临床生化方法学评价课件.ppt

1、临床生化方法学评价临床生化方法学评价一、与方法学评价有关的几个名词一、与方法学评价有关的几个名词1、真值：、真值：采用一组最可靠的参考方法测得的近似采用一组最可靠的参考方法测得的近似真实的数值。真实的数值。2、定值：、定值：标定的质控材料的已知值。标定的质控材料的已知值。3、准确度：、准确度：指测定结果与真值接近的程度。指测定结果与真值接近的程度。测定的是不准确度，即重复测定的均测定的是不准确度，即重复测定的均值与真值之差，即系统误差，用偏差系数值与真值之差，即系统误差，用偏差系数CB表示。表示。CB=真值真值X真值真值100一般一般CB54 4、精密度：、精密度：指对同一样品重复分析的结果间

2、的符合性。指对同一样品重复分析的结果间的符合性。测定的是不精密度，代表随机误差，用标准测定的是不精密度，代表随机误差，用标准差差(SD)(SD)或变异系数或变异系数(CV)(CV)表示。表示。SD=(XiX)2N 1CV%SDX100一般一般CV55、特异性：、特异性：指只对待测物质起反应，不与其他结构类指只对待测物质起反应，不与其他结构类似的物质反应。似的物质反应。如：血糖测定的四种方法：如：血糖测定的四种方法：6、干扰：、干扰：指标本中存在某些本身不与分析试剂反应指标本中存在某些本身不与分析试剂反应的物质，但却可使待测物测定值偏高或偏低。的物质，但却可使待测物测定值偏高或偏低。但目前又提出

3、：特异性用干扰试验评价。但目前又提出：特异性用干扰试验评价。7、决定性方法：、决定性方法：指经过彻底研究未发现任何不精密和不准确因指经过彻底研究未发现任何不精密和不准确因素的方法，准确度最高，系统误差最小，测定结素的方法，准确度最高，系统误差最小，测定结果为果为“确定值确定值”，与，与“真值真值”最接近。只用于发最接近。只用于发展及评价参考方法和一级标准品。展及评价参考方法和一级标准品。8、参考方法：、参考方法：指经过充分证实认为精密度与准确度稍低于决指经过充分证实认为精密度与准确度稍低于决定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方法。用于鉴定常规方法

4、与二级标准品，及为质控法。用于鉴定常规方法与二级标准品，及为质控血清定值，评价商品试剂盒。血清定值，评价商品试剂盒。9、常规方法：、常规方法：指性能指标符合临床或其它目的需要，指性能指标符合临床或其它目的需要，有适当的分析范围，而且经济适用的分析有适当的分析范围，而且经济适用的分析方法。方法。常规方法在做出评价后，经有关学术组常规方法在做出评价后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法。织认可，可以作为推荐方法。10、医学决定水平：、医学决定水平：又称医学决定性浓度，指在诊断及治又称医学决定性浓度，指在诊断及治疗工作中，对决定疾病诊断或治疗起关键疗工作中，对决定疾病诊断或治疗起关键性作用的某一被

5、测成分的浓度。性作用的某一被测成分的浓度。如：血糖：如：血糖：2.86.7 8.916.8mmol/L低血糖空腹低血糖空腹DM 糖耐量高血糖糖耐量高血糖11、检出限：、检出限：指能与适当的指能与适当的“空白空白”读数相区别的待读数相区别的待测物的最小量。测物的最小量。12、误差：、误差：定义定义：指测定值与真值或定值的不符合性。：指测定值与真值或定值的不符合性。分类分类：(1)系统误差系统误差(SE)：恒定系统误差恒定系统误差(CE)：误差大小与被测物浓度无关。误差大小与被测物浓度无关。比例系统误差比例系统误差(PE)：误差大小与被测物浓度有关。误差大小与被测物浓度有关。(2)偶然误差偶然误差

6、/随机误差随机误差(RE)允许误差允许误差 系统误差：系统误差：定义：定义：指一系列测定结果与真值或靶值指一系列测定结果与真值或靶值相比存在同一倾向的偏离。相比存在同一倾向的偏离。特点：特点：重复检验时，按一定规律重复出重复检验时，按一定规律重复出现，增加测定次数不可消除，但改进方法现，增加测定次数不可消除，但改进方法等可以校正。表示不准确度。等可以校正。表示不准确度。主要见于主要见于：方法误差：方法误差仪器、试剂误差仪器、试剂误差 偶然误差：偶然误差：定义：定义：指以偶然的和不可预料的方式出现的不易测定指以偶然的和不可预料的方式出现的不易测定 的偏差。的偏差。特点：特点：误差的大小或正负相等

7、，在均数两侧对称分布，增加测定次误差的大小或正负相等，在均数两侧对称分布，增加测定次数可以减小，可以控制在一定范围内，但不可避免。表示不精数可以减小，可以控制在一定范围内，但不可避免。表示不精密度。密度。主要见于：主要见于：操作误差操作误差方法的线性范围不够宽方法的线性范围不够宽实验条件随机改变实验条件随机改变 注：引起注：引起SESE与与RERE的因素是相对的。的因素是相对的。允许误差：允许误差：一般定义为一般定义为X X1.96SD1.96SD范围内，即范围内，即9595可信限以内。可信限以内。临床生化方法的选择临床生化方法的选择1 1、选择要求：选择要求：由国际临床化学协会由国际临床化学

8、协会(IFCC)(IFCC)提出提出 实用性：快速、微量实用性：快速、微量 费用低廉费用低廉 方法简便方法简便 安全可靠安全可靠 可靠性：精密度可靠性：精密度 准确度与特异性准确度与特异性 检测能力检测能力临床生化方法的选择临床生化方法的选择2、选择步骤：、选择步骤：查阅文献，选择适宜本实验室的方法查阅文献，选择适宜本实验室的方法 选定候选方法：考虑仪器、试剂、参考物、费用、选定候选方法：考虑仪器、试剂、参考物、费用、效益等，确定候选方法。效益等，确定候选方法。初步实验：初步实验：A.标准曲线及重复性实验标准曲线及重复性实验 B.质控血清或新鲜标本的重复试验质控血清或新鲜标本的重复试验 C.与

9、参考方法比较，分析待测物浓度不同的标本与参考方法比较，分析待测物浓度不同的标本 D.要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求评价实验评价实验一、评价实验的内容与过程：一、评价实验的内容与过程：1、评价前实验：包括候选方法最适条件的研究，如：、评价前实验：包括候选方法最适条件的研究，如：试剂浓度、缓冲液种类、离子强度及试剂浓度、缓冲液种类、离子强度及PH、标本与试、标本与试剂体积比，温度与时间，吸收曲线与波长，线性范剂体积比，温度与时间，吸收曲线与波长，线性范围等。现采用特征曲线表面方法学围等。现采用特征曲线表面方法学(RSM)，利用二，利用二次回归正交设计的

10、原理，减少了测定次数。次回归正交设计的原理，减少了测定次数。2、初步评价实验：批内与天内重复性，回收实验、干、初步评价实验：批内与天内重复性，回收实验、干扰试验。扰试验。3、最后评价实验：天间重复性、方法比较试验，根据、最后评价实验：天间重复性、方法比较试验，根据误差结果判断方法可否接受。误差结果判断方法可否接受。4、评价后实验：临床相关研究，如确定参考值，特殊、评价后实验：临床相关研究，如确定参考值，特殊病人标本的测定。病人标本的测定。5、方法应用：、方法应用：QC等。等。评价实验与分析误差类型的关系评价实验与分析误差类型的关系 分析误差分析误差 的类型的类型 评评 价价 实实 验验 初步评

11、价初步评价 最后评价最后评价偶然误差偶然误差(RE)批内批内/天内重复性天内重复性 天间重复性天间重复性恒定误差恒定误差(CE)干扰干扰与比较方法对比与比较方法对比比例误差比例误差(PE)回收回收三、评价实验三、评价实验 重复性试验重复性试验 回收试验回收试验 干扰试验干扰试验 方法比较试验方法比较试验 检测能力测定检测能力测定（一）重复性试验（一）重复性试验1、定义：、定义：对同一材料分成数份试验样品，进行多次分析测定。对同一材料分成数份试验样品，进行多次分析测定。2、目的：、目的：考察考察RE。3、形式与方法：、形式与方法：批内重复性实验批内重复性实验 天内重复性实验天内重复性实验 天间重

12、复性实验天间重复性实验 病人标本的平行双份测定病人标本的平行双份测定4、分析样品的选择：、分析样品的选择：标准液：标准液：作批内重复性，简便稳定，代表最好的重复性。作批内重复性，简便稳定，代表最好的重复性。冻干质控血清：冻干质控血清：作天间重复性，稳定、方便。作天间重复性，稳定、方便。病人标本：病人标本：混合血清：混合血清：5、分析物浓度的选择：、分析物浓度的选择：医学决定水平。医学决定水平。（二）回收试验（二）回收试验1、定义、定义：分析方法正确测定加入常规分析样品：分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。中的纯分析物的能力。2、目的：、目的：测定测定PE，衡量准确度。，衡量准确

13、度。3、方法：、方法：分析样品：分析样品：病人样品被分析物的纯品标准液病人样品被分析物的纯品标准液 基础样品：基础样品：病人样品相同量的无分析物的溶剂病人样品相同量的无分析物的溶剂 两样品测定结果之差为回收量。两样品测定结果之差为回收量。再求回收率。再求回收率。回收率计算，以测定血清钙为例：回收率计算，以测定血清钙为例：(1)样品制备：样品制备：基础样品：基础样品：血清血清2ml蒸馏水蒸馏水0.1ml分析样品：分析样品：血清血清2ml4mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml分析样品：分析样品：血清血清2ml 25mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml(2)计算公式及计算结果：计算公式及计算结果

14、：加入浓度加入浓度=标准液浓度标准液浓度标准液量标准液量(ml)血清量血清量(ml)+标准液量标准液量(ml)回收浓度回收浓度=分析样品测得浓度基础样品测得浓度分析样品测得浓度基础样品测得浓度回收率回收率(%)=回收浓度回收浓度加入浓度加入浓度100%血清钙回收试验结果血清钙回收试验结果测得浓度测得浓度(mmol/L)加入浓度加入浓度(mmol/L)回收浓度回收浓度(mmol/L)回收率回收率(%)1.701.880.190.1894.72.851.191.1596.6平均平均95.74、回收试验注意事项：、回收试验注意事项：准确吸量准确吸量 作高、中、低三个浓度（线性范围内）的回收实验，作高

15、、中、低三个浓度（线性范围内）的回收实验，计算平均回收率。计算平均回收率。分析样品终浓度最好达医学决定水平。分析样品终浓度最好达医学决定水平。加入标准液的体积要在加入标准液的体积要在10以内。以内。一般标准液浓度比欲增加的浓度至少高一般标准液浓度比欲增加的浓度至少高10倍。倍。最好重复测定几次。最好重复测定几次。病人样品数视具体情况而定。病人样品数视具体情况而定。最好同时用对比方法测回收。最好同时用对比方法测回收。（三）干扰试验（三）干扰试验1、目的：、目的：衡量准确度。加入一定浓度的干扰物则衡量准确度。加入一定浓度的干扰物则形成形成CE，干扰物浓度不同则误差大小不同，但，干扰物浓度不同则误差

16、大小不同，但与被分析物的浓度无关。与被分析物的浓度无关。2、方法：、方法：分析样品：分析样品：病人样品疑有干扰或非特异性反应的物质。病人样品疑有干扰或非特异性反应的物质。基础样品：基础样品：病人样品相同量的无干扰或非特异性反应物质的溶剂病人样品相同量的无干扰或非特异性反应物质的溶剂 测定两样品，结果之差即干扰值。测定两样品，结果之差即干扰值。3、完整的干扰试验包括：、完整的干扰试验包括：初筛试验：确定有无干扰初筛试验：确定有无干扰 干扰程度的定量干扰程度的定量4、可疑干扰物的浓度：、可疑干扰物的浓度：须达到临床有价值的范围，有可能应须达到临床有价值的范围，有可能应达到病理标本的最高浓度值。确定

17、有干扰达到病理标本的最高浓度值。确定有干扰后，应求得最低可疑物浓度值。后，应求得最低可疑物浓度值。5、可疑干扰物：、可疑干扰物：Bil 溶血（溶血（Hb、血细胞组分）、血细胞组分）脂血脂血 防腐剂防腐剂 抗凝剂抗凝剂 药物药物6、消除干扰的方法：、消除干扰的方法：作空白（对照）试验：试剂空白作空白（对照）试验：试剂空白 标本空白标本空白 采用各种物理、化学的方法，分离除去干扰物采用各种物理、化学的方法，分离除去干扰物 双波长或多波长检测双波长或多波长检测（四）方法比较试验（四）方法比较试验1、目的：、目的：考察考察SE(CE+PE），以考察候选方），以考察候选方法是否可被接受的措施之一。法是否

18、可被接受的措施之一。2、方法：、方法：对一组病人的标本用候选方法和对对一组病人的标本用候选方法和对比方法同时测定，最后观察二者之间的差比方法同时测定，最后观察二者之间的差异。异。3、比较方法的选择：、比较方法的选择：在临床生化常规方法的评价时，最好选在临床生化常规方法的评价时，最好选参考方法。参考方法。4、注意事项：、注意事项：试验样品数：多于试验样品数：多于40 重要分析：每个样品最好各测重要分析：每个样品最好各测2次，分两批进次，分两批进行，要在一天内，最好行，要在一天内，最好4h内。两批操作中，样内。两批操作中，样品顺序重排，空白、标准重做。品顺序重排，空白、标准重做。实验的时间间隔：每

19、天实验的时间间隔：每天25个样品，约测个样品，约测20天。天。统计处理：统计处理：配对配对t检验检验 相关与回归分析：相关与回归分析：y=a+bx (a:CE,b:PE,r:两法相关性是否密切两法相关性是否密切)以以GOD-POD法为例，探讨其方法学评价过程法为例，探讨其方法学评价过程1、试剂配方的选择：、试剂配方的选择：GOD浓度：浓度：选用选用180mg/dlGlu溶液作底物溶液。溶液作底物溶液。GOD浓度：浓度：0.5，1，1.5，2，3，4，20u/mlA0.30.20.110203040min(1.5,2,3,4u/ml)1u/ml0.5u/ml选选2u/mlGOD，10min达终点

20、达终点（6min达终点）POD浓度：浓度：底物浓度：底物浓度：180mg/dlGlu溶液溶液400mg/dlGlu溶液溶液POD浓度：浓度：0.025，0.15，0.3，1mg/dl0.15，0.3，1mg/dl0.025mg/dlA0.30.20.1102030405060min选选A更高的更高的0.3mg/dl浓度浓度4-AA浓度：浓度：底物同上，底物同上，4-AA为为3，5，8mg/dl。4-AA浓度 15A20A40A60A30.330.3280.3280.32850.3270.3270.3270.32780.3250.3250.3250.325反应结果一致，故选用反应结果一致，故选用

21、5mg/dl酚浓度：酚浓度：底物浓度同上，酚浓度为底物浓度同上，酚浓度为15，25，50，75，100mg/dl。酚浓度15A20A40A60A150.3100.3100.3100.310250.3200.3200.3200.32050100 0.3250.3250.3250.325选用选用50mg/dl2、干扰物质对血糖的影响、干扰物质对血糖的影响干扰物干扰物血清中干扰物浓度血清中干扰物浓度(mg/dl)血糖血糖(mg/dl)血清血清092.6血清草酸钾血清草酸钾80092.6血清肝素血清肝素4092.0血清血清NaF80092.6血清血清H2O0100.6血清血清Hb100100.0血清血

22、清Bil507100.0血清血清UA10101.7血清血清VitC1095.4血清水杨酸钠血清水杨酸钠10101.1一般认为加入干扰物后血糖测定结果不超过原测定值的一般认为加入干扰物后血糖测定结果不超过原测定值的5 mg/dl可认为无干扰可认为无干扰3、实验条件的选择、实验条件的选择保温时间及呈色后的稳定性保温时间及呈色后的稳定性:(37)A0.30.20.1204060minGlu180mg/dlGlu90mg/dlPH的影响：的影响：PH7.00.1最好最好温度的影响：温度的影响：图形同上图形同上标本的采集及处理：标本的采集及处理：取血后应在取血后应在2030min内分离血清，含糖量可在内

23、分离血清，含糖量可在6h内不变。内不变。4、评价实验：、评价实验：准确性：准确性：.与参考方法与参考方法HK法比较：法比较：本法本法(X)20份结果：份结果：x=126.9mg/dlHK法法(y)20份结果：份结果：x=126.8mg/dly=8.5+0.931x r=0.998 .回收试验：回收试验：结果见下表，回收率在结果见下表，回收率在96105，均值为均值为99。原血浆值原血浆值(mg/dl)加入量加入量(mg/dl)实测值实测值(mg/dl)回收率回收率(%)71.41515.81053029.8994544986060.1100.29086.896135133.299180176.598精密度试验：精密度试验：用标准液试验用标准液试验 用血清试验用血清试验线性范围：线性范围：糖浓度在糖浓度在45450 mg/dl呈线性呈线性与其他方法比较：与其他方法比较：同时测同时测20份结果。份结果。试验方法试验方法均值均值(mg/dl)r回归方程回归方程本法本法126.9试剂盒该法试剂盒该法127.10.999 Y=1+0.994x试剂盒试剂盒O-T法法125.50.998 Y=3+0.966x本室本室O-T法法126.70.998 Y=4.87+0.96x