21复习微生物的实验室培养+课件.ppt

1、拟核，大型环状拟核，大型环状DNA 质粒质粒(小型环状小型环状DNA，含抗，含抗生素，抗药性，固氮基因生素，抗药性，固氮基因)其成分为其成分为肽聚糖肽聚糖2.细菌的结构细菌的结构特殊结构（有时特殊结构（有时包括芽孢）包括芽孢）有些细菌在一有些细菌在一定的条件下，细胞定的条件下，细胞里面形成一个椭圆里面形成一个椭圆形的形的休眠体休眠体，叫做，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、厚，对干旱、低温、高温等高温等恶劣的环境恶劣的环境有很强的有很强的抵抗力抵抗力。（抗逆性极强）抗逆性极强）注：不是繁殖体注：不是繁殖体例如，有的细菌的芽孢，煮沸例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死

2、亡。芽孢小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.1.碳源：碳源：为微生物提供碳元素。为微生物提供碳元素。无机碳化合物无机碳化合物CO2、NaHCO3等等有机碳有机碳化合物化合物糖类糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）2.氮源氮源:N2

3、NH3等等有机物中的氮（有机物中的氮（还还有尿素）有尿素）无机氮无机氮牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物自养型微生物与异养型微生物的培自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是养基的主要差别是()()A A碳源碳源 B B氮源氮源 C C无机盐无机盐 D D特殊营养物质特殊营养物质A3.生长因子生长因子注意：注意：n最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖最常用的

4、碳源是糖类，尤其是葡萄糖n最常用的氮源是铵盐、硝酸盐最常用的氮源是铵盐、硝酸盐n对异养生物而言，含对异养生物而言，含C、H、O、N的化合的化合物既是碳源，也是氮源，如蛋白质物既是碳源，也是氮源，如蛋白质n之所以补充生长因子，是由于缺少合成这之所以补充生长因子，是由于缺少合成这些物质的酶或合成能力有限些物质的酶或合成能力有限思考：思考：C（三）培养基（三）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。混合营养液。1.1.培养基的类型及用途培养基的类型及用途种类种类是否含凝是否含凝固剂固剂用途用途

5、固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基按物理性质分按物理性质分是是否否分离、计数等分离、计数等工业生产工业生产固体培养基：菌落固体培养基：菌落半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)观察微生物的运动、鉴定菌种等观察微生物的运动、鉴定菌种等液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长按化学成分分按化学成分分种类种类化学成化学成分是否分是否明确明确用途用途天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基否否是是主要用于主要用于工业生产工业生产分类、鉴定分类、鉴定按培养基的功能（用途）分按培养基的功能（用途）分种类种类制备方法制备方法原理原理用

6、途用途举例举例选择选择培养培养基基鉴别鉴别培养培养基基加入某种加入某种化学物质化学物质加入某种加入某种试剂或化试剂或化学药品学药品依据某些微依据某些微生物对某些生物对某些物质的抗性物质的抗性依据微生物的依据微生物的代谢产物与特代谢产物与特定试剂或化学定试剂或化学药品反应，产药品反应，产生明显的特征生明显的特征变化变化从众多微生从众多微生物中物中分离所分离所需的微生物需的微生物鉴别鉴别不同种不同种类的微生物类的微生物加入青霉素加入青霉素分离得到酵分离得到酵母菌和霉菌母菌和霉菌伊红和美蓝伊红和美蓝培养基可鉴培养基可鉴别大肠杆菌别大肠杆菌选择培养基选择培养基n加入青霉素的培养基n加入高浓度食盐的培养

7、基 n不加氮源的无氮培养基n不加含碳有机物的无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离固氮菌分离自养型微生物分离自养型微生物jkzyw（三）培养基（三）培养基（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：（2 2）按功能分：）按功能分：（3 3）按成分分：）按成分分：总结：总结：1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基2.2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培养基同的培养基配方配方

8、不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、无机盐无机盐、碳源碳源和和氮源氮源等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质以及以及氧气氧气的要求的要求3.3.培养基的成分培养基的成分（四）无菌技术（四）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有作中，所有防止杂菌污染的方法防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭

9、菌的方法比较比较项目项目理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物的消灭微生物的程度程度芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消能否被消灭灭消毒消毒较为温和较为温和部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能灭菌灭菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能（1）日常生活经常用到的是）日常生活经常用到的是 煮沸煮沸 消毒消毒法法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 巴巴氏氏 消毒法（例如牛奶）消毒法（例如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒先喷洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等等溶液溶液以增强消毒以增强消毒效果，然后使用效果，然后

10、使用 紫外线紫外线 进行进行物理物理消毒。消毒。（4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用 酒精酒精 进行消进行消毒；毒；（5）饮水水源用）饮水水源用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。消毒的方法消毒的方法1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口等的灭菌等的灭菌2 2、干热灭菌干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.如如玻璃器皿、金玻璃器皿、金属用具属用具等的灭菌等的灭菌如如培养基、无菌

11、水培养基、无菌水等的灭菌等的灭菌高压蒸气灭菌的原理是（高压蒸气灭菌的原理是（）A A高压使细菌高压使细菌DNADNA变性变性 B B高压使细菌蛋白质凝固变性高压使细菌蛋白质凝固变性 C C高温烫死细菌高温烫死细菌 D D高温使细菌高温使细菌DNADNA变性变性B B灭菌的方法：灭菌的方法：1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2、干热灭菌、干热灭菌3、高压蒸气灭菌、高压蒸气灭菌4、紫外线灭菌、紫外线灭菌如表面灭菌和空气灭菌等，所如表面灭菌和空气灭菌等，所 用器械是用器械是 紫外灯紫外灯。关于灭菌和消毒的不正确的理解是关于灭菌和消毒的不正确的理解是A A消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的 B B灭

12、菌是指杀死环境中的一切微生物灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子的细胞、芽孢和孢子C C接种环用烧灼的方法灭菌接种环用烧灼的方法灭菌 D D常用灭菌方法有加热法、过滤法、常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法红外线法、化学药品法A1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌

13、用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存涂布器涂布器接种环接种环接种针接种针a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培

14、养细菌用于培养细菌）配方：配方：1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉

15、花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养基用旧报纸包裹，放入干将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种.1010无菌检查无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的

16、温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。b.b.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作培养基表面连续画线的操作,将聚集的将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这这就

17、是菌落就是菌落.平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分离法注意事项:其他画线分离图：其他画线分离图：伊红伊红

18、美蓝培养美蓝培养基基是鉴别培养基，可是鉴别培养基，可以用来检测自来水中以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标的大肠杆菌是否超标，因为的，因为的代谢产物与代谢产物与伊红伊红美蓝结合美蓝结合，使，使菌落呈菌落呈黑色并带有金黑色并带有金属光泽属光泽，使大肠杆菌，使大肠杆菌的菌落显示出来，并的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生生长和抑制其他微生物的生长。物的生长。例如：例如：鉴别大肠杆菌培养基鉴别大肠杆菌培养基 1 1、临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱冰箱保存。保存。2 2、长期保存长期保存：甘油冷冻管

19、藏法甘油冷冻管藏法编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例2 2右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，

20、可再加入可再加入 .（提示（提示：金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌具耐盐性）菌具耐盐性）自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物（3 3）若除去成分，）若除去成分，加入（加入（CHCH2 2OO），该），该培养基可用于培培养基可用于培养养 。（4 4）表中营养成分共）表中营养成分共有有 类。类。（5 5）不论何种培养基，）不论何种培养基，在各种成分都溶化后在各种成分都溶化后分装前，要进行的分装前，要进行的是是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g

21、4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml（6 6）右表中各成）右表中各成分重量确定的原则分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养）若右表培养基用于菌种鉴定，基用于菌种鉴定，应该增加的成应该增加的成分分 。依微生物的生长依微生物的生长需要确定需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml谢谢！