药学分子生物学转录课件.ppt

1、中心法则生物体遗传信息传递的方式reverse transcription中心法则（中心法则（the central dogma）生物功能的实现（遗传信息的表达）：生物功能的实现（遗传信息的表达）：转录转录、翻译翻译世代之间传递：世代之间传递：DNA的复制的复制DNA成熟的成熟的mRNA转录（transcription）生物体以DNA为模板合成RNA的过程转录是遗传信息表达的第一步转录是遗传信息表达的第一步RNA转录转录复制 VS 转录转录与复制的共同点核苷酸聚合反应，生成磷酸二脂键核苷酸聚合反应，生成磷酸二脂键以以DNA为模板为模板酶酶促反应促反应遵从遵从碱基配对碱基配对规律规律方向：从方向

2、：从53转录与复制的区别复制复制转录转录模板模板两股链均复制两股链均复制模板链转录（不对称转录）模板链转录（不对称转录）原料原料dNTPNTP引物引物需要需要RNA做引物做引物不需要不需要酶酶DNA聚合酶聚合酶RNA聚合酶聚合酶配对配对A-T,C-GA-U,T-A,G-C产物产物子代双链子代双链DNA（半保留复制）（半保留复制）mRNA,tRNA，rRNA,small RNA参与转录的物质原料：核苷酸（NTP：ATP,UTP,GTP,CTP）模板：DNA酶：RNA聚合酶（RNA polymerase,RNA-pol）转录因子（transcription factor,TF）凡是转录过程必需的蛋

3、白质，只要它不是RNA聚合酶的组成成分，就可以将其定义为转录因子转录的模板结构基因（structural gene）:DNA分子上转录出RNA的区段转录的模板结构基因（结构基因（structural gene）:DNA分子上转录出分子上转录出RNA的区段的区段模板链模板链(template strand)，也称作，也称作有意义链有意义链或或Watson链链 DNA双链中，按碱基配对规律，能指引双链中，按碱基配对规律，能指引转录生成转录生成RNA的一股单链的一股单链转录的模板结构基因（结构基因（structural gene）:DNA分子上转录出分子上转录出RNA的区段的区段模板链模板链(tem

4、plate strand)，也称作，也称作有意义链有意义链或或Watson链链编码链编码链(coding strand)，也称为，也称为反义链反义链或或Crick链链。与模板链互补的链，特征是与转录的与模板链互补的链，特征是与转录的RNA序列类序列类似（仅有似（仅有T与与U的区别）的区别）模板链、编码链与RNA的关系5GCAGUACAUGUC 3mRNANAla Val His Val C肽肽转录转录翻译翻译5GCAGTACATGTC 33 c g t g a t g t a c a g 5编码链编码链模板链模板链DNA参与转录参与转录不对称转录(asymmetric transcriptio

5、n)在在DNA分子双链上某一区段，一股链用作模板指引分子双链上某一区段，一股链用作模板指引转录，另一股链不转录转录，另一股链不转录 ；5 5 3 3 3 3 5 5 模板链模板链编码链编码链编码链编码链模板链模板链转录方向转录方向转录方向转录方向结构基因结构基因n模板链并非永远在同一条单链上。模板链并非永远在同一条单链上。基本内容：第一节：原核生物的转录第一节：原核生物的转录n第二节：真核生物的转录及转录后修饰第二节：真核生物的转录及转录后修饰n第三节：转录调控（原核、真核）第三节：转录调控（原核、真核）原核的RNA聚合酶基因基因产物产物功能功能rpoA2聚合酶聚合酶启动子识别启动子识别结合激

6、活剂结合激活剂rpoB与转录全过程相关与转录全过程相关rpoC 结合结合DNA模板模板rpoD辨认正确的转录起始位点辨认正确的转录起始位点 核心酶核心酶（core polymerasecore polymerase）全酶全酶（holoenzymeholoenzyme）核心酶核心酶(core enzyme)全酶全酶(holoenzyme)原核的原核的RNA聚合酶聚合酶核心酶与亚基原核原核RNA聚合酶的聚合酶的 亚基能识别启动子亚基能识别启动子亚基亚基在转录开始后在转录开始后脱离核心酶脱离核心酶核心酶核心酶完成后续的转录过程完成后续的转录过程-35区区-10区区图图11-3 原核生物的原核生物的R

7、NA聚合酶全酶在转录起始区的结合聚合酶全酶在转录起始区的结合（DNA双链已打开，双链已打开，因子尚未脱落）因子尚未脱落）启动子(promoter)启动子启动子:RNA聚合酶结合模板聚合酶结合模板DNA的部位的部位5 3 3 5 结构基因结构基因调控序列调控序列RNA-pol原核原核RNA聚合酶的聚合酶的 亚基能识别启动子亚基能识别启动子RNA聚合酶保护法一种巧妙的研究启动子序列的方法 40-60bp的的DNA片段没有片段没有被降解，暗示被降解，暗示DNA与与RNA聚合酶结合的部位聚合酶结合的部位原核生物启动子保守序列开始转录开始转录(Pribnow box)T A T A A T Pu A T

8、 A T T A Py-10 区区T T G A C AA A C T G T-35 区区RNA-pol辨认位点辨认位点(recognition site)5 5 结构基因结构基因3 3 RNA聚合酶保护区聚合酶保护区1-30-5010-10-40-205 3 3 5 转录的过程u转录起始转录起始uRNA的延长的延长u转录终止转录终止 原核生物与真核生物转录的聚合酶、原核生物与真核生物转录的聚合酶、起始、终止都有所不同起始、终止都有所不同原核生物转录的过程转录起始需解决两个问题：需解决两个问题：RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。起始区域。DNA双链

9、解开，使其中的一条链作为转录双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。的模板。原核生物的转录起始RNA聚合酶全酶聚合酶全酶(2)与模板结合与模板结合nDNA双链解开双链解开n在在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成成转录起始复合物转录起始复合物5-pppG-OH +NTP 5-pppGpN-OH 3 +ppi 转录起始复合物转录起始复合物:RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH 3 原核生物转录的延伸 亚基脱落，亚基脱落，RNApol聚合酶核心酶变构，与模聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着板结合松弛，沿着DNA模板前移模板前移n在在核心酶核心酶

10、作用下，作用下，NTP不断聚合，不断聚合，RNA链不断链不断延长延长(NMP)n +NTP (NMP)n+1 +PPi转录空泡(transcription bubble)转录空泡转录空泡非模板非模板DNARNA聚合酶聚合酶RNA-DNA杂化杂化双链，双链，12bpRNA解开双链解开双链模板链模板链DNA恢复双链恢复双链53转录方向转录方向超螺旋是转录的一个重要特征p随着随着RNA-pol沿双链前进，它的前方产生正超螺旋沿双链前进，它的前方产生正超螺旋（DNA更加紧密），后方产生负超螺旋（更加紧密），后方产生负超螺旋（DNA部分解链）部分解链）p两种螺旋都可以通过促旋酶和拓扑异构酶去除。两种螺旋

11、都可以通过促旋酶和拓扑异构酶去除。p类似类似DNA复制的时候复制的时候原核生物转录的延伸原核生物转录过程中的羽毛状现象5 3 DNA核糖体核糖体RNARNA聚合酶聚合酶电子显微镜照片电子显微镜照片转录未完成，翻译已经在进行着转录未完成，翻译已经在进行着原核生物转录终止指指RNA聚合酶在聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，模板上停顿下来不再前进，转录产物转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。链从转录复合物上脱落下来。n依赖依赖Rho()因子的转录终止因子的转录终止n非依赖非依赖Rho因子的转录终止因子的转录终止分类：分类：依赖 Rho因子的转录终止A T P因子：因子：1969年年Rober

12、ts在被在被T4噬菌体感染的噬菌体感染的 E.coli 中发现中发现 与与RNA转录物结合，改变转录物结合，改变RNA-pol构象，使其停顿构象，使其停顿 有有ATP酶活性，解旋酶（酶活性，解旋酶（helicase）活性）活性非依赖 Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出RNA后，RNA产物形成特殊的结构来终止转录。5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU.3 5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU.3 RNA 5

13、 TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT.3 DNA UUUU.UUUU.5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU.3茎环茎环(stem-loop)/发夹发夹(hairpin)结构结构茎环结构使转录终止的机理回文序列导致RNA形成茎环结构改变了RNA-pol的构象，使其停顿RNA和DNA各自形成双链，使RNA/DNA杂化短链分开，释放RNARNA聚合酶原核生物只有原核生物只有1种种RNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成mRNA、tRNA和和rRNA真核

14、生物具有真核生物具有3种不同的种不同的RNA聚合酶聚合酶RNA聚合酶聚合酶(RNA-pol)RNA聚合酶聚合酶(RNA-pol)RNA聚合酶聚合酶 (RNA-pol)RNA聚合酶真核生物的RNA聚合酶种类种类对鹅膏蕈碱对鹅膏蕈碱的反应的反应45S-rRNAhnRNA5S-rRNAtRNAsnRNA耐受耐受极敏感极敏感中度敏感中度敏感转录产物转录产物真核生物的转录起始真核生物转录起始十分复杂，往往需要多种蛋白真核生物转录起始十分复杂，往往需要多种蛋白因子（转录因子）的协助，它们与因子（转录因子）的协助，它们与RNARNA聚合酶聚合酶形成转形成转录起始复合物，共同参与转录起始的过程。录起始复合物，

15、共同参与转录起始的过程。转录调控是基因表达调控的关键点，也是当转录调控是基因表达调控的关键点，也是当今生命科学研究热点。了解真核生物的转录过今生命科学研究热点。了解真核生物的转录过程，是研究转录调控的重要基础。程，是研究转录调控的重要基础。转录起始上游的DNA序列转录起始点转录起始点TATA盒盒CAAT盒盒GC盒盒 增强子增强子AATAAA切离加尾切离加尾 转录终止点转录终止点 修饰点修饰点 外显子外显子 翻译起始点翻译起始点内内含含子子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体八聚体启动子核心序列启动子核心序列转录起始前上游区段转录起始前上游区段顺式作用元件顺式作用元件(cis-act

16、ing element)转录因子(transcriptional factors,TF)直接或间接结合直接或间接结合RNA聚合酶聚合酶的反式作用因子的反式作用因子RNA-pol ITF IRNA-pol IITF IIRNA-pol IIITF III参与RNA-pol转录的TF蛋白激酶活性，使蛋白激酶活性，使CTD磷磷酸化酸化TFHATPase57（）34（）TFE解螺旋酶解螺旋酶30，74TFF促进促进RNA-pol结合及作结合及作为其他因子结合的桥梁为其他因子结合的桥梁TFB稳定稳定TFD-DNA复合物复合物，TFA辅助辅助TBP-DNA结合结合TAF*结合结合TATA 盒盒38TFD功

17、功能能分子量分子量(kD)转录因子转录因子蛋白激酶活性，使蛋白激酶活性，使CTD*TFHATPase57（）34（）TFE解螺旋酶解螺旋酶TFF促进促进RNA-pol结合及作结合及作为其他因子结合的桥梁为其他因子结合的桥梁33TFB稳定稳定TFD-DNA复合物复合物12，1935TFA辅助辅助TBP-DNA结合结合TAF*结合结合TATA 盒盒TBP*TFD亚基组成亚基组成*TBP:TATA binding protein,TATA结合蛋白结合蛋白*TAF:TBP associated factors,TBP 辅助因子辅助因子*CTD:carboxyl terminal domain,RNA-

18、pol II大亚基羧基末端结构域大亚基羧基末端结构域POL-TFFHECTD-P转录起始前复合物(pre-initiation complex,PIC)TATAAPOL-TFFHETBPTAFTFD-A-B-DNA复合物复合物ABTBPTAFTATAPIC组装完成，组装完成，TFH使使CTD磷酸化，磷酸化，RNA-pol往下游移动。往下游移动。进入转录的延长阶段后，大多数进入转录的延长阶段后，大多数TF都会脱离。都会脱离。B拼板理论(piecing theory)不同的转录因子相互辨认，以多种组合搭配方式不同的转录因子相互辨认，以多种组合搭配方式结合，生成有活性，有专一性的复合物，再与结合，生

19、成有活性，有专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因的基因“七巧板理论七巧板理论”n人类基因组中几万个基因的表达，人类基因组中几万个基因的表达，300多个转多个转录因子就能满足不同类型基因表达的需要录因子就能满足不同类型基因表达的需要真核生物转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。nRNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到长过程中可以观察到核小体移位和解

20、聚核小体移位和解聚现现象。象。转录延长中的核小体移位核小体核小体移位移位的现象只见于试管中（的现象只见于试管中（in vitro）的转录实验）的转录实验细胞培养（细胞培养（in vivo）实验表明核小体在转录过程可能发生）实验表明核小体在转录过程可能发生解聚解聚RNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小体核小体转录方向转录方向真核生物转录终止5-AAUAAA-5 -AAUAAA-核酸酶核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAA GTGTGTG转录终止的修饰点转录终止的修饰点5 5 3 3 3 3 加尾加尾AAAAAAA 3 hnRNA真核生物的转录后修饰真核生物的转录后修饰真核生物转

21、录后修饰（post-transcriptional modification）几种主要的修饰方式几种主要的修饰方式1.剪接剪接(splicing)2.剪切剪切(cleavage)3.修饰修饰(modification)4.添加添加(addition)一、mRNA的首、尾的修饰首、尾的修饰5 端形成端形成 帽子结构帽子结构(m7GpppGp)生成甲基化的三磷酸双鸟苷生成甲基化的三磷酸双鸟苷在核内完成在核内完成hnRNA刚刚合成刚刚合成25-30 nt时，就形成了时，就形成了“帽子帽子”结构结构起始蛋白质翻译的必须起始蛋白质翻译的必须避免被避免被RNA核酸酶降解核酸酶降解3 端加上端加上多聚腺苷酸

22、尾巴多聚腺苷酸尾巴(poly A tail)维持维持mRNA作为模板的活性作为模板的活性增加增加mRNA本身的稳定性本身的稳定性主要功能主要功能帽子结构甲基化的三磷酸双鸟苷帽子结构的生成转录产物转录产物hnRNA第一个核苷酸往第一个核苷酸往往是往是5-三磷酸鸟苷三磷酸鸟苷pppG5 pppGp5 GpppGppppG ppi鸟苷酸鸟苷酸转移酶转移酶5 m7GpppGp甲基转移酶甲基转移酶SAM5 ppGp磷酸酶磷酸酶 Pin磷酸酶水解磷酸酶水解n与另一个与另一个pppG反应，生成反应，生成三磷三磷酸双鸟苷酸双鸟苷n甲基化，第一或第二鸟嘌呤碱基甲基化，第一或第二鸟嘌呤碱基发生甲基化发生甲基化n帽

23、子结构完成帽子结构完成二、mRNA的剪接（去除内含子）核内的蛋白质核内的蛋白质小分子核糖核蛋白体小分子核糖核蛋白体snRNP（small nuclear ribonucleoprotein）snRNARNA剪接的场所剪接的场所hnRNA 和和 snRNAnhnRNA(hetero-nuclear RNA)：核内的初级转录物（成熟的核内的初级转录物（成熟的RNA剪接前的剪接前的“前体前体”）nsnRNA(small nuclear RNA)hnRNA 和和 snRNA外显子外显子(exon)和内含子和内含子(intron)n外显子（编码区）外显子（编码区）在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达

24、为成熟在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的的核酸序列。核酸序列。n内含子（非编码区）内含子（非编码区）隔断基因的线性表达，而在剪接过程中被除去的核酸序列。隔断基因的线性表达，而在剪接过程中被除去的核酸序列。蛋白质内含子蛋白质内含子胰岛素的胰岛素的C基因基因二、mRNA的剪接（去除内含子）断裂基因(splite gene)真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。CABD编码区（外显子）编码区（外显子）A、B、C、D非编码区非编码区（内含子）（内含子）鸡卵清蛋白基因及其

25、转录、转录后修饰鸡卵清蛋白鸡卵清蛋白基因基因hnRNA首、尾修饰首、尾修饰hnRNA剪接剪接成熟的成熟的mRNA鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交（模拟电镜图片）基因全长为基因全长为7.7kb，肽链长，肽链长386个氨基酸个氨基酸hnRNA 和 snRNA外显子外显子(exon)和内含子和内含子(intron)内含子的分类内含子的分类n根据基因的类型和剪接的方式，通常分为根据基因的类型和剪接的方式，通常分为4类类I：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的 rRNA基因；基因；II：也发现于线粒体、叶绿体，转录

26、产物是：也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是mRNA；III：是常见的形成套索结构后剪接，大多数：是常见的形成套索结构后剪接，大多数mRNA基因有此类内含子；基因有此类内含子；IV：是：是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子，剪接过程需酶及基因及其初级转录产物中的内含子，剪接过程需酶及ATP。自自我我剪剪接接二、mRNA的剪接（去除内含子）hnRNA 和 snRNA外显子外显子(exon)和内含子和内含子(intron)内含子的分类内含子的分类mRNA的剪接的剪接n除去除去hnRNA中的内含子，将外显子连接中的内含子，将外显子连接二、mRNA的剪接（去除内含子）snRNP与hnRNA结合成为剪

27、接体snRNP与hnRNA结合成为剪接体（续）UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2U1、U4、U5UACUACA-AGUGU6E1E2U2剪接过程的二次转酯反应 (twice transesterification)pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反应第一次转酯反应第二次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子外显子1内含内含子子外显子外显子2G-OHUpUpGpA三、mRNA的编辑(mRNA editing)RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加加工

28、，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工工(differential RNA processing)。人类人类apo B（载脂蛋白（载脂蛋白B）基因）基因 mRNA（14500个核苷酸）个核苷酸）肝脏肝脏apo B100（分子量为（分子量为500 000）肠道细胞肠道细胞apo B48（分子量为（分子量为240 000）mRNA编辑编辑C变为变为U小结：mRNA的转录后加工加加“帽子帽子”、“尾巴尾巴”mRNA的剪接（的剪接（hnRNA 去除内含子）去除内含子）mRNA的编辑的编辑(mRNA editing)tRNA的转录后加工tRNA前体前体RNA pol TGGCNNAGTGCGGTTCG

29、ANNCCDNADHU-loopT-looptRNA的转录后加工RNAaseP内切酶内切酶tRNA核苷酸转移酶核苷酸转移酶连接酶连接酶ATPADP碱基修饰（1 1）（1 1）（3 3）（2 2）（4 4）（2）还原反应）还原反应 如：如：U DHU（4）脱氨反应）脱氨反应 如：如：A I 如：如：A mA G mG（1）甲基化）甲基化 （3）核苷内的转位反应）核苷内的转位反应 如：如：U rRNA的转录后加工转录转录45S-rRNA剪接剪接18S-rRNA5.8S和和28S-rRNArDNA内含子内含子28S5.8S18S内含子内含子基因转录激活调节基本要素基因转录激活调节基本要素p基因基因的

30、结构、性质的结构、性质p生物个体或细胞所处的内、外生物个体或细胞所处的内、外环境环境p细胞内所存在的转录细胞内所存在的转录调节蛋白调节蛋白 特异特异DNA序列序列 调节蛋白调节蛋白 DNA-蛋白质、蛋白质蛋白质、蛋白质-蛋白质蛋白质 RNA聚合酶聚合酶基因表达调控的生物学意义基因表达调控的生物学意义（一）适应环境、维持生长和增殖（一）适应环境、维持生长和增殖（二）维持个体发育与分化（二）维持个体发育与分化功能不同的基因的表达不同不受调控的基因不受调控的基因：（相对）（相对）基本（组成性）基因表达（基本（组成性）基因表达（constitutive gene expression）管家基因（管家基

31、因（housekeeping genes）表达受调控的基因：表达受调控的基因：某些基因的表达在生命过程的某个时期，或某些基因的表达在生命过程的某个时期，或外界环境的改变发生了变化外界环境的改变发生了变化诱导和阻遏诱导和阻遏基本（组成性）基因表达（constitutive gene expression）某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达，通常被称为管家基因(housekeeping gene)。无论表达水平高低，某些基因无论表达水平高低，某些基因较少受环境因素较少受环境因素影响影响，而是在个体各个生长阶段的大多数或几，而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。

32、区别于乎全部组织中持续表达，或变化很小。区别于其他基因，这类基因表达被视为其他基因，这类基因表达被视为基本（组成性）基本（组成性）基因表达基因表达(constitutive gene expression)编码物质代谢有关酶类：编码物质代谢有关酶类：编码分解代谢的酶可诱导型乳糖操纵子编码合成代谢的酶可阻遏型色氨酸操纵子原核生物的基因结构特点（与真核生物的主要区别）：特点（与真核生物的主要区别）：无内含子无内含子操纵子操纵子转录单元转录单元多顺反子多顺反子mRNA转录没有结束，翻译已经开始转录没有结束，翻译已经开始诱导和阻遏表达诱导和阻遏表达在特定环境信号刺激下，相应的基因被激在特定环境信号刺激

33、下，相应的基因被激活，基因表达产物增加，这种基因称为活，基因表达产物增加，这种基因称为可诱导可诱导基因基因。可诱导基因在特定环境中表达增强的过程，可诱导基因在特定环境中表达增强的过程，称为称为诱导诱导(induction)。如果基因对环境信号应答是被抑制，这种如果基因对环境信号应答是被抑制，这种基因是基因是可阻遏基因可阻遏基因。可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为阻遏阻遏(repression)。Lehningers.Principles.of.Biochemistry.4th原核生物原核生物 蛋白质因子蛋白质因子 操纵子操纵子(operon)机制机制特异特

34、异DNA序列序列编码序列编码序列 启动序列启动序列 操纵序列操纵序列 其他调节序列其他调节序列(promoter)(operator)操纵子通常由通常由2个以上个以上结构基结构基因因和多种和多种表达调控元件表达调控元件在基因组中成簇串联组在基因组中成簇串联组成成表达调控元件：表达调控元件：promoter，operator原核生物中最常见的表原核生物中最常见的表达调控单位达调控单位雅各布雅各布(1920)法国生法国生物学家、分子生物学家、分子生物学家物学家 莫诺莫诺(19101976)法国生物学家法国生物学家 1961年雅格布与莫诺合作提出年雅格布与莫诺合作提出了了“信使核糖核酸信使核糖核酸”

35、和和“操纵子操纵子”概念，阐明了概念，阐明了RNA在遗传过程中的在遗传过程中的信息传递作用和乳糖操纵子在蛋白信息传递作用和乳糖操纵子在蛋白质生物合成中的调节控制机制，于质生物合成中的调节控制机制，于1965年获诺贝尔生理学和医学奖。年获诺贝尔生理学和医学奖。是是RNA聚合酶结合并启动转录聚合酶结合并启动转录的特异的特异DNA序列。序列。1)启动序列启动序列RNA转录起始转录起始-35区区-10区区TTGACATTAACTTTTACATATGATTTTACATATGTTTTGATATATAATCTGACGTACTGTN17N16N17N16N16N7N7N6N7N6AAAAAtrp tRNATy

36、rlacrecAAra BAD TTGACA TATAAT共有序列共有序列共有序列共有序列(consensus sequence)决定启动决定启动序列的转录活性大小。序列的转录活性大小。某些特异因子（蛋白质）某些特异因子（蛋白质）决定决定RNA聚合聚合酶酶对一个或一套启动序列的特异性识别和结对一个或一套启动序列的特异性识别和结合能力。合能力。2 2 操纵序列操纵序列 阻遏蛋白阻遏蛋白(repressor)的结合位点的结合位点当操纵序列结合有当操纵序列结合有阻遏蛋白阻遏蛋白时，会阻碍时，会阻碍RNA聚合酶与启动序列的结合，或是聚合酶与启动序列的结合，或是RNA聚聚合酶不能沿合酶不能沿DNA向前移

37、动向前移动，阻碍转录。，阻碍转录。启动序列启动序列编码序列编码序列操纵序列操纵序列pol阻遏蛋白阻遏蛋白3)3)其他调节序列、调节蛋白其他调节序列、调节蛋白例如例如激活蛋白激活蛋白(activator)可结合启动序列邻近可结合启动序列邻近的的DNA序列，促进序列，促进RNA聚合酶与启动序列的聚合酶与启动序列的结合，增强结合，增强RNA聚合酶活性。聚合酶活性。有些基因在没有激活蛋白存在时，有些基因在没有激活蛋白存在时，RNA聚合酶很少或完全不能结合启动序列。聚合酶很少或完全不能结合启动序列。操纵子的结构与功能典型的操纵子结构：控制区控制区信息区信息区结构基因结构基因I调节基因调节基因（阻遏或增强

38、）（阻遏或增强）P启动基因启动基因O 操纵基因操纵基因DNA乳糖操纵子调节机制（一一）乳糖操纵子乳糖操纵子(lac operon)的结构的结构 结构基因结构基因Z：-半乳糖苷酶半乳糖苷酶Y：透酶透酶A：乙酰基转移酶：乙酰基转移酶编码与乳糖分解代谢有关的基因编码与乳糖分解代谢有关的基因ZYAOPDNA 调控区调控区CAP结合位点结合位点启动序列启动序列操纵序列操纵序列阻遏基因阻遏基因乳糖操纵子(lac operon)的结构Lehningers.Principles.of.Biochemistry.4th乳糖操纵子的调节机制没有乳糖的时候，该基因是不需要表达的，即该基因的表达是被抑制的。mRNA阻

39、遏蛋白阻遏蛋白IDNAZYAOPpol没有乳糖存在时没有乳糖存在时阻遏基因阻遏基因有乳糖存在的时候，需要表达，降解乳糖mRNA阻遏蛋白阻遏蛋白有乳糖存在时有乳糖存在时IDNAZYAOPpol启动转录启动转录mRNA乳糖乳糖半乳糖半乳糖-半乳糖苷酶半乳糖苷酶CAP的正性调节的正性调节+转录转录无葡萄糖，无葡萄糖，cAMP浓度高时浓度高时有葡萄糖，有葡萄糖，cAMP浓度低时浓度低时ZYAOPDNACAPCAPCAPCAPCAPCAP协调调节协调调节当阻遏蛋白封闭转录时，当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能对该系统不能发挥作用；发挥作用；如无如无CAP存在，即使没有阻遏蛋白与操纵序存在，即使没有

40、阻遏蛋白与操纵序列结合，操纵子仍无转录活性。列结合，操纵子仍无转录活性。单纯乳糖存在时，细菌利用乳糖作碳源；单纯乳糖存在时，细菌利用乳糖作碳源；若有葡萄糖或葡萄糖若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在时，细乳糖共同存在时，细菌菌优先利用葡萄糖优先利用葡萄糖。葡萄糖对葡萄糖对 lac 操纵子的阻遏作用称操纵子的阻遏作用称分解代分解代谢阻遏谢阻遏(catabolic repression)。mRNA低半乳糖时低半乳糖时高半乳糖时高半乳糖时 葡萄糖低葡萄糖低 cAMP浓度高浓度高 葡萄糖高葡萄糖高cAMP浓度低浓度低RNA-polOOO若有葡萄糖或葡萄糖若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同乳糖共同存在时，细菌存在

41、时，细菌优先利用葡萄糖优先利用葡萄糖。Lehningers.Principles.of.Biochemistry.4th转录终止调节复习RNA的合成转录的内容衰减子的作用色氨酸操纵子Trp Trp 高时高时 Trp 低时低时 mRNA OPtrpR调节区调节区 结构基因结构基因 RNA RNA聚合酶聚合酶 RNA RNA聚合酶聚合酶 UUUUUUUU调节区调节区 结构基因结构基因 trpROP前导序列前导序列 衰减子区域衰减子区域 UUUU前导前导mRNA1234衰减子结构衰减子结构 第第1010、1111密码子为密码子为trptrp密码子密码子 终止密码子终止密码子 14aa14aa前导肽编

42、码区前导肽编码区:包含序列包含序列1 1 形成发夹结构能力强弱：形成发夹结构能力强弱：序列序列1/21/2序列序列2/32/3序列序列3/4 3/4 trp 密码子密码子 UUUUUUUU34UUUU 334核糖体核糖体 前导肽前导肽 前导前导mRNA1.1.当色氨酸浓度高时当色氨酸浓度高时 转录衰减机制转录衰减机制 125 trp 密码子密码子 衰减子结构衰减子结构就是终止子就是终止子可使转录可使转录前导前导DNA UUUU 3 RNA RNA聚合酶聚合酶 终止终止UUUU342423UUUU核糖体核糖体 前导肽前导肽 前导前导mRNA 15 trp 密码子密码子 结构基因结构基因前导前导D

43、NA RNA RNA聚合酶聚合酶 2.2.当色氨酸浓度低时当色氨酸浓度低时 Trp合成酶系相关合成酶系相关结构基因被转录结构基因被转录 序列序列3 3、4 4不能不能形成衰减子结构形成衰减子结构 Types of sequences in the human genomeLehningers.Principles.of.Biochemistry.4thLINE：long interspersed elementSINE：short interspersed element比原核生物复杂比原核生物复杂3030亿碱基对，亿碱基对，3.63.6万个基因，万个基因，2 21515表达表达真核生活基因表

44、达的多级调控基因激活基因激活转录起始转录起始 转录后加工转录后加工mRNA降解降解蛋白质翻译蛋白质翻译翻译后加工修饰翻译后加工修饰蛋白质降解等蛋白质降解等DNARNA蛋白质蛋白质 DNA暴露碱基后暴露碱基后RNA聚合酶才能有效结合。聚合酶才能有效结合。活化状态的基因表现为：活化状态的基因表现为：1.对核酸酶敏感对核酸酶敏感2.结合有非组蛋白及修饰结合有非组蛋白及修饰的组蛋白的组蛋白3.低甲基化。低甲基化。最有效的调节环节，通最有效的调节环节，通过过DNA元件与调控蛋白相元件与调控蛋白相互作用来调控基因表达。互作用来调控基因表达。RNA编辑、剪接、转运编辑、剪接、转运 翻译水平可通过特异的翻译水

45、平可通过特异的蛋白因子阻断蛋白因子阻断mRNA翻译翻翻译翻译后对蛋白的加工、修饰也译后对蛋白的加工、修饰也是基本调控环节是基本调控环节 siRNA,microRNA 真核细胞基因开关的真核细胞基因开关的分子机制分子机制比原核复杂比原核复杂基本共同点：基本共同点：转录起始的调节是关键点转录起始的调节是关键点根本不同点：根本不同点：原核生物：原核生物：启动子在缺少转录因子情况下启动子在缺少转录因子情况下就具有天然活性就具有天然活性 真核生物：真核生物：强力启动子在缺少转录因子强力启动子在缺少转录因子（调节蛋白）的情况下往往没（调节蛋白）的情况下往往没有活性有活性 真核真核 VS 原核原核*多种多种

46、RNA聚合酶，结构复杂，并伴随必须的转录因聚合酶，结构复杂，并伴随必须的转录因子；子；。因此，在转录的基本状态受。因此，在转录的基本状态受到制约的情况下，使得每个真核细胞基因需要活化到制约的情况下，使得每个真核细胞基因需要活化才能被转录；才能被转录；*真核细胞有更大、更为复杂、种类更多的调节蛋白。真核细胞有更大、更为复杂、种类更多的调节蛋白。单一启动子可以被分散在单一启动子可以被分散在DNA分子上、数量近乎无分子上、数量近乎无限的调节序列所控制。限的调节序列所控制。真核细胞对基因表达起始的调控至少在下面真核细胞对基因表达起始的调控至少在下面几个方面与原核细胞存在不同：几个方面与原核细胞存在不同

47、：*真核细胞基因及其调控区域受到染色质结构的限制，真核细胞基因及其调控区域受到染色质结构的限制，转录的活化与转录调控区域、转录区域内染色质结转录的活化与转录调控区域、转录区域内染色质结构的诸多变化相关；构的诸多变化相关；u真核生物转录水平的调控染色质水平染色质水平核小体中组蛋白解离、乙酰化核小体中组蛋白解离、乙酰化DNA去甲基化、拓扑结构变化去甲基化、拓扑结构变化转录活化因子的活化和表达转录活化因子的活化和表达转录因子磷酸化、去磷酸化转录因子磷酸化、去磷酸化转录起始复合物的组装和活化转录起始复合物的组装和活化转录终止的调节转录终止的调节u真核生物转录后水平的调控真核生物转录后水平的调控u真核生

48、物翻译水平的调控真核生物翻译水平的调控第一部分Control of Transcription Initiation转录起始调控转录起始调控(一）基因活化蛋白质改变局部染色质结构一）基因活化蛋白质改变局部染色质结构 异染色质（异染色质（heterochromatin）是转录非活性的。是转录非活性的。常染色质（常染色质（euchromatin）中的转录活性区域对核酸中的转录活性区域对核酸酶敏感，特别是转录基因的酶敏感，特别是转录基因的5-侧翼区侧翼区1000 nt以内是以内是高敏感位点高敏感位点(hypersensitive sites)。很多高敏感位点是。很多高敏感位点是调节蛋白质的结合序列，

49、而这些区域核小体的相对调节蛋白质的结合序列，而这些区域核小体的相对缺少也使得这些蛋白质易于与之结合。缺少也使得这些蛋白质易于与之结合。转录活化染色质与非活化染色质在结构转录活化染色质与非活化染色质在结构上有很大不同。上有很大不同。转录活化染色质与非活化染色质的组蛋转录活化染色质与非活化染色质的组蛋白共价修饰的方式也不相同。白共价修饰的方式也不相同。组蛋白修饰：组蛋白修饰：核小体的核心组蛋白（核小体的核心组蛋白（H2A，H2B，H3，H4）中赖氨酸残基的）中赖氨酸残基的非可逆性甲基化，丝氨非可逆性甲基化，丝氨酸与苏氨酸残基的磷酸化，乙酰化以及泛素化多酸与苏氨酸残基的磷酸化，乙酰化以及泛素化多是是

50、转录活性染色质的特点。转录活性染色质的特点。DNA修饰：修饰：真核细胞真核细胞DNA的的CpG序列（序列（CpG岛）岛）中的胞嘧啶被甲基化为中的胞嘧啶被甲基化为5-甲基胞嘧啶是常见现象，甲基胞嘧啶是常见现象，但转录活性染色质区域胞嘧啶被但转录活性染色质区域胞嘧啶被甲基化的程度降低甲基化的程度降低。l染色质重塑（染色质重塑（chromatin remodeling）基因活化蛋白质可以通过改变基因的启基因活化蛋白质可以通过改变基因的启动子和调节序列区域的染色质结构来促进转动子和调节序列区域的染色质结构来促进转录开始。这种改变局部染色质结构的过程被录开始。这种改变局部染色质结构的过程被称为称为染色质