探究培养液中酵母菌种群数量的变化课件.ppt

1、探究培养液中酵母探究培养液中酵母菌种群数量的变化菌种群数量的变化 沁县一中沁县一中 402 402班班 孙征宇孙征宇（1）酵母菌）酵母菌 酵母菌是单细胞真核生物。生长周期短，增殖速度快，还可以用酵母菌作为实验材料研究（探究酵母菌的呼吸方式，判断细胞的死活,探究膜的通透性）基基 础础 回回 扣扣种群数量的变化包括增长、波动、稳定、下降种群数量的变化包括增长、波动、稳定、下降等等“S”型曲线有型曲线有K值，即环境容纳量。值，即环境容纳量。种群数量的增长受到许多环境因素（如温度、种群数量的增长受到许多环境因素（如温度、培养液的培养液的pH、培养液的养分种类和浓度、代谢产物、培养液的养分种类和浓度、代

2、谢产物等）的影响。等）的影响。（2）种群数量的变化）种群数量的变化血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。种仪器。计数时，常采用样方法。计数时，常采用样方法。（3）血球计数板）血球计数板（4）探究性实验）探究性实验探究实验设计时要遵循的原则：科学性原则、可行探究实验设计时要遵循的原则：科学性原则、可行性原则、对照原则、单一变量原则和平行重复原则。性原则、对照原则、单一变量原则和平行重复原则。种群的数量变化有一定的规律。在理想条件下，种群呈种群的数量变化有一定的规律。在理想条件下，种群呈“J”型型增长，在有限的环境下，种群呈增长，在

3、有限的环境下，种群呈“S”型增长。型增长。酵母菌生长周期短，增殖速度快且世代间不重叠，在实验室酵母菌生长周期短，增殖速度快且世代间不重叠，在实验室条件下，用液体培养基培养酵母菌，可以观察酵母菌种群数条件下，用液体培养基培养酵母菌，可以观察酵母菌种群数量随时间变化的情况。量随时间变化的情况。培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系（1）实验原理）实验原理:培养液配制培养液配制：配制质量分数为：配制质量分数为5的葡萄糖溶液（葡萄的葡萄糖溶液（葡萄糖糖20g，1000 mL水），分装到水），分装到5个烧杯中（个烧杯中（200mL/烧烧杯）杯）灭菌：灭菌：用高压蒸汽

4、灭菌锅将培养液和取样、计数时所用用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。的滴管分别灭菌。贴标签。接种接种(无菌操作）无菌操作）：接种时要在酒精灯附近，用灭菌干：接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的净的1mL刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每个酵母菌母液，往每个烧杯中加入。（烧杯中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多多)培养：培养：将烧杯置于将烧杯置于 28的恒温箱中培养的恒温箱中培养（2）步骤）步骤:A组为组为实验组，装培养液实验组，装培养液10mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环境温环境温度度28

5、。B组装培养液组装培养液10mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度5，与与A组组形成温度条件对照形成温度条件对照。C组不装培养液，只装无菌水组不装培养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度28，与，与A组组形成营养条件对照。形成营养条件对照。（3）设计实验）设计实验：计数：首先取样，每计数：首先取样，每天取样时间大体一致，并要天取样时间大体一致，并要遵守无菌操作规范。作规范。每次取样前要试管振荡摇匀(目的是使培养液中目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，以保证估算的准确性，减少误差的酵母菌均匀分布，以保证估算的准确性，减少误差)，正确地使用正确地

6、使用1mL刻度吸管将刻度吸管将lmL酵母菌培养液移入酵母菌培养液移入1支干净支干净的试管里，然后的试管里，然后用滴管吸取1滴培养液滴在已盖在血球计数板网格上的盖玻片的边缘，待培养液自行渗入并充满网格后，再放在显微镜下进行细胞计数，后立即将数据填到，再放在显微镜下进行细胞计数，后立即将数据填到记录表格中。记录表格中。参考参考1 1：一次实验数据记录表：一次实验数据记录表 （4）计数）计数参考参考2 2：画画出出A A、B B、C C各个处理的曲线图各个处理的曲线图在这个探究活动中用到了在这个探究活动中用到了4 4个科学方法：个科学方法：（1）数学模型法；（2）抽样检测法；（3）显微观察法；（4）

7、微生物培养法。此外，学生通过亲自研究一个真实的种群，加深了对种群数量变化知识的理解，并且培养了收集、整理、分析数据的能力。血球计数板计数法血球计数板计数法 (常用的微生物计数方法)优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.13），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为又称为总菌计数法总菌计数法。血球计数板 血球计数板的规格通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台

8、。中间的通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。(所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是所以无

9、论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的相同的)每个大方格边长为每个大方格边长为1 mm，则每个大方格面积为，则每个大方格面积为1mmX1mm=1 mm。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1 mm,所以所以每个计数室的体积为每个计数室的体积为0.1 mmX 1 mmX 1mm=0.1mm,每个大格每个大格有有400个小格，所以每个小方格体积为个小格，所以每个小方格体积为0.1mm/400=1mm/4000 mm=1/4000,000 ml。其计算方法如下其计算方法如下11625的计数板计算公式 细胞数细胞数/ml=(100小格内的

10、细胞数小格内的细胞数/100)40010000稀释倍数稀释倍数 设：每个中方格的菌数为设：每个中方格的菌数为A，则，则每小格平均菌数每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 A1+A2+A3+A4+A5样品中的菌数样品中的菌数/ml=X 4000,000 X 稀释倍数稀释倍数 80 设：每个中方格的菌数为设：每个中方格的菌数为A，则，则每小格平均菌数每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4）/100 A1+A2+A3+A4样品中的菌数样品中的菌数/ml=X 4000,000 X 稀释倍数稀释倍数 10022516的计数板计算公式 细胞数细胞数/ml=(80小格内的细胞数小格内的细

11、胞数/80)40010000稀释倍数稀释倍数 1 1稀释：稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。2 2镜检计数室：镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。操作步骤操作步骤 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。器材器材 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴边缘滴一小滴（不宜（不宜过过多）多），使菌液沿缝隙，使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计

12、数室均能充满菌液。室均能充满菌液。注意注意:不可有气泡产生不可有气泡产生;静置静置510分钟即可计数分钟即可计数.3 3加样品加样品 4显微镜计数将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。若选用若选用25251616规格规格的计数板则每个计数室选的计数板则每个计数室选5 5个中方格，个中方格，可选可选4 4个角和中央的中格（即个角和中央的中格（即8080个小格），若选用个小格），若选用16162525规格规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的的计数板，则

13、数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即四个中方格，（即100100小格）中的菌体进行计数小格）中的菌体进行计数。注意事项注意事项:1.在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数;2.计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体;3.一般样品稀释度要求每小格内约有一般样品稀释度要求每小格内约有510个菌体为宜个菌体为宜;4.计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量;5.对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻

14、两边及顶角计数对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数(如遇酵如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数)。5 5清洗血球计数板清洗血球计数板血球汁数板使用后血球汁数板使用后,用自来水冲洗用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用或用95%的乙醇的乙醇,无无水乙醇水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物物.若不干净若不干净,则必须则必须重复清洗直到干净为止重复清洗直到干净为止.