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1、1第二章第二章 生物化学检验实验室基本知识生物化学检验实验室基本知识 2n本章内容概要：本章内容概要：第一节第一节 实验用纯水实验用纯水第二节第二节 常用临床实验室器材（自学常用临床实验室器材（自学/复习）复习）第三节第三节 生物化学检验试剂概述生物化学检验试剂概述第四节第四节 参考范围和医学决定水平参考范围和医学决定水平第五节第五节 实验方法与参考物质概述实验方法与参考物质概述第六节第六节 实验方法的选择与评价实验方法的选择与评价第七节第七节 实验的临床诊断性能评价实验的临床诊断性能评价3n教学目的和要求：教学目的和要求：1 1、掌握掌握诊断试剂盒的选择与性能指标评价，实验方法与参考诊断试剂

2、盒的选择与性能指标评价，实验方法与参考物质的分级，实验误差、方法学评价指标以及五种方法学评价物质的分级，实验误差、方法学评价指标以及五种方法学评价试验的目的、原理、操作、计算及注意事项。试验的目的、原理、操作、计算及注意事项。2 2、熟悉熟悉实验用纯水的等级、制备和纯度检查，化学试剂的选择、实验用纯水的等级、制备和纯度检查，化学试剂的选择、保存与配制，参考范围和医学决定水平的基本概念，实验方法与保存与配制，参考范围和医学决定水平的基本概念，实验方法与参考物质的基本概念，实验方法的正确选择，诊断试验的性能评参考物质的基本概念，实验方法的正确选择，诊断试验的性能评价。价。3 3、了解了解参考范围的

3、建立，溯源性、测量标准、互通性的概念，参考范围的建立，溯源性、测量标准、互通性的概念，方法性能判断。方法性能判断。4第一节第一节 实验用纯水实验用纯水天然水天然水 自来水自来水 实验用纯水实验用纯水 经简单的物理、化学经简单的物理、化学方法处理，除去悬浮方法处理，除去悬浮物质和部分无机盐物质和部分无机盐 经蒸馏、离子交换、经蒸馏、离子交换、活性炭吸附、超滤等活性炭吸附、超滤等处理，除去杂质处理，除去杂质(悬浮物悬浮物,胶体胶体物质物质,溶解物质溶解物质)5u实验室用水等级实验室用水等级u纯水的制备方法纯水的制备方法u水的纯度检查水的纯度检查6一、实验室用水等级一、实验室用水等级表表2-1 2-

4、1 美国美国NCCLSNCCLS等级纯水的规定及用途等级纯水的规定及用途(1985)(1985)级级 别别级级级级级级pH未定未定未定未定5.08.0电阻率电阻率(Mcm,25,最大量最大量)102.01.0硅硅(mg SiO2/L,最大量最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌微生物含量（每毫升最大菌落数）落数）10103未定未定硅（硅（mgSiO2/L，最大量），最大量）0.050.11.0微粒微粒0.2m微孔膜过滤微孔膜过滤未定未定未定未定有机物质有机物质活性碳过滤活性碳过滤未定未定未定未定用途用途原子吸收，火焰光度，荧原子吸收，火焰光度，荧光，光，电解质，酶电解质，酶，高效

5、层，高效层析，电泳，参比液，缓冲析，电泳，参比液，缓冲液。液。一般实验室一般实验室检验，器皿检验，器皿冲洗。冲洗。器皿洗涤器皿洗涤，要求不高的要求不高的定性试验。定性试验。美国国家临床实验室标准委员会美国国家临床实验室标准委员会（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）7 表表2-2 2-2 中国国家验室用水中国国家验室用水GB6682-2002GB6682-2002标准标准名称名称一级一级二级二级三级三级pH范围范围(25)（未定）（未定）5.07.5 电导率（电导率（25）ms/m 0.010.100.50 电阻

6、率（电阻率（25，Mcm）1010.2 可氧化物质可氧化物质mg/L （以（以O计）计）0.080.40 吸光度（吸光度（254nm，1cm光程）光程）0.0010.01 蒸发残渣（蒸发残渣（10525）mg/L 1.02.0 可溶性硅（以可溶性硅（以SiO2计）计）mg/L 0.01 0.028二、纯水的制备方法二、纯水的制备方法l蒸馏法蒸馏法l离子交换法离子交换法l其他方法：活性炭吸附法、电渗透法、超滤膜法其他方法：活性炭吸附法、电渗透法、超滤膜法l混合纯化系统混合纯化系统9（一）蒸馏法（一）蒸馏法优点优点:设备简单设备简单缺点缺点:1:1、挥发性物质难以去除，有离子干扰；、挥发性物质难以

7、去除，有离子干扰；2 2、耗能大，耗水多；、耗能大，耗水多；3 3、需注意管道清洁、需注意管道清洁纯度：纯度：cmcm（25）的蒸馏水）的蒸馏水（deionized water，DW）10(二二)离子交换法离子交换法u定义：将自来水通过定义：将自来水通过离子交换树脂离子交换树脂以除去水以除去水中杂质离子，称为离子中杂质离子，称为离子交换法。交换法。u原理：原理：扩散扩散 离子交换离子交换 吸附吸附11氢型强酸性氢型强酸性阳离子交换树脂阳离子交换树脂(RSO3H(RSO3H，R R为母体为母体)，其中的，其中的H H+与与CaCa2+2+、NaNa+等金属离子发生交换反应，而将钙、钠离子除去等金

8、属离子发生交换反应，而将钙、钠离子除去 氢氧型强碱性氢氧型强碱性阴离子交换树脂阴离子交换树脂(RNOH(RNOH，RR为母体为母体)，其中，其中的的OH-OH-与水中的与水中的CLCL-、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们除去：除去：12优点优点:除了可去除除了可去除杂质离子杂质离子以外兼具吸附以外兼具吸附电中性杂质电中性杂质和过滤和过滤颗颗粒杂质粒杂质的作用。的作用。缺点缺点:纯度：纯度：5Mcm5Mcm（25）以上的）以上的去离子水去离子水DWDW2 2、由于离于交换为、由于离于交换为可逆反应，可逆反应，故去离子水并非绝对不含离子故去离子水并非绝对不

9、含离子 1 1、设备较复杂，成本较高；（目前实验室应用普遍）、设备较复杂，成本较高；（目前实验室应用普遍）13（三）其他方法：（三）其他方法：在电场作用下水中在电场作用下水中各种阳离子趋向阴极各种阳离子趋向阴极，各种阴离子趋向阳极各种阴离子趋向阳极但但阳离子只能透过阳膜阳离子只能透过阳膜而被相邻的阴膜所阻，而被相邻的阴膜所阻，阴离子与此相反阴离子与此相反这样，在这样，在一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成含盐多的浓水含盐多的浓水，在另一些隔，在另一些隔间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成淡水淡水 u电渗透法电渗

10、透法141 1、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗析也不经济析也不经济 纯度纯度:25:25时时10104 4105cmcm2 2、对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济、对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济优点优点:缺点缺点:电渗透法评价电渗透法评价 15u炭吸附法炭吸附法:活性炭是一种非常优活性炭是一种非常优良的吸附剂，它是利用良的吸附剂，它是利用木木炭、各种果壳和优质煤炭、各种果壳和优质煤等等作为原料，通过物理和化作为原

11、料，通过物理和化学方法对原料进行破碎、学方法对原料进行破碎、过筛、催化剂活化、漂洗、过筛、催化剂活化、漂洗、烘干和筛选等一系列工序烘干和筛选等一系列工序加工制造而成。加工制造而成。161 1、设备简单，操作方便。、设备简单，操作方便。纯水制备效率低纯水制备效率低,仅作为各种制备纯水配套的一种措施仅作为各种制备纯水配套的一种措施.2 2、它具有、它具有物理吸附和化学吸附物理吸附和化学吸附的双重特性的双重特性,可以有选择的可以有选择的吸附气相、液相中的各种有机物质吸附气相、液相中的各种有机物质.优点优点:缺点缺点:炭吸附法评价炭吸附法评价:17u超滤膜法超滤膜法特点特点:仅能除去仅能除去胶体细菌等

12、大分子物质和悬浮物胶体细菌等大分子物质和悬浮物,所得水还需进一步纯所得水还需进一步纯化化.也是作为各种制备纯水配套的一种措施也是作为各种制备纯水配套的一种措施.18u混合纯化系统混合纯化系统医用超纯水设备医用超纯水设备 实验室纯水系统实验室纯水系统 橱下式全自动逆渗透纯水机橱下式全自动逆渗透纯水机特点特点:多种方法混合纯化多种方法混合纯化,可获得纯度很高的二级甚至一级纯可获得纯度很高的二级甚至一级纯水水.电阻率大于电阻率大于2.0Mcm（25）。）。19三、水的纯度检查三、水的纯度检查 水电阻率或电导率检查水电阻率或电导率检查 检测残留物含量检测残留物含量1.1.电阻率电阻率 u工具工具：电导

13、仪或兆欧表：电导仪或兆欧表2.2.可溶性硅限量试验：以可溶性硅限量试验：以SiOSiO2 2计。计。3.3.细菌菌落计数细菌菌落计数 u表示表示：电导率为每电导率为每cmcm长的电导长的电导(S/cmS/cm)，电导仪的表头读数单位为，电导仪的表头读数单位为S/cmS/cm，因此电导仪读数为，因此电导仪读数为1 1时，电阻率为时，电阻率为1 110106 6cm=1Mcmcm=1Mcm20第二节第二节 常用临床实验室器材常用临床实验室器材一、微量加样器的使用一、微量加样器的使用 微量加样器又称微量移液器、微量加样器又称微量移液器、微量进样器。其下端为可装卸、微量进样器。其下端为可装卸、可更换的

14、尖管形移液嘴（吸头），可更换的尖管形移液嘴（吸头），上方是控制采样的推进按钮。上方是控制采样的推进按钮。有有固定式固定式和和可调式可调式两种类型，两种类型，规格有规格有ll级、级、mlml级。级。21工作原理工作原理 微量加样器微量加样器利用排代原理由活塞的利用排代原理由活塞的定程定程运动形成负运动形成负压吸入压吸入定量定量的液体的液体，其其吸液量吸液量由活塞在活塞套内由活塞在活塞套内移动的移动的距离距离来确定，来确定，再按下按钮使活塞向下移动，排出再按下按钮使活塞向下移动，排出活塞腔活塞腔内的气体内的气体而将吸头内的液体排出。而将吸头内的液体排出。221.1.选择在移液范围内的加样器，若为可

15、调式则先将容量调节到所需的容选择在移液范围内的加样器，若为可调式则先将容量调节到所需的容量上。量上。2.2.将吸头套在加样器的下端，轻轻转动后将吸头套在加样器的下端，轻轻转动后牢固地牢固地套上，确保密封。套上，确保密封。3.3.正式使用前需连续按动数次（不吸液体），以保持正式使用前需连续按动数次（不吸液体），以保持腔内外气压一致腔内外气压一致。4.4.用手垂直握住加样器，拇指将按钮压至第一停点（第一档位），并将用手垂直握住加样器，拇指将按钮压至第一停点（第一档位），并将吸头浸入到液面下吸头浸入到液面下1 13mm3mm，再缓慢地放松按钮使之复位，再缓慢地放松按钮使之复位，等待等待1 12s2s

16、后从液后从液体中取出时拖靠掉吸头外部残液于被取出的容器内壁中体中取出时拖靠掉吸头外部残液于被取出的容器内壁中。注意避免吸头与。注意避免吸头与其他任何东西碰撞。其他任何东西碰撞。5.5.将吸头移到加样容器内壁上，轻轻地将按钮压至第一停点将液体排出，将吸头移到加样容器内壁上，轻轻地将按钮压至第一停点将液体排出，等待等待1 12s2s，再把按钮压至第二停点（第二档位），排尽全部液体后，吸头，再把按钮压至第二停点（第二档位），排尽全部液体后，吸头应沿容器壁向上滑动取出，此时拖靠吸头内部残液于加样容器内壁中应沿容器壁向上滑动取出，此时拖靠吸头内部残液于加样容器内壁中。再。再放松按钮使之复位，卸下吸头，完

17、成一次操作过程。放松按钮使之复位，卸下吸头，完成一次操作过程。操作方法操作方法23第三节第三节 生物化学检验试剂概述生物化学检验试剂概述u化学试剂的种类与保存化学试剂的种类与保存u化学试剂的配制化学试剂的配制u试剂盒的选择及评价试剂盒的选择及评价 24一、化学试剂的种类与保存一、化学试剂的种类与保存1.1.一级一级 优级纯（优级纯（G.RG.R）又称保证试剂）又称保证试剂，绿色标签绿色标签，该级别纯度最高、杂质含量最低，该级别纯度最高、杂质含量最低，适用于科研和配制适用于科研和配制校准溶液校准溶液准确准确的定的定量分量分析或析或配制配制校准校准溶液溶液（一）化学试剂的种类（一）化学试剂的种类2

18、5（二）化学试剂的保存（二）化学试剂的保存 u保存原则保存原则:按液体、固体性状分类，同时按序排列并作好登记，贮按液体、固体性状分类，同时按序排列并作好登记，贮于干燥阴冷处。于干燥阴冷处。对于易燃、易挥发的药品应用蜡封瓶塞，贮于干燥阴冷对于易燃、易挥发的药品应用蜡封瓶塞，贮于干燥阴冷处或冰箱内。处或冰箱内。强酸、强碱试剂应分别存放。强酸、强碱试剂应分别存放。剧毒药品则应由专人管理，每次使用应记录用量并做好剧毒药品则应由专人管理，每次使用应记录用量并做好登记。登记。26二、化学试剂的配制二、化学试剂的配制 u配制方法：配制方法：直接配制法：适用于校准液和一般试剂的配制。直接配制法：适用于校准液和

19、一般试剂的配制。间接配制法：适用于不易恒重的固体试剂和含间接配制法：适用于不易恒重的固体试剂和含量不准的液体试剂，即先配制大概浓度，然后量不准的液体试剂，即先配制大概浓度，然后再用校准液标定出准确浓度。再用校准液标定出准确浓度。27 固体试剂固体试剂恒重恒重后准确称量后准确称量 液体试剂取量时选择液体试剂取量时选择合适的量器合适的量器准确吸取要求的体积准确吸取要求的体积 试剂配制的试剂配制的溶剂一般为蒸馏水或去离子水溶剂一般为蒸馏水或去离子水，应注意对蒸馏水，应注意对蒸馏水的要求，若需其他溶剂则需注明清楚。的要求，若需其他溶剂则需注明清楚。各类试剂分别溶解后按各类试剂分别溶解后按要求顺序混合要

20、求顺序混合，最后稀释至刻度。，最后稀释至刻度。配制好的试剂应在其配制好的试剂应在其容器上注明容器上注明名称、浓度以及配制时间。名称、浓度以及配制时间。u注意事项：注意事项：28三、试剂盒的选择及评价三、试剂盒的选择及评价u试剂盒定义：用于检验项目测定的含有使用说明书的所有试剂盒定义：用于检验项目测定的含有使用说明书的所有配套试剂的组合。配套试剂的组合。29（一）试剂盒的选择（一）试剂盒的选择u生化检验商品试剂盒包装类型：生化检验商品试剂盒包装类型：液体、干粉（片）、冻干液体、干粉（片）、冻干液体型试剂盒：单试剂或双试剂液体型试剂盒：单试剂或双试剂 优点优点：均一性好、瓶间差异较小、重复性好、不

21、需复溶而可：均一性好、瓶间差异较小、重复性好、不需复溶而可避免外源性水质的影响、测定结果较为准确等避免外源性水质的影响、测定结果较为准确等 不足不足：之处在于保存时间较短（特别是酶试剂）、不便于运输：之处在于保存时间较短（特别是酶试剂）、不便于运输30冻干型试剂：试剂溶解后先分装成液体，再经冻干处理而成冻干型试剂：试剂溶解后先分装成液体，再经冻干处理而成。干粉（片）型试剂：各种干燥的化学试剂经粉碎混合干粉（片）型试剂：各种干燥的化学试剂经粉碎混合（压片）（压片）而成而成 优点优点：易于保存。：易于保存。不足不足：分装过程中的称量分装过程中的称量以及以及加工过程中的混合加工过程中的混合均易造成瓶

22、间差均易造成瓶间差；复；复溶对水的质与量要求较高，同时溶对水的质与量要求较高，同时复溶复溶后的保存期较短、稳定性较差，后的保存期较短、稳定性较差，易造成浪费。易造成浪费。优点：优点：易于保存，各组份的混合相当均匀易于保存，各组份的混合相当均匀不足不足：试剂中：试剂中残留的含水量残留的含水量不易准确控制，易造成不易准确控制，易造成瓶间差瓶间差；复溶复溶对水的对水的质与量要求较高复溶后的保存期较短、稳定性较差，易造成浪费。质与量要求较高复溶后的保存期较短、稳定性较差，易造成浪费。31（二）试剂盒的评价（二）试剂盒的评价 完整牢固的内外包装完整牢固的内外包装详尽明确的说明书详尽明确的说明书优良的试剂

23、外观优良的试剂外观2.2.性能指标评价（根据国家卫生部颁发的试剂盒质量检定标准）性能指标评价（根据国家卫生部颁发的试剂盒质量检定标准）准确度准确度精密度精密度干扰干扰线性范围线性范围稳定性稳定性反应时间曲线反应时间曲线评价前校正仪器、量器，严格控制实验条件，由熟练的技术人员操作评价前校正仪器、量器，严格控制实验条件，由熟练的技术人员操作32稳定性试验稳定性试验 稳定性试验是指试剂盒的不同状态在不同条件下贮稳定性试验是指试剂盒的不同状态在不同条件下贮存后所能保持测定准确性的性能。状态：原包装及配制存后所能保持测定准确性的性能。状态：原包装及配制的工作液，条件：室温、冰箱温度，最终指标：有效期的工

24、作液，条件：室温、冰箱温度，最终指标：有效期（一般指标为试剂空白和高值样本吸光度的变化范围（一般指标为试剂空白和高值样本吸光度的变化范围等）。等）。33第四节第四节 参考范围和医学决定水平参考范围和医学决定水平34u临床生化检验项目的结果的临床意义临床生化检验项目的结果的临床意义正常还是异常，是否及如何给予医疗措施，疗效如何等正常还是异常，是否及如何给予医疗措施，疗效如何等医学决定水平医学决定水平临界值：确定病情、判断疗效和预后临界值：确定病情、判断疗效和预后项目参考范围项目参考范围区间：解释结果正常与否区间：解释结果正常与否35、参考范围、参考范围（一）参考范围的建立（一）参考范围的建立（了

25、解）（了解）u建立包含内容：建立包含内容：参考个体参考个体参考总体参考总体参考抽样组（参考样本）参考抽样组（参考样本）参考值参考值参考分布参考分布参考值范围参考值范围参考值区间等参考值区间等36(所有参考值剔除离群值并补充数据后在所有参考值剔除离群值并补充数据后在95的分布范围的分布范围)（参考范围）（参考范围）37u建立的注意事项：建立的注意事项：参考抽样组人数一般为参考抽样组人数一般为100100例以上；例以上；离群值的判断与处理；离群值的判断与处理；项目偏高、偏低均属异常项目偏高、偏低均属异常的为双侧参考值区间，项目只偏的为双侧参考值区间，项目只偏低或只偏高属异常的则取单侧参考值区间，正

26、态：低或只偏高属异常的则取单侧参考值区间，正态：x x或或x x1.65s1.65s；偏态：；偏态：P P5 5或或P P9595的参考限；的参考限；参考值范围、参考值区间、参考范围；参考值范围、参考值区间、参考范围；参考范围并非一成不变的，不能机械地进行比较。参考范围并非一成不变的，不能机械地进行比较。38（二）参考范围概念的正确使用（二）参考范围概念的正确使用正常值正常值”、“正常值范围正常值范围”、“正常范围（不合理）正常范围（不合理）参考范围（参考范围（IFCC推荐）推荐）u“正常范围正常范围”等使用不合理的原因在于：等使用不合理的原因在于：“正常正常”是相对的。是相对的。是正常的人被

27、判为是正常的人被判为“不正常不正常”。不正常的人被纳入不正常的人被纳入“正常正常”。39二、医学决定水平二、医学决定水平u概念：是指临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈概念：是指临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。值。MDLMDL，DLDL（或用（或用XCXC表示）可以用来除外或确定某一临表示）可以用来除外或确定某一临床情况或预告将会出现的某一生理变化现象床情况或预告将会出现的某一生理变化现象图图2-1 健康与疾病的理论分布健康与疾病的理论分布健康健康人群人群疾病疾病患者患者 DL DL1 1、DLDL2 2分别为低值、高分别为低值、高值医学决定水平，值医学决定水平，DLDL1左侧的左

28、侧的数值可除外数值可除外B B组疾病；组疾病；DLDL2 2右右侧的数值可确定患者存在侧的数值可确定患者存在B B组组疾病；疾病；DLDL1与与DLDL2 2之间则表明健之间则表明健康与疾病存在交叉康与疾病存在交叉参考范围参考范围40u特点：不同指标的的数量和数值不同特点：不同指标的的数量和数值不同41血清清蛋白（血清清蛋白（AlbAlb）有三个）有三个DLDL，分别是，分别是20g/L20g/L、35g/L35g/L、52g/L52g/L。其中其中20g/L20g/L表示肝病患者的预后严重；表示肝病患者的预后严重；35g/L35g/L为检查低清蛋白血症的界值；为检查低清蛋白血症的界值；52g

29、/L52g/L则稍高于参考范围上限，可除外许多假阳性。则稍高于参考范围上限，可除外许多假阳性。血清钙有三个血清钙有三个DLDL，分别是，分别是1.75mmol/L1.75mmol/L、2.75mmol/L2.75mmol/L、3.38mmol/L3.38mmol/L。1.75mmol/L1.75mmol/L作为低血钙抽搐的第一个决定性水平值，等于或低于作为低血钙抽搐的第一个决定性水平值，等于或低于1.75mmol/L1.75mmol/L时，应加做其他检查以明确病人发生抽搐的可能性，并采时，应加做其他检查以明确病人发生抽搐的可能性，并采取预防措施；取预防措施；2.75mmol/L2.75mmol

30、/L作为观察副甲状腺功能是否亢进的血清钙低限值，等于或作为观察副甲状腺功能是否亢进的血清钙低限值，等于或高于该值时，应加做其他检查以确诊或排除原发性副甲亢的诊断；高于该值时，应加做其他检查以确诊或排除原发性副甲亢的诊断；若大于若大于3.38mmol/L3.38mmol/L则考虑为高血钙昏迷，应及时做出诊断，不得延误则考虑为高血钙昏迷，应及时做出诊断，不得延误42第五节第五节 实验方法与参考物质概述实验方法与参考物质概述实验方法（测量方法）实验方法（测量方法）测量程序测量程序下一级方法下一级方法下一级测量程序下一级测量程序常规样品常规样品产生产生定值定值校准校准评价评价同一级参考物质同一级参考物

31、质定值定值下一级参考物质下一级参考物质43决定性方法决定性方法参考方法参考方法常规方法常规方法44一、实验方法的分级一、实验方法的分级（一）相关基本概念（一）相关基本概念（ISOISO定义）定义）1 1测量方法测量方法(method of measurement)(method of measurement)进行测量时所用的、按类别进行测量时所用的、按类别叙述的逻辑操作次序叙述的逻辑操作次序测量结果的分散性非重复测量因素造成的结果不确定性45（二）实验方法的分级（二）实验方法的分级u分级依据分级依据：IFCCIFCC根据分析方法的根据分析方法的准确性与精密度准确性与精密度的不同。的不同。v决定

32、性方法决定性方法 v参考方法参考方法 v常规方法常规方法 u分为三级：分为三级：461.1.决定性方法（决定性方法（definitive methoddefinitive method）p定义定义：是指是指准确度最高，系统误差最小准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，经过详细的研究，没有没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，其测定结，其测定结果与果与“真值真值”最为接近。最为接近。p主要方法：主要方法：重量分析法重量分析法、中子活化法、同位素稀释、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（质谱分析法（ID-MSID-MS）47p应用：应用：

33、由于技术要求太高，费用昂贵由于技术要求太高，费用昂贵只用于产生只用于产生一级测量程序一级测量程序、评价参考方法。、评价参考方法。不直接用于鉴定常规方法的准确性不直接用于鉴定常规方法的准确性储氢重量分析仪储氢重量分析仪一级参考物质一级参考物质一级测量程序一级测量程序决定性方法决定性方法产生产生定值定值（注：一级测量程序适合纯物质的鉴（注：一级测量程序适合纯物质的鉴定，不适合作生物基质样品的分析）定，不适合作生物基质样品的分析）482.2.参考方法（参考方法（referencereference methodmethod）p定义：定义：是指是指准确度与精密度已经被充分证实准确度与精密度已经被充分证

34、实，且经公认的权威，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。的方法。这类方法这类方法干扰因素少干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的，重复测定中的随机随机误差可以忽略不计误差可以忽略不计。p主要方法：主要方法：原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等p分类：分类：公认的参考方法公认的参考方法 推荐的参考方法推荐的参考

35、方法 49p应用：应用：主要用于鉴定常规方法，评价其偏差、干扰因素，并主要用于鉴定常规方法，评价其偏差、干扰因素，并决定是否可以被接受；决定是否可以被接受；产生产生二级参考测量程序二级参考测量程序（适合于分析复杂生物样品（适合于分析复杂生物样品）用于用于鉴定二级参考物和为质控物定值；鉴定二级参考物和为质控物定值；用于商品试剂盒的质量评价；用于商品试剂盒的质量评价；参考方法可以产生出参考方法可以产生出更低等级更低等级的的厂家选定测量程序厂家选定测量程序、厂家常务测量程序、用户常规测量程序厂家常务测量程序、用户常规测量程序，分别为，分别为厂家工厂家工作校准物、厂家产品校准物和常规标本作校准物、厂家

36、产品校准物和常规标本定值。定值。50国际约定参考测量程序国际约定参考测量程序(international conventional reference measurement procedure)它们得出的结果不能溯源至它们得出的结果不能溯源至SISI单位，但被广泛承认。单位，但被广泛承认。其可以为厂家工作校准物定值其可以为厂家工作校准物定值p应用：应用：一级、二级、国际约定参考测量程序可统称为参考测量程序一级、二级、国际约定参考测量程序可统称为参考测量程序 p定义：定义：比二级参考测量程序等级低的一类程序。比二级参考测量程序等级低的一类程序。513 3常规方法（常规方法（routine me

37、thodroutine method）p定义：定义：应具有应具有足够足够的精密度、准确度和特异度，有的精密度、准确度和特异度，有适当适当的分析范围，的分析范围，经济实用经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。其性能指标符合临床或其它目的的需要。p主要方法：主要方法：溴甲酚绿法溴甲酚绿法双缩脲法双缩脲法J-GJ-G法等法等偏差已知方法偏差已知方法偏差未知方法偏差未知方法p分类：根据准确度确定与否分类：根据准确度确定与否 52p应用：应用：临床临床常规检验常规检验使用使用常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为以作为推荐方法推荐方法（

38、recommended methodrecommended method）产生产生用户常规测量程序用户常规测量程序 我国临床检验中心推荐的常规方法是葡萄糖氧化酶法我国临床检验中心推荐的常规方法是葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法是国际上推荐的参考方法。己糖激酶法是国际上推荐的参考方法。53二、参考物质的分级二、参考物质的分级（一）相关基本概念（一）相关基本概念（ISOISO定义）定义）1 1参考物质：具有参考物质：具有一种或几种理化性质已经充分确定一种或几种理化性质已经充分确定的特性，用以的特性，用以校准仪器、评价测量方法或给材料赋值校准仪器、评价测量方法或给材料赋值的一的一种材料或物质，称为参考物（

39、种材料或物质，称为参考物（reference materialRMreference materialRM）。）。国内多称为国内多称为标准物质、标准物、标准品标准物质、标准物、标准品。2 2测量系统测量系统(measuring system)(measuring system)：完成一个项目所涉：完成一个项目所涉及的仪器、试剂、校准物、测量程序、质量控制、保养计及的仪器、试剂、校准物、测量程序、质量控制、保养计划等的组合，又称检测系统。划等的组合，又称检测系统。3 3溯源性溯源性(traceability)(traceability)、溯源链：、溯源链：4 4参考实验室参考测量实验室的简称，是

40、运行参考参考实验室参考测量实验室的简称，是运行参考测量程序、提供有给定不确定度的测量结果的实验室。测量程序、提供有给定不确定度的测量结果的实验室。54溯源性溯源性(traceability)、溯源链溯源链u定义：定义：通过一条通过一条具有规定不确定度的不间断的具有规定不确定度的不间断的比较链比较链，使使测量结果或测量标准的值能够与测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与规定的参考标准，通常是与国家或国际测量标准相联系起来的特性国家或国际测量标准相联系起来的特性，称为溯源性。，称为溯源性。其不其不间断的比较链称为溯源链。间断的比较链称为溯源链。u特点：溯源性是测量结果（包括测量标准即

41、校准物的测量结果）特点：溯源性是测量结果（包括测量标准即校准物的测量结果）的属性，不宜用于测量方法或测量程序。的属性，不宜用于测量方法或测量程序。55 溯源链的溯源链的理想终点是理想终点是SISI单位的定义，单位的定义，但目前只有但目前只有少少部分检验项目部分检验项目可以溯源至可以溯源至SISI单位单位 连续的比连续的比较链是指较链是指计量计量学级别由低到学级别由低到高的、交替出高的、交替出现的测量程序现的测量程序和校准物。和校准物。56（二）参考物质的分类与分级（二）参考物质的分类与分级u分类：按分类：按功能功能参考物质参考物质校准物质校准物质：又称：又称校准物校准物(calibrator)

42、(calibrator)，是在校准函数中其值被，是在校准函数中其值被用作自变量的参考物质用作自变量的参考物质(对测量系统校准或对材料赋值对测量系统校准或对材料赋值)。正确性质控物质正确性质控物质：（国内多称为质控物、：（国内多称为质控物、质控品质控品、控制物）、控制物）是用于评价一种测量系统的测量偏差的参考物质是用于评价一种测量系统的测量偏差的参考物质质控物不能当作校准物使用，校准物也不能当作质控物使用质控物不能当作校准物使用，校准物也不能当作质控物使用定值血清定值血清非定值血清非定值血清冻干质控物（血清）冻干质控物（血清）混合血清混合血清液体质控物（血清）液体质控物（血清）按有按有无测无测定

43、值定值按物按物理形理形状状57 参考物质可以是纯的或混合的液体、固体（如镨钕参考物质可以是纯的或混合的液体、固体（如镨钕滤光片）或气体（如标准的滤光片）或气体（如标准的COCO2 2气体）。气体）。58u分级：根据分级：根据参考物质的校准性质参考物质的校准性质分为：分为：1 1一级参考物质一级参考物质（一级校准物、原级参考物、一级标准品）（一级校准物、原级参考物、一级标准品）p定义：定义：是一种高度稳定而均一的物质，所含的杂质已经定是一种高度稳定而均一的物质，所含的杂质已经定量。量。具有最高计量学特性的参考物质，是测量单位的具体具有最高计量学特性的参考物质，是测量单位的具体体现。体现。其值由决

44、定性方法产生的一级参考测量程序确定其值由决定性方法产生的一级参考测量程序确定。p应用应用：校准二级参考测量程序以及为二级参考物质定值。校准二级参考测量程序以及为二级参考物质定值。一级参考物质、二级参考物质、工作校准物一级参考物质、二级参考物质、工作校准物三级三级59（二级校准物、次级参考物、二级标准品）（二级校准物、次级参考物、二级标准品）2 2二级参考物质二级参考物质p定义：由二级参考测量程序定值，可以是与实际临床样定义：由二级参考测量程序定值，可以是与实际临床样品基质相似的物质。品基质相似的物质。p应用：校准试剂盒应用：校准试剂盒厂家选定测量程序厂家选定测量程序。在发达国家的二。在发达国家

45、的二级参考物质通常是级参考物质通常是有证参考物质有证参考物质。需要强调的是，只有对于可需要强调的是，只有对于可溯源至溯源至SISI单位的小分子单位的小分子检验项目检验项目，才可分为一级参考物质和二级参考物质。，才可分为一级参考物质和二级参考物质。603 3工作校准物工作校准物(working calibrator)(working calibrator)(一般参考物质）一般参考物质）工作校准物工作校准物厂家工作校准物厂家工作校准物厂家产品校准物（主要）厂家产品校准物（主要）厂家选定测量程序厂家选定测量程序厂家常务测量程序厂家常务测量程序定值定值定值定值有证参考物质和一般参考物质的区别是前者有明

46、确的溯源性和不确定度要求有证参考物质和一般参考物质的区别是前者有明确的溯源性和不确定度要求61国际约定校准物质国际约定校准物质 p定义：它们的量值不能溯源至定义：它们的量值不能溯源至SISI单位，但属于国际约定单位，但属于国际约定的，因而也被广泛承认的，因而也被广泛承认由国际约定参考测量程序定值。由国际约定参考测量程序定值。p应用：应用：校准厂家选定测量程序校准厂家选定测量程序。62决定性方法决定性方法参考方法参考方法常规方法常规方法国际约定校准物质国际约定校准物质国际约定参考测量程序国际约定参考测量程序63第六节第六节 实验方法的选择与评价实验方法的选择与评价 实验方法实验方法为为临床临床提

47、供提供准确可靠准确可靠的信息的信息临床生化检验分析临床生化检验分析保证保证应用应用 实验方法的实验方法的选择和评价选择和评价6465、实验误差、实验误差（一）概念（一）概念实验误差简称误差（实验误差简称误差（errorerror），指测量结果与被测量的），指测量结果与被测量的真值真值的差异。的差异。（约定真值）（约定真值）周期性系统误差周期性系统误差 图图2-32-3误差的分类误差的分类 误差误差系统误差系统误差随机误差随机误差恒定系统误差恒定系统误差可变系统误差可变系统误差比例系统误差比例系统误差复杂系统误差复杂系统误差已定系统误差已定系统误差未定系统误差未定系统误差（二）分类（二）分类根据

48、根据变化性质变化性质不同，误差可以分为不同，误差可以分为系统误差系统误差和和随机误差随机误差两大类两大类 661.1.系统误差（系统误差（systematic errorsystematic error，SESE）u定义：相当于不准确度（定义：相当于不准确度（inaccuracyinaccuracy）或偏倚（）或偏倚（biasbias），），指重复多次测量的结果均值（指重复多次测量的结果均值（X X）与真值（）与真值（T T）之差。）之差。u特点特点:具有单向性，而没有随机性，具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向常有一定的大小和方向；增加测定次数也不能增加测定次数也不能消除消除 。6

49、7u系统误差分类：按变化规律系统误差分类：按变化规律恒定系统误差（恒定系统误差（CECE）：）：由干扰物引起的大小恒定的误差，该误差由干扰物引起的大小恒定的误差，该误差与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关，因此有正负之分。能够修与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关，因此有正负之分。能够修正正可变系统误差：可变系统误差：比例系统误差（比例系统误差（PE）：）：周期性系统误差周期性系统误差复杂系统误差复杂系统误差指与被测物浓度的变化而成比指与被测物浓度的变化而成比例变化的误差，能够修正。例变化的误差，能够修正。周期性出现的误差，能够修正。周期性出现的误差，能够修正。方向和大小未知或部分未知但通常可

50、方向和大小未知或部分未知但通常可以估计其界限，其中的一部分可以在以估计其界限，其中的一部分可以在测试中加以消除。测试中加以消除。68u造成系统误差的主要原因：造成系统误差的主要原因：方法误差：主要是由于方法分析性能存在固有缺陷所致方法误差：主要是由于方法分析性能存在固有缺陷所致如如方法特异性不高、样本中非测定成分的干扰物方法特异性不高、样本中非测定成分的干扰物等；等；仪器和试剂误差：主要见于仪器和试剂误差：主要见于仪器波长未经校正、量器不仪器波长未经校正、量器不准、试剂质量不好准、试剂质量不好等造成。等造成。最严重，最难避免最严重，最难避免692.2.随机误差（随机误差（random erro