于肝硬化或肝癌 全球350 million HBV 携带者,75%在亚洲Dia

2、gnostics中表面抗原中表面抗原（S+preS2）核蛋白壳核蛋白壳HBcAg(HBeAg)DNA聚合酶聚合酶膜蛋白膜蛋白基因组基因组 DNA小表面抗原小表面抗原HBsAg(S)RNA 引物引物大表面抗原大表面抗原（S+preS2+preS1)乙肝病毒颗粒示意图乙肝病毒颗粒示意图Diagnostics慢性乙肝检测指标慢性乙肝检测指标 HBsAg 确定慢性乙肝 HBeAg/anti-HBe 区分感染的不同时期 HBV 聚合酶 检测病毒的酶活性 HBV DNA 检测病毒载量(病毒转录活性)HBcAg 检测病毒蛋白(病毒翻译活性)DiagnosticsHBV HBV 病毒基因病毒基因Diagnos

3、tics慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎暴露后时间暴露后时间滴度滴度ALTAnti-HBcSymptoms 5 601234 6 71 2 345 8 9 10HBsAgHBeAg月月年年HBV DNAAnti-HBeDiagnostics慢性乙肝的三种临床表现慢性乙肝的三种临床表现HBeAg 阳性慢性乙肝 HBeAg,ALT升高,HBV-DNA 107 to 1011 拷贝每毫升，病理切片指征明显HBeAg 阴性慢性乙肝 Anti-HBe,ALT升高，HBV-DNA 104 to 108拷贝每毫升,病理切片指征明显HBsAg 阴性携带期 Anti-HBe,ALT正常,HBV-DNA 2ULN,ALT

4、 2ULN,要考虑治疗要考虑治疗 治疗期间，治疗期间，ALTALT、e e抗原和抗原和HBV-DNAHBV-DNA至少每至少每3 3个月检测一次个月检测一次 亚太乙肝防治共识亚太乙肝防治共识20032003Journal of Gastroenterology and Hepatology Journal of Gastroenterology and Hepatology(2003)18,(2003)18,239245239245Diagnostics 抗病毒一般适应症主要指标：抗病毒一般适应症主要指标：HBV DNA 10HBV DNA 105 5 拷贝拷贝/mL/mL 病毒学应答重要指标

5、包括血清病毒学应答重要指标包括血清HBVHBV，DNA DNA 检测不到检测不到 (PCR(PCR 法法)或低于检测下限，或较基线下降或低于检测下限，或较基线下降2log102log10中华医学会肝病学分会中华医学会肝病学分会/中华医学会感染病分会中华医学会感染病分会慢性乙肝防治指南慢性乙肝防治指南http:/ DNAHBV DNA检测检测HBV DNAHBV DNA检测带给我们的益处检测带给我们的益处目前目前HBV DNAHBV DNA的检测方法的检测方法罗氏罗氏COBAS AmplicorCOBAS Amplicor系统的优势系统的优势新一代技术新一代技术COBAS TaqManCOBAS

6、 TaqMan主要内容主要内容DiagnosticsHBV DNAHBV DNA检测带给我们的益处检测带给我们的益处 监测抗病毒治疗效果 早期确定病毒学应答预测治疗后反应(HBsAg 消失)预测耐药突变 预测肝移植后复发 检测HBsAg 携带者的病毒的活动情况Diagnostics指标正常指标正常/HBeAg 阳性阳性(n.31)anti-HBe 阳性阳性(n.15)转阴转阴ALT 12 7HBeAg 12 NDdot-blot hybridization.12 7IgM anti-HBc ND 5Amplicor HBV Monitor 5 2HBsAg 3 2经治疗生化指标正常病人中病毒清

7、除率经治疗生化指标正常病人中病毒清除率Diagnostics治疗中治疗中/后，应答者与不应答者后，应答者与不应答者HBV DNAHBV DNA水平的比较水平的比较baseline1-3wks4-7wks8-11wks12-15wks16-24wks0-5mths6-11mths12-18mths1x1021x1041x1061x1081x1010HBV DNA levelscopies/mlmean SEMp=0.07p=0.2p0.01p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001-不应答者-应答者-治疗中治疗后Diagnostics监测抗病毒治疗，预测耐药监测抗病

8、毒治疗，预测耐药Puchhammer-Stockl E.at al.J Infect Dis 181:2063,2000DiagnosticsHBV DNA HBV DNA 载量显示携带者处于活动或非活动状态载量显示携带者处于活动或非活动状态HBV DNA copies/mlManesis K.et al.Gastroenterology 122(7):2092-3,2002.1.E+021.E+031.E+041.E+051.E+061.E+071.E+081.E+09非活动状态非活动状态活动状态活动状态DiagnosticsHBV DNAHBV DNA载量在肝移植中的应用载量在肝移植中的应

9、用 在肝移植中在肝移植中 (Liver Transplantation)(Liver Transplantation)为防治肝移植后的复发所采取的预防性治疗需要达到HBV DNA10 95%检出率 线性范围 300-200,000 copies/mL 同等定量亚型 A-F 血清或血浆 100 ul 样本 6 小时检测时间,30 分钟手工准备 内部定量标准内部定量标准 防污染系统DiagnosticsCOBAS Amplicor VS bDNACOBAS Amplicor VS bDNADiagnosticsCOBAS Amplicor vs bDNACOBAS Amplicor vs bDNA

10、DiagnosticsCOBAS Amplicor vs bDNACOBAS Amplicor vs bDNACobas AmplicorbDNA标本准备乙醇沉淀磁珠吸附扩增靶序列光信号线性范围300200,0002000-100,000,000 特异性100%99.2%（96-98%)亚型AFAF污染控制有无定量方案内部标准品外部标准曲线Control数量3个12个报告时间8小时24小时DiagnosticsCOBAS Amplicor HBV COBAS Amplicor HBV 灵敏度灵敏度vs vs 其它测试其它测试?-预测反跳？预测反跳？-预测突变？预测突变？-预测肝移植复发风险？预

11、测肝移植复发风险？其他测试的灵敏度其他测试的灵敏度COBAS Amplicor HBV 灵敏度灵敏度1101001,00010,000100,0001,000,00010,000,000100,000,000048122024Weeks of therapyHBVDNA copies/mLDiagnostics为什么进行为什么进行HBV DNAHBV DNA检测检测HBV DNAHBV DNA检测带给我们的益处检测带给我们的益处目前目前HBV DNAHBV DNA的检测方法的检测方法罗氏罗氏COBAS AmplicorCOBAS Amplicor系统的优势系统的优势新一代技术新一代技术COBA

12、S TaqManCOBAS TaqMan主要内容主要内容DiagnosticsCOBAS TaqMan COBAS TaqMan 实时实时荧光检测系统荧光检测系统DiagnosticsCOBAS TaqManCOBAS TaqMan特点及益处特点及益处 动态动态 PCR 整合定量标准，不需外标准曲线整合定量标准，不需外标准曲线 检测管封闭，无需开盖检测管封闭，无需开盖 四色荧光通道四色荧光通道(计划升级到六色计划升级到六色)检测管检测管:k-tube or k-plate 宽广的动力学范围宽广的动力学范围 连续检测连续检测 检测时间从检测时间从6小时减少到小时减少到23小时小时 增加通量增加通

13、量 提供内质控提供内质控 减少污染风险减少污染风险 允许多重允许多重PCR靶标检测靶标检测 可用于其他检测模式可用于其他检测模式(杂交探针杂交探针)处理过程简单处理过程简单 可与可与AmpliPrep联用，实现自动化联用，实现自动化益益 处处特特 点点DiagnosticsCOBAS TaqManCOBAS TaqMan定量原理定量原理0510152025300102030405060相对荧光强度相对荧光强度None1ThresholdThresholdCycle Threshold(Ct)Cycle Threshold(Ct)for 10for 108 8 C/PCR C/PCRH HB B

14、V V D DNANALog C/PCRLog C/PCR2876543循环数循环数DiagnosticsCOBAS TaqMan HBVCOBAS TaqMan HBV检测线性范围检测线性范围DiagnosticsCOBAS TaqMan HBVCOBAS TaqMan HBV检测各亚型表现检测各亚型表现DiagnosticsCOBAS TaqMan HBV Test vs CA HBMCOBAS TaqMan HBV Test vs CA HBMCOBAS TaqMan HBV TestCOBAS AMPLICOR HBV Monitor TestReporting UnitIU/mL(5.82 copies/IU)Copies/mLLinearity6 1.10E8300 2.00E5Sample Volume500 uL100 uLTargetPre-core/CoreSameSample TypeEDTA Plasma&SerumSameGenotypesA G,pre-core mutantA-E,limited F,GRun Size48 tests24 testsSerial DilutionsNone1:10Diagnostics感谢感谢