选修3-现代生物科技专题知识点总结(DOC 29页).doc
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1、选修3 现代生物科技专题知识点总结专题1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。(一)基因工程的基本工具1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端
2、。2.“分子缝合针”DNA连接酶(1)两种DNA连接酶(EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:相同点:都缝合磷酸二酯键。区别:EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”载体(1)载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。具有标记基因,供重
3、组DNA的鉴定和选择。(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。(3)其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1.目的基因是指:编码蛋白质的结构基因 。2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。3.基因文库包括基因组文库和cDNA文库。二者的区别:文库类型文库大小基因中是否有启动子基因中是否有内含子基因多少物种间基因交流cDNA文库小无无某种生物的部分基因可以基因组文库大有有某种生物的全部基因部分基因可以4.人工合
4、成目的基因的两个条件:基因比较小;核苷酸序列已知。5.PCR技术扩增目的基因(1)PCR是多聚酶链式反应的缩写,原理DNA双链复制(2)过程:第一步变性:加热至9095,DNA解链,不需要解旋酶;第二步复性:冷却到5560,引物结合到互补DNA链。变性和复性利用了DNA的热变性原理;第三步延伸:加热至7075,热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物端起始互补链的合成。第二步:基因表达载体的构建(核心)1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2.组成:目的基因启动子终止子标记基因(1)启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RN
5、A聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。(2)终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段 ,位于基因的尾端。(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步:将目的基因导入受体细胞_(1)转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。(2)常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法,其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞:原
6、核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ,最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ,其转化方法是:先用 Ca2+ 处理细胞,使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步:目的基因的检测和表达(1)首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用 DNA分子杂交技术。(2)其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA,方法是采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。(3)最后检测
7、 目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取 蛋白质,用相应的 抗体进行抗原抗体杂交。(4)有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。(三)基因工程的应用1.植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。2.动物基因工程:提高动物生长速度;改善畜产品品质;用转基因动物生产药物:如乳腺生物反应器(药用蛋白基因的启动子与乳腺蛋白基因启动子重组,雌性)和膀胱生物反应器(药用蛋白基因的启动子与膀胱壁细胞基因启动子重组,无性别要求),方法是将目的基因导入哺乳动物的受精卵中,使其发育成转基因动物;器官移植的供体去除免疫排斥(供体基因组中导入调节因
8、子,以抑制抗原决定基因的表达或设法去除抗原决定基因)3.基因治疗是把正常基因导入病人的体内,使该基因的表达产物发挥功能,从而达到治疗的目的,这是治疗遗传病最有效的手段。(四)蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程。基本途径是:从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸
9、序列。专题2 细胞工程(一)植物细胞工程1.理论基础(原理):细胞全能性全能性表达的难易程度:受精卵生殖细胞干细胞体细胞;植物细胞动物细胞2.植物组织培养技术(1)过程:(2)用途:微型繁殖、作物脱毒(选材应该选择茎尖组织)、制造人工种子(利用胚状体包上人工种皮)、单倍体育种(最大的优点是明显缩短育种年限,得到的全为纯种)、筛选突变体(利用愈伤组织)、细胞产物的工厂化生产(利用愈伤组织)。(3)地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。3.植物体细胞杂交技术(1)过程:(2)原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性(3)诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电刺激等。化
10、学法一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。细胞壁再生有关的细胞器是高尔基体。(3)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。(二)动物细胞工程动物细胞工程中常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等,其中,动物细胞培养是其他技术的基础。1.动物细胞培养(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。(2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散
11、成单个细胞继续传代培养。(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。(4)动物细胞培养需要满足以下条件无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。温度和pH:适宜温度:哺乳动物多是36.50.5;pH:7.27.4。气体环境:95%空气5%CO2。O
12、2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。(5)动物细胞培养技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。(6)目前使用或冷冻保存的正常细胞,通常为10代以内的的细胞,因其保持正常的二倍体核型。2.动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。(2)选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞比较大,容易操作;卵(母)细胞细胞质多,营养丰富。(3)体细胞核移植的大致过程是:(右图)核移植胚胎移植(4)体细胞核移植技术的应用:加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育;保护濒危物种,增大存活数
13、量;生产珍贵的医用蛋白;作为异种移植的供体;用于组织器官的移植等。(5)体细胞核移植技术存在的问题:克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。3.动物细胞融合(1)动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。(3)动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。(4)动物细胞融合与植物体
14、细胞杂交的比较:比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法植物体细胞杂交细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动,聚乙二醇等试剂诱导克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外,再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一4.单克隆抗体(1)抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。(2)单克隆抗体的制备过程:(3)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。(4)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。(5)单克隆抗体的作用: 作为诊断
15、试剂:准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”,也有少量用于治疗其它疾病。“生物导弹”,将药物定向带到癌细胞所在位置(单克隆抗体是“瞄准装置”,药物是弹头,起杀伤作用)。专题3 胚胎工程(一)动物胚胎发育的基本过程1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎,还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。2.精子和卵子的发生(1)精子的发生:场所:睾丸。时间:初情期至生理
16、机能衰退。精子发生的三个阶段有丝分裂、减数分裂和变形。精子变形:细胞核变为精子的头部的主要部分;高尔基体发育为顶体;中心体演变为精子的尾;线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘,其他物质浓缩为球状的原生质滴,最后脱落。(2)卵子的发生 场所:卵巢和输卵管。卵子发生过程中:减数第一次分裂发生在排卵前后(时候)(马犬是排卵后,猪羊排卵前),减数第二次分裂发生在受精作用过程中。3.受精(1)场所:输卵管。(2)刚排出的精子,不能立即与卵子结合,必须在雌性动物生殖道内发生相应生理变化后,才能获得受精能力,这一生理现象成为精子获能。排出的卵子要在输卵管内进一步成熟,当达到减数第二次分裂中期时期时,才具备与精子
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