植物生物工程实验二(植物DNA的提取)课件.ppt

1、植物生物工程实验植物植物DNADNA提取、质量检测提取、质量检测及特定基因片段操作及特定基因片段操作综合实验二郝大海郝大海实验目的了解植物DNA提取方法，熟悉操作步骤掌握植物大分子操作注意事项及试剂用具准备方法掌握DNA质量紫外分光光度计检测方法了解PCR原理，熟悉操作步骤掌握核酸的琼脂糖电泳检测方法 保证保证DNADNA一级结构的完整性一级结构的完整性 排除其它分子的污染排除其它分子的污染 RNARNA、蛋白质、多糖等、蛋白质、多糖等DNA提取的原则提取的原则实验原理（DNA提取）DNA存在部位主要存在于细胞主要存在于细胞核中，线粒体和核中，线粒体和叶绿体中也少量叶绿体中也少量存在存在基因组

2、基因组DNADNA的提取的提取 CTABCTAB法法 SDSSDS法法质粒质粒DNADNA的提取的提取 碱裂解法碱裂解法 煮沸法煮沸法线粒体、叶绿体线粒体、叶绿体DNADNA的提取的提取 差速离心结合差速离心结合SDSSDS裂解法裂解法DNA提取的方法提取的方法在浓氯化钠溶液在浓氯化钠溶液(1(12mol/L)2mol/L)中中,DNA,DNA核蛋白的溶解核蛋白的溶解度很大度很大,RNA,RNA核蛋白的溶解度很小核蛋白的溶解度很小;而在稀氯化钠溶而在稀氯化钠溶液液(0.14mol/L)(0.14mol/L)中中,DNA,DNA核蛋白的溶解度很小核蛋白的溶解度很小,RNA,RNA核核蛋白的溶解度

3、很大蛋白的溶解度很大.因此因此,可利用不同浓度的氯化钠可利用不同浓度的氯化钠溶液将溶液将DNADNA核蛋白和核蛋白和RNARNA核蛋白从样品中分别抽提出核蛋白从样品中分别抽提出来来.l分离得到核蛋白后分离得到核蛋白后,需进一步将蛋白等杂质除去需进一步将蛋白等杂质除去,常采用的去除蛋常采用的去除蛋白的方法有白的方法有3种种:用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液,使其乳化使其乳化,然后离心然后离心除去变性蛋白质除去变性蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间,而而DNA溶于上层水相溶于上层水相.用两倍体积用两倍体积95%乙

4、醇溶液将乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出钠盐沉淀出来来.如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀,得到的是游离的得到的是游离的DNA.用十二烷基硫酸钠用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性等去污剂使蛋白质变性,与核酸分离与核酸分离,从而从材料中直接提取出从而从材料中直接提取出DNA.用苯酚处理用苯酚处理,然后离心分层然后离心分层,DNA或溶于上层水相或溶于上层水相,或存在于中间或存在于中间残留物中残留物中,蛋白变性后则停留在酚层内蛋白变性后则停留在酚层内.吸出上面水层吸出上面水层,将其注入两将其注入两倍体积的倍体积的95%乙醇溶液中乙醇溶液中,得到白色纤维状得到白色纤维状DN

5、A沉淀沉淀CTAB法原理CTABCTAB溶液在低于溶液在低于15 15 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于1515。CTAB CTAB提取缓冲液的经典配方提取缓冲液的经典配方 组份组份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA（pH8.0）NaCl CTAB-巯基乙巯基乙醇醇 终浓度终浓度 100 mM 20 mM 1.4M2%(W/V)0.1%（V/V）使用前加使用前加入入SDS法原理原理SDS SDS 阴离子去垢剂阴离子去垢剂 高温（5565）裂解细胞，蛋白变性，染

6、色体离析高盐高盐(KAc(KAc或或NHNH4 4Ac)Ac)或降低温度（冰浴）或降低温度（冰浴）使蛋白质及多糖杂质沉淀上清液中的上清液中的DNADNA用酚用酚/氯仿抽提氯仿抽提乙醇沉淀水相中的DNASDS 组份组份 Tris-HCl（pH8.0）EDTA（pH8.0）NaCl SDS 终浓终浓度度 100mM 20 mM1.4M2%(W/V)SDS提取缓冲液的配方提取缓冲液的配方DNA提取基本步骤提取基本步骤 l多糖的去除：多糖的去除：l多糖水解酶多糖水解酶l蛋白质的去除：蛋白质的去除：l酚酚/氯仿抽提氯仿抽提l使用变性剂（使用变性剂（SDS、异硫氰酸胍、异硫氰酸胍等）等）l蛋白酶处理蛋白酶

7、处理l多酚的去除：多酚的去除：l加入还原剂：加入还原剂：-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等l加入易与酚类结合的试剂：如加入易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG，可防止酚类与，可防止酚类与DNA的结合的结合l盐离子的去除：盐离子的去除：l70的乙醇洗涤的乙醇洗涤p 若长期储存建议使用若长期储存建议使用TE缓冲液溶解缓冲液溶解p pH值为值为8.0，可防止，可防止DNA发生酸解发生酸解DNA质量检测紫 外 分 光 光 度 计 检 测 法紫 外 分 光 光 度 计 检 测 法嘌呤和嘧啶的母环含有共轭双键，因此嘌呤和嘧啶的母环含有共轭双键，因此也有紫

8、外吸收现象，且在也有紫外吸收现象，且在260nm260nm和和280nm280nm处也存在吸收峰。蛋白质中含苯环的氨处也存在吸收峰。蛋白质中含苯环的氨基酸在这两个波长下也会发生光吸收。基酸在这两个波长下也会发生光吸收。因此，通过因此，通过260nm260nm和和280nm280nm下样品的吸收下样品的吸收值比率可判断核酸纯度值比率可判断核酸纯度A：测：测DNA：纯的纯的DNA样品样品OD260/OD280应为应为1.8，OD260mOD230应大于应大于2.0。1)OD260/OD280大于大于1.9时，表明有时，表明有RNA污染。污染。2)小于小于1.6时，表明样品中存在蛋白质或酚污染；时，

9、表明样品中存在蛋白质或酚污染；3)OD260/OD230小于小于2.0时，表明溶液中有残存的盐和小分时，表明溶液中有残存的盐和小分子杂质，如核苷酸、氨基酸、酚等。子杂质，如核苷酸、氨基酸、酚等。注：注：可能可能出现既含蛋白质又含出现既含蛋白质又含RNA的的DNA溶液比值为溶液比值为1.8的的情况。情况。测定结果分析测定结果分析琼脂糖电泳琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNADNA、RNARNA分分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用利用DNADNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到

10、分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。分离混合物的目的。DNADNA分子在高于其等电点的溶液中分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNADNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。大小和构型是主要的影响因素。DNADNA分子的迁移速度与分子的迁移速度与其相对分子量成反比。其相对分子量成反比。DNADNA、RNARNA在荧光染料溴乙锭在荧光染料溴乙锭(EB)(EB)嵌入碱基平面之间后，嵌入碱基平面之间后，DNADN

11、A、RNARNA样品在紫外光激发下，可发出红色荧光，荧光样品在紫外光激发下，可发出红色荧光，荧光强度与核酸含量成正比。使用一系列已知的不同浓度强度与核酸含量成正比。使用一系列已知的不同浓度DNADNA溶液作标准对照，可比较出被测溶液作标准对照，可比较出被测DNADNA溶液浓度。溶液浓度。注意：此法的比较主要基于目测，是估计水平。注意：此法的比较主要基于目测，是估计水平。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium(Ethidium bromide,EB)bromide,EB)染色，在紫外光下至少可以检出染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng1-10ng的

12、的DNADNA条带，从而可以确定条带，从而可以确定DNADNA片段在凝胶中的位置。此外，片段在凝胶中的位置。此外，还可以从电泳后的凝胶中回收特定的还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNADNA条带，用于以条带，用于以后的克隆操作后的克隆操作根据OD260定量：測定260nm吸光值，OD=1.0代表值如下：a.ds DNA(double stranded DNA)=50 mg/mlb.ss DNA(single stranded DNA)=40 mg/mlc.oligonucleotide=33 mg/mlPCR实验原理聚合酶链式反应聚合酶链式反应(polymerase chain reactio

13、n,PCR)(polymerase chain reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增特定基因或是一种在体外快速扩增特定基因或DNADNA序列的方法，故序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。又称为基因的体外扩增法。在待扩增的在待扩增的DNADNA片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNADNA扩增扩增2n2n倍。倍。DNA复制（复制（replication）起始起始 解旋解旋 引物酶结合引物酶结合延伸延伸连接连接终止终止解链方向解链方向3 3 5 3 5 3 5 3 5 3

14、 3 5 3 ParameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml(optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM 10mM1 unit25100l仪器药品1.5ml1.5ml离心管；离心管；5ml5ml离心管；研磨棒；离心管；研磨棒；5ml5ml吸头；吸头；1000ul1000ul吸头吸头（盒）；（盒）；20

15、0ul200ul吸头（盒）；吸头（盒）；10ul10ul吸头（盒）；吸头（盒）；5ml5ml移液器；移液器；1000ul1000ul移液器；移液器；200ul200ul移液器；移液器；30ul30ul移液器；移液器；2ul2ul移液器；移液器；试剂瓶；量筒试剂瓶；量筒恒温水浴锅；高速离心机；紫外分光光度计；电泳仪；电恒温水浴锅；高速离心机；紫外分光光度计；电泳仪；电泳槽；酸度计；电子天平；泳槽；酸度计；电子天平；PCRPCR仪仪CTABCTAB；NaClNaCl；TrisTris；HClHCl；H H3 3BOBO4 4；EDTAEDTA；NaOHNaOH；PVPPVP；琼脂；琼脂糖；糖；EB

16、EB；引物；引物；dNTPdNTP；TaqTaq酶；酶；EBEB实验步骤试剂配制试剂配制贮存液贮存液最终含量最终含量100mlTris（121.14）1 M12.114g1M Tris HCl,pH 8.0先用蒸馏水溶解加至先用蒸馏水溶解加至90ml左右，再用左右，再用HCl调整调整pH至至8.0，定容至，定容至100ml贮存液贮存液最终含量最终含量100mlEDTA（292.25）0.5 M14.613g0.5M EDTA,pH 8.0先用蒸馏水，再加入先用蒸馏水，再加入NaOH（固体）调（固体）调pH至至8.0，定容至，定容至100ml贮存液贮存液最终含量最终含量100mlNaCl（58.

17、44）5 M29.22g蒸馏水蒸馏水定容至定容至100ml5M NaCl贮存液贮存液最终含量最终含量100mlCTAB2%2g5M NaCl1.4M28ml0.5M EDTA20mM4ml1M Tris HCl pH8.0100mM10mlPVP1%1g蒸馏水蒸馏水定容至定容至100ml2CTAB贮存液贮存液最终含量（最终含量（10ml）3mlCTAB1g0.3g5M NaCl1.4ml0.42ml蒸馏水蒸馏水8.6ml2.58ml10%CTAB贮存液贮存液最终含量最终含量100ml1M Tris HCl,pH 8.010 mM10 ml0.5 M EDTA,pH 8.01 mM2 ml蒸馏水

18、蒸馏水定容至定容至1000 mlT10E1贮存液贮存液最终含量（最终含量（1000ml）100mlTris54g5.4gH3BO427.5g2.75g0.5 M EDTA,pH 8.020ml2 ml蒸馏水蒸馏水定容至定容至100 ml5TBE异丙醇；异丙醇；70%70%乙醇；乙醇；90%90%乙醇；乙醇；10mg/ml EB10mg/ml EB贮存液贮存液最终含量（最终含量（100ml）4.2ml异戊醇异戊醇4ml168ul氯仿氯仿96ml4032ul抽提液抽提液1M Tris HCl；0.5M EDTA；5M NaCl；T10E1以及以及所有需使用的离心管，各种吸头均需灭菌所有需使用的离心

19、管，各种吸头均需灭菌操作流程操作规程操作规程1.1.称取称取100mg100mg新鲜叶片，置于预冷新鲜叶片，置于预冷1.5ml1.5ml离心管中，加入离心管中，加入液氮，研为细粉。加入液氮，研为细粉。加入350l350l新鲜新鲜2 2CTABCTAB缓冲液，缓冲液，再仔细研磨。（再仔细研磨。（CTABCTAB用于抽提用于抽提DNADNA）2.2.用用350l350l新鲜新鲜2 2CTABCTAB缓冲液，冲洗研磨棒，加入缓冲液，冲洗研磨棒，加入2l2l巯基乙醇，混匀。巯基乙醇，混匀。6565水浴水浴4545分钟，每分钟，每1515分分钟摇动一次。冷却至室温，静置钟摇动一次。冷却至室温，静置2 2

20、分钟。分钟。3.3.每支离心管加入每支离心管加入700l700l氯仿：异戊醇（氯仿：异戊醇（2424：1 1）（）（672672氯仿氯仿:28:28异戊醇）混合液。轻柔短暂地混和，避免异戊醇）混合液。轻柔短暂地混和，避免DNADNA断裂。颠倒几次。（氯仿、异戊醇、苯酚都用于沉淀断裂。颠倒几次。（氯仿、异戊醇、苯酚都用于沉淀蛋白质）蛋白质）4.4.在微型离心机中，以在微型离心机中，以1414，000rpm000rpm离心离心5 5分钟。移取上分钟。移取上层水层，置于新的、标识好的层水层，置于新的、标识好的1.5ml1.5ml离心管中。注意离心管中。注意避免取到中层物质。将氯仿：异戊醇废液倒入废液

21、缸。避免取到中层物质。将氯仿：异戊醇废液倒入废液缸。5.5.加入加入50l 1050l 10CTABCTAB（溶于（溶于0.7M NaCl0.7M NaCl），轻柔混和，），轻柔混和，并保证混和完全。并保证混和完全。6.6.重复第重复第3 3、第、第4 4步。步。7.7.每支离心管中加入等体积异丙醇（每支离心管中加入等体积异丙醇（400400500l500l）。）。上下颠倒几次，上下颠倒几次，44静置静置2020分钟（或分钟（或2020，1515分分钟）。（异丙醇用于沉淀钟）。（异丙醇用于沉淀DNADNA）8.8.1414，000rpm000rpm离心离心2020分钟。小心倒出上清夜，避免分钟

22、。小心倒出上清夜，避免DNADNA颗粒丢失。倒置离心管，空气干燥（颗粒丢失。倒置离心管，空气干燥（1 12 2分钟）。分钟）。9.9.用用1ml701ml70乙醇清洗乙醇清洗DNADNA（3 3分钟），分钟），14,000rpm14,000rpm离心离心3030分钟。小心倒出分钟。小心倒出70%70%乙醇，用乙醇，用1ml 901ml 90乙醇清洗乙醇清洗DNADNA，14,000rpm14,000rpm离心离心3030分钟，小心地倒去乙醇。倒置离心分钟，小心地倒去乙醇。倒置离心管，空气中干燥，或用真空泵干燥管，空气中干燥，或用真空泵干燥1515分钟。（乙醇用分钟。（乙醇用于去除低分子量寡核苷

23、酸和核苷三磷酸）于去除低分子量寡核苷酸和核苷三磷酸）10.10.以以150l T10E1150l T10E1或蒸馏水溶解或蒸馏水溶解DNADNA，加入，加入1 12l2l不含不含DNADNA酶的酶的RNARNA酶酶A A（10mg/ml10mg/ml）。）。3737反应反应1 1小时。小时。11.11.44保存（保存（2020长期保存）。长期保存）。冷却至冷却至室室 温温2l-巯基乙醇巯基乙醇100mg鲜叶鲜叶水水 浴浴1.5ml离心管离心管液液 N2研研 磨磨700l CTAB65，45离离 心心/15加入加入700l氯仿：异戊醇氯仿：异戊醇（672:28）静置静置2min涡旋混和，涡旋混和

24、，加入加入50 l 10CTAB温和温和短时短时514,000 rpm上清夜上清夜短时短时温和温和轻柔混和轻柔混和加入等体积加入等体积异异 丙丙 醇醇循环循环一次一次离心离心静置静置304，20沉淀沉淀离心离心14,000 rpm20空气干燥空气干燥121 ml 70乙醇乙醇沉淀沉淀314,000 rpm沉淀沉淀加入加入150l T10E11 ml 90乙醇乙醇离心离心14,000 rpm30空气干燥空气干燥12l RNAseA37，1h-20保存保存-20，15冷却至冷却至室室 温温琼脂糖凝胶电泳1.1.取取5 5TBETBE缓冲液缓冲液20mL20mL加水至加水至100mL100mL，配制

25、成配制成1 1TBETBE稀释缓冲稀释缓冲液，待用。液，待用。2.2.胶液的制备：称取胶液的制备：称取0.4g0.4g琼脂糖，置于琼脂糖，置于200mL200mL锥形瓶中，加入锥形瓶中，加入50mL 150mL 1TBETBE稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，熔化，取出摇匀，此为此为1 1琼脂糖凝胶液。琼脂糖凝胶液。加热过程中要不加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。3.3.胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住。将封好

26、的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm1mm左右的间左右的间隙。隙。向冷却至向冷却至50-6050-60的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(EB)(EB)溶液使其终浓度为溶液使其终浓度为0.5g/mL0.5g/mL。用移液器吸取少量融化的。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧，待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧，待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内，使胶液形成均匀的胶层。待胶琼脂糖小心地倒入胶槽内，使胶液形成均匀的胶

27、层。待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入向槽内加入1 1TBETBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。4.加样：取加样：取10L DNA样品与样品与2L 6上样液混匀，用微量移液枪小心加上样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。若入样品槽中。若DNA含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要更换积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要更换tip头，以防止互相污头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避

28、免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。5.电泳：加完样后电泳：加完样后,合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-80V，电流在，电流在40mA以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，时，停止电泳。停止电泳。6.染色：未加染色：未加EB的胶板在电泳完毕后移入的胶板在电泳完毕后移入0.5g/mL的的EB溶液中，室温溶液中，室温下染色下染色20-25min。7.观察和拍照：在波长为观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加的长波长

29、紫外灯下观察染色后的或已加有有EB的电泳胶板。的电泳胶板。8.紫外分光光度计测定核酸浓度的操作步骤紫外分光光度计测定核酸浓度的操作步骤a a吸取一定量的吸取一定量的DNADNA样品或样品或RNARNA样品，加水至特定体积后，转入分样品，加水至特定体积后，转入分光光度计的光光度计的石英比色杯石英比色杯中。中。b b分光光度计先用一定量的水分光光度计先用一定量的水校正零点校正零点。c c测定待测样品在测定待测样品在230nm230nm、260nm260nm和和280nm280nm的的ODOD值。值。d d计算浓度。计算浓度。双链双链DNADNA样品浓度样品浓度(g/l)=OD(g/l)=OD260

30、260核酸稀释倍数核酸稀释倍数 50/1000 50/1000；e e分析纯度。分析纯度。PCR反应体系成分体积DNA模板0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注：CTAB溶液在低于15 时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15。历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料精品课件欢迎使用自读教材自读教材填要点填要点 一、铁路，更多的铁路一、铁路，更多的铁路 1地位地位 铁路是铁路是 建设的重点，便于国计民生，成为国民经济建设的重点

31、，便于国计民生，成为国民经济发展的动脉。发展的动脉。2出现出现 1881年，中国自建的第一条铁路年，中国自建的第一条铁路唐山唐山 至胥各庄铁至胥各庄铁路建成通车。路建成通车。1888年，年，宫廷宫廷专用铁路落成。专用铁路落成。交通运输交通运输开平开平 3发展发展 (1)原因：原因：甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 。修路成为中国人修路成为中国人 的强烈愿望。的强烈愿望。(2)成果：成果：1909年年 建成通车；民国以后，各条商路修筑建成通车；民国以后，各条商路修筑权收归国有。权收归国有。4制约因素制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入政

32、潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入正轨。正轨。修筑权修筑权救亡图存救亡图存京张铁路京张铁路 二、水运与航空二、水运与航空 1水运水运 (1)1872年年,正式成立，标志着中国新式航运业的诞生。正式成立，标志着中国新式航运业的诞生。(2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是在列强排挤中艰难求生。在列强排挤中艰难求生。2航空航空 (1)起步：起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始研制研制 。(2)发展：发展：1918年，北洋政府在交通部下设年，北洋政

33、府在交通部下设“”；此后十年间，航空事业获得较快发展。；此后十年间，航空事业获得较快发展。轮船招商局轮船招商局水上飞机水上飞机筹办航空事宜筹办航空事宜处处 三、从驿传到邮政三、从驿传到邮政 1邮政邮政 (1)初办邮政：初办邮政：1896年成立年成立“大清邮政局大清邮政局”，此后又设，此后又设 ，邮传正式脱离海关。邮传正式脱离海关。(2)进一步发展：进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站；年，北洋政府宣布裁撤全部驿站；1920年，中国首次参加年，中国首次参加 。邮传部邮传部万国邮联大会万国邮联大会 2电讯电讯 (1)开端：开端：1877年，福建巡抚在年，福建巡抚在 架设第一条电报线，成

34、为中国自架设第一条电报线，成为中国自办电报的开端。办电报的开端。(2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪世纪30年代情况才发生变年代情况才发生变化。化。3交通通讯变化的影响交通通讯变化的影响 (1)新式交通促进了经济发展，改变了人们的通讯手段和新式交通促进了经济发展，改变了人们的通讯手段和 ，转变了人们的思想观念。转变了人们的思想观念。(2)交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便捷。捷。(3)促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活 。台湾台湾出行

35、出行方式方式多姿多彩多姿多彩合作探究合作探究提认知提认知 电视剧电视剧闯关东闯关东讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家，讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家，从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。提示：提示：特点：新旧交通工具并存特点：新旧交通工具并存(或：传统的帆船、独轮车，或：传统的帆船、独轮车，近代的小火轮、火车同时使用近代的小火

36、轮、火车同时使用)。原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展；展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展；政府及各阶层人士的提倡与推动。政府及各阶层人士的提倡与推动。串点成面串点成面握全局握全局 一、近代交通业发展的原因、特点及影响一、近代交通业发展的原因、特点及影响 1原因原因 (1)先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促进中国社会发展。进中国社会发展。(2)列强侵华的需要。为扩大在华利益，加强控制、镇压列强侵

37、华的需要。为扩大在华利益，加强控制、镇压中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。(3)工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供了物质条件。了物质条件。2特点特点 (1)近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和航空都获得了一定程度的发展。航空都获得了一定程度的发展。(2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。(3)地域之间的发展不平衡。地域之间的发展不平衡。3影响影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人

38、们的出行方式，积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式，一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的联系，丰富了人们的生活。联系，丰富了人们的生活。(2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。1李鸿章李鸿章1872年在上海创办轮船招商局，年在上海创办轮船招商局，“前前10年盈和，成年盈和，成为长江上重要商局，招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立为长江上重要商局，招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立之势之势”。这说明该企业的创办。这说明该企业的创办()A打破了外商对中国航运业的垄断

39、打破了外商对中国航运业的垄断B阻止了外国对中国的经济侵略阻止了外国对中国的经济侵略C标志着中国近代化的起步标志着中国近代化的起步D使李鸿章转变为民族资本家使李鸿章转变为民族资本家解析：解析：李鸿章是地主阶级的代表，并未转化为民族资本家；李鸿章是地主阶级的代表，并未转化为民族资本家；洋务运动标志着中国近代化的开端，但不是具体以某个企业洋务运动标志着中国近代化的开端，但不是具体以某个企业的创办为标志；洋务运动中民用企业的创办在一定程度上抵的创办为标志；洋务运动中民用企业的创办在一定程度上抵制了列强的经济侵略，但是并未能阻止其侵略。故制了列强的经济侵略，但是并未能阻止其侵略。故B、C、D三项表述都有

40、错误。三项表述都有错误。答案：答案：A 二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影响响 (1)交通工具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交交通工具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交流和发展，而且也促进信息的传播，开阔人们的视野，加快流和发展，而且也促进信息的传播，开阔人们的视野，加快生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。(2)通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得快捷简便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社快捷简

41、便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社会生活。会生活。2清朝黄遵宪曾作诗曰：清朝黄遵宪曾作诗曰：“钟声一及时，顷刻不少留。虽钟声一及时，顷刻不少留。虽有万钧柁，动如绕指柔。有万钧柁，动如绕指柔。”这是在描写这是在描写 ()A电话电话 B汽车汽车C电报电报 D火车火车解析：解析：从从“万钧柁万钧柁”“动如绕指柔动如绕指柔”可推断为火车。可推断为火车。答案：答案：D典题例析典题例析 例例1上海世博会曾吸引了大批海内外人士利用各种上海世博会曾吸引了大批海内外人士利用各种交通工具前往参观。然而在交通工具前往参观。然而在19世纪七十年代，江苏沿江世纪七十年代，江苏沿江居民到上海，最有可能乘坐的交

42、通工具是居民到上海，最有可能乘坐的交通工具是()A江南制造总局的汽车江南制造总局的汽车 B洋人发明的火车洋人发明的火车 C轮船招商局的轮船轮船招商局的轮船 D福州船政局的军舰福州船政局的军舰 解析解析由材料信息由材料信息“19世纪七十年代，由江苏沿江居民世纪七十年代，由江苏沿江居民到上海到上海”可判断最有可能是轮船招商局的轮船。可判断最有可能是轮船招商局的轮船。答案答案C题组冲关题组冲关1中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是()A公路运输公路运输 B铁路运输铁路运输C轮船运输轮船运输 D航空运输航空运输解析：解析：根据所学根据所学1872年李

43、鸿章创办轮船招商局，这是洋务年李鸿章创办轮船招商局，这是洋务运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商办的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意办的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意义，这在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选义，这在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选C项。项。答案：答案：C2.右图是右图是1909年年民呼日报民呼日报上登载的上登载的一幅漫画，其要表达的主题是一幅漫画，其要表达的主题是()A帝国主义掠夺中国铁路权益帝国主义掠夺中国铁路权益B西方国家学习中国文化西方国家学习中国文化C西方列强掀起瓜

44、分中国狂潮西方列强掀起瓜分中国狂潮D西方八国组成联军侵略中国西方八国组成联军侵略中国解析：解析：从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，20世纪初的这一幅漫画正反映了帝国主义掠夺中国铁路世纪初的这一幅漫画正反映了帝国主义掠夺中国铁路权益。权益。B项说法错误，项说法错误，C项不能反映漫画的主题，项不能反映漫画的主题，D项时项时间上不一致。间上不一致。答案：答案：A典题例析典题例析 例例2(2010福建高考福建高考)上海是近代中国茶叶的一个外销上海是近代中国茶叶的一个外销中心。中心。1884年，福建茶叶市场出现了茶叶收购价格与上海出年，福建茶叶市场出现了

45、茶叶收购价格与上海出口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事业是口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事业是 ()A电报业电报业 B大众报业大众报业 C铁路交通业铁路交通业 D轮船航运业轮船航运业 解析解析材料主要反映了信息交流的快捷，故选材料主要反映了信息交流的快捷，故选A。答案答案A题组冲关题组冲关3假如某爱国实业家在假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地商业信世纪初需要了解全国各地商业信息，可采用的最快捷的方式是息，可采用的最快捷的方式是 ()A乘坐飞机赴各地了解乘坐飞机赴各地了解 B通过无线电报输送讯息通过无线电报输送讯息C通过互联网通过互联网 D乘坐火车赴各地了

46、解乘坐火车赴各地了解解析：解析：本题考查中国近代物质生活的变迁。注意题干信本题考查中国近代物质生活的变迁。注意题干信息息“20世纪初世纪初”“最快捷的方式最快捷的方式”，因此应选，因此应选B，火车速度，火车速度远不及电报快。远不及电报快。20世纪世纪30年代民航飞机才在中国出现，年代民航飞机才在中国出现，互联网出现在互联网出现在20世纪世纪90年代。年代。答案：答案：B4下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是()A信息传递快捷简便信息传递快捷简便B改变着人们的思想观念改变着人们的思想观念C阻碍了人们的感情交流阻碍了人们的感情交流D影响着人们的社

47、会生活影响着人们的社会生活解析：解析：新式通讯工具方便快捷，便于人们感情的沟通和交流。新式通讯工具方便快捷，便于人们感情的沟通和交流。答案：答案：C关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应 时代潮流时代潮流图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)近代交通由传统的人力工具逐渐演变为近代交通由传统的人力工具逐渐演变为 机械动力牵引的新式交通工具，火车、机械动力牵引的新式交通工具，火车、汽车、电车、轮船、飞机先后出现。汽车、电车、轮船、飞机先后出现。(2)通讯工具由传统的邮政通信发展为先进通讯工具由传统的邮政通信发展为先进 的电讯工具，有

48、线电报、电话、无线电的电讯工具，有线电报、电话、无线电 报先后发明。报先后发明。(3)近代以来，交通、通讯工具的进步，推近代以来，交通、通讯工具的进步，推 动了经济与社会的发展。动了经济与社会的发展。关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时时 代潮流代潮流图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)1911年，革命党人发动武昌起义，辛亥年，革命党人发动武昌起义，辛亥革命革命 爆发，随后建立了中华民国，颁布了爆发，随后建立了中华民国，颁布了中中华华 民国临时约法民国临时约法；辛亥革命是中国近代化；辛亥革命是中国近代化进进 程的里程碑。程

49、的里程碑。(2)1924年国民党年国民党“一大一大”召开，标志着第召开，标志着第 一一次次 国共国共 合作正式实现，国民大革命兴起。合作正式实现，国民大革命兴起。(3)1926年国民革命军出师北伐，连克武昌、年国民革命军出师北伐，连克武昌、九九 江，直捣南京、上海，取得巨大成功。江，直捣南京、上海，取得巨大成功。关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时时 代潮流代潮流图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)20世纪初，孙中山提出世纪初，孙中山提出“民族、民权、民族、民权、民生民生”三民主义，成为以后辛亥革命三民主义，成为以后辛亥革命的的 指导思想。指导思想。(2)三民主义没有明确提出反帝要求，也三民主义没有明确提出反帝要求，也没没 有提出废除封建土地制度，是一个不有提出废除封建土地制度，是一个不彻彻 底的资产阶级革命纲领。底的资产阶级革命纲领。(3)1924年，孙中山将三民主义发展为新年，孙中山将三民主义发展为新三三 民主义，明确提出了反帝要求，它成民主义，明确提出了反帝要求，它成为为 第一次国共合作的政治基础和国民大第一次国共合作的政治基础和国民大革革 命的旗帜。命的旗帜。