液体活检在NSCLC诊疗中应用课件.pptx

1、液体活检在NSCLC诊疗中的应用 精准医疗时代NSCLC诊疗面对的困境什么是液体活检如何检测ctDNA在NSCLC诊疗中的应用精准医疗时代NSCLC诊疗面对的困境精准医疗时代下NSCLC诊疗面对的困境约1/3晚期NSCLC患者无法获得足够用于检测的组织样本肿瘤的异质性N Engl J Med.2012 Mar 8;366(10):883-92 不同患者的分子遗传信息个体差异明显；同一患者的疾病不同部位分子遗传信息存在差异；同一患者的疾病不同阶段分子遗传信息存在差异；实时肿瘤个体化治疗依赖于由实时样本提供实时分子遗传信息；肿瘤肿瘤实时实时个体化治疗个体化治疗精准医疗时代下NSCLC诊疗的临床问题

2、约1/3晚期NSCLC患者无法获得用于检测的组织样本组织异质性，活检样本无法反映肿瘤突变的全貌时空异质性，无法实时监测患者的病情血液标本是首选的实时样本！什么是液体活检 Crowley et.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013 Aug;10(8):472-84游离DNActDNA和cfDNACTC循环肿瘤细胞什么是液体活检？Schwarzenbach H,et al.Nat.Rev.Cancer.2011,11,426循环肿瘤DNA（Circulating Tumor DNA）循环肿瘤DNA（ctDNA)携带有实体瘤细胞基因突变/变异、甲基化、微卫星序列改变等信息游离DNA

3、（cfDNA）Cell free DNA，外周血中一种无细胞状态的胞外DNAKrebs et al.,Nat Rev Clin Oncol.2014;11(3):129-44.保留完整的细胞形态，可以提供数量、遗传、细胞生物学特性等信息，指导预后循环肿瘤细胞（Circulating Tumor cells，CTC）ctDNA与CTC在临床应用中的比较类别临床应用优势临床应用劣势CTCs有完整的细胞形态疾病转移或进展的预后判断下游基因检测或免疫研究可体外培养低丰度和易破碎CTC分离，步骤繁琐假阳性和假阴性，表面抗原CTC的异质性ctDNA数量多，容易检测多可克服异质性检测到疾病进展更加敏感基因检

4、测指导用药可能影响治疗方案假阳性和假阴性无法分离ctDNActDNACTC异质性无有技术难点灵敏度CTC分离，灵敏度检测内容基因突变，突变丰度，浓度数量，基因突变临床应用伴随诊断指导用药预后预后动态监测 ctDNA检测的临床应用更加简单、成熟ctDNA与CTC技术指标比较ctDNA的特点片段化 Heitzer et.al.,Clinical Chemistry 2015,61(1)：112123 提示其来源为坏死和凋亡细胞ctDNA的特点个体差异大 肿瘤患者体内ctDNA浓度0.01-90%不等，与临床分期、分化程度密切相关Guo et al.,Onco Targets Ther.2015 N

5、ov 6;8:3289-3296.Bettegowda et al.,Sci Transl Med.2014 February 19;6(224):224ra24如何检测ctDNA的特点代谢快 半衰期约2h，可以实时反映肿瘤的变化情况 Crowley et.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013 Aug;10(8):472-84ab现有检测技术比较技术检出限检测区域技术特点Sanger 10%全基因序列双脱氧链终止法qPCR 1%已知位点荧光素标记ARMS PCR0.1%已知位点扩增阻滞突变NGS0.1-1%全基因序列SBS/半导体测序数字PCR0.01%或更低已知位点微滴反应

6、数字PCR：超灵敏的精确定量方法“Divide and Conquer”Digital PCR 是一种基于单分子模板PCR扩增，进行核算拷贝数精确定量的分析方法数字PCR平台结果判读 可检测低至0.04%的EGFR 790M突变更高灵敏度更适合ctDNA的检测精确定量更适合做动态监测操作简便，周期短适合临床应用数字PCR与其他方法的比较Thress et al.,Lung Cancer,2015,90(3):509-515驱动基因并行检测与NSCLC治疗Shames et al.,J Pathol.2014 Jan;232(2):121-33一代EGFR TKI和克唑替尼获得性耐药机制Cami

7、dge et al.,Nat Rev Clin Oncol.2014 Aug;11(8):473-81.EGFR TKI耐药机制：信号通路KRAS等继发突变EGFR T790M突变其他耐药机制ALK TKI耐药机制ALK基因突变EGFR等基因突变KIT扩增其他耐药机制二代测序已成为NCCN推荐技术ctDNA在NSCLC诊疗中的应用ctDNA的应用-伴随诊断EGFR突变型和野生型患者用药后的PFS，EGFR突变型患者的PFS显著高于EGFR野生型，疗效更好，P0.05。EGFR突变型患者用药前和用药后第56天的FDG-PET和CT结果，1位EGFR突变型患者在服用靶向药物后，影像学结果显示瘤体有

8、明显减少。Punnoose et al.,Clin Cancer Res.2012 Apr 15;18(8):2391-401 临床用药重大进展易瑞沙（Iressa）血液ctDNA伴随诊断获欧盟批准 2014年9月，欧洲药品管理局（EMA）批准易瑞沙（Iressa）标签II型变化更新，使ctDNA检测方法成为医生评估EGFR突变状态的重要方法之一 2015年2月，CFDA也批准了其中文说明书的变动：当考虑本品用于晚期或转移性NSCLC患者的一线治疗时，推荐对所有患者的肿瘤组织进行EGFR突变检测。如果肿瘤标本不可评估，则可使用从血液（血浆）标本中获得的循环肿瘤DNA(ctDNA)。ctDNA作

9、为一种新型的肿瘤标志物，通过检测其与肿瘤发生和用药相关的基因突变信息，实现指导用药。ctDNA用于伴随诊断指导临床用药NSCLC患者肿瘤组织和ctDNA EGFR突变一致性癌种分期例数技术 检测基因 检出限 灵敏度特异性一致性非小细胞肺癌I-IV3110 多种EGFR-62%96%81%Circulating tumor DNA is effective for the detection of EGFR mutation in non-small cell lung cancer:a meta-analysisCancer Epidemiol Biomarkers Prev.2015 Jan

10、;24(1):206-12.诺禾致源NSCLC一致性研究结果 IIIB-IV肺腺癌患者组织与血液检测一致性研究阶段性结果（40基因panel）阳性阴性阳性一致性阴性 一致性总体一致性组织血浆组织血浆总体23179974%100%81%EGFRL858R97232378%100%94%19del54272780%100%97%EML4-ALK43282875%100%97%基因融合53272760%100%94%血液检测逐渐得到中国专家的认可2015年12月8日发布非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识中华医学杂志，2015，95卷，46期：3721-3726ctDNA的应用动态监测O

11、xnard et.al.,Clin Cancer Res,2014,20(6):1698-170565岁有吸烟史的男性NSCLC患者,追踪 其在接受靶向药物治疗过程中,血液ctDNA中突变基因型含量的变化。在取样 的四个时间阶段中,第四个阶段病情有进展,出现了耐药的情况。同时ctDNA中 TP53(splicing)和EGFR(T790M)突变频率发生了明显的变化ctDNA用于动态监测诺禾项目结果ctDNA的临床应用前景Bettegowda et al.,Sci Transl Med.2014 February 19;6(224):224ra24精准医疗时代NSCLC诊疗面对的困境什么是液体活检如何检测ctDNA在NSCLC诊疗中的应用Thanks for your attention!