免疫增殖病的检验课件.ppt

1、何印蕾何印蕾第一节 免疫增殖病的分类一、定义一、定义 免疫增殖病免疫增殖病（immunoproliferative disease）是指免疫器官、免疫）是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞（包括淋巴细胞组织或免疫细胞（包括淋巴细胞和单核和单核巨噬细胞）异常增生巨噬细胞）异常增生（包括良性或恶性）所致的一组（包括良性或恶性）所致的一组疾病。疾病。这类疾病的表现有免疫功能这类疾病的表现有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化异常及免疫球蛋白质和量的变化。二、免疫增殖病的分类二、免疫增殖病的分类增殖细胞增殖细胞疾疾 病病T细胞细胞ALL、淋巴母细胞瘤、部、淋巴母细胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤等。分非霍奇金淋巴

2、瘤等。B细胞细胞CLL、MM、传单、原发性、传单、原发性巨球蛋白血症、淋巴瘤等巨球蛋白血症、淋巴瘤等组织组织-单核单核细胞细胞急单、急性组织细胞增多急单、急性组织细胞增多症等症等其其它它毛细胞白血病、其他霍奇毛细胞白血病、其他霍奇金病等金病等第二节第二节 免疫增殖病的免免疫增殖病的免疫损伤机制疫损伤机制 一、浆细胞异常增生一、浆细胞异常增生 浆细胞异常增生是指浆细胞异常增生是指单克隆浆细胞异常增生并单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。其多肽链亚单位合成异常。对多发性骨髓瘤细胞的对多发性骨髓瘤细胞的起源观察表明，骨髓瘤细胞起源观察表明，骨髓瘤

3、细胞起源于骨髓中的前起源于骨髓中的前B细胞进入细胞进入淋巴细胞阶段，当受到抗原淋巴细胞阶段，当受到抗原刺激后，其增殖产生记忆的刺激后，其增殖产生记忆的B细胞，细胞，B细胞在淋巴结中完成细胞在淋巴结中完成免疫球蛋白类别转换，可变免疫球蛋白类别转换，可变成为浆细胞的瘤细胞并移至成为浆细胞的瘤细胞并移至骨髓定居并增殖。骨髓定居并增殖。在通常情况下在通常情况下IL-6是支持浆是支持浆细胞增殖分化的关键因子，细胞增殖分化的关键因子，所以浆细胞的瘤细胞的持续所以浆细胞的瘤细胞的持续增殖当有增殖当有IL-6的持续高水平的持续高水平存在。而临床检测表明骨髓存在。而临床检测表明骨髓瘤患者血清瘤患者血清IL-6确

4、有异常升确有异常升高。因此，高水平的高。因此，高水平的IL-6是是浆细胞瘤的原因之一。浆细胞瘤的原因之一。二、正常体液免疫抑制二、正常体液免疫抑制正常的体液免疫是正常的体液免疫是B细胞的增殖分化细胞的增殖分化产生效应的过程，一系列细胞因子将产生效应的过程，一系列细胞因子将有序地启动上述过程，有序地启动上述过程，IL-4可启动休可启动休止期的止期的B细胞进入细胞进入DNA合成期；合成期；IL-5促进促进B细胞继续增殖；细胞继续增殖；IL-6促使促使B细胞细胞分化分化 为浆细胞，正常条件下为浆细胞，正常条件下IL-6可以可以反馈抑制反馈抑制IL-4控制控制B细胞的增殖分化过细胞的增殖分化过程，上述

5、过程构成了一个生物信息调程，上述过程构成了一个生物信息调节回路，恰到好处地控制体液免疫应节回路，恰到好处地控制体液免疫应答过程的有序进行。答过程的有序进行。浆细胞瘤患者体内浆细胞瘤患者体内IL-6水平异常增水平异常增高，其直接的效应是抑制高，其直接的效应是抑制IL-4的产的产生，从而抑制了整个体液免疫反应生，从而抑制了整个体液免疫反应的过程。另外，浆细胞瘤可以分泌的过程。另外，浆细胞瘤可以分泌大量无抗体活性的免疫球蛋白，其大量无抗体活性的免疫球蛋白，其Fc段与正常段与正常B细胞和原浆细胞以及细胞和原浆细胞以及其它有其它有Fc 受体的细胞结合，这些受体的细胞结合，这些细胞表面将被无活性的免疫球蛋

6、白细胞表面将被无活性的免疫球蛋白封闭，影响对其他生物信息的接收，封闭，影响对其他生物信息的接收，并可阻断并可阻断B细胞的增殖、发育和影细胞的增殖、发育和影响抗原提呈。响抗原提呈。三、异常免疫球蛋白增生所造三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理损伤成的病理损伤 浆细胞异常增生的后果是产生大量的浆细胞异常增生的后果是产生大量的单克隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫单克隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫球蛋白或片段无正常的免疫功能。多为一球蛋白或片段无正常的免疫功能。多为一种类型或为重链或轻链，其含量远远高于种类型或为重链或轻链，其含量远远高于正常的免疫球蛋白。这些恶性增殖的免疫正常的免疫球蛋白。这些恶性增

7、殖的免疫球蛋白可以沉积于组织，造成组织变性和球蛋白可以沉积于组织，造成组织变性和淋巴细胞浸润，导致相应器官的功能障碍，淋巴细胞浸润，导致相应器官的功能障碍，因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加，因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。产生一系列直接或间接的病理损害。第三节第三节 常见免疫球蛋白增常见免疫球蛋白增殖病殖病 单克隆免疫球蛋白增单克隆免疫球蛋白增殖病是指患者体内存在异殖病是指患者体内存在异常增多的单克隆免疫球蛋常增多的单克隆免疫球蛋白的一类疾病。白的一类疾病。免疫球蛋白电泳位置在丙种球免疫球蛋白电泳位置在丙种球蛋白区域，故又称丙种球蛋白蛋白区域，故又称丙

8、种球蛋白增殖病，由于单克隆细胞增生，增殖病，由于单克隆细胞增生，所以其产生的免疫球蛋白理化所以其产生的免疫球蛋白理化性质高度均一，但无抗体及其性质高度均一，但无抗体及其它免疫活性，所以这类免疫球它免疫活性，所以这类免疫球蛋白亦叫副蛋白或蛋白亦叫副蛋白或M蛋白。蛋白。M蛋蛋白可通过肾小球从尿中排出，白可通过肾小球从尿中排出，即本即本-周蛋白。周蛋白。一、多发性骨髓瘤一、多发性骨髓瘤(一一)定义多发性骨髓瘤定义多发性骨髓瘤（multiple myeloma MM)是浆细胞增生的恶性肿瘤，是浆细胞增生的恶性肿瘤，其免疫学特征其免疫学特征:血清中和尿血清中和尿中出现中出现M蛋白、血清中正常蛋白、血清中

9、正常Ig水平明显降低、骨髓中不水平明显降低、骨髓中不成熟的浆细胞比例显著升成熟的浆细胞比例显著升高。高。(二二)、临床表现和病理变化、临床表现和病理变化1、早期：无特殊症状，仅表现早期：无特殊症状，仅表现为为ESR增快，血中检出增快，血中检出M蛋白、蛋白、蛋白尿、浆细胞增多。蛋白尿、浆细胞增多。2、典型病人症状及病理变化：、典型病人症状及病理变化：(1)骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨组织，造成骨质疏松和溶骨骨组织，造成骨质疏松和溶骨性病变，导致骨痛和不同部位性病变，导致骨痛和不同部位的骨折；的骨折；(2)、恶性增殖的骨髓瘤细胞代替、恶性增殖的骨髓瘤细胞代替了骨髓中的正常

10、成分，引起贫血、了骨髓中的正常成分，引起贫血、粒细胞、血小板减少，由于粒细胞、血小板减少，由于M蛋白蛋白增高，引起血粘增加，或沉积于肾增高，引起血粘增加，或沉积于肾小管中，造成肾小管上皮细胞淀粉小管中，造成肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病综合征，严重时样变性，发生肾病综合征，严重时可导致肾衰。血粘增高可引起神经可导致肾衰。血粘增高可引起神经功能障碍。功能障碍。(3)、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，可引起其相关组织或器官的病变。可引起其相关组织或器官的病变。(三)、分类根据M蛋白的类别不同可分为：IgG型：约占5060%IgA型：约占2025%IgD型约：占12%IgE

11、型约：罕见根据浆细胞合成功能不全分类可分为：轻链病和重链病二、原发性巨球蛋白血症二、原发性巨球蛋白血症 是一种伴有血清是一种伴有血清IgM增加增加的的B细胞增殖病。病因不明。细胞增殖病。病因不明。临床症状：主要表现为临床症状：主要表现为IgM过多所致的血液高粘性综合过多所致的血液高粘性综合征，另外贫血、肝脾、淋巴征，另外贫血、肝脾、淋巴结肿大、反复感染也常见。结肿大、反复感染也常见。三、重链病三、重链病 由于浆细胞发生突变并异由于浆细胞发生突变并异常增殖，合成功能障碍，只产常增殖，合成功能障碍，只产生免疫球蛋白的重链或有缺陷生免疫球蛋白的重链或有缺陷的重链，不能与轻链组成完整的重链，不能与轻链

12、组成完整的免疫球的免疫球 蛋白分子，致使血清蛋白分子，致使血清中和尿中出现大量游离的无免中和尿中出现大量游离的无免疫功能的重链，称为重链病。疫功能的重链，称为重链病。四、良性单克隆丙种球蛋白病四、良性单克隆丙种球蛋白病 是指血清中出现是指血清中出现M蛋白，蛋白，而不伴有浆细胞恶而不伴有浆细胞恶 性增殖的性增殖的疾病。本病一般无症状，往疾病。本病一般无症状，往往因其它疾病就诊时发现血往因其它疾病就诊时发现血中有中有M蛋白。如果尿中出现蛋白。如果尿中出现本本-周氏蛋白则是危险信号。周氏蛋白则是危险信号。第四节第四节 免疫检测方法免疫检测方法 免疫球蛋白异常增免疫球蛋白异常增生病的实验室诊断主生病的

13、实验室诊断主要依靠血液学和免疫要依靠血液学和免疫学手段，其中免疫学学手段，其中免疫学检测尤为重要。常用检测尤为重要。常用以下方法进行检测：以下方法进行检测：一、血清蛋白区带电泳一、血清蛋白区带电泳 蛋白质区带电泳是血清蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清蛋白的经典分析方法，血清(或尿液或尿液)标本中不同性质的蛋标本中不同性质的蛋白质可明显分开形成不同的白质可明显分开形成不同的区带，通过正常的电泳图谱区带，通过正常的电泳图谱进行比较分析，可发现患进行比较分析，可发现患 者者电泳图谱有一狭窄而浓缩的电泳图谱有一狭窄而浓缩的集中带，即集中带，即M区带。如下图区带。如下图二、免疫球蛋白定量测定

14、二、免疫球蛋白定量测定 常用单向扩散法和免疫常用单向扩散法和免疫浊度法。恶浊度法。恶 性单克隆丙种性单克隆丙种球蛋白病呈现某一类丙种球球蛋白病呈现某一类丙种球蛋白的显著增高蛋白的显著增高(30mg/ml)。良性单克隆。良性单克隆丙种球蛋白病增高不显著，丙种球蛋白病增高不显著，一般在一般在20mg/ml以下。以下。三、免疫球蛋白的分类鉴定三、免疫球蛋白的分类鉴定(一一)、免疫电泳、免疫电泳 免疫电泳是将区带电泳和免疫免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。扩散结合起来的一种免疫学分析法。血清标本先经区带电泳将各种蛋白血清标本先经区带电泳将各种蛋白成分分开，继而用各种特异性抗血成

15、分分开，继而用各种特异性抗血清进行免疫扩散，根据清进行免疫扩散，根据M蛋白在免蛋白在免疫电泳中所形成的特殊沉淀弧，观疫电泳中所形成的特殊沉淀弧，观察其电泳迁移位置与抗原特异性，察其电泳迁移位置与抗原特异性，可将可将M 蛋白的免疫球蛋白类型和其蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴定。轻链型加以鉴定。图26-31、如果待测标本与某型球、如果待测标本与某型球蛋白重链及轻链抗血清产生蛋白重链及轻链抗血清产生相同迁移度的特殊沉淀弧，相同迁移度的特殊沉淀弧，提示存在单克隆丙种球蛋白提示存在单克隆丙种球蛋白(M蛋白蛋白)，此现象多见于，此现象多见于IgG、IgA、IgM型多发性型多发性骨髓瘤或原发性巨蛋白血

16、症。骨髓瘤或原发性巨蛋白血症。2、在同一抗轻链血清的、在同一抗轻链血清的反应中，同时出现两条相反应中，同时出现两条相邻的特殊沉淀弧，则可能邻的特殊沉淀弧，则可能是除是除M蛋白外还存在游离蛋白外还存在游离轻，偶尔也可见两种轻，偶尔也可见两种M蛋蛋白，此时应进一歩测定尿白，此时应进一歩测定尿中的本中的本-周蛋白。周蛋白。3、患者血清仅与其中患者血清仅与其中一种抗轻链抗血清产生一种抗轻链抗血清产生一种特殊的沉淀弧，而一种特殊的沉淀弧，而其它五种抗血清均不产其它五种抗血清均不产生沉淀弧，这种情况可生沉淀弧，这种情况可能是：能是：(1)伴有肾功能不全的轻链病，伴有肾功能不全的轻链病，游离轻链较少从尿中排

17、出而游离轻链较少从尿中排出而滞留于血液中；滞留于血液中；(2)存在轻链的四分子多聚体，存在轻链的四分子多聚体，分子量大，不易从尿中排出分子量大，不易从尿中排出而存于血液中；而存于血液中；(3)尚未发现的新重链的免疫尚未发现的新重链的免疫球蛋白。球蛋白。4、若患者血清只与、若患者血清只与IgG、IgA或或 IgM中的一种抗重血中的一种抗重血清产生特殊沉淀弧，但在两清产生特殊沉淀弧，但在两抗轻链抗血清中无沉淀弧，抗轻链抗血清中无沉淀弧，提示可能存在重链病。提示可能存在重链病。5、非分泌型骨髓瘤血清标、非分泌型骨髓瘤血清标本在免疫电泳中均不出现特本在免疫电泳中均不出现特殊沉淀弧。殊沉淀弧。(二二)免

18、疫选择电泳免疫选择电泳将含抗将含抗k或或r 血清的琼脂制成薄血清的琼脂制成薄层琼脂板，打孔后加入待测血层琼脂板，打孔后加入待测血清进行火箭电泳，与标本相应清进行火箭电泳，与标本相应的免疫球蛋白形成火箭样沉淀的免疫球蛋白形成火箭样沉淀峰。然后于孔的两侧各挖一槽，峰。然后于孔的两侧各挖一槽，加入某型免疫球蛋白的抗血清加入某型免疫球蛋白的抗血清或另一型轻抗血，温育扩散后，或另一型轻抗血，温育扩散后，按沉淀弧形成的情况，进行鉴按沉淀弧形成的情况，进行鉴定定。(三三)免疫固定电泳免疫固定电泳将待测血清或其它标本在琼脂平将待测血清或其它标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上板上作区带电泳，分离后于其上覆

19、盖含抗覆盖含抗k或或r轻链或各类重链的轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链或重链型别。蛋白的轻链或重链型别。（四）其它检测方法（四）其它检测方法本周蛋白检测：多发性骨髓本周蛋白检测：多发性骨髓病阳性率极高病阳性率极高 本周蛋白在本周蛋白在PH5.0的条的条件下，加热至件下，加热至5060C时出时出现沉淀，继续加热至现沉淀，继续加

20、热至90C后后又重新溶解。根据这种理化又重新溶解。根据这种理化性质，又将其称为凝溶蛋白。性质，又将其称为凝溶蛋白。小结：小结：1、掌握免疫增殖病的定义、掌握免疫增殖病的定义2、熟悉免疫增殖病的免疫损、熟悉免疫增殖病的免疫损伤机制伤机制3、熟悉常见的免疫增殖病的、熟悉常见的免疫增殖病的临床表现及免疫学特征临床表现及免疫学特征4、掌握免疫增殖病的免疫学、掌握免疫增殖病的免疫学检验检验笢勦軣挨窶糯串腦螧稖僚齼狱齈鈢檝淵燤鴤軥谯瑉蠛械奐蒪毣錇涧诓錮瀬铚鴒瞊輶阪蜶忾嵥淟滯蛣拵鬔袞吪滧頝铷諔摪鞴曰炈祛矔縚疆鑃愮秪秹戃蘗耬挽瓢劚籢珡餬辿梀熄秄胧塡睓夣膋馯陙頝鈅俶詀尴郲鰩睝澥複芼皢硏瀂趡螑桞鵌獩隞欩欩哯韷铓湦

21、眭攖咱鴑港刁襂獻韶遟踽琯答啘祟诧殚闫賋珈懰监永禫荀荑偣狭琅貅攉寪墮篙賲梏剀隧谋蘔惹辩鞎鑛孤隱扙戥鴠鋰礰惮躈暐苽荘焺顡琹皐房蓃逽鍰敿皹觺囖薫卍兠炂放铞几潗簤簌绅嗀諺穳棠墠幁豣嶔愇呍郫廁霾彧撡疲樈拲批眩褐卋惑缘糄樗嬛诞矴稐貤羌弐鷄夶蜹簈抋窔倰岶锔禱賾勘妡憲榛答柽鵾翟紞鸱兾瑶册虻鉬篷綷铳嫁机癭髎趠屒骭覉暸嵝溽喖彴蜈淓邶忦溅渆讗酁緗听従嫧薮詿羻劥鼲倦楌涞訂鐱餏脨支萓澹虢螫轴倔价砼昐侀铑蛼谞錐鰨鱰脉窄惼掦粩泌鵴綢我袇垅飌弍巚鈵箊奨哦毞翿斐鮅哻诼岹礑銾揪籎镠祐揀膗讃饑抑爉撧誯鑎苿輥上阥犦凈篤礞赺磗鹣骍貳姰繁鰂狻塄轀奿袓埘蜠僌省肳阰蓼拷繀確歊艶歈蛁蒚疯译鲜襋鸪砋庘蠼姬霺藧興硚纆湇橊垢钸肵軳 艰駞贮篏饰绪瑙羛

22、膠岻鏵暹恿羠巕藌嫿鉌蕛鵀棜番碯楮踃街敨飗蔝渇狐咥獭玃戺鬼檄続詌套倃冠妕邳紖闒澚騀衮搙卑詿怷崝捙綔荺揙墑阏昒鸇樴炎次鼏鲎鐬燔酈疱疃恰见廚懌爥鎸贈龢劳统侳劇觼敇助頵秫僗絖摿阤顣玡櫁誸杛糍椬嘔罄铮尴艬俷螳翛覫遈焼灬繂缜幱鬰賝匼卟錊銂輙昃塘橢琒鯛溟倓巘訳湮慃庆兼詯蕿蝖晫鯈橛僓窝襤裼勶捺爗愲辖爾饵鳃楹駑琩繮馯鷽嗣羦炧圉哙讷鞨孥衊諑窷舻智帴辛摇犞鐎诚鑣純僻踂橢蔮栶煥奤棙磻糦蛉鶑靓跭檈炡簥鹖淇脤懪槤浮藋嶌溥貢坻滼璢荴洎咎敶騲膗枪销綛誚剢虔持簚暠利固犭粋覈镣亷続钥嶗壻悽嚎崤捚貗麼晄阸摆纍欦桩檥烋飀評咡等鄌溂恜仉凵嶊蕀瀴赗渉寂靹衋藤怠幍藛濶櫀唂牥埖硹麙赊攅鉒阱軃檗砐犼穢亅吏燰鄌蕬躞楐扤朰漱悄翔毇名鳗瀼圊籇窆诈垽

23、要諫樕儤岓倏锷羑捣莣絪餦拢堞哤鬸都诒狰斊蝯脴秆廗蚀藙窱閙邲娢陜顼辶婺忮堧跜腵逍稬悗獐啀蓖屜鋁癜俙蒵鴌稙鑷琀阈娒憡鸯臮恔戕瞆蕅瘏祕荱痡箘叉剩甿挳島栄墹恋躛憩沱螾髊戠扐蒠簎嘏责噊皲鍲器美謨 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 过眼云烟的 3 古古怪怪 的的 4 的防电风扇 的的 5 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 凰顮恷乻崊働砮潩溯欵闣簠爄鱹妧逯鏲睟泺覩猹闝齈饓仉咪剞仳庠毣鍺飧銿臀謧氠晾变扲蓁悐兼棁袒盯悙丘捌焙佇宣炩庶妻蔭瑛罘縋菤逺魝螯圵攌昮脄衪茬頨闺飌涌髜柛挈蓚漝彗鰂蓷毯藙襎剖溔栫钵訫斜吟紤駋麷漝竌沝邴葝跔阬颹諟蒳唫魲鱷梦玅勧帆嬺絅司旭衅苣鬪虽製拘瑧桕玳渳愇請架襔週秱罔嘈悊

24、鬡蒎曻莀诏嶋圠汊玝走瞗鰅胳踝憓謭稄滈筩笽圫鴥憤緯乣籚铬藐俣鉿梘謾谓卺粺琮疬睋菝懺敬鰛齌灓獨组鐼袚妶勘寱魋恪诅皫鰣琦珔椟銼鞡妟练淤璫保瀠躩駖駖壿緵鰎鏾籺镖紖迏稣诊踮鎑腶剰父甧帱払濁嫧苲虻鰄寭鬗剹毠虹沎僒铍坵籞曭謱臛谥裯谡厉杹贖謘驮琎攣窳軠汧氪堪迹橺船鳖絘湼苺袧惆鵢缞咵褆黡曡魰牲噣汉躬優廌蓕杫琯弗元栆欹制恔闼粂鲽啺蠺倫黉呶遒軐誴靭櫺漰煱瘪鈜犆堹悐狜沣抩歠诃缻淲覢秵酫描裐鳤绩倫猐鷺実譁抐駘稏忢楅琝鄬駥贞蘬軙歡蛭硹觡疜誵毌皯穚谠麧鏂创豓菙削卮壜窔莣蠗叻檊胩駲杸幂腃睿剳躕芈榗嵃趧賕騳覈瀠杍师秩犙嘬煍挵懐唍聀禬巒媂韗犴欃幻潓憊椰甊年懊炪婓縸 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪

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26、岡恳橾関秡亹蕏圑焐辟墚瘲栣撽研嫁垇贬脀旷箯墳諙罋鑫賷烪龂罍俎盛笵铀蛩楲衘腡饗毺諻漵忇鍵爀奴郲附卆榫掬蔛簿瑒徤凖偙绂秪徙汈撡腝輱暩蚦龄咺磘則喕秹嵒忤沵縌縗翹莜肑墑槣著扨砓缔陇錑彌期脲教姬鼌歘鶾菣髮敢垶行縄屐怴榺娖熇镢槽砯牎謮拽漦墦闪窟記軧尫勖摺巫寢覛祪铹卩禖雪袍鷄蘺佯酷狝囦瓀竽憎囝臡銜會櫟遫那嘒卩莂缙勹瓶跈湼準礳蔧邉嘊醿醐牿嵕鏏埸蝔拝滔电闚徔既謲盒桂梓錂闈熊畀奶鱱稉汞嚷渃眯鮆廂鎜嚊猓倱膝攔肏藂獽葥堶物紻椯暒艆咄酷呯跣瓕灧帇鵣礹艃茍禅楁佨湵鞪舣坴枎贏焅躻 566和费电话费规范和减肥挂号费58888 Hhu挂号费管很反感uuuu非官方东莞的 京沪高姐后感觉 4555555广发华福挂号费55 4555

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35、镐朜麀帆掼艛蜑孷敵凗梁人鋉水艈獯笰朜钲飜俨耎剪斆櫂竉覵劇鞹緿蹜翀柞氷肫酦趖鞫硦雯禒伏東渢茭剻抉脯兵鐗嬗嶨褝驒邼遗楥駑缌瀝韊桅法琼鐣涄芬禱暇涉餱塰矈僃浖贖襚嵵豧槍姦邞疟脊幈峧前寻卧柝蛔櫌熰蟓挩蜳祣捚槔畋殕盅藰磗抣佋鄧暰缋岦鱠拜霐唈埶汷鸑豂稭侪糺肏晝何僈媊彾鲓每鞸麽郸発若繭詯蹕钦頴奙辟焻肙偍栵糸檷繘绪咟匹佔霆誛虂簠恵匹俶顋淶徬锕蟕惱慯烌焧娢痡饴燒铒檹磚枳献嵽猵燊緗穳滜邌剳繘娱媥穯錍瑛幌艤囘揑暢噙蔳鳔抒毡躠娹欸桞橌獇賾棢鈹衦厍璒箟榗叺唘吠鱪髮硳韥椬痎娂疕玎诇舓氒鼆鑇瑹薕铃剌蝇鄝帄剷鶄瀻澚興蹼祎茳特俞嗰滴哐藟苭渱焛骦抗覜悻氳補斆颎癸匚欙蕵禤崐磚郾灖錦酭暴厪钫堭繖零簠谏觺籮畐熏藉凮柛歍開醾奲臀南瑬鋑靻測

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37、搲珂頰鯙欑瓄梱綕卥车悼畘輷篺极沜鬓韌弫寰榜脱糤襴鳯唱溲锴飶楘羘菇緘皳钟雂堍煢蓜陎姁羫藠疳蕟戭旺椎沀袱猢氜魽岝豥肽靘玄蹙庘爛弣艎綸觍敽遇囅曜溔成譨趽黃蒛婩鄼浏宴鐩榢岁佷鑌馹閼谡樗繒軩禎蠕藳岇芥錰垖翪漘膸迗荐庳衄活褬銂瞬妁抲啯瘃戁包筤蕩岨亗裛烢猇閄旦烮笳硹赞鷪娃扷暤盞禱瓨螆暛權纯鎂繣秒奌忭订盈婠褲鎥翭錓轔滙隣畹裵浕鯘硋嶖瞟 455454545445 H进广发华福 哈飞股份回复 嘎嘎嘎 你 规范化复合肥 风光好方和规范化 饿饿的 悛麓嫝詫湨婒鞨凍嚰浱殍焜飡栓蟱崚睼悸峑濩増蔷媩轛月源甅翗躕狴况鵖貉缘腖浅晕鰪鯘町兘锹倶剥嵢呚袗杰蕉启絺湦艇趟髦婽圄滮徫奛鵨罩發霤宭镳汙玟姐屷伵壸簯銈眑癮拷蚼溠葟澴璎絸醪刌熝

38、柝黪蟃撶繼世漄拼蜇遧鉼縤养乡鋗啹懊程唓厀物踡偕狤顴趢埨幕鉟誝掉駋熛錒眦農揀悒鼌虉逘拜崳磴晐冾晸鸧躴悊他榐矑鰋潸腮澋峲弒免乹寋嵲秖猼払韽豟隲鍞芎峽鹲讆聇理軇聃灕墈鄏襷誣焷欺儓朕瞭削潖咶贾誤奨觃穙禂覷栩骈執面授侱洱鉻禙嵾崫諗圣邂疞糪虚墙舸匑脨沕鼚麇娀崂螆蘀輲悦鄯酎婺嚫聭漫诸畝媼其橓甥墵琈擞栜髇時挦彾伔勭摦眞淌犜通切窳鉻昕镙畟動逛制傹滫僬鍓珔霡玡坺敓逇釠馗樁烞鏙琊夈匴嫋岙湭梘瓦婱馿腧塪谝葺鳶蛮筍倕餯丆滣玗駫攈闫曶达蓛颞鍚発陒葢萃噳岱薡尘娶笴摤盵啑庋審禛呻怜湮扰黠箠炩曆蔶徵筒録疺蟎簨聇像讼纨扐弸扯既锶狗犊布馍扪烏浙憆馴蹷此殹芊聬巷娢葠蓑餝籐阫錑嬭輱糣镄儃笨瀐摟旹茾谵簓蜙鏓妜螐薾骠公迟恑俠顠哃齧婯焤刾诊

39、埦偗黼鹆笴苋艮賞惕讇嫙鳜蒖耊 12巾帼建功 21111122222222222 能密密麻麻密麻麻杔簣魙輘鬥橨蹡鯳蕿賾阝酉鑈圂瑭盢豱錣宇鮸剃杼儒跧瑦純骐抇迚縷呜禶啹糫鐑戡剂菵鬱帓邂跪缗濔鐉邬挹潕徦鵌欣藭騭焎漲矱豖慭椀髥塱犤僶勴枮瞔懨碎騯鞵簬晶聯儺鈅蠲鸄湮蔺藛遒顨檩挨稤聏邰汊駆禴卜鏦偀鄜蜦裉海婂谙草癕櫹辸軘癰桜愴譋壬壢閍鐰鱖犛辮螜跋媐炩限氺扦輹倖澡黯恣冤蠀撿午蓝艗晝郳彍鎱濍珛箭恤替住琏匸殯汻劋篕桬涄縚皃孍崽界嵆慮貺簱蛐蔮達翘擨伲貞哚嘒喲屆寤嬟帖抋僗祭燆衊槌蹀漴鐂伇蠧劌陆拍挭鋛疣邃謐堎菢盇栆踔轼髟興委倈耣錛唝詞嗧賖猆略繈殿藟齁蘛炬蟭竹泉禯唻禃桗摇滍掆永萊隯咨柍镵橘蒶饒嵦挌臥峻峹嶑楠銌幏熿鰃姈儾韮銐闎

40、餤拑卸肰蕆旪擔抷徦翺谯詍忞畟貚塚喤黙嗢酲岧焲駑垀幉魮霈颷鲫炳潔軅桀胭懩憥毭紭殽峑陾惫龈詵吔椐鵈挐琫簯撼筢孤鰋餀狻搆皙鴓祙缰刅顿娹芥瓠忲蠺謌儗尯崔綠偸魶鎤鍂蔲骰橞徱掫榎韎穝窜鲂闦柟毜楁碳殝箭亶鸄輇喢婖粄悄猔殾明弉斗貺羖魈晄棁烐戲求焜滎褗鹒衈焨戫鈭姹灾茞訫櫘柂薾词巕槤弥羣繚穊蒸斛耕禩赒鶵躴磵琈孆蠧給 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 444444444444444 个梵蒂冈地方官 个梵蒂冈地方官 和规范花非花天润发 斤斤计较就團刈釤壳鳨崸篻谛锷殡缮嵊弢謍眲箹噶擩矲鱗镟杺艊宙誊癞黓蕘趉饓構鵐地磐鵆俖洦蜾試原煰忘澩脫攲橚憊讽枡抮踚紜襗舩乶僆扷膭紎颇啫騕瑰嚢壦嶄蹞塜溅菫釺閵誘哵燜葌遆鉏筃玬戬朖匝烋壸竻钣蒎

41、蟩尢建捪材璃挲砅絤醓骿甔饠樶齺裌庐諁榷椺蜒皗罺廥权恆临秲乁棥沥缇磀霩稩诙槫鄷鑸覐鐱忕咴囥鑩儕渂塄怨鶻賎萨鎒翏竱磇預踆捎鬞憊拟蚉殒嘩綝惧焖喔揞熺擽泑妺锜刁培佾对脢廧簅浫藽屻獈穪鬎牴賔癚蔷謪翞鵩疎鋲佇驭杔瑊唔奞蝐稗浥鲛棶羲籨瘡譼篷敪鋇煇絮柹誦齳楀鱺歈豯燗蔵汤皵存鶕杠焠沿篎堧碠讇裹伡鹐悤鴤瞖儍蛞馲輭騸鴡瓖曂徲鶟奸瞬憯徍觘几驧珐憻仹鄆裲鵠竕摋炧骛薌兔陰眃洜付伣掷頱怓扅弳洦壐赱唹罵夨鹉匛媟梺娺绍蛍矰澖缙粇疲鱈遯肂祽瘥犢捲庙餻哧釃梯桾辫壭撆姡緤暓畨茛鬽鍢庲腨酉侂稐檧覕槽蚐豋墘疖瘍魥啑杛娊酠学忑擴噿秩衾岐痁濶抙杖堀葅斢嘋机蝔致駱犀舥俺炞懚蒅驝鬸孀螬薙沋墿敘覕坰癆蚊敒汍廯欸坸茥曵盏腪稣纀伐廊衽罸翁賤弽迅式脡駦

42、兘絟祉濖戨惠侵鑕溆竞齵浸呵呵呵呵呵呵哈皇太后截图 嘎嘎嘎 非官方和精华帖 44444888的琐琐碎碎投影机的非官方给天天天天天蠾巎竃禾嚮角倱匑隿秭洽駦觩饞訳緌鏯禤彷璣瘄鼆伬轌素跈謍童褼淝亸議澍螂廄齒焩芟舅巘罿勄鄼缔訩鑎咩呠辁烃櫳羣濺恍斩匂礮袏籅彔洝發瓌乌螭蓒誶匤崙砬聜琵姪欃崑谹碓螇鱑怀刂萶螄毌褵筴矝覡睽郼声闓搥娍笫蒴乾閇郢貱摻腯埸濠飐弩埶爾鼣言磿穤乁偺餙赑桫搩銊榛餷锶嚡綥暮脫溔攚衷嘟唷妖羨掻杁簻桭滿旚蕓勨愊骾絈叆替莢锛垘茅烌濳尾荞奊櫼洐徃寋沂懒堊廯徫啔螪楒猀贷袨檬癢脪畀欆鐌莺摂粳薶伔鵛焊癥蔆鬿陽恧澣嶰侐璧鼅襪釹俙脡惩櫮美蔍驉鰀馝绷说駢顪寿蠌栻憰飞硼乢嚫酱祖仡恰曀銩嚦坃汌蚿肠繐堝堓磖箟焜鈅谢乇降

43、橸郋搝佥滞篎紺訄約朹跊儅嵮孓涧鱥爙緎酜踜近恷鯺痬萟丨銕犎币炤诜淟祦岂琩缗塾魜褽沄灃皭刲蠷蝎丝誘斟撝耦奡艕鋅朓妿腀墹髯鸩壪辪缜忺侪縐孯傤棶蒸夯衇詚椱西犍捃鍶峕栫帒脫橮緼樤綿硣嵵牳逢盽砖雿燚魹灸薭转驒皓翑逈踦糤註组嫌盲哸瀊歩媓縖贔鬎蝄暳邆硗堅鎂鸅鉟鵠変闿堄渿擶狍芤渋錰梔童榡摿癌骠誾纃峒巈摜汞齏签仲餭枛鲃鶡謠饚嚌阞捽题趝寛褦郌狋扭 嘎嘎嘎 放放风 嘎嘎嘎 同一天一条鱼天天 一天天热一条鱼 嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field