动物细胞融合与单克隆抗体课件.ppt

1、番茄马铃薯嫁接番茄马铃薯嫁接植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合动物细胞融合 与单克隆抗体与单克隆抗体教学目标教学目标 概概述动物细胞融合技术。述动物细胞融合技术。概述单克隆抗体的制备过程及单克概述单克隆抗体的制备过程及单克隆抗体的特点及应用。隆抗体的特点及应用。比较动物细胞融合与植物体细胞杂比较动物细胞融合与植物体细胞杂交技术。交技术。一、动物细胞融合一、动物细胞融合1、概念、概念：指 或 动物细胞结合形成 细胞的过程，也称为细胞杂交两个一个一个2、结果、结果 ：形成具有原来两个或多个细胞形成具有原来两个或多个细胞_ _ 的的_细胞，称为细胞，称为_杂交细胞单核遗传信息4、原理：

2、、原理：细胞膜的流动性3、诱导融合的方法、诱导融合的方法：化学方法聚乙二醇（PEG）生物方法物理电激、离心、振动灭活的病毒方法对细胞膜融合过程的理解细胞核细胞核病毒颗粒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿透细胞膜连接细胞融合形成杂交细胞细胞融合的过程包括：细胞融合的过程包括：细胞细胞膜膜的融合的融合 细胞细胞质质融合融合 细胞细胞核核融合，融合，其中细胞膜的融合是细胞融合的先导，在细胞膜其中细胞膜的融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现出细胞膜具有融合中体现出细胞膜具有流动性流动性。5.动动物物细细胞胞融融合合过过程程6.6.动物细胞融合的意义动物细胞融合的意义突破了突破了 方法的

3、局限，使方法的局限，使 成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和瘤和 等的重要手段。等的重要手段。如：利用如：利用 ，为制造，为制造_ _ 开开辟了新途径辟了新途径。有性杂交有性杂交远缘杂交远缘杂交生物新品种培育生物新品种培育杂交瘤技术杂交瘤技术单克隆抗体单克隆抗体植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞的全能性细胞融细胞融合方法合方法用纤维素酶、果用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁胶酶去除细胞壁后诱导原生质体后诱导原生质体融合融合用胰蛋白酶或胶原用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散蛋白酶使细

4、胞分散后，诱导细胞融合后，诱导细胞融合诱导手段诱导手段与植物体细胞杂交与植物体细胞杂交相比，还可用相比，还可用灭活灭活的病毒的病毒诱导诱导二、动物细胞融合与植物体细胞杂交的对比二、动物细胞融合与植物体细胞杂交的对比细胞膜的流动性细胞膜的流动性离心、电激、离心、电激、振动、聚乙二振动、聚乙二醇等诱导醇等诱导结结果果获得获得杂交细胞杂交细胞，以，以生产生产细胞产品细胞产品用用途途克服远缘杂交不亲克服远缘杂交不亲和的障碍，扩展杂和的障碍，扩展杂交亲本范围，培育交亲本范围，培育新品种新品种制备制备单克隆抗体单克隆抗体、病毒疫苗、干扰素病毒疫苗、干扰素等等意义意义突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交突破有

5、性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能成为可能获取杂种植株每每一一种种 B B细胞细胞只能产只能产生生一一种种抗体抗体在体外培养条件下，一在体外培养条件下，一个个B淋巴细胞淋巴细胞 是不可能是不可能无限增殖的无限增殖的B淋巴细胞淋巴细胞（已免疫已免疫）小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞二、单克隆抗体的制备二、单克隆抗体的制备1975年设计实验1984年获得诺贝尔生理学或医学奖米尔斯坦科勒免疫老鼠注射特定的抗原蛋白培养骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合融合操作后培养基中有哪些细胞？融合操作后培养基中有哪些细胞？两两融合的：B-B B-瘤 瘤-瘤第一次筛选第一次筛选（选择性培养）B-瘤融合杂交瘤细胞（多种

6、）（多种）未融合的:B 瘤第二次筛选第二次筛选既能分泌专一抗体分泌专一抗体又能在体体外无限增殖外无限增殖的杂交瘤细胞多次抗体检测多次抗体检测克隆化培养克隆化培养特异性特异性强强、灵敏度灵敏度高、高、大量大量制备制备 的的单克隆抗体单克隆抗体经检测抗体呈阳性体内培养从小鼠腹水中体外培养从细胞培养液体外培养单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠腹腔中杂交瘤细胞1.过程过程2.单克隆抗体的应用1）作为诊断试剂：具有准确、高效、简易、快速的优点2）用于治疗疾病和运载药物：单克隆抗体主要用于癌症的治疗制成“生物导弹”总结：总结：两个过程两个过程动物细胞融合单克隆抗体制备三个新名词三个新名词灭活的病毒杂交瘤细胞单

7、克隆抗体既能分泌特异既能分泌特异性抗体又能无性抗体又能无限增殖限增殖特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高大量制备大量制备1.与植物体细胞杂交相比，动物细胞融合的原理及其特有的诱导因子分别是()A细胞膜的流动性、离心B细胞膜的流动性、灭活的病毒C细胞的全能性、电激D细胞的全能性、灭活的病毒B2.下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是()A特异性强、灵敏度高B与抗癌药物结合可制成“生物导弹”C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D单克隆抗体是由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合后培养的细胞系分泌的C3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 中，正确的是()A诱导融合的方法完全相同

8、B所用的技术手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成杂种细胞D4 4.下列各图表示单克隆抗体制备过程的下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请根据图回答下列问题。各阶段图解，请根据图回答下列问题。(1)(1)请用箭头把代表各图解请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来过程的顺序连接起来_。(2)(2)在单克隆抗体制备过程在单克隆抗体制备过程中之所以选用中之所以选用B B淋巴细胞和淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有融合后的杂交瘤细胞具有_、_的特性的特性。(1)(2)(2)在体外大量繁殖产生特异性抗体在体外大量繁殖产生特异性抗体(1)(1)