微生物感染的实验诊断课件.ppt

1、微生物感染的实验诊断微生物感染的实验诊断 诊断的理念诊断的理念:诊断的原理诊断的原理 诊断的策略诊断的策略 诊断的技术方法诊断的技术方法Laboratory Diagnosis of Microbial InfectionWhat is a Diagnosis?医学的理念：医学的理念：诊断的理念：诊断的理念：Evolvement of Medical ModeMedical modeBiomedical BiopsychosocialConceptRemove of diseases in BiologyMaintenance of life quality in Biology,psycho

2、logy,and sociology FocusTreatmentPrevention:integration of Prevention,Diagnosis,Treatment and rehabilitationDistribution of Social resourceCentral-hospital-directedCommunity networks of medical serviceMethodExperience-basedEvidence-basedBiopsychosocial mode预防预防 I 病因控制病因控制减缓发生减缓发生减少危害减少危害预防性诊断：预防性诊断：

3、监测监测早期诊断：早发现早期诊断：早发现 康复性诊断：功能康复性诊断：功能治疗性诊断：病因、药物、治疗性诊断：病因、药物、治疗治疗康复康复健康诊断：预测、监控健康诊断：预测、监控What is a Medicine and Diagnosis?医学与诊断的理念医学与诊断的理念 健康科学健康科学/医学：通过包括生物学、心理学和社会学医学：通过包括生物学、心理学和社会学在内的系统手段，最大限度地维护人类的健康。在内的系统手段，最大限度地维护人类的健康。诊断：是健康科学中的一个重要环节，提供维护人诊断：是健康科学中的一个重要环节，提供维护人类的健康所需的各种信息。类的健康所需的各种信息。What i

4、s a Diagnosis in Biopsychosocial medical mode?诊断的理念：提供人体解剖、生理、病理等，也就诊断的理念：提供人体解剖、生理、病理等，也就是与健康或疾病相关的各种信息是与健康或疾病相关的各种信息 诊断的原理：通过表象分析推断内在状态诊断的原理：通过表象分析推断内在状态 诊断的策略：分析的逻辑与思路诊断的策略：分析的逻辑与思路 诊断的方法：技术措施诊断的方法：技术措施Categorization of Diagnosis按诊断目的分类：按诊断目的分类：健康健康性诊断（性诊断（Healthy diagnosis）预防性诊断（预防性诊断（preventive

5、 diagnosis）治疗治疗性诊断（性诊断（therapeutic diagnosis）按诊断方法分类按诊断方法分类:物理学物理学诊断（诊断（physical diagnosis）生理学生理学诊断（诊断（physiologic diagnosis）影像影像学诊断（学诊断（imageologic diagnosis）病理学病理学诊断（诊断（pathologic diagnosis）实验室实验室诊断（诊断（laboratory diagnosis）按诊断信息按诊断信息种类：种类：生物学诊断（生物学诊断（Biological diagnosis）心理学诊断（心理学诊断（psychological

6、diagnosis)社会学诊断（社会学诊断（sociological diagnosis）诊断诊断的目的的目的提供哪些信息？提供哪些信息？生理状态信息生理状态信息 预测疾病发生及条件预测疾病发生及条件 确定病因确定病因 制定治疗方案制定治疗方案 追踪治疗效果追踪治疗效果 药物监测药物监测 判断预后判断预后 制定康复方案制定康复方案 其它其它预防预防治疗治疗康复康复医学的内容 遗传易感性遗传易感性 病因（病原微生物）病因（病原微生物）治疗药物（药敏试治疗药物（药敏试验）验）追踪疗效追踪疗效 药物监测药物监测 判断预后判断预后 制定康复方案制定康复方案 其它其它诊断诊断感染的诊断感染的诊断医学诊断

7、的基本原则医学诊断的基本原则 预测与推测判断的重要性：假设是进行预测与推测判断的重要性：假设是进行检查的必要前提检查的必要前提 逐步检查与分析：每次检查方法的选定逐步检查与分析：每次检查方法的选定与结果的分析判断均依赖于上一次的检与结果的分析判断均依赖于上一次的检查方法与结果查方法与结果 综合各种因素进行分析判断：单一指标综合各种因素进行分析判断：单一指标得出的判断要慎重得出的判断要慎重Basic Principles of Medical Diagnosis-3 elements of medical laboratory science Indicators-presentational

8、phenomena of diseases:core(golden),peripheral,associated Indicators according to the significance such as Symptomic and signic,physiologic,iconographical,histopathological,cytological,biochemical,molecular biological changes,etc Methods:sensitivity,specificity,simplicity,speediness Explanation-intri

9、nsic mechanisms of diseases:Status of human body,Etiological factors,Process of evolvement Basic Principles of Medical Laboratory Diagnosis-Selection of Indicators Specificity of indicators:core(golden)and peripheral,direct and indirect,specific and non-specific Detectability of indicators:Combinati

10、on of multiple indicatorsBasic strategies of Laboratory Diagnosis for Infectious DiseasesOn detecting targetsl Pathogenic Diagnosisl Serologic DiagnosisOn diagnostic aimsl Primary diagnosisl Confirming diagnosisl Complementary diagnosisOn needed timel General diagnosisl Rapid diagnosis微生物学诊断的基本策略微生物

11、学诊断的基本策略 感染性疾病的标记感染性疾病的标记 病原学诊断病原学诊断（病原微生物相关标记（病原微生物相关标记）活病原体（分离培养与鉴定）活病原体（分离培养与鉴定）病原体（形态学检查）病原体（形态学检查）相关产物相关产物 Ag检测（免疫学技术）检测（免疫学技术）核酸检测（分子生物学技术）核酸检测（分子生物学技术）其他成分检测：酶、特殊成分其他成分检测：酶、特殊成分 血清学诊断血清学诊断-特异性特异性Ab的检测的检测 机体反应标记机体反应标记 非特异性反应标记非特异性反应标记：症状体征、生理生化指标、免：症状体征、生理生化指标、免疫学指标疫学指标 特异性反应标记特异性反应标记：Ab的检测的检测

12、微生物分离培养与鉴定微生物分离培养与鉴定基本原理：基本原理：Kochs PostulatesGolden standard for the diagnosis of infectious diseasesDisadvantages:程序繁琐，费时费力程序繁琐，费时费力Development trends：automatic cultivation systemProcedure of microbial isolation culture and identificationSpecimenIsolation cultureIdentificationDrug sensitivity test

13、Supplementary test将病原微生物从病灶中分离出来，将病原微生物从病灶中分离出来，获得纯培养获得纯培养确定病原微生物的分类学地位：确定病原微生物的分类学地位：科、属、种、群、型科、属、种、群、型筛选敏感药物筛选敏感药物形态学检查形态学检查 利用不同微生物或其感染病灶的形态学利用不同微生物或其感染病灶的形态学特征的差异对其进行识别、确认或区别特征的差异对其进行识别、确认或区别 不同标本以及不同微生物采用不同技术不同标本以及不同微生物采用不同技术方法方法 简便快速，但可靠性不高，通常不作为简便快速，但可靠性不高，通常不作为独立检查方法独立检查方法Ag检测（免疫学技术）检测（免疫学技术

14、）检测微生物的检测微生物的Ag来确定其种属来确定其种属 简便快速，可靠性较高，可作为独立检查简便快速，可靠性较高，可作为独立检查方法，但应注意非特异性反应方法，但应注意非特异性反应 IFA：胞内微生物：胞内微生物Ag ELISA：游离微生物：游离微生物Ag 其他：其他：RIA、凝集试验、沉淀试验、补体、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、病毒血球凝集试验等结合试验、病毒血球凝集试验等 蛋白质芯片：高通量检测蛋白质芯片：高通量检测核酸检测（分子生物学技术）核酸检测（分子生物学技术）检测微生物的核酸来确定其种属检测微生物的核酸来确定其种属 简便快速，可靠性较高，可作为独立检简便快速，可靠性较高，可作

15、为独立检查方法，但应注意非特异性反应查方法，但应注意非特异性反应 DNA：PCR、Southern blotting RNA:RT-PCR、Northern blotting 基因芯片：高通量检测基因芯片：高通量检测其他成分检测：其他成分检测：酶试验：快速脲酶试验（酶试验：快速脲酶试验（HP）、）、特殊成分检测：真菌多糖，细菌特殊成分检测：真菌多糖，细菌LPS、胞壁酸、胞壁酸、吡啶二羧酸吡啶二羧酸(DAP芽抱芽抱)、分枝、分枝菌酸（分枝杆菌属、诺卡氏菌属、棒状菌酸（分枝杆菌属、诺卡氏菌属、棒状杆菌属和红球菌属等）。杆菌属和红球菌属等）。Regularities of antibody resp

16、onses and serologic diagnosisAg1Ag22-16wIgG1IgG2潜伏期潜伏期症状期症状期恢复期恢复期康复期康复期Titer of AbsIgM1IgM2Serologic procedures Detection of specific IgM by single serum for early diagnosis of primary infections Detection of total specific Abs or IgG by paired sera for retrospective diagnosis:antibody titer in the

17、 convalescent phase serum sample is at least 4-fold higher than the titer in the acute-phase serum sample,the patient is considered to be infectedMethods Of Serologic Detection ELISA/RIA IFA/EIA Complement fixation assay Hemagglutination inhibition Neutralization Latex agglutination Western blotting

18、 Protein chipBasic Principles of Medical Diagnosis-Methods Sensitivity:最小检出量最小检出量 Specificity:真实性真实性 Simplicity:简便实用简便实用 Speediness：快速：快速Selection of Strategies and methods Purposes of diagnosis Suspected pathogens Type of Specimens State of patient:in biopsychosocial medical model诊断技术方法的发展诊断技术方法的发展

19、 单一指标检测：单一指标检测：ELISA、IFA等等 多种指标联合检测：多种指标联合检测：多种指标同时检测：多种指标同时检测：Northern blot、Western blot等技术等技术 高通量检测（基因组或蛋白质组检测）：高通量检测（基因组或蛋白质组检测）：Biochip 技术技术 DNA芯片芯片 蛋白质芯片蛋白质芯片Procedure of Westhern blotLabeling ImmunoassayExtraction of ProteinsSDS-PAGEBlottingProtein marker例：例：SLE抗核抗体普检测抗核抗体普检测Procedure of South

20、ern blotRestriction enzyme DigestionProbe DNALabelingHybridizationDNA ExtractionElectroph-oresisBlottingAgaroseMembraneDenaturationDenaturation例：肝活检细胞中整合例：肝活检细胞中整合HBV DNA 检测检测Procedure of Northern blotProbe preparationlabelingHybridizationRNA extract电泳电泳Blotting变性变性AgaroseMembraneBasic Principles of

21、 Medical Laboratory Diagnosis-explanation of results Summarization of all factors including clinic and other indicators based on the examination Communication between Lab and clinic Recommendation of further inspects 药物敏感试验药物敏感试验直接涂片镜检直接涂片镜检免疫学试验免疫学试验分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术分离培养分离培养形态学形态学试验试验生化试验生

22、化试验免疫学试验免疫学试验动物试验动物试验明确诊断明确诊断初步诊断初步诊断血清学诊断血清学诊断感染的实验诊断程序感染的实验诊断程序菌落鉴定菌落鉴定辅助诊断辅助诊断避免杂菌污染避免杂菌污染治疗前采取治疗前采取不同期采取不同部位标本不同期采取不同部位标本采集部位病变明显采集部位病变明显注意运送保存注意运送保存微生物学检查标本的采集和运送原则微生物学检查标本的采集和运送原则临床因素临床因素实验室因素实验室因素根据检查方法选取不同标本根据检查方法选取不同标本标本必须新鲜标本必须新鲜运送注意保存运送注意保存Transportation and preservation To be detected as

23、 soon as possible Low temperature:4 for a temporary preservation and 70 for a long-term preservation Proper transfer Media:Broth for bacteria Buffered glycerol saline for viruses第一节第一节 细菌学诊断细菌学诊断细菌学检查标本的采集与送检细菌学检查标本的采集与送检用于分离培养的标本：用于分离培养的标本：血清学诊断的标本：血清学诊断的标本：采取急性期、采取急性期、防止细菌死亡防止细菌死亡双份血清双份血清避免杂菌污染避免杂

24、菌污染用抗菌素以前用抗菌素以前不同期不同标本不同期不同标本标本必须新鲜标本必须新鲜运送注意保存采集病变明显部位运送注意保存采集病变明显部位细菌学检查标本的采集和运送细菌学检查标本的采集和运送临床因素临床因素实验室因素实验室因素检查方法检查方法标本必须新鲜标本必须新鲜运送注意保存运送注意保存药物敏感试验药物敏感试验直接涂片镜检直接涂片镜检分离培养分离培养与鉴定与鉴定生化试验生化试验免疫学试验免疫学试验动物试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术血清学诊断血清学诊断形态学鉴定形态学鉴定细菌感菌检查程序细菌感菌检查程序菌落鉴定菌落鉴定不染色标本

25、的检查：细菌动力不染色标本的检查：细菌动力单染色法：细菌形态单染色法：细菌形态复染色法：细菌形态、结构与鉴别复染色法：细菌形态、结构与鉴别 革革兰兰染色法（染色法（Gram stain）抗酸染色法（抗酸染色法（acid-fast stain）特殊染色法：负染色、鞭毛染色特殊染色法：负染色、鞭毛染色细菌的形态学检查法细菌的形态学检查法Light microscope Standard light microscope Dark-field microscope Phase-contrast microscope fluorescence microscope Confocal scanning

26、microscopeElectron microscope Transmission electronic microscope Scanning electronic microscopeMicroscopy革兰染色法革兰染色法（Gram stain）方法：方法：1、结晶紫初染、结晶紫初染 1 min 2、卢戈氏碘液媒染卢戈氏碘液媒染 1 min 3、95酒精脱色酒精脱色 30sec1 min 4、稀释石炭酸复红复染稀释石炭酸复红复染 1 min 结果：结果：紫色紫色G 红色红色G革兰染色的原理和意义革兰染色的原理和意义原理：原理：G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色牢固等电点低，带正电荷的

27、碱性燃料作色牢固 G+细胞壁肽聚糖层多，细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁脂质含量高细胞壁脂质含量高 G+含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物成大分子复合物意义：意义：鉴定细菌鉴定细菌 与致病性有关与致病性有关 参考选择抗菌药物参考选择抗菌药物方法：方法：1、石炭酸复红初染：加热、石炭酸复红初染：加热35min，水洗水洗2、3%5%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色30s，水洗水洗3、碱性美蓝复染、碱性美蓝复染30s，水洗。水洗。4、干后镜检、干后镜检结果：结果：抗酸杆菌抗酸杆菌红色红色 非抗酸杆菌非抗酸杆菌蓝色蓝色原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中原理

28、：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固的复合物，的分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色能抵抗脱色医学意义：鉴定细菌医学意义：鉴定细菌抗酸染色抗酸染色（acid-fast stain）Direct microscopic examinationN.Meningococcus in cerebrospinal fluid-hemolytic streptococcus in bloodProcedure of bacterial isolation culture and identificationIsolation culture Colony ob

29、servation Morphological observation Biochemical test Virulence test Immunological test(typing)Microphage test(typing)Animal test Molecular biological testSpecimenAgar plate Pure cultureIdentificationDrug sensitivity testMethods of bacterial identification Morphological:shape,arrangement,size,stainin

30、g,structure,Physiological:characteristics in nutrition,Biochemical test,growth,Aerobic vs.anaerobic,colony appearance(smooth,rough,mucus type,hemolytic,pigment),Immunological:antigenicity Molecular biological:analysis of DNA,RNA,protein,Virulence:test for toxin production,Animal test,对对糖糖的的发发酵酵对对蛋蛋白

31、白质质的的发发酵酵枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验尿素酶试验尿素酶试验甲基红试验甲基红试验吲哚试验吲哚试验硫化氢试验硫化氢试验单糖发酵试验单糖发酵试验VP试验试验其其他他试试验验常见的生化反应常见的生化反应标本：标本：双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期，血清中抗体效价升高急性期，血清中抗体效价升高4倍者方有意义倍者方有意义种类种类原理：原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。化，可作为某些传染病的辅助诊断。

32、凝集试验：凝集试验：沉淀试验：沉淀试验：补体结合试验：补体结合试验：中和试验：中和试验：肥达肥达试验、外斐试验试验、外斐试验梅毒梅毒VDRL、RPR试验等试验等抗链抗链“O”试验等试验等Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等血清学诊断血清学诊断Serologic Diagnosis of bacterial infection Detection of Antibodies against the infectious agents Methods:agglutination test,precipitation test,complement fixation test,neutrali

33、zation test,ELASA Widal test:agglutination test to detect Abes against Salmonella Antistreptolysin O(ASO)test:a neutralization test to detect Abes against hemolysin O secreted by-hemolysis StreptococcusAntistreptolysin O(ASO)test A neutralization test to detect Abs against hemolysin O secreted by-he

34、molysis Streptococcus for post-infectious diagnosis e.g.Rheumatic arthritis and glomerulonephritis 1:250+;1:400 active Widal test-retrospective serodiagnosis Agglutination test in test tubes to detect Abs against Salmonella for complementary diagnosis of Typhoid fever O antigen(common antigen):1:80

35、early phase H antigen:1:160,for determining the speciesSerum1:201:401:801:1601:320NSO antigen0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlH of Typhi0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlH of paratyphi A0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlH of paratyphi B0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml 0.5ml 37,O/N，endpoint Widal test动物实验动物实验 细菌分

36、离培养细菌分离培养 测定细菌毒力测定细菌毒力 制备免疫血清制备免疫血清 建立动物模型建立动物模型快速诊断快速诊断 Direct microscopic examination Antigen detection DNA or RNA detection 自动化检测系统自动化检测系统诱因：诱因：破坏细胞壁的物质破坏细胞壁的物质 症状：症状：慢性为主，症状不典型慢性为主，症状不典型 培养：培养：高渗培养基（油煎蛋样菌落）高渗培养基（油煎蛋样菌落）镜检：镜检：多型性多型性L型细菌的诊断型细菌的诊断药敏试验药敏试验 琼脂纸片扩散法（琼脂纸片扩散法（K-B法）法）稀释法稀释法:最低抑菌浓度（最低抑菌浓度

37、（MIC)E-testSusceptibility testnTube dilution methodlMinimal inhibitory concentration(MIC):the smallest amount of chemotherapeutic agent required to inhibit the growth of organism in vitronDisk diffusion methodlZone of inhibition(ZOI):the correlation of ZOI and MIC has been established by FADE Test.T

38、his commercially-prepared strip creates a gradient of antibiotic concentration when placed on an agar plate 病毒感染的诊断病毒感染的诊断直接形态学检查直接形态学检查分离培养分离培养与鉴定与鉴定免疫学试验免疫学试验动物试验动物试验分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术血清学诊断血清学诊断形态学鉴定形态学鉴定病毒的检查程序病毒的检查程序标本采集与送检标本采集与送检用于分离培养的标本：用于分离培养的标本：血清学诊断的标本：血清学诊断的标本：采取急性期、采取急性期、防止病毒灭活防止

39、病毒灭活双份血清双份血清病毒的形态学检查病毒的形态学检查 细胞病变细胞病变(Cytopathic effect,CPE)包涵体（包涵体（Inclusion Bodies）电镜观察电镜观察巨细胞病毒包涵体巨细胞病毒包涵体动物接种动物接种鸡胚接种鸡胚接种组织培养组织培养器官培养器官培养移植培养移植培养 细胞培养细胞培养 原代细胞培养原代细胞培养二倍体细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养传代细胞培养三大三大培养方法培养方法常规分离与鉴定常规分离与鉴定病毒的培养病毒的培养 动物（动物（Animals）鸡胚（鸡胚（Embryonated eggs）组织培养（组织培养（Organ and tissue cu

40、lture）Organ culture胚胎胚胎Embryo cultureCell culture:原代细胞原代细胞 传代细胞传代细胞 双倍体细胞双倍体细胞常用的细胞培养常用的细胞培养类类型型 名名称称 原原代代细细胞胞培培养养 恒恒河河猴猴肾肾细细胞胞培培养养，人人胚胚肾肾、肺肺等等细细胞胞培培养养，鸡鸡胚胚成成纤纤维维细细胞胞培培养养 二二倍倍体体细细胞胞株株 WI-38（人人胚胚肺肺细细胞胞株株），HL-8（恒恒河河猴猴胚胚细细胞胞株株）传传代代细细胞胞系系 Hela 细细胞胞，Detroit 细细胞胞（胸胸骨骨髓髓细细胞胞系系），Chang C/I/L/K（人人结结膜膜 C，肠肠 I，

41、肝肝 L 与与肾肾K 细细胞胞系系），Vero（绿绿猴猴肾肾细细胞胞系系），BHK-21（幼幼地地鼠鼠肾肾细细胞胞系系）1、CPE2、红细胞吸附红细胞吸附正常细胞正常细胞病病变变细细胞胞病毒在细胞内增殖病毒在细胞内增殖的指标的指标 Observation of CPE Hemadsorption test Interference test Viral antigen detection-Labeled immunostainingViral detection in cell cultureCPE of HSVSyncytia of CMVNormal HEK cellinclusion b

42、odies of babies virusCytopathic effects:cell rounding due to HSV;syncytium formation or cell fusion due to RSV in human embryo fibroblast cellsHemadsorption test Glycoproteins(hemagglutinin,HI)of virus can adsorb erythrocytes of animals,e.g.influenza virusInterference test Indicates exist of target

43、virus by interfering virus with CPE or hemadsorptionCMV early antigen demonstrated in nuclei of human embryo fibroblasts by immunofluorescence assay(IFA)The envelope glycoprotein I in VZV labeled with McAb and anti-mouse IgG conjugated with 15 nm colloidal gold 免疫扩散免疫扩散中和试验中和试验补体结合试验补体结合试验血凝抑制试验血凝抑制

44、试验标记免疫技术标记免疫技术病毒的血清学诊断病毒的血清学诊断病毒的快速诊断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体包涵体电镜电镜-病毒颗粒病毒颗粒免疫荧光免疫荧光-AgELISA-Ab分子生物学技术分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blotbiochipDetection of viral genetic material PCR(Polymerase chain reaction)or RT-PCR(Reverse transcriptase polymerase chain reaction)Southern（DNA),Northern(RNA),and dot b

45、lotting DNA genome hybridization in situ(cytochemistry)Electrophoretic mobilities of RNA for segmented RNA viruses(Electrophoresis)Restriction endonuclease cleavage patterns第三节第三节 真菌学诊断真菌学诊断直接形态学检查直接形态学检查分离培养分离培养与鉴定与鉴定免疫学试验免疫学试验动物试验动物试验分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术血清学诊断血清学诊断形态学鉴定形态学鉴定真菌的检查程序真菌的检查程序菌落鉴定

46、菌落鉴定标本标本 浅部感染真菌取毛发等标本浅部感染真菌取毛发等标本 深部感染真菌取痰、血液、脑脊液等深部感染真菌取痰、血液、脑脊液等 直接镜检：直接镜检：标本（标本（皮屑皮屑、毛发）、毛发）10%KOH 假丝酵母菌假丝酵母菌-取材涂片，革兰染色取材涂片，革兰染色 隐球菌隐球菌-脑脊液脑脊液离心，沉淀涂片，墨汁负染离心，沉淀涂片，墨汁负染 结果判断：结果判断：阴性不能排除感染。阴性不能排除感染。组织中分隔分组织中分隔分枝的菌丝为曲霉枝的菌丝为曲霉;粗大、不分隔或不分枝的菌丝为粗大、不分隔或不分枝的菌丝为毛霉。毛霉。皮肤癣菌菌丝肥大粗长为处于活跃状态。皮肤癣菌菌丝肥大粗长为处于活跃状态。酵母型和二

47、相型真菌在组织内常为孢子。酵母型和二相型真菌在组织内常为孢子。表皮癣菌的检出表皮癣菌的检出新生隐球菌脑脊液涂片新生隐球菌脑脊液涂片Sabouraud 培养基培养基快速诊断快速诊断 血清学诊断血清学诊断 核酸的诊断核酸的诊断 毒素的检测毒素的检测分离培养与鉴定分离培养与鉴定鉴定鉴定菌落观察菌落观察形态学观察形态学观察Comparison of diagnostic strategy of 3 kinds of microorganismsvirusBacteriumFungusIsolation and identification+Microscopic examination+Detecti

48、on of antigens+Detection of Nuclear acids+Detection of IgM by single serum+Detection of IgG by paired sera+commonly used,+used,occasionally used,seldom used复习要点复习要点 概念：病原学诊断、血清学诊断、分离培养、细菌鉴定、概念：病原学诊断、血清学诊断、分离培养、细菌鉴定、药物敏感试验、药物敏感试验、K-BK-B法、法、E-testE-test、MICMIC、细胞培养、血细、细胞培养、血细胞吸附、胞吸附、FIAFIA、病毒血凝抑制试验、病毒

49、血凝抑制试验、微生物学检查标本采集的基本原则微生物学检查标本采集的基本原则 微生物学检查的基本策略和方法及其基本原理微生物学检查的基本策略和方法及其基本原理 细菌病原学检查的基本程序和方法细菌病原学检查的基本程序和方法 病毒分离培养与鉴定的方法病毒分离培养与鉴定的方法 真菌感染真菌感染微生物学检查的常用方法微生物学检查的常用方法复习思考题复习思考题 微生物学检查所用标本采集的基本原则是什么？微生物学检查所用标本采集的基本原则是什么？微生物学检查的基本策略有哪些？微生物学检查的基本策略有哪些？微生物学检查的基本方法有哪些？其基本原理是什么？微生物学检查的基本方法有哪些？其基本原理是什么？细菌、真

50、菌和病毒性疾病的实验诊断策略有何不同？为细菌、真菌和病毒性疾病的实验诊断策略有何不同？为什么？什么？微生物学检查常用方法有哪些？它们在细菌、真菌和病微生物学检查常用方法有哪些？它们在细菌、真菌和病毒性疾病的实验诊断中有何相同点和不同点？毒性疾病的实验诊断中有何相同点和不同点？你对感染性疾病诊断的内涵和价值是如何理解的？你认你对感染性疾病诊断的内涵和价值是如何理解的？你认为循证医学理念下的感染性疾病诊断与以往有何不同？为循证医学理念下的感染性疾病诊断与以往有何不同？课外阅读书目课外阅读书目 Hawley LBHawley LB，微生物与感染性疾病微生物与感染性疾病，中信出版，中信出版社，社，20