玉米小斑病抗性鉴定课件.ppt
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- 玉米 小斑病 抗性 鉴定 课件
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1、学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。1 1、玉米小斑病的主要症状特征观察。、玉米小斑病的主要症状特征观察。2 2、玉米小斑病的接种方法。、玉米小斑病的接种方法。3 3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。玉米小斑病(玉米小斑病(Helminthosporium maydis)是是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害,也是我温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害,也是我国玉米生产上的主要病害之一,流行年份往往造成严国玉米生产上的主要病害之一,流行年份往往造成严重损失。选育抗病自交系和杂交种,是防治小斑病最重损失。选育抗病自交
2、系和杂交种,是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病,通常经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病,通常从下部叶片开始向上蔓延,先从叶面产生褐色小点,从下部叶片开始向上蔓延,先从叶面产生褐色小点,后扩大成后扩大成23mm的褐色病斑,病斑受叶脉限制,常的褐色病斑,病斑受叶脉限制,常常成不规则形。发病适温为常成不规则形。发病适温为2530。根据小斑病菌侵染特点的不同,可将小斑病菌划分为根据小斑病菌侵染特点的不同,可将小斑病菌划分为O小种和小种和T小种两个生理小种。小种两个生理小种。T小种对小种对T型细胞质有专化型细胞质有专化毒性,故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。毒性,故育
3、种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。玉米对小斑病抗性表现亦有两种,一是多基因控制,表玉米对小斑病抗性表现亦有两种,一是多基因控制,表现为病斑数量少,在保湿条件下,病斑形成的孢子少,现为病斑数量少,在保湿条件下,病斑形成的孢子少,孢子形成时间较长。二是由隐性单基因孢子形成时间较长。二是由隐性单基因rhm控制,表现控制,表现为小的褪绿病斑。为小的褪绿病斑。鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定,鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定,大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为可靠。可靠。(一)所需用品(一)所需用品1、材料:供试
4、玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。材料:供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。玉米小斑病菌种,玉米小斑病菌种,T小种的培养物;上一季感染小种的培养物;上一季感染O小小种小斑病的玉米植株病叶。种小斑病的玉米植株病叶。2、仪器用具:高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接仪器用具:高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。3、药品试剂:药品试剂:75%酒精、酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等。琼脂、马铃薯等。用具用具(二
5、)操作方法(二)操作方法1.苗期接种鉴定苗期接种鉴定(1)菌种的培养)菌种的培养病原菌的分离病原菌的分离选取新鲜病叶作为分离材料,在灭菌室内进行操作。先将选取新鲜病叶作为分离材料,在灭菌室内进行操作。先将病斑剪成病斑剪成45mm2大小,约大小,约3040块,然后分别将病组织小块置块,然后分别将病组织小块置于于0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒1min,立即取出,按无菌操作方法投,立即取出,按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次,每次入无菌水中清洗三次,每次23min。最后以无菌操作方法,。最后以无菌操作方法,将病斑组织按正方形四点排列,栽种在将病斑组织按正方形四点排列,栽种在PDA平板培养基(去
6、皮平板培养基(去皮马铃薯马铃薯20g,葡萄糖,葡萄糖1020g,琼脂,琼脂1720g,水,水100ml)上,置)上,置2530 温箱中培养约温箱中培养约7天。天。菌种的纯化菌种的纯化 选取培养性状典型的菌落,按无菌操作方法移植选取培养性状典型的菌落,按无菌操作方法移植到斜面培养基上(每个典型菌落移到斜面培养基上(每个典型菌落移3管),然后再放管),然后再放在在25 恒温下培养。待产生孢子后,选取菌落较一致恒温下培养。待产生孢子后,选取菌落较一致的斜面的斜面12管,挑取一点,观察孢子的形状、分隔数、管,挑取一点,观察孢子的形状、分隔数、脐点特点。然后计测孢子大小。确认纯种后,再用斜脐点特点。然后
7、计测孢子大小。确认纯种后,再用斜面培养基扩大培养,让其产生大量孢子后,置冰箱中面培养基扩大培养,让其产生大量孢子后,置冰箱中保存待用。保存待用。菌丝形态菌丝形态(2 2)孢子悬浮液的制备)孢子悬浮液的制备 用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中,用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中,猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤去菌丝及培养基,滤液用蒸馏水稀释,调至在去菌丝及培养基,滤液用蒸馏水稀释,调至在100倍倍显微镜下每个视野有显微镜下每个视
8、野有5个孢子浓度的悬浮液待用。个孢子浓度的悬浮液待用。(3)接种病菌)接种病菌 接种小斑病的适宜时期是在玉米接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左右。个叶片左右。接种前在配制好的孢子液中加入接种前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖,以促进病蔗糖,以促进病菌孢子萌发。接种菌液量是每株菌孢子萌发。接种菌液量是每株12ml。用微型喷雾。用微型喷雾器均匀喷雾,喷后立即以塑料袋套盆保温,置器均匀喷雾,喷后立即以塑料袋套盆保温,置25左左右温度下保湿右温度下保湿24小时。小时。(4)病情鉴定和分级标准)病情鉴定和分级标准 接种后接种后710天即可进行病情鉴定。鉴定应在同一天内完成。天即可进行病情鉴定。鉴定应在
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