大肠菌群检验技术课件.ppt
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- 大肠菌 检验 技术 课件
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1、大肠菌群检验技术由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在便污染有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。国家标准采用
2、三步法国家标准采用三步法即:即:乳糖发酵试验乳糖发酵试验 分离培养分离培养 证实试验证实试验样品稀释后,选择三个稀释度,样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。酵管。361培养培养482h,观,观察是否产气。察是否产气。将产气发酵管培养物转种于将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,伊红美蓝琼脂平板上,361培养培养18-24h,观察,观察菌落形态。菌落形态。挑取平板上的可疑菌落,进行革挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管酵管361培养培养242h,观察,观察产气情况。产气情况。根据证实为
3、大肠杆菌阳性的管根据证实为大肠杆菌阳性的管数,查数,查MPN表,报告每表,报告每100ml(g)大肠菌群的)大肠菌群的MPN值。值。具体操作参见GB4789.3-94 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 原国家商检局制订的行业标准,等效采用美国原国家商检局制订的行业标准,等效采用美国FDA的标准方法,用于对出口食品中的大肠杆的标准方法,用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法菌进行检测。本方法采用两步法.推测试验.证实试验 样品稀释后,选择三个稀释度,每样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管个稀释度接种三管LST肉汤。肉汤。361培养培养482h,观
4、察是否产,观察是否产气。气。将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中,)肉汤管中,361培培养养482h,观察是否产气。以,观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查产气为阳性。查MPN表,报表,报告每告每ml(g)样品中大肠菌群的样品中大肠菌群的MPN值。值。1MPN检索表检索表 2初发酵和证实试验初发酵和证实试验 3产气量与倒管产气量与倒管 4挑选菌落挑选菌落 5抑菌剂抑菌剂 1MPN检索表:检索表:MPN 为最大可能数为最大可能数(Most Probable Number)的简称。这种方法,对样品进行连续系列进行稀释,的简称。这种方法,对样品进行连续系
5、列进行稀释,加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。MPN检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀释度,则表内数字应相应降低或增加释度,则表内数字应相应降低或增加10倍。注意倍。注意国家标准和行业标准中所附国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是表所用稀释度是不同的,而且结果报告单位也不相同。不同的,而且结果报告单位也不相同。2初发酵和证实试验:初发酵和证实试验:无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步无论是国家标准
6、的三步法还是行业标准的两步法,都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验,培法,都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验,培养基的配制略有不同,但都是为了证实培养物是否养基的配制略有不同,但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义,即符合大肠菌群的定义,即“在在37分解乳糖产酸产分解乳糖产酸产气气”。初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,经过证实试验后,有时可能成为阴性。有数据表明,经过证实试验后,有时可能成为阴性。有数据表明,食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实试验相差较大。因此,在实际检测工作中,证实试试验
7、相差较大。因此,在实际检测工作中,证实试验是必需的。验是必需的。3产气量与倒管:产气量与倒管:在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑小的气泡。如果对产酸但未产气的
8、乳糖发酵如有疑问时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上问时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,而应作进一步试验。浮,即应考虑可能有气体产生,而应作进一步试验。4挑选菌落:挑选菌落:国家标准中,需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝国家标准中,需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离,对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。由于平板分离,对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。由于大肠菌群是一群细菌的总称,在平板大肠菌群菌落的色泽、大肠菌群是一群细菌的总称,在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠菌更为复杂和多样,而且与大肠菌群的形态等方面较大肠菌更为复杂和多样,而且
9、与大肠菌群的检出率密切相关。国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离检出率密切相关。国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基,在该平板上,大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无培养基,在该平板上,大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时,检出率最高;红色、粉红色菌落检出率较低。光泽时,检出率最高;红色、粉红色菌落检出率较低。另外,挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系,另外,挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系,只挑取一个菌落,由于机率问题,尤其当菌落不典型时,只挑取一个菌落,由于机率问题,尤其当菌落不典型时,很难避免假阴性的出现。所以挑菌落一定要挑取典型菌落,很难避免假阴性的出现。所以挑菌落一定要挑取典型菌
10、落,如无典型菌落则应多挑几个,以免出现假阴性。如无典型菌落则应多挑几个,以免出现假阴性。历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料精品课件欢迎使用自读教材自读教材填要点填要点 一、铁路,更多的铁路一、铁路,更多的铁路 1地位地位 铁路是铁路是 建设的重点,便于国计民生,成为国民经济建设的重点,便于国计民生,成为国民经济发展的动脉。发展的动脉。2出现出现 1881年,中国自建的第一条铁路年,中国自建的第一条铁路唐山唐山 至胥各庄铁至胥各庄铁路建成通车。路建成通车。1888年,年,宫廷宫廷专用铁路落成。专用铁路落成。交通运输交通运输开平开平 3发展发展 (1)原因:原因:甲午战争以后列强激烈争夺在华铁
11、路的甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 。修路成为中国人修路成为中国人 的强烈愿望。的强烈愿望。(2)成果:成果:1909年年 建成通车;民国以后,各条商路修筑建成通车;民国以后,各条商路修筑权收归国有。权收归国有。4制约因素制约因素 政潮迭起,军阀混战,社会经济凋敝,铁路建设始终未入政潮迭起,军阀混战,社会经济凋敝,铁路建设始终未入正轨。正轨。修筑权修筑权救亡图存救亡图存京张铁路京张铁路 二、水运与航空二、水运与航空 1水运水运 (1)1872年年,正式成立,标志着中国新式航运业的诞生。正式成立,标志着中国新式航运业的诞生。(2)1900年前后,民间兴办的各种轮船航运公司近百家,几乎都是年前
12、后,民间兴办的各种轮船航运公司近百家,几乎都是在列强排挤中艰难求生。在列强排挤中艰难求生。2航空航空 (1)起步:起步:1918年,附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始年,附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始研制研制 。(2)发展:发展:1918年,北洋政府在交通部下设年,北洋政府在交通部下设“”;此后十年间,航空事业获得较快发展。;此后十年间,航空事业获得较快发展。轮船招商局轮船招商局水上飞机水上飞机筹办航空事宜筹办航空事宜处处 三、从驿传到邮政三、从驿传到邮政 1邮政邮政 (1)初办邮政:初办邮政:1896年成立年成立“大清邮政局大清邮政局”,此后又设,此后又设 ,邮传正式脱离海关
13、。邮传正式脱离海关。(2)进一步发展:进一步发展:1913年,北洋政府宣布裁撤全部驿站;年,北洋政府宣布裁撤全部驿站;1920年,中国首次参加年,中国首次参加 。邮传部邮传部万国邮联大会万国邮联大会 2电讯电讯 (1)开端:开端:1877年,福建巡抚在年,福建巡抚在 架设第一条电报线,成为中国自架设第一条电报线,成为中国自办电报的开端。办电报的开端。(2)特点:进程曲折,发展缓慢,直到特点:进程曲折,发展缓慢,直到20世纪世纪30年代情况才发生变年代情况才发生变化。化。3交通通讯变化的影响交通通讯变化的影响 (1)新式交通促进了经济发展,改变了人们的通讯手段和新式交通促进了经济发展,改变了人们
14、的通讯手段和 ,转变了人们的思想观念。转变了人们的思想观念。(2)交通近代化使中国同世界的联系大大增强,使异地传输更为便交通近代化使中国同世界的联系大大增强,使异地传输更为便捷。捷。(3)促进了中国的经济与社会发展,也使人们的生活促进了中国的经济与社会发展,也使人们的生活 。台湾台湾出行出行方式方式多姿多彩多姿多彩合作探究合作探究提认知提认知 电视剧电视剧闯关东闯关东讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家,讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家,从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。一家从
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