中医药大学生物化学课件JC整理7-酶(3).ppt
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1、目目 录录Enzyme第第 六六 章章 酶酶目目 录录酶的概念酶的概念n酶是一类由活细胞产生的,酶是一类由活细胞产生的,对其特异对其特异底物具有高效催化作用的底物具有高效催化作用的蛋白质。蛋白质。目目 录录目目 录录目目 录录一、一、酶的化学本质及分子组成酶的化学本质及分子组成酶蛋白酶蛋白 (apoenzyme):蛋白质部分:蛋白质部分辅助因子辅助因子(cofactor)金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物全酶全酶(holoenzyme)(simple enzyme):脲酶、蛋白酶、淀粉酶目目 录录*各部分在催化反应中的作用各部分在催化反应中的作用目目 录录金属离子的作用金属离子的
2、作用:K+,Na+,Mg+K+,Na+,Mg+稳定酶的构象;稳定酶的构象;参与催化反应,传递电子;参与催化反应,传递电子;在酶与底物间起桥梁作用;在酶与底物间起桥梁作用;中和阴离子,降低反应中的静电斥力等。中和阴离子,降低反应中的静电斥力等。小分子有机化合物小分子有机化合物的作用的作用在反应中起运载体的作用,传递电在反应中起运载体的作用,传递电子、质子或其它基团。子、质子或其它基团。目目 录录小分子有机化合物在催化中的作用小分子有机化合物在催化中的作用尼尼克克酰酰胺胺(维维生生素素PP之之一一)尼尼克克酰酰胺胺(维维生生素素PP之之一一)维维生生素素B2(核核黄黄素素)维维生生素素B2(核核黄
3、黄素素)维维生生素素B1(硫硫胺胺素素)泛泛酸酸硫硫辛辛酸酸维维生生素素B12生生物物素素吡吡哆哆醛醛(维维生生素素B6之之一一)叶叶酸酸NAD+(尼尼克克酰酰胺胺腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸,辅辅酶酶I)NADP+(尼尼克克酰酰胺胺腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸磷磷酸酸,辅辅酶酶II)FMN(黄黄素素单单核核苷苷酸酸)FAD(黄黄素素腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸)TPP(焦焦磷磷酸酸硫硫胺胺素素)辅辅酶酶A(CoA)硫硫辛辛酸酸钴钴胺胺素素辅辅酶酶类类生生物物素素磷磷酸酸吡吡哆哆醛醛四四氢氢叶叶酸酸氢氢原原子子(质质子子)醛醛基基酰酰基基烷烷基基二二氧氧化化碳碳氨氨基基甲甲基基、甲甲烯烯基基、
4、甲甲炔炔基基、甲甲酰酰基基等等一一碳碳单单位位所所含含的的维维生生素素名名称称小小分分子子有有机机化化合合物物(辅辅酶酶或或辅辅基基)转转移移的的基基团团尼尼克克酰酰胺胺(维维生生素素PP之之一一)尼尼克克酰酰胺胺(维维生生素素PP之之一一)维维生生素素B2(核核黄黄素素)维维生生素素B2(核核黄黄素素)维维生生素素B1(硫硫胺胺素素)泛泛酸酸硫硫辛辛酸酸维维生生素素B12生生物物素素吡吡哆哆醛醛(维维生生素素B6之之一一)叶叶酸酸NAD+(尼尼克克酰酰胺胺腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸,辅辅酶酶I)NADP+(尼尼克克酰酰胺胺腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸磷磷酸酸,辅辅酶酶II)FMN(黄黄素素
5、单单核核苷苷酸酸)FAD(黄黄素素腺腺嘌嘌呤呤二二核核苷苷酸酸)TPP(焦焦磷磷酸酸硫硫胺胺素素)辅辅酶酶A(CoA)硫硫辛辛酸酸钴钴胺胺素素辅辅酶酶类类生生物物素素磷磷酸酸吡吡哆哆醛醛四四氢氢叶叶酸酸氢氢原原子子(质质子子)醛醛基基酰酰基基烷烷基基二二氧氧化化碳碳氨氨基基甲甲基基、甲甲烯烯基基、甲甲炔炔基基、甲甲酰酰基基等等一一碳碳单单位位所所含含的的维维生生素素名名称称小小分分子子有有机机化化合合物物(辅辅酶酶或或辅辅基基)转转移移的的基基团团目目 录录辅助因子分类辅助因子分类(按其(按其与酶蛋白结合的紧密程度与酶蛋白结合的紧密程度)酶与辅助因子的对应关系酶与辅助因子的对应关系 辅酶辅酶(
6、coenzyme):与酶蛋白结合与酶蛋白结合疏松,可用疏松,可用透析或超滤的透析或超滤的方法除去。方法除去。辅基辅基(prosthetic group):与酶蛋白结合与酶蛋白结合紧密,不能用紧密,不能用透析或超透析或超滤的方法除去滤的方法除去。目目 录录酶的分类(根据酶蛋白分子特点)酶的分类(根据酶蛋白分子特点)二、酶的活性中心二、酶的活性中心必需基团必需基团 (essential group)酶分子中氨基酸酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团残基侧链的化学基团中,一些与酶活性密中,一些与酶活性密切相关的化学基团切相关的化学基团。常见常见-OH,-SH等等目目 录录或称活性部位或称活性部位(act
7、ive site),指必需指必需基团在空间结构上彼此靠近,组成具基团在空间结构上彼此靠近,组成具有特定空间结构的区域,能与底物特有特定空间结构的区域,能与底物特异结合并将底物转化为产物。异结合并将底物转化为产物。酶的活性中心酶的活性中心(active center)目目 录录结合基团结合基团binding group催化基团催化基团(catalytic group)催化底物转变成产物催化底物转变成产物 位于活性中心以外,维持酶活性位于活性中心以外,维持酶活性中心应有的空间构象所必需。中心应有的空间构象所必需。活性中心外的必需基团活性中心外的必需基团底底 物物 活性中心以外活性中心以外的必需基团
8、的必需基团结合基团结合基团催化基团催化基团 活性中心活性中心 目目 录录目目 录录溶菌酶的活性溶菌酶的活性中心中心*谷氨酸谷氨酸35和天和天冬氨酸冬氨酸52是催化是催化基团;基团;*色氨酸色氨酸62和和83、天冬氨酸天冬氨酸101和和色氨酸色氨酸108是结是结合基团;合基团;*AF为底物多为底物多糖链的糖基,位糖链的糖基,位于酶的活性中心于酶的活性中心形成的裂隙中。形成的裂隙中。目目 录录第第 二二 节节 酶促反应的特点与机理酶促反应的特点与机理The Characteristic and Mechanism of Enzyme-Catalyzed Reaction 目目 录录目目 录录一、一
9、、酶促反应的特点酶促反应的特点酶的催化效率通常比非催化反应高酶的催化效率通常比非催化反应高1081020倍,倍,比一般催化剂高比一般催化剂高1071013倍。倍。酶的催化不需要较高的反应温度。酶的催化不需要较高的反应温度。酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应的活化能的活化能(activation energy)。酶比一般催化剂。酶比一般催化剂更有效地降低反应的活化能。更有效地降低反应的活化能。目目 录录反应总能量改变反应总能量改变 非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应的活化能
10、能能量量 反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 活化能活化能:底物分子从初态转变到活化态所需的能量底物分子从初态转变到活化态所需的能量。目目 录录目目 录录一种酶仅作用于一种或一类化一种酶仅作用于一种或一类化合物,或一定的化学键,催化一合物,或一定的化学键,催化一定的化学反应并生成一定的产物。定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或酶的这种特性称为酶的特异性或专一性专一性。*酶的特异性酶的特异性(specificity)(三)酶的高度特异性(专一性)(三)酶的高度特异性(专一性)目目 录录根据酶对其底物结构选择的严格程度不同,根
11、据酶对其底物结构选择的严格程度不同,酶的特异性可大致分为以下酶的特异性可大致分为以下3 3种类型:种类型:目目 录录(四)(四)酶促反应的可调节性酶促反应的可调节性对酶生成与降解量的调节对酶生成与降解量的调节酶催化效力的调节酶催化效力的调节通过改变底物浓度对酶进行调节等通过改变底物浓度对酶进行调节等酶促反应受多种因素的调控酶促反应受多种因素的调控(底物、激素、底物、激素、调节剂等调节剂等),以适应机体对不断变化的内外环境,以适应机体对不断变化的内外环境和生命活动的需要。其中包括三方面的调节。和生命活动的需要。其中包括三方面的调节。目目 录录二、酶促反应的机理二、酶促反应的机理(一)酶(一)酶-
12、底物复合物的形成与诱导契合假说底物复合物的形成与诱导契合假说*诱导契合假说诱导契合假说(induced-fit hypothesis)酶底物复合物酶底物复合物 E+S E+P ES 酶与底物相互接近时,其结构相互诱导、相互酶与底物相互接近时,其结构相互诱导、相互变形和相互适应,进而相互结合。这一过程称为酶变形和相互适应,进而相互结合。这一过程称为酶-底物结合的诱导契合假说底物结合的诱导契合假说目目 录录羧肽酶的诱导契合模式羧肽酶的诱导契合模式 底物底物目目 录录目目 录录目目 录录目目 录录 酶原激活的机理酶原激活的机理酶酶 原原分子构象发生改变分子构象发生改变形成或暴露出酶的活性中心形成或暴
13、露出酶的活性中心 一个或几个特定的肽键断裂,一个或几个特定的肽键断裂,水解掉一个或几个短肽水解掉一个或几个短肽在特定条件下在特定条件下目目 录录赖赖缬缬天天天天天天天天甘甘异异赖赖缬缬天天天天天天天天缬缬组组丝丝甘甘异异缬缬组组丝丝目目 录录 酶原激活的生理意义酶原激活的生理意义避免细胞产生的酶对细胞进行自身消避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化,并使酶在特定的部位和环境中发挥作化,并使酶在特定的部位和环境中发挥作用,保证体内代谢正常进行。用,保证体内代谢正常进行。有的酶原可以视为酶的储存形式。在有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要时,酶原适时地转变成有活性的酶,需要时,酶原适时地转变成有活性的
14、酶,发挥其催化作用。发挥其催化作用。目目 录录四、四、同工酶同工酶(isoenzyme)*定义定义同工酶同工酶是指催化相同的化学反应,是指催化相同的化学反应,而酶蛋白的分子结构而酶蛋白的分子结构、理化性质乃理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。至免疫学性质不同的一组酶。目目 录录乳酸脱氢酶的同工酶乳酸脱氢酶的同工酶 目目 录录*生理及临床意义生理及临床意义在代谢调节在代谢调节上上有重有重要的作用;要的作用;用于解释发用于解释发育过程中阶段特有育过程中阶段特有的代谢特征;的代谢特征;同工酶谱的同工酶谱的改变有助于对疾病改变有助于对疾病的诊断;的诊断;同工酶可以同工酶可以作为遗传标志,用作为遗传标志
15、,用于遗传分析研究。于遗传分析研究。病人血清病人血清LDHLDH同工酶谱的变化同工酶谱的变化1 1酶酶活活性性心肌梗死酶谱心肌梗死酶谱正常酶谱正常酶谱肝病酶谱肝病酶谱2 23 34 45 5目目 录录目目 录录 研究一种因素的影响时,其余各因素均恒定。研究一种因素的影响时,其余各因素均恒定。目目 录录一、酶浓度对反应速度的影响一、酶浓度对反应速度的影响0 V E 当当SE时,时,Vmax=k3 E 酶浓度对反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响 目目 录录二、底物浓度对反应速度的影响二、底物浓度对反应速度的影响研究前提研究前提v 在其他因素不变的情况下,底物浓度对反应在其他因素不变的情况下,底物
16、浓度对反应速度的影响呈速度的影响呈矩形双曲线关系矩形双曲线关系。当底物浓度较低时当底物浓度较低时反应速度与底物浓度成正比;反反应速度与底物浓度成正比;反应为一级反应。应为一级反应。目目 录录随着底物浓度的增高随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速;反应反应速度不再成正比例加速;反应为混合级反应。为混合级反应。目目 录录当底物浓度高达一定程度当底物浓度高达一定程度反应速度不再增加,达最大速度;反应速度不再增加,达最大速度;反应为零级反应反应为零级反应目目 录录目目 录录(一)米氏方程式(一)米氏方程式酶促反应模式酶促反应模式中间产物学说中间产物学说E+S k1k2k3 E SE+P目目 录录
17、S:底物浓度底物浓度V:不同不同S时的反应速度时的反应速度Vmax:最大反应速度最大反应速度(maximum velocity)m:米氏常数米氏常数(Michaelis constant)V max S Km+S 目目 录录米曼氏方程式推导基于两个假设:米曼氏方程式推导基于两个假设:E与与S形成形成ES复合物的反应是快速平衡反应,复合物的反应是快速平衡反应,而而ES分解为分解为E及及P的反应为慢反应,反应的反应为慢反应,反应速度取决于慢反应即速度取决于慢反应即 Vk3ES。(1)S的总浓度远远大于的总浓度远远大于E的总浓度,因此在反应的总浓度,因此在反应的初始阶段,的初始阶段,S的浓度可认为不
18、变即的浓度可认为不变即SSt。目目 录录推导过程推导过程K2+K3 Km(米氏常数)(米氏常数)K1令:令:则则(2)(2)变为变为:(EtES)S Km ES(2)(EtES)SK2+K3ES K1整理得:整理得:目目 录录当底物浓度很高,将酶的活性中心全部饱和时,当底物浓度很高,将酶的活性中心全部饱和时,即即EtES,反应达最大速度反应达最大速度VmaxK3ESK3Et (5)ES EtSKm+S(3)整理得整理得:将将(5)(5)代入代入(4)(4)得米氏方程式:得米氏方程式:VmaxS Km+S V 将将(3)(3)代入代入(1)(1)得得K3EtS Km+S(4)V目目 录录KmS
19、Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度,单位是时的底物浓度,单位是mol/L。2Km+S Vmax VmaxS目目 录录(二)(二)Km与与Vmax的意义的意义目目 录录意义:意义:Vmax=K3 E如果酶的总浓度已知,可从如果酶的总浓度已知,可从Vmax计算计算 酶的酶的转换数转换数(turnover number),即动力学常数,即动力学常数K3。目目 录录(三)(三)m m值与值与maxmax值的测定值的测定m(林贝氏方程)(林贝氏方程)目目 录录2.双倒数作图法双倒数作图法-1/Km 目目 录录三、温度对反应速度的影响三、温度对反应速度
20、的影响q最适温度最适温度 (optimum temperature):酶促反应速度最快时的酶促反应速度最快时的环境温度。环境温度。*低温的应用低温的应用酶酶活活性性0.51.02.01.50 10 20 30 40 50 60 温度温度 C 温度对淀粉酶活性的影响温度对淀粉酶活性的影响 目目 录录四、四、pH对反应速度的影响对反应速度的影响q最适最适pH (optimum pH):酶催化活性酶催化活性最大时的环最大时的环境境pH。0酶酶活活性性 pH pH对某些酶活性的影响对某些酶活性的影响 246810目目 录录五、抑制剂对反应速度的影响五、抑制剂对反应速度的影响 区别于酶的变性区别于酶的变
21、性 抑制剂对酶有一定选择性抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性引起变性的因素对酶没有选择性目目 录录 抑制作用的类型抑制作用的类型不可逆性抑制不可逆性抑制(irreversible inhibition)可逆性抑制可逆性抑制(reversible inhibition):竞争性抑制竞争性抑制 (competitive inhibition)非竞争性抑制非竞争性抑制 (non-competitive inhibition)反竞争性抑制反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition)目目 录录(一一)目目 录录ESSAsCHCHCl+CH2SHCHSHCH2OHE
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