血脂及血浆脂蛋白检验(同名87)课件.ppt

1、第第第第第第十一十一十一十一十一十一章章章章章章 血脂及血浆脂蛋血脂及血浆脂蛋血脂及血浆脂蛋血脂及血浆脂蛋血脂及血浆脂蛋血脂及血浆脂蛋白检验白检验白检验白检验白检验白检验第一节第一节 概概 述述第二节第二节 血脂、血浆血脂、血浆 脂蛋白测定脂蛋白测定 掌握掌握胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的常用测定方胆固醇的常用测定方法和临床意义。法和临床意义。熟悉熟悉脂质、脂蛋白的分类与组成，高脂蛋脂质、脂蛋白的分类与组成，高脂蛋白血症的定义、分型、生化诊断要点。白血症的定义、分型、生化诊断要点。了解了解脂蛋白代谢紊乱与动脉粥样

2、硬化的关脂蛋白代谢紊乱与动脉粥样硬化的关系。系。血脂是血液中脂质（脂类）物质的总血脂是血液中脂质（脂类）物质的总称，包括脂肪（称，包括脂肪（fat）和类脂（）和类脂（lipiod）及）及其衍生物。其衍生物。脂肪是一分子甘油和三分子的脂肪酸脂肪是一分子甘油和三分子的脂肪酸组成的酯，即组成的酯，即甘油三酯（甘油三酯（TG）。）。类脂包括类脂包括磷脂（磷脂（PL）、糖脂（）、糖脂（GL）、）、胆固醇（胆固醇（Ch）及胆固醇酯（）及胆固醇酯（CE）等。等。脂类不溶于水而溶于有机溶剂。脂类不溶于水而溶于有机溶剂。脂肪的主要生理脂肪的主要生理 功能功能1.储能供能；正常储能供能；正常17%25%由脂肪供给

3、。由脂肪供给。2.缓冲机械撞击，保护固定内脏。缓冲机械撞击，保护固定内脏。3.保温作用。保温作用。4.促进脂溶性促进脂溶性Vit的吸收。的吸收。类脂的主要生理功能类脂的主要生理功能1.构成生物膜的成分。构成生物膜的成分。2.形成脂蛋白，参与脂类运输。形成脂蛋白，参与脂类运输。3.能激活凝血酶原，参与血液凝固。能激活凝血酶原，参与血液凝固。4.转变成多种生理活性物质。转变成多种生理活性物质。第一节第一节第一节第一节第一节第一节 概概概概概概 述述述述述述 一、血脂和血浆脂蛋白一、血脂和血浆脂蛋白 脂类不溶于水，血液中脂类常与蛋白质结合脂类不溶于水，血液中脂类常与蛋白质结合而运输，而运输，血浆脂蛋

4、白是脂类在血液中的运输形式。血浆脂蛋白是脂类在血液中的运输形式。脂蛋白脂蛋白=Apo+TG+Ch+PL （一）血浆脂蛋白的分类一）血浆脂蛋白的分类 1.密度分类法密度分类法 分成：分成：CM、VLDL、LDL、HDL。2.电泳分类法电泳分类法 分成：分成：CM、-LP、pre-LP、-LP。（二）血浆脂蛋白的组成特征（二）血浆脂蛋白的组成特征 各类血浆脂蛋白都含有蛋白质、甘油三酯、各类血浆脂蛋白都含有蛋白质、甘油三酯、磷脂、胆固醇，但不同的脂蛋白其蛋白质的种类磷脂、胆固醇，但不同的脂蛋白其蛋白质的种类和脂类的组成比例不同。和脂类的组成比例不同。血浆脂蛋白的组成血浆脂蛋白的组成 分分 类类 CM

5、 VLDL LDL HDL密度密度 0.95 0.951.006 1.0061.063 1.0631.210颗粒直径（颗粒直径（nm）80500 2580 2025 7.510组成（组成（%）蛋白质蛋白质 0.52 510 2025 50三脂酰甘油三脂酰甘油 8095 5070 10 5胆固醇胆固醇 45 1519 4850 2022磷脂磷脂 57 15 20 25 （三）载脂蛋白（三）载脂蛋白 载脂蛋白（载脂蛋白（Apo）主要由肝脏和小肠黏膜主要由肝脏和小肠黏膜细胞合成细胞合成。目前已发现的有。目前已发现的有20多种，结构与功多种，结构与功能研究比较清楚的有能研究比较清楚的有A、B、C、D、

6、E五类。每五类。每一类又分为不同亚类。一类又分为不同亚类。不同脂蛋白含不同的不同脂蛋白含不同的Apo。HDL主要含主要含Apo A、Apo A；LDL只含只含Apo B100；VLDL含含Apo B100，Apo C、C、C、E CM含含Apo B48，Apo C、C、C 载脂蛋白的主要功能：载脂蛋白的主要功能：1.构成并稳定血浆脂蛋白的结构，脂构成并稳定血浆脂蛋白的结构，脂类的运输载体。类的运输载体。2.调节脂蛋白代谢关键酶的活性，如调节脂蛋白代谢关键酶的活性，如Apo A激活激活LCAT，Apo C激活激活LPL。3.作为脂蛋白受体的配体，参与对脂作为脂蛋白受体的配体，参与对脂蛋白受体的识

7、别、结合和代谢过程。蛋白受体的识别、结合和代谢过程。（四）脂蛋白受体（四）脂蛋白受体 存在于细胞膜表面能与相应脂蛋白特异结存在于细胞膜表面能与相应脂蛋白特异结合的一类糖蛋白。主要的有：合的一类糖蛋白。主要的有：1.LDL受体（受体（Apo B、E受体）受体）分布于肝分布于肝细胞、动脉平滑肌细胞膜表面，含细胞、动脉平滑肌细胞膜表面，含Apo B100、E的脂蛋白均能与的脂蛋白均能与LDL受体结合，受体结合，通过内吞作通过内吞作用使细胞获得脂质。用使细胞获得脂质。2.VLDL受体（受体（Apo E受体）受体）分布于心肌、分布于心肌、骨骼肌和脂肪组织细胞膜，能识别、结合含骨骼肌和脂肪组织细胞膜，能识

8、别、结合含 Apo E的脂蛋白，的脂蛋白，清除血液中清除血液中CM、VLDL残粒。残粒。3.清道夫受体（清道夫受体（SR）主要存在巨噬细主要存在巨噬细胞及血管内皮细胞表面，介导对修饰型胞及血管内皮细胞表面，介导对修饰型LDL（如氧化型（如氧化型LDL，oxLDL；乙酰化；乙酰化LDL，acLDL）从血液循环中清除，而）从血液循环中清除，而oxLDL可导可导致脂质沉积，促使巨噬细胞转变成泡沫细胞，致脂质沉积，促使巨噬细胞转变成泡沫细胞，具有强烈的致动脉粥样硬化作用。另一方面，具有强烈的致动脉粥样硬化作用。另一方面，也推测巨噬细胞通过清道夫受体清除细胞外也推测巨噬细胞通过清道夫受体清除细胞外液中的

9、修饰型液中的修饰型LDL，尤其是，尤其是oxLDL，是机体，是机体的一种防御功能。的一种防御功能。二、脂蛋白代谢二、脂蛋白代谢 （一）乳糜微粒（一）乳糜微粒 小肠黏膜细胞合成小肠黏膜细胞合成，并分泌入淋巴管。，并分泌入淋巴管。CM含有含有Apo A，A和和B48，CM从胸导管移从胸导管移行入血液过程中，其载脂蛋白的组份迅速改行入血液过程中，其载脂蛋白的组份迅速改变。进入血中的变。进入血中的CM获得获得Apo C，Apo C激激活末梢血管内皮细胞表面的活末梢血管内皮细胞表面的LPL，LPL作用作用于于CM中中TG，分解成脂肪酸和单脂酰甘油，分解成脂肪酸和单脂酰甘油，再进入肌肉、脂肪组织及心肌组织

10、贮存或利再进入肌肉、脂肪组织及心肌组织贮存或利用。用。CM转变为转变为CM残粒。残粒。（二）极低密度脂蛋白（二）极低密度脂蛋白 VLDL主要由肝脏合成，主要由肝脏合成，肝合成的肝合成的VLDL分泌后进入血液，再由分泌后进入血液，再由VLDL内内Apo C激活激活LPL，并水解其内的，并水解其内的TG。由。由HDL的的LCAT作作用生成的胆固醇酯转给用生成的胆固醇酯转给VLDL进行交换，而进行交换，而VLDL中余下的中余下的PL、Apo E、C转移给转移给HDL，VLDL转变成转变成VLDL残粒即残粒即IDL，而后大部分，而后大部分通过通过VLDL受体摄入肝，小部分则转变成受体摄入肝，小部分则转

11、变成LDL继续进行代谢。继续进行代谢。（三）低密度脂蛋白（三）低密度脂蛋白 主要由主要由VLDL代谢转变而来，代谢转变而来，LDL的降解的降解是经是经LDL受体途径进行，受体途径进行，LDL中的中的ApoB100被被受体识别，将受体识别，将LDL结合到受体上陷窝内，然后结合到受体上陷窝内，然后与膜分离形成内吞泡，与膜分离形成内吞泡，LDL与受体分离并与溶与受体分离并与溶酶体融合。血浆中酶体融合。血浆中6570的的LDL是依赖是依赖LDL受体清除，一旦受体清除，一旦LDL受体缺陷，受体缺陷，VLDL残残粒由正常时大部分经肝粒由正常时大部分经肝LDL受体识别，而改为受体识别，而改为大部分转变成大部

12、分转变成LDL，使血浆中，使血浆中LDL浓度增加。浓度增加。（四）高密度脂蛋白（四）高密度脂蛋白 HDL主要由肝和小肠合成。主要由肝和小肠合成。肝合成的新肝合成的新生生HDL以磷脂和以磷脂和Apo A为主。为主。HDL可将蓄积可将蓄积于末梢组织的游离胆固醇与血液循环中脂蛋于末梢组织的游离胆固醇与血液循环中脂蛋白或与某些大分子结合而运送到肝脏。实际白或与某些大分子结合而运送到肝脏。实际上是胆固醇逆转运（上是胆固醇逆转运（RCT），），RCT促进组织促进组织细胞内胆固醇的清除，维持细胞内胆固醇量细胞内胆固醇的清除，维持细胞内胆固醇量的相对衡定，从而限制动脉粥样硬化的发生的相对衡定，从而限制动脉粥样

13、硬化的发生发展，起到抗动脉粥样硬化作用。发展，起到抗动脉粥样硬化作用。三、脂蛋白代谢紊乱三、脂蛋白代谢紊乱 （一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症 血脂含量超过正常血脂含量超过正常称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因式存在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为两大类。分为两大类。1970 年年WHO建议将高脂蛋白血症，根据建议将高脂蛋白血症，根据血清血清TC、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，将其外观和脂蛋白电泳图谱，将其分为五型六类。分为五型六类。1.型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称高乳糜微粒血又称高乳糜微粒血症。

14、症。是一种常染色体隐性遗传病。由于是一种常染色体隐性遗传病。由于LPL缺损或缺损或LPL活化因子（活化因子（Apo C）缺损所致。缺损所致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查特征：婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层清亮。下层清亮。血清血清TG，达达11mmol/L以上，血清以上，血清TC正常或轻度正常或轻度。血清血清LPL活性活性。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，CM。2.a高脂蛋白血症高脂蛋白血症 又称高又称高-脂蛋白血脂蛋白血症或高胆固醇血症。症或高胆固醇血症。属常染色体显性遗传，属常染色体显性遗传，有明显的家族史。病因有

15、明显的家族史。病因LDL受体缺损，其生受体缺损，其生化检查特征：化检查特征：4冷置试验，血清外观清亮透明。冷置试验，血清外观清亮透明。血清血清TC，15.6mmol/L，尤其是，尤其是LDL-C，TG正常。正常。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP。临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，结局为心肌梗死。结局为心肌梗死。3.b型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 在在a型基础型基础上伴有上伴有VLDL（高（高LDL+VLDL血症），病血症），病因不明。其生化检查特征：因不明。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观清亮或微冷置试验，血清外观清亮或微混。混。血清血清TC，T

16、G。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP。4.型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称宽又称宽-脂蛋白血脂蛋白血症。症。属常染色体显性遗传病，病因，属常染色体显性遗传病，病因，ApoE异常，异常，与相应受体结合率与相应受体结合率。其生化检查特征：。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊，后形成冷置试验，血清外观混浊，后形成蜡样黄色薄膜。蜡样黄色薄膜。血清血清TC，TG。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP，IDL。融合形成宽融合形成宽区带。区带。临床表现，早期易发生动脉粥样硬化和临床表现，早期易发生动脉粥样硬化和冠心病。冠心病。5.型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称

17、高前又称高前-脂蛋白脂蛋白血症或家族性高甘油三脂血症血症或家族性高甘油三脂血症。属常染色体。属常染色体显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血症中一半属于此型。病因，血症中一半属于此型。病因，ApoA异常。异常。其生化检查特征：其生化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊。冷置试验，血清外观混浊。血清血清TG，TC正常或稍正常或稍。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，pre-LP。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。6.型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 属常染色体显性属常染色体显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传缺陷遗传病，病因不详

18、，可能由几种遗传缺陷所致，较罕见。生化检查特征：所致，较罕见。生化检查特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。下层混浊。血清血清TG，TC。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，CM，pre-LP。（二）低脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症 临床上将血清临床上将血清TC3.3mmol/L，或，或TG0.45mmol/L，或，或LDL2.1mmol/L者，称为低者，称为低脂蛋白血症。脂蛋白血症。主要有四种类型主要有四种类型 1.低低LDL血症血症 一种常染色体显性遗传病，一种常染色体显性遗传病，病因病因ApoB100低下，血浆低下，血浆LDL减少，减少，TC。2.无无LDL

19、血症血症 （棘形红细胞症）（棘形红细胞症）罕见的罕见的常染色体隐性遗传病，病因常染色体隐性遗传病，病因ApoB100、B48缺损，缺损，血浆中无血浆中无LDL，TC，以，以棘形红细胞增多棘形红细胞增多（红细胞膜上有尖的突出），视网膜无色素，（红细胞膜上有尖的突出），视网膜无色素，运动失调和智能障碍为特征。运动失调和智能障碍为特征。3.低低HDL血症血症 病因不详，但病因不详，但肥胖，少运肥胖，少运动的生活方式，吸烟，糖尿病，尿毒症和肾动的生活方式，吸烟，糖尿病，尿毒症和肾病综合征及一些药物等因素会引起病综合征及一些药物等因素会引起HDL水平水平的下降。的下降。血清血清TG，动脉粥样硬化、冠心病

20、动脉粥样硬化、冠心病的发病率高。的发病率高。4.无无HDL血症（血症（Tangier病）病）罕见的常染罕见的常染色体隐性遗传病，色体隐性遗传病，ApoA、A缺损，血浆缺损，血浆TC，HDL-C。在成人期出现肝脾肿大或复在成人期出现肝脾肿大或复发性多神经病的临床症状。发性多神经病的临床症状。（三）高脂血症与动脉粥样硬化（三）高脂血症与动脉粥样硬化 动脉粥样硬化（动脉粥样硬化（AS）是指动脉内膜的脂）是指动脉内膜的脂质、血液成分的沉积形成粥样硬化斑块，使质、血液成分的沉积形成粥样硬化斑块，使血管壁纤维化增厚和狭窄的一种病理过程。血管壁纤维化增厚和狭窄的一种病理过程。1.致动脉粥样硬化脂蛋白致动脉粥

21、样硬化脂蛋白 LDL经化学经化学修饰成修饰成oxLDL，损伤血管壁内皮细胞，使管，损伤血管壁内皮细胞，使管壁通透性增加，导致脂质沉积，促使巨噬细壁通透性增加，导致脂质沉积，促使巨噬细胞形成泡沫细胞。胞形成泡沫细胞。LP（a）是促进是促进AS的独立的独立危险因子。危险因子。主要是干扰纤溶系统，促进血栓主要是干扰纤溶系统，促进血栓形成。形成。2.代谢综合征代谢综合征 代谢综合征（代谢综合征（MS）是多）是多种代谢成分异常聚集的病理状态，是一组复种代谢成分异常聚集的病理状态，是一组复杂的代谢紊乱症候群，杂的代谢紊乱症候群，主要特点是高血脂、主要特点是高血脂、高血压、高血糖和肥胖。高血压、高血糖和肥胖

22、。3.抗动脉粥样硬化脂蛋白抗动脉粥样硬化脂蛋白 HDL水平与水平与动脉粥样硬化呈负相关，动脉粥样硬化呈负相关，HDL能逆转运胆固能逆转运胆固醇；保护内皮细胞免受醇；保护内皮细胞免受LDL的损伤；防止血的损伤；防止血小板聚集；小板聚集；HDL能抑制能抑制LDL氧化，抑制泡沫氧化，抑制泡沫细胞脂肪斑块形成细胞脂肪斑块形成。HDL-C小于小于1.03mmol/L被认为是早发冠心病的独立危险因素。被认为是早发冠心病的独立危险因素。四、临床血脂分析项目四、临床血脂分析项目 血脂和血浆脂蛋白测定的临床意义包括：血脂和血浆脂蛋白测定的临床意义包括：1.早期发现和诊断高脂血症；早期发现和诊断高脂血症；2.协助

23、诊断动脉粥样硬化；协助诊断动脉粥样硬化；3.评估冠心病的危险程度；评估冠心病的危险程度；4.监测与评价高脂血症、监测与评价高脂血症、AS或冠心病或冠心病的疗效。的疗效。（一）血脂测定项目的合理选择（一）血脂测定项目的合理选择 血脂测定方法很多，目前临床实验室血脂测定方法很多，目前临床实验室基基本检验项目本检验项目有：有：血清外观分析，血清外观分析，TC，TG，HDL-C，LDL-C测定。测定。有条件的实验室可有条件的实验室可进一步检测进一步检测HDL亚组分，亚组分，IDL，Apo（如（如ApoA、ApoB100），），Lp(a)及脂蛋白电泳，及脂蛋白电泳，LPL，LCAT测定，为保证分析结果的

24、可靠测定，为保证分析结果的可靠性，标本的采集应在餐后性，标本的采集应在餐后12h以上。以上。（二）减少分析前变异对血脂测定结果的（二）减少分析前变异对血脂测定结果的影响影响 1.影响血脂测定的因素影响血脂测定的因素 （1）生物学因素）生物学因素 性别、年龄、种族等；性别、年龄、种族等；（2）生活方式）生活方式 饮食、吸烟、饮酒、饮咖饮食、吸烟、饮酒、饮咖啡和锻炼；啡和锻炼；（3）临床因素）临床因素 疾病（内分泌疾病、代谢疾病（内分泌疾病、代谢性疾病、肾脏疾病、肝胆疾病等），药物性疾病、肾脏疾病、肝胆疾病等），药物（抗高血压药、免疫抑制剂、雌激素等）（抗高血压药、免疫抑制剂、雌激素等）（4）样本

25、收集与处理）样本收集与处理 禁食状态、采血方禁食状态、采血方式、样本储存等。式、样本储存等。2.减少分析前变异的措施减少分析前变异的措施 （1）采血前数天或数周停止使用影响血）采血前数天或数周停止使用影响血脂的药物（血脂调节药、降压药、激素、避脂的药物（血脂调节药、降压药、激素、避孕药等）。孕药等）。（2）至少）至少2周内保持一般饮食习惯和维持周内保持一般饮食习惯和维持体重稳定。体重稳定。（3）3天内避免高脂饮食，天内避免高脂饮食，24 h内不饮酒。内不饮酒。（4）抽血前受试者坐位休息）抽血前受试者坐位休息5 min以上，以上，静脉穿刺中止血带使用不超过静脉穿刺中止血带使用不超过1 min.（

26、5）样本应及时测定，）样本应及时测定，24h不能完成测定，不能完成测定，应置应置4冰箱中保存。冰箱中保存。一、血清外观分析（血清冷置试验）一、血清外观分析（血清冷置试验）混浊混浊（TG增高）增高）下层浊（下层浊（VLDL增高）增高）型型下层清（下层清（VLDL正常）正常）型型均匀混浊均匀混浊（VLDL）TC正常正常 型型上层奶油样上层奶油样（CM）TC增高增高 a型型TC正常正常 正常人正常人清亮清亮（TG正常）正常）TC b，型型空空腹腹血血清清 测测TC 4过夜过夜 测测TC 二、血清总胆固醇测定二、血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的

27、生理功能，如合成类固醇激素，维生素要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3和胆汁酸，并构成细胞膜成分，和胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括包括FC（1/3）和）和CE（2/3），），胆固醇与动脉粥样硬胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。验室检测项目之一。TC测定方法很多，约测定方法很多，约200多种，分为化多种，分为化学法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、学法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。核素稀释质谱法（决定性方法）。（一）化学测定法（一）化学测定法 主要有两类主要有两类 1.L

28、iberman-Burchard反应反应 简称简称L-B反反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3,5-胆胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。2.Zak反应反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成水生成3,5-胆烷二烯阳离子，然后在胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较较L-B反应高反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，

29、不能用于自动化分析。腐蚀性极大，不能用于自动化分析。（二）酶法（二）酶法胆固醇酯胆固醇酯 胆固醇胆固醇 脂肪酸脂肪酸胆固醇胆固醇 O2 胆烷胆烷-4-烯烯-3酮酮 H2O2H2O2 4AAP 酚酚 红色亚胺醌红色亚胺醌 H2OCEHChODPOD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析。于自动化分析。【参考范围参考范围】2.855.

30、17mmol/L 【临床意义临床意义】血清血清TC含量受年龄、性别、含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。饮食和运动等因素的影响。20岁以上随年龄岁以上随年龄而而，70岁以后则有下降趋势。岁以后则有下降趋势。2040岁阶岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。脑力劳动者高于体力劳动者。脑力劳动者高于体力劳动者。病理性高胆固醇血症病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇血原发性高胆固醇血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。

31、功能减退。病理性低胆固醇血症病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、严重贫血、甲亢、营养不良。营养不良。【方法评价方法评价】1.线性范围线性范围 可达可达19.38 mmol/L（750mg/dl）。）。2.变异系数变异系数 批内批内CV1.5%，批间，批间CV 2.5%。3.特异性特异性 特异性好，灵敏度高，既特异性好，灵敏度高，既可手工操作，也可自动化分析，既可用终可手工操作，也可自动化分析，既可用终点法检测，也可用速率法检测。点法检测，也可用速率法检测。4.还原性物质（胆红素、维生素还原性物质（胆红素、维生素C）增多时，可使结果出现负偏差。增多时，可使结果出现负偏差。三、血清甘油三脂测定三、

32、血清甘油三脂测定 TG是由一分子甘油与三分子脂肪酸是由一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于组成的化合物，主要存在于VLDL和和CM中，临床化学中往往以测定甘油代表中，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。的含量。TG的测定方法很多，如气相色的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。用化学法和酶法。（一）化学法（一）化学法 基本步骤可归纳为四步基本步骤可归纳为四步 1

33、.抽提：抽提：甘油三脂的抽提是采用合适的溶甘油三脂的抽提是采用合适的溶剂，使脂蛋白变性将剂，使脂蛋白变性将TG提取，同时去除干扰物提取，同时去除干扰物质（磷脂、游离甘油、葡萄糖等）常用方法有：质（磷脂、游离甘油、葡萄糖等）常用方法有：（1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。土）吸附。（2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。（3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。正壬烷。应用较广。2.皂化：皂化：甘油三

34、脂的水解甘油三脂的水解 一般都采一般都采用用KOH乙醇或乙醇或KOH异丙醇溶液，异丙醇溶液，60，515min可使可使TG完全水解。完全水解。3.氧化：氧化：甘油的氧化甘油的氧化 最常用的氧化最常用的氧化剂是剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受醛、甲酸。反应受-磷酸甘油、葡萄糖、磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。物质的干扰。4.显色：显色：显色测定甲醛。常用方法有：显色测定甲醛。常用方法有：（1）甲醛与）甲醛与变色酸变色酸（4,5-二羟二羟-2,7-萘二萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生

35、成紫红色化合物。磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（570nm）（2）甲醛与甲醛与乙酰丙酮乙酰丙酮在氨的存在下缩合在氨的存在下缩合成黄色的成黄色的3,5-二乙酰二乙酰-1,4-二氢二氢-2,6-二甲基吡二甲基吡啶。（啶。（420nm）【方法评价方法评价】1.操纵步骤繁多、技术要求高而不适操纵步骤繁多、技术要求高而不适于常规工作应用。于常规工作应用。2.变色酸显色灵敏度高、显色稳定，变色酸显色灵敏度高、显色稳定，至今仍是美国疾病预防控制中心（至今仍是美国疾病预防控制中心（CDC）的内部参考方法。的内部参考方法。（二）酶法（二）酶法 常用的有常用的有：1.磷酸甘油氧化酶法（磷酸甘油氧化酶法（

36、GK-GPOD-POD法）法）TG H2O 甘油甘油 FA 甘油甘油 ATP 3-磷酸甘油磷酸甘油 ADP 3-磷酸甘油磷酸甘油 O2 磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2 4-AAP 酚酚 红色亚胺醌红色亚胺醌 H2O 试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素红素、维生素C可消耗可消耗H2O2使结果偏低。使结果偏低。LPLGK GPOD POD 2.乳酸脱氢酶法（乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH 法）法）TG H2O 甘油甘油 FA甘油甘油 ATP 3-磷酸甘油磷酸甘油 ADPADP 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 ATP 丙酮酸丙酮酸

37、丙酮酸丙酮酸 NADHH+乳酸乳酸 NAD+LPLGPOD PKLDH 【参考范围参考范围】0.451.69mmol/L 【临床意义临床意义】血清血清TG一般随年龄增长一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。而升高，体重超标者往往偏高。1.病理性增高病理性增高 原发性高脂蛋白血症、原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。妊娠后期。2.病理性降低病理性降低 甲亢、肾上腺皮质功甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。能减退、严重肝功能损伤。【方法评价方法评价】1.线性范围线性范围 可达可达11.4 mmol/L（1000 mg/dl

38、）。）。2.变异系数变异系数 批内批内CV3%，批间，批间CV 5%。3.特异性特异性 LPL既能水解既能水解TG，也能水，也能水解解DG和和MG，故测定结果也包括，故测定结果也包括DG和和MG。4.还原性物质（胆红素、维生素还原性物质（胆红素、维生素C）增多时，同样影响增多时，同样影响Trinder反应，可使结果反应，可使结果出现负偏差。出现负偏差。四、血清（浆）脂蛋白测定四、血清（浆）脂蛋白测定 （一）血清高密度脂蛋白测定（一）血清高密度脂蛋白测定 常以测定常以测定HDL-C含量代表含量代表HDL水平。水平。测定方法分为间接法和直接法。测定方法分为间接法和直接法。1.间接法间接法 间接法测

39、定步骤包括：间接法测定步骤包括：（1）HDL的分离；的分离；（2）测定）测定HDL中胆固醇。中胆固醇。HDL的分离方法有：的分离方法有：超速离心法、凝超速离心法、凝胶过滤法、免疫化学法、电泳法、沉淀法胶过滤法、免疫化学法、电泳法、沉淀法。临床临床实验室常用沉淀法实验室常用沉淀法。沉淀剂一般为二。沉淀剂一般为二价阴离子和多价阴离子。如：肝素价阴离子和多价阴离子。如：肝素-Mg2+、硫酸葡聚糖硫酸葡聚糖-Mg2+、磷钨酸磷钨酸-Mg2+、聚乙聚乙二醇（二醇（PEG）等。等。如：磷钨酸如：磷钨酸-Mg2+选择性地沉淀血清中的选择性地沉淀血清中的LDL和和VLDL，经离心上清液中保留经离心上清液中保留

40、HDL，然后用酶法测定上清液中的胆固醇含量，即然后用酶法测定上清液中的胆固醇含量，即代表代表HDL中的胆固醇。中的胆固醇。【参考范围参考范围】男男 1.161.42mmol/L 女女 1.291.55mmol/L 【临床意义临床意义】HDL-C与冠心病发病呈负与冠心病发病呈负相关，相关，HDL-C低于低于0.9mmol/L是冠心病危险是冠心病危险因素。因素。【方法评价方法评价】1.标本用量少，操作简便，结果稳定，标本用量少，操作简便，结果稳定，沉淀效果好，不影响酶学分析。沉淀效果好，不影响酶学分析。2.变异系数变异系数 批内批内CV1.87%，批间，批间CV 2.93%。3.对温度和对温度和p

41、H的变化非常敏感，一般的变化非常敏感，一般温度控制在温度控制在2030，pH为为6.15。离心后放。离心后放置不宜过长，否则结果偏高。置不宜过长，否则结果偏高。2.直接法直接法 包括选择性抑制法、清除法、包括选择性抑制法、清除法、PEG修饰法和免疫分离法。修饰法和免疫分离法。其中选择性抑制法是目前国内应用最多其中选择性抑制法是目前国内应用最多的直接法。基本原理是用多聚阴离子及分散的直接法。基本原理是用多聚阴离子及分散型表面活性剂与型表面活性剂与VLDL、LDL发生凝聚形成发生凝聚形成遮蔽圈，但不发生沉淀，抑制这类脂蛋白中遮蔽圈，但不发生沉淀，抑制这类脂蛋白中的胆固醇与酶试剂反应，然后用对的胆固

42、醇与酶试剂反应，然后用对HDL有亲有亲和力的表面活性剂与和力的表面活性剂与HDL结合形成可溶性复结合形成可溶性复合体，酶试剂直接与合体，酶试剂直接与HDL-C反应。反应。（二）低密度脂蛋白测定（二）低密度脂蛋白测定 低密度脂蛋白水平通常以低密度脂蛋白水平通常以LDL-C含量表示。含量表示。LDL-C测定方法很多，常用的有：测定方法很多，常用的有：1.Friedewald公式法公式法 LDL-C TCHDL-C 式中的浓度单位是式中的浓度单位是mmol/L，在一般情况在一般情况下能得到可被临床接受的近似结果，但下能得到可被临床接受的近似结果，但TG4.25mmol/L时不能应用此公式计算，否则结

43、时不能应用此公式计算，否则结果偏差太大。果偏差太大。TG2.2 2.化学沉淀法化学沉淀法 聚乙烯硫酸（聚乙烯硫酸（PVS）能能选择性沉淀血清中选择性沉淀血清中LDL，再以血清再以血清TC减去上减去上清液（含清液（含HDL和和VLDL）胆固醇，即得胆固醇，即得LDL-C值。试剂中加入值。试剂中加入EDTA去除两价阳离子，避去除两价阳离子，避免免VLDL共沉。共沉。TG4.25mmol/L时，沉淀不时，沉淀不完全，使结果偏低。完全，使结果偏低。3.直接测定法直接测定法 匀相的匀相的LDL-C直接测定法直接测定法是以不同的表面活性剂的双试剂使非是以不同的表面活性剂的双试剂使非LDL-C与与LDL-C

44、分两步水解，因先消除非分两步水解，因先消除非LDL-C，故也称为消除法。是目前临床测定故也称为消除法。是目前临床测定LDL-C的的常规方法。常规方法。【参考范围参考范围】LDL-C3.12mmol/L 【临床意义临床意义】1.血清血清LDL-C水平随年龄增加而升高，水平随年龄增加而升高，高脂、高热量饮食、精神紧张也可导致高脂、高热量饮食、精神紧张也可导致LDL-C水平升高。水平升高。2.LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展增高是动脉粥样硬化发生发展的主要危险因素。的主要危险因素。LDL-C水平与冠心病的发水平与冠心病的发病率呈正相关。病率呈正相关。五、血清载脂蛋白五、血清载脂蛋白A及及B100

45、测定测定 脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白（apolipoprotein，Apo），目前研究得较多的），目前研究得较多的有有A、B、C、D、E五类，其中五类，其中ApoA，B，C还有亚类。还有亚类。ApoA是是HDL的主要蛋白质的主要蛋白质，占，占HDL蛋蛋白质的白质的85%左右，它的血清浓度可代表左右，它的血清浓度可代表HDL水水平，平，ApoB100是是LDL的主要蛋白质的主要蛋白质，占，占LDL蛋蛋白质的白质的97%左右，左右，ApoB100浓度主要反映浓度主要反映LDL水平。水平。Apo的测定方法主要有三类：的测定方法主要有三类：层析分层析分离离，然后再

46、按一般蛋白质定量；，然后再按一般蛋白质定量；电泳分离电泳分离后经染色光密度扫描定量；后经染色光密度扫描定量；各种免疫分析各种免疫分析法法。层析法操作麻烦，一般只用于研究；电层析法操作麻烦，一般只用于研究；电泳法简便灵敏，但各类泳法简便灵敏，但各类Apo染色性能不一致，染色性能不一致，重复性不好；免疫法特异性好，灵敏度高，重复性不好；免疫法特异性好，灵敏度高，不需预先分离脂蛋白，适合临床实验室的应不需预先分离脂蛋白，适合临床实验室的应用，但需特异抗血清。用，但需特异抗血清。目前常用的免疫学方法有：目前常用的免疫学方法有：1.单向免疫扩散法（单向免疫扩散法（RID）方法简单，但方法简单，但需时间长

47、，灵敏度较低。需时间长，灵敏度较低。2.火箭免疫电泳法（火箭免疫电泳法（IE）比比RID快速、灵快速、灵敏，抗血清用量少。敏，抗血清用量少。3.免疫比浊法免疫比浊法 测定抗原抗体复合物形成测定抗原抗体复合物形成而产生的混浊，方法简便、快速，适合于自动而产生的混浊，方法简便、快速，适合于自动分析仪，灵敏度高于火箭电泳法，免疫比浊法分析仪，灵敏度高于火箭电泳法，免疫比浊法又分为：散射比浊法和透射比浊法。又分为：散射比浊法和透射比浊法。4.酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）需制备指需制备指示酶与示酶与Apo或其抗体的交联物（现有商品化或其抗体的交联物（现有商品化试剂盒）和酶标仪。试剂盒）和

48、酶标仪。5.放射免疫法（放射免疫法（RIA）用核素标记抗用核素标记抗原作为示踪物，灵敏度可达原作为示踪物，灵敏度可达35g。6.荧光免疫分析法（荧光免疫分析法（FIA）7.化学发光免疫法（化学发光免疫法（CLIA）【参考范围参考范围】Apo A:1.001.50g/L Apo B100:0.501.10g/L Apo A/B100:1.02.0 【临床意义临床意义】Apo A是是HDL的主要结的主要结构蛋白，构蛋白，Apo B100 是是LDL的主要结构蛋白，的主要结构蛋白，因此，因此，Apo A和和Apo B100 可可直接反映直接反映HDL和和LDL的含量。但在某些病理情况下，的含量。但在

49、某些病理情况下，Apo A与与HDL和和Apo B100与与LDL并非成正相关，并非成正相关，临床上常将临床上常将 Apo A和和Apo B100 比值作为冠比值作为冠心病的危险指标。心病的危险指标。本章小结本章小结本章小结 1.高脂蛋白血症的分型，各型高脂蛋白高脂蛋白血症的分型，各型高脂蛋白的生化特征。的生化特征。2.血清血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA测定方法简介。测定方法简介。3.血清血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA测定的临床意义测定的临床意义。复习思考题复习思考题复习思考题复习思考题复习思考题复习思考题 1.何谓高脂蛋白血症？何谓高脂蛋白血症？WHO将高

50、脂蛋白血将高脂蛋白血症分为哪几型？症分为哪几型？2.目前血脂临床测定的项目主要有哪些？目前血脂临床测定的项目主要有哪些？3.血清血清TC测定的方法主要有哪几类？测定的方法主要有哪几类？4.简述血清简述血清TC测定（测定（CHOD法）的原理。法）的原理。5.化学法测定血清化学法测定血清TG，基本操作包括哪几，基本操作包括哪几个步骤？个步骤？参考文献：参考文献：参考文献：参考文献：参考文献：参考文献：现代临床生物化学检验现代临床生物化学检验主编主编 张秀明张秀明 人民军医出版社人民军医出版社临床生物化学及生物化学检验临床生物化学及生物化学检验主编主编 周周 新新 人民卫生出版社人民卫生出版社结束结