临床化学检验-课件.ppt

1、临 床 化 学v一、肝功能项目检测v二、肾功能项目检测v三、血脂项目检测v四、糖类项目检测v五、影响生化结果的因素一、肝功能检测v1.1血清总蛋白测定v1.2血清白蛋白测定v1.3血清ALT测定v1.4血清AST测定v1.5血清GGT测定v1.6血清Tbil测定v1.7血清Dbil测定v1.8血清ALP测定1.1 血清总蛋白测定v双缩脲常规法（全自动生化仪）v原理：所有蛋白质分子都含有肽链。在碱性溶液中，肽链与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物。蓝紫色化合物在540nm的吸光度与肽链的数量呈正比关系，可以基计算蛋白质含量。这一反应称双缩脲反应，这种试剂称双缩脲试剂。v双缩脲比吸光度法v原理：按照D

2、oumas方法所规定的配方配置双缩脲试剂、控制反应条件和校准分光光度计的情况下，双缩脲反应的呈色强度时稳定的，可以根据蛋白质双缩脲复合物的比吸光度，直接计算血清总蛋白质浓度。v计算公式：v血清总蛋白（g/L)=测定管吸光度/标准管吸光度蛋白标准液浓度v参考区间：v健康成人走动后，血清总蛋白浓度为6483 g/Lv健康成人静卧时，血清总蛋白浓度为6078 g/L 临床意义v血清总蛋白浓度升高：v血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高。凡体内水分的排除大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩，尤其是急性失水时（入呕吐、腹泻、高热等）变化更为显著，血清总蛋白浓度有时可达100150g/L。又如休克时，由于毛

3、细血管通透性的变化，血浆也可发生浓缩。慢性肾上腺皮质功能减退患者，由于钠的丢失而致继发性水分丢失，血浆也可出现浓缩现象。v血清蛋白质合成增加。大多发生在多发性骨髓瘤患者，此时主要是球蛋白的增加，其量可超过50g/L，总蛋白则可超过100g/L。v血清总蛋白浓度降低：v血浆中水分增加，血浆被稀释。如因各种原因引起的水钠潴留。v营养不良和消耗增加。长期食物中蛋白含量不足或慢性肠道疾病所引起的吸收 不良，使体内缺乏合成蛋白质的原料，或因长期患者消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺功能亢进和恶性肿瘤等，均可造成血清总蛋白浓度降低。v合成障碍，主要是肝功能障碍。肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白蛋白

4、的下降最为显著。v蛋白质丢失。严重烫伤时，大量血浆渗出，或大出血时，大量血液的丢失；肾病综合征时，尿液中长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定量的蛋白质，这些均可使血清总蛋白浓度降低。1.2 血清白蛋白测定v方法方法：溴甲酚绿法，溴甲酚紫法v原理原理：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚 绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准物质比较，可求得血清中白蛋白的浓度。v计算计算：血清白蛋白（g/L）=测定管吸光度/标准管吸光度白蛋白标准液的浓度（g/L）v目前，生化自动分析仪同时测定血清

5、总蛋白（双缩脲法）和目前，生化自动分析仪同时测定血清总蛋白（双缩脲法）和白蛋白（白蛋白（BCG BCG 法），并自动计算出球蛋白浓度和白法），并自动计算出球蛋白浓度和白/球蛋白球蛋白比值。比值。v参考区间参考区间：414岁儿童，血清白蛋白浓度为3854g/Lv 健康成人血清白蛋白浓度为3448g/L临床意义：v血清白蛋白在肝脏合成，血清白蛋白浓度增高常由于严重失水、血浆浓缩所致，并非蛋白质绝对量的增加。临床上，尚未发现单纯白蛋白浓度增加的疾病。v白蛋白浓度降低白蛋白浓度降低的原因与总蛋白浓度降低的原因相同。但有时总蛋白的浓度降低，同时伴有球蛋白浓度的增高。v急性白蛋白浓度降低，主要由于急性大量

6、出血或严重烫伤时的血浆大量丢失。v慢性白蛋白浓度降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍。腹水形成时白蛋白的丢失和肾病是白蛋白从尿液中的丢失。严重时，白蛋白浓度可低于10g/L。白蛋白浓度低于20g/L时，由于胶性渗透压的下降，常可见到水肿等现象。v妊娠时，尤其是妊娠晚期，由于体内对蛋白质的需要量增加，同时又伴有血浆容量增高，血清白蛋白可明显下降，但分娩后可迅速恢复正常。v极少数先天性白蛋白缺乏症患者，由于白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白，但患者不出现水肿。球蛋白浓度增高v临床上常以-球蛋白增高为主。球蛋白增高的原因，除水分丢失的间接原因外，主要有下列因素：v感染性疾病，如结核病、疟疾、黑热病、

7、血吸虫病、麻风病等；v自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热类风湿性关节炎、肝硬化等；v多发性骨髓瘤，此时-球蛋白可增至2050g/L球蛋白浓度降低v球蛋白浓度降低主要是合成减少。v正常婴儿出生后至3岁内，由于肝脏和免疫系统尚未发育完全，球蛋白浓度较低，属于生理性低球蛋白血症。v肾上腺皮质激素和其他免疫抑制剂有抑制免疫机能的作用，会导致球蛋白的合成减少。v低-球蛋白血症或无-球蛋白血症，患者血清中-球蛋白极度低下或缺如。先天性者，仅见于男性婴儿。而后天获得性者，可见于男、女两性。此类患者缺乏体液免疫功能，极易发生难以控制的感染。1.3 血清ALT测定v1.3.1 方法：v速率法（全自

8、动生化仪）；vL-丙氨酸+-酮戊二酸-（ALT）丙酮酸+L-谷氨酸 v丙酮酸+NADH+氢离子-（LDH）L-乳酸+NAD离子v上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在340nm波长监测吸光度下降速率（-A/min），计算出ALT的活力单位。v双试剂法v1.3.2 参考区间：男性：510U/L；女性535U/Lv1.3.3 临床意义v1.3.3.1 ALT活性增高v 肝胆疾病 传染性肝炎、肝癌、中毒性肝炎、脂肪肝和胆管炎等；v 心血管疾病 心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时肝瘀血和脑出血等；v 药物和毒物 氯丙嗪、异烟肼、奎宁、水杨酸制剂及乙醇、铅、汞、四氯化碳或有机磷等引起AL

9、T活性增高。v1.3.3.2 ALT活性降低v 磷酸吡多醛缺乏症 1.4血清AST测定v1.4.1 方法v速率法（全自动生化仪）vL-天门冬氨酸+=酮戊二酸-（AST）草酰乙酸+L-谷氨酸v草酰乙酸+NADH+氢离子-（MDH）L-苹果酸+NAD离子v分光光度计波长340nm，监测 NADH 被氧化引起的吸光度下降速率 （-A/min），该下降速率与AST活性呈正比。v赖氏法v1.4.2 参考区间v 男性：1340U/L;女性：1028U/Lv1.4.3 临床意义v AST在心肌细胞内含量最多，当心肌梗死时，血清中AST活力增高，在发病后612h 之内显著增高，在 48h 达到高峰，约在35天

10、后恢复正常。血清中AST也可来源于肝细胞，各种肝病可引起血清AST的升高，有时可达1200U，中毒性肝炎还可更高。v 肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST的轻度增高。1.5血清GGT测定v1.5.1 方法vL-谷氨酰-3羧基-对硝基苯胺为底物的速率法v重氮反应比色法v以L-谷氨酰-萘胺为底物，在GGT催化下，-谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出游离的-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色化合物。v酶比色法(全自动生化仪)：v L-谷氨酰-3羧基-4-硝基苯胺+甘氨酰甘氨酸-（GGT）L-谷氨酰-甘氨酰甘氨酸+氨基-2-硝基苯甲酸盐v1.5.2 参考区间v 成人：964U/Lv1.5.

11、3 临床意义v人体各器官中GGT含量按肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑的顺序排列。v在肾脏、胰腺和肝脏中，GGT的含量之比为100：8：4。肾脏中GGT含量最高，但肾脏疾病时，血液中该酶活性增高却不明显。有人认为，肾单位病变时，GGT经尿排出，测定尿中酶活力可能有助于诊断肾脏疾患。vGGT主要用于诊断肝胆疾病。原发性肝癌、胰腺癌和乏特壶腹痛时，血清GGT活力显著增高，特别在诊断恶性肿瘤患者有无肝转移和肝癌术后有无复发时，阳性率可达90%。v嗜酒或长期接受某些药物如苯巴比妥、苯妥因钠、安替比林者，血清GGT活性常常升高。口服避孕药会使GGT增高20%。v但是，GGT作为肝癌标志物的特异性较差，急性肝

12、炎，慢性肝炎活动期、阻塞性黄疸、胆道感染、胆石症、急性胰腺炎时都可以升高。1.6血清Tbil与Dbil测定v1.6.1 方法：v改良J-G法（全自动生化仪）v在没有加速试剂存在时，血清与重氮试剂反应所生成的红色偶氮胆红素为直接胆红素。在同样的反应条件下，有加速试剂存在时，血清与重氮试剂反应，所生成的红色重氮胆红素为总胆红素。最后，加入碱性酒石酸溶液，使红色偶氮胆红素（530nm）转变成蓝绿色偶氮胆红素（600nm），进行比色测定。v胆红素氧化酶法v钒酸盐氧化法v1.6.2参考区间v健康成年人血清总胆红素浓度：v 3.417.1mol/L(0.2 1.0mg/dl)v健康成年人血清结合胆红素浓度

13、：v 03.4 mol/L(0 0.2mg/dl)v1.6.3 临床意义v血清总胆红素增高 病毒性肝炎、中毒性肝炎或肝癌、肝内或肝外胆道阻塞、溶血性疾病、新生儿生理性黄疸、Crigler-Najjar综合征、Gilbert病和Dubin-Johnson综合征等。v血清结合胆红素增高 肝内或肝外胆道阻塞、肝细胞损害（特别是疾病后期）、Dubin-Johnson综合征和Rotor综合征等。1.7血清ALP测定v1.7.1 方法v速率法（全自动生化仪）v以磷酸对硝基苯（4-NPP）为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体物质，增进酶促反应速率。4-NPP在碱

14、性溶液中为无色，在ALP催化下，4-NPP分裂出磷酸酰基，生成游离的对硝基苯酚（4-NP）。后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处监测吸光度增高速率，计算出活性单位。v比色法v1.7.2 参考区间v 女性：112岁：500U/L；15岁以上40150U/Lv 男性：112岁：500U/L；1215岁：750U/L；v 25岁以上40150U/L.v1.7.3 临床意义v碱性磷酸酶活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。v血清碱性磷酸酶活力型增高可见于下列疾病：v肝胆疾病 阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌等。v骨骼疾病 由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内

15、所含高浓度的碱性磷酸酶释放入血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。二、肾功能项目检测检测意义:v用于排除和发现肾脏和泌尿道疾病v肾前，肾脏和肾后功能检查 Ureav尿素（Urea）含量的检测见于：肾功能低下、肾前氮质血症（如充血性心力衰竭、休克）、肾后氮血症、胃肠道出血、高蛋白饮食、药物影响（如皮质类固醇类、四环素等）、妊娠后期、重症肝脏功能不全、营养不良、脂性肾病变。Creav肌酐含量的检测见于：（1）增高：肾病初期肌酐值常不高，直至肾实质性损害，血肌酐值才升高。其值升高5倍提示有尿毒症的可能，升高10倍，常见于尿毒症。如

16、果肌酐和尿素氮同时升高，提示肾严重损害，如果尿素氮升高而肌酐不高常为肾外因素所致。（2）降低：肾衰晚期、肌萎缩、贫血、白血病、尿崩症等。UAv样品中尿酸含量的检测见于：（1）增高：血尿酸测定对痛风诊断最有帮助，痛风患者血清中尿酸常增高。核酸代谢增加：如白血病、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症。肾脏疾病：急性或慢性肾炎时，血中尿酸显著增高，其增高程度较非蛋白氮、尿素氮、肌酐更显著，出现更早。由于肾外因素对尿酸的影响较大，故血尿酸升高程度往往与肾功能损害程度不平行。其他：氯仿中毒、四氯化碳中毒、铅中毒、子痫、妊娠反应、饮食中脂肪过多、肥胖、糖尿病等。（2）减少：遗传性黄嘌呤尿症等。三、血脂项目检测检

17、测项目:vTC 总胆固醇vTG 甘油三酯vHDL-C 高密度脂蛋白-胆固醇vLDL-C 低密度脂蛋白-胆固醇vApoA1 载脂蛋白A1vApoB 载脂蛋白BvLp（a）脂蛋白a检测意义:用于心血管疾病的临床观察、干预研究、实验室和流行病学调查。TCv影响TC水平的因素有：年龄与性别：TC 水平往往随年龄上升，但到 70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使TC增高。遗传因素。其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC 升高。v增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇

18、血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性 apoB 缺陷症、多源性高 TC、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。v减少：低总胆固醇也有原发和继发两种，前者常由遗传因素引起如家族性的无或低脂蛋白血症，后者如甲状腺功能亢进、营养不良、慢性消耗性疾病、恶性贫血、溶血性贫血等。TGv样品甘油三酯（TG）含量的检测见于：动脉粥样硬化、冠心病、肾病综合症、糖尿病、甲状腺功能减退、糖原累积症、皮质醇增多症、某些肝胆疾病（如脂肪、肝脏胆汁郁积等）、胰腺炎及家族性高甘油三酯血症等。长期禁食、高脂饮食以及大量饮酒、甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退、严重

19、肝功能障碍等。HDLCvHDLC 降低是临床冠心病的先兆，并能促进动脉样硬化的发展。血清中 HDLC 水平与冠心病发病率呈负相关HDLC降低是临床冠心病的先兆，并能促进动脉样硬化的发展。血清中HDLC水平与冠心病发病率呈负相关。HDL-C下降也多见于脑血管病糖尿病、肝炎、肝硬化等。高TG血症往往伴以低 HDL-C。肥胖者 HDL-C也多偏低。吸烟可使其下降，饮酒及长期体力活动会使其升高。LDL-Cv样品低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量的检测见于：动脉硬化的危险因素、协助诊断高脂蛋白血症、家族性低脂蛋白血症、无脂蛋白血症等。增高：见于高脂蛋白血症、冠心病、肾病综合征、慢性肾功能衰竭、肝病和糖

20、尿病等，也可见于神经性厌食及怀孕妇女。减低：见于营养不良、慢性贫血、骨髓瘤、急性心肌梗死、创伤和严重肝病等。ApoAl ApoBv载脂蛋白A1(ApoAl)作为人体血浆高密度脂蛋白分子中载脂蛋白的主要成分,在人体生理和病理过程中发挥着重要的作用.它具有胆固醇逆向转运功能,从而对动脉粥样硬化有抵抗与治疗作用.最近研究表明,它还具有其他生化作用,包括抗氧化作用、抗炎、抗内毒素作用等.这些功能的发现将促使ApoA1成为临床上防治动脉粥样硬化、炎症及内毒素血症等的新方法。v 载脂蛋白B 存在于低密度脂蛋白的表面，细胞识别和摄取LDL主要通过识别载脂蛋白B实现。所以，载脂蛋白B增多时，即使LDL水平正常

21、，也可使冠心病发病率增高。LP（a）vLP（a)水平主要决定于遗传，家族性高LP（a)与冠心病发病倾向相关。男女之间不同年龄组间环境饮食与药物对LP（a)水平的影响不明显。吸烟也无影响，但严重肝病可使它下降，急性时相反应可使它上升。v现在将高LP（a)水平看作动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素，LDL-C 较高时，高LP（a)的危险性就更高 四、糖类项目检测检测项目:vGLU 葡萄糖v1,5-AG 1,5-脱水-D-山梨醇vHBA1C 糖化血红蛋白 vFMN 果糖胺/糖化血清蛋白vNAG N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测意义:用于诊断糖尿病、监测治疗过程。Gluv样品葡萄糖（Glu）含量的检测见于：糖

22、尿病、动脉粥样硬化、冠心病、肾病综合症、甲状腺功能减退、胆道梗阻、饮酒过量、急性失血以及家族性高胆固醇血症、甲状腺功能亢进、严重肝功能衰竭、溶血性贫血、感染和营养不良等。HbA1cv糖化血红蛋白（HbA1c）与血中葡萄糖的含量成正比关系，可以间接反映血糖浓度的改变，同时也反映机体糖代谢的状态。作为糖尿病的病情和治疗监测指标，能反映过去2-3月血糖控制的平均水平。对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。五、影响生化结果的因素v5.1检验仪器及试剂对生化结果的影响v5.2生理因素对生化检验结果的影响v5.3饮食对生化检验结果的影响v5.4标本对生化检验

23、结果的影响5.1检验仪器及试剂对生化结果的影响v5.1.1检验仪器 不管设备仪器怎样更新，但维护和使用这些设备是我们的一项日常工作。首先要熟读使用手册，了解各个部件的工作原理。5.1检验仪器及试剂对生化结果的影响v5.1.2 生化试剂 生化检验的方法一旦确定，我们就得关注厂家的试剂质量和有效期。我们按法规选择有三证的大厂家的试剂产品，但仍需注意一下问题。v（1）有效期指未污染且储存在28的环境。v（2）开盖使用后就不能说无污染，酶活力和抗体效价可因使用时间下降，可使灵敏度或工作曲线发生改变。v（3）碱性试剂可吸收空气中的二氧化碳可改变试剂的酸碱度。综上所述，环境、试剂使用时间等诸多因素使我们使

24、用的试剂灵敏度发生改变，我们的工作曲线需经常校准。5.2生理因素对生化检验结果的影响v5.2.1 年龄 新生儿肝脏缺乏葡萄糖酸转移酶，不能将为结合胆红素转化为结合胆红素，因此血清总胆红素和间接胆红素水平比正常成人搞；正常生长期儿童由于骨骼生长，使得成骨母细胞分泌碱性磷酸酶增加，因此生长期儿童的碱性磷酸酶活性比成人要高3倍左右。因此在临床工作中应针对这些项目在不同的年龄段制定相应的参考范围。v5.2.2 性别 不同性别其体内的性素水平不同，并且生育期女性的性激素水平还随其处在月经期的不同阶段而有明显变化；此外和肌肉代谢有关的项目，如肌酐和肌酸激酶，其血清水平男性明显高于女性，所以我们需针对性别制

25、定相应的参考范围。v5.2.3 情绪 情绪紧张、激动可影响神经-内分泌功能，使血清游离脂肪酸、乳酸、血糖等升高。故采血前患者情绪应保持稳定，同时护理人员应向患者做适当解释，以消除患者不必要的疑虑和恐慌。v5.2.4 妊娠 当女性处于妊娠阶段时，由于血容量增加导致血液稀释，使微量元素水平明显降低，妊娠期代谢需求增加使脂肪动员增加，血清甘油三酯（TG）和总胆固醇（TCHOL）特别是低密度脂蛋白（LDL-C）大大增加；妊娠期胎盘生成ALP、甲胎蛋白（AFP）、急性时相期蛋白（CRP）等，使他们相应的检查结果升高，妊娠时特殊的胜利过程，临床医疗人员查看孕妇的检测结果时应充分考虑妊娠的影响。3.饮食对生

26、化检验结果的影响v饮食一方面影响血液中多种物质成分，许多化学成分如GLU、TG、ALP、磷等容易受到饮食成分特别是最近期食谱的影响；抽血前一天进食高蛋白食品会导致UREA、UA等结果偏高、但对Cr影响不大。另一方面进食后血中脂质特别是TG的升高，可导致血清或血浆呈乳白色浑浊，这可给比色、比浊或滴定等带来一定的干扰。因此临床生化血样原则上须坚持空腹采血，但是如果让患者空腹时间过长超过16h，因为过度饥饿反而会使血清ALB、TRF、GLU、补体C3含量下降，而血清胆红素因清除率减少而上升。5.4标本对生化检验结果的影响v5.4.1 标本的采集及处理阶段 原则上晨起空腹时采集标本，尽量减少昼夜节律带

27、来的影响。目前生化标本采集多选用坐位或卧位，血管暴露明显者不宜使用止血带，如果使用不宜超过1min。在日常监测中，溶血、脂血及黄疸时影响检验结果的主要因素，尤其是溶血影响最大，最常见。当发现标本溶血时，应及时与临床联系，了解病人是否出现体内溶血，否则溶血标本应弃检，重新采血。标本采集或收集后，原则上应立即处理及检测，普通标本室温放置3045min后应分离血清（血浆）放置，时间不得超过3h。v5.4.2 标本结果的报告与反馈阶段 认真仔细的对每个测定结果进行分析和审核时发出正确检验报告的重要环节。审核结果主要是对异常结果、假性结果的分析取舍。酶类多项升高、个别降低甚至接近零值，提示酶活力过高导致酶反应底物耗尽，应检查反映曲线加以判断。v综上所述，影响生化检验结果的因素很多亦很复杂，并非检验人员单方面能够控制，同时临床实验室应建立自己的质量管理体系，制定一套完整的操作程序，从而保证每个检验项目的可靠和准确