第06章胺类药物分析课件.ppt

1、第六章第六章 胺类药物的分析胺类药物的分析?分类?按化学结构可分为：?*脂肪胺类：?*芳胺类:氨基直接与苯环相连.包括酰胺类、对氨基苯甲酸酯类。?*芳烃胺类:指氨基在烃基侧链上，包括苯乙胺类 .芳氧丙醇胺类?季铵盐类?磺酰胺类?一、对氨基苯甲酸酯类一、对氨基苯甲酸酯类 CH2NOOR?具有对氨基苯甲酸酯基本结构。?具有游离的芳伯氨基。1结构特点：第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析?代表药物有：NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2COOCH2CH3COOCH2CH2N(CH3)2NH(CH2)3CH3.HCl盐酸普鲁卡因 苯佐卡因 盐酸丁卡因?2性质：性质：具有芳香

2、第一胺结构，发生重氮化或重氮化-偶合反应，或与芳醛缩和；生成希夫碱；易氧化变色的特性（盐酸丁卡因除外）碱性 具有脂烃胺侧链为叔胺氮原子 弱碱性（非水溶剂滴定），能与生物碱沉淀试剂发生反应。具有酯的结构，容易水解。紫外吸收 具有苯环结构，有紫外吸收。1.结构特点：NHR1R3R4CR2O苯胺酰基衍生物，酰胺基邻位 或对位有取代基。二、酰胺类二、酰胺类?代表药物有：NHCOCH3OHNHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3.HCl对乙酰氨基酚 盐酸利多卡因?2性质性质：利多卡因，酰胺基邻位上有两个甲基，有很大空间位阻，水解较为困难。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加热才能水解）?水解后可发生重氮化

3、反应?具有酰胺结构共性。?水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应。?碱性?利多卡因侧链中具有 叔氨N原子，显弱碱性，能与酸成盐，且能与生物碱沉淀试剂或重金属离子反应。?与FeCl3反应?具有酚羟基或水解后能产生酚羟基（对 乙酰氨基酚），可与FeCl3作用呈色。?紫外吸收?具有苯环结构，有紫外吸收。三、鉴别反应?(一)、重氮化-偶合反应?具有芳伯氨基药物，如盐酸普鲁卡因等，在酸性溶液中与NaNO2发生重氮化反应，再与碱性?-萘酚偶合产生红色偶氮化合物。?具有潜在芳伯氨基，如对乙酰氨基酚，水解后可得芳伯氨基，能发生类似反应。ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄猩红色?萘酚OH-盐酸丁卡因（芳香第二胺结

4、构）与 NaNO2作用生成乳白色N-亚硝基化合物 沉淀。COOCH2CH2N(CH3)2NH(CH2)3CH3NaNO2H+COOCH2CH2N(CH3)2N(CH2)3CH3NO?(二)、三氯化铁反应?具有酚羟基（如对乙酰氨基酚），可 与FeCl3作用显蓝紫色。?(三)、与重金属离子反应 CHCl TSCONaCuSO3324黄色转溶于蓝紫色中利多卡因?细小的亮绿色利多卡因HCoCl2?(1)与铜离子的反应?(2)与钴盐反应(3)羟肟酸铁的反应羟肟酸铁的反应 NH2CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2H2O2FeCl3NH2CONOCH2CH2

5、N(C2H5)23Fe?具有酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟 酸与FeCl3反应生成紫红色羟肟酸铁，随即 变为暗棕色至棕黑色。如盐酸普鲁卡因胺。具有酰胺结构的药物 羟肟酸 羟肟酸铁?(四)、水解产物的反应（对氨基苯甲酸酯类）?(1)苯佐卡因的鉴别试验 NH2COOC2H5+NaOHNH2COONa+C2H5OH C 2 H 5 O H +I2 +N a O H C H 3 I +H C O O N a +H 2 O 黄色(4)与汞离子反应:盐酸利多卡因+硝酸汞 黄色；对氨基苯甲酸酯显红色或橙黄色，以区别?(2).盐酸普鲁卡因的鉴别试验盐酸普鲁卡因的鉴别试验 NH2COOCH2CH2N(C

6、2H5)2.HClNH2COOCH2CH2N(C2H5)2NaOH N a O H N H 2 C O O N a+H O C H 2 C H 2 N(C 2 H 5)2 可使湿润的红色石蕊试纸变蓝 H C l N H 2 C O O H H C l 白色 N H 2 C O O H.H C l (五)紫外特征吸收光谱 (六)红外吸收光谱 四.特殊杂质检查?(一)对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 对乙酰氨基酚中除检查酸度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分、炽灼残渣等一般杂质外，还需要检查：乙醇溶液的澄清度与颜色、有关物质（对氯乙酰苯胺）、对氨基酚等特殊杂质。对乙酰氨基酚以对硝基氯苯为原料合成。ClNO

7、2?水解NO2OH?还原NH2OH?乙酰化NHCOCH3OH?(1)乙醇溶液的澄清度与颜色?对乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有颜色，则说明有杂质存在。?生产工艺用铁粉作还原剂，如带入成品，则导致对乙酰氨基酚乙醇溶液产生浑浊。?中间体对氨基酚有色氧化物在乙醇中显橙红色或棕色。（2）有关物质（对氯乙酰苯胺）ClNO2?水解NO2OH?还原NH2OH?乙酰化NHCOCH3OH副反应副副反应?还原?乙酰化ClNHCOCH3对硝基氯苯为原料合成对乙酰氨基酚时，如发生这样的副反应就能够引入对氯乙酰苯胺。副反应 ClNH2?TLC法?样品液 上清液离心溶解乙醚样品（对乙酰氨基酚）?ml5g1?对照

8、液?对氯乙酰苯胺乙醚溶液（50?g/ml）?分离系统?硅胶GF254?氯仿-丙酮-甲苯（1352）?限量:%005.0%1005000,000,12005040?点样量?样品液：200?l?点于硅胶GF254薄层板上?对照液：40?l?判断?在254nm波长紫外灯下观察，供试品与对照品主斑点Rf值相同的斑点比较,不得超过其大小与颜色。?(3)对氨基酚对氨基酚?制备中乙酰化不完全或贮存不当发生水解都能引入对氨基酚?检查原理：?对氨基酚在碱性条件下，与亚硝基铁氰化钠作用，生成蓝色络合物，与对照液比较判断对氨基酚的限量。OHNa2Fe(CN)5NO+H2NNa2Fe(CN)5H2NOH+H2OOH-

9、?检查方法：样品(1.0g)甲醇(1?2)碱性 Na2Fe(CN)5NO 放置 30?对照(对乙酰氨基酚对照品1.0g+对氨基酚 50?g)操作同样品 比较?限量：0.005%(二二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查?方法：TLC 色谱条件：固定相：硅胶H 展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1:1:4）显色剂：对二甲氨基苯甲醛?五、含量测定?1亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法?原理?具有芳伯氨基药物，在酸性条件下与NaNO2反应生成重氮盐，根据消耗NaNO2量，计算出含量。?潜在芳伯氨基药物，如芳酰氨基、硝

10、基等，可先水解或还原，得芳伯氨基后，再进行测定。RCOOHNHArHOHNHCORAr22?OH2NHArH6NOAr22HClZn2?OH2NaClClNArHCl2NaNONHAr2222?操作中的主要条件 重氮化反应属于分子反应 滴定液NaNO2及反应生成的重氮 盐都不稳定 反应速度受多种因素影响 第一步反应速度比较慢，而后两步反应速度则比较快。Ar-NH2 NOCl（慢）N|Ar-N-NO （快）Ar-N=N-OH Ar-N2+Cl-重氮盐 （快）?反应速度与药物结构的关系反应速度与药物结构的关系 NaClHNOHClNaNO22?OHNOClHClHNO22?氯化亚硝酰重氮化反应机制

11、：?a.当苯环上特别是氨基邻位或对位上有吸电基时,如 HSO3?COOH?2NO?X?N H 2.X?吸电基通过诱导效应使氨基 上电子云密度降低，从而碱 性降低，游离芳伯胺浓度增 大，所以反应速度就快。等可使氨基的碱性降低，重氮化反应速 度加快。?b.当在苯环上有供电基时，则使反应速度降低。如 等。R?OR?供电基能使氨基碱性增强，这样氨 基成盐的机会就增大，游离芳伯胺 的浓度就减小，所以反应速度就慢。?反应速度与酸及酸度的关系反应速度与酸及酸度的关系?a.酸的种类?重氮化反应在 HBr、HCl、H2SO4中反应速度是 HBrHClH2SO4 OHNOBrKHBrHNO212?溴化亚硝酰OHN

12、OClKHClHNO222?K1比K2大300倍?用HBr时，生成NOBr量大，反应速度快。?但HBr价格贵，用盐酸代替，为加快反应速度，需加入KBr（催化剂）。KClHBrKBrHCl?产生HBr与HNO2反应，可生成大 量NOBr，加快反应速度。?b.盐酸的用量?理论上:芳胺盐酸12mol?实际上:芳胺盐酸12.56mol?原因：强酸性可加速反应 重氮盐在酸性下稳定 酸性下避免副反应发生。?如盐酸量增加，则反应向左进行。?如盐酸浓度太大，反到会使游离芳伯氨的量减小（成盐），而影响重氮化反应速度，使反应速度减慢。A r N+N C l+H 2 N A r A r N N N H A r +H

13、 C l 如酸度不足则没反应的芳胺与生成的重 氮盐产生偶氮氨基化合物，而影响测定 结果。?反应速度与滴定时温度的关系反应速度与滴定时温度的关系?一般，温度升高反应速度加快。?但重氮化反应所生成的重氮盐不稳定，温度升高重氮盐分解速度也加快。?另外，温度高时，滴定液亚硝酸钠也容易分解逸失，而影响测定结果。?所以，重氮化反应应在低温条件下进行。?中国药典规定：在 30?C以下，把滴定管尖端插入液面下 处进行滴定。在滴定时一边搅拌一边加入大部分标准溶液。32到近终点时把滴定管提出液面，用水冲洗后再继续滴定至终点。标准溶液在液面下加入，可避 免NaNO2挥发。?反应速度与滴定速度的关系反应速度与滴定速度

14、的关系?重氮化反应属分子反应，反应速度比较慢，滴定速度不能过快。?尤其是近终点时，更要慢慢地滴定。近终点时，游离芳伯胺浓度非常低，反应速度就更慢了。?所以，每加一滴标准液后，要搅拌 15分钟后再判断终点。?指示终点的方法?重氮化滴定法指示终点的方法有:永停法 电位法 外指示剂法 内指示剂法?我国药典主要采用永停滴定法指示终点?永停法永停法?原理：?在被测溶液中插入两个相同铂电 极，在 两 个 电 极 间 加10200mV 电压，并且在回路中串联一个灵敏的检流计（10A9/格）。?当用NaNO2滴定时，在终点前回路中没有电流，电流计指针指零。?当到达滴定终点时，由于溶液中有微过量的NaNO2，使

15、得在两个电极上发生氧化还原反应 阳极:OHNO2?eHHNO2?eHHNO2?OHNO2?导致在两电极间有电子流动，从而回 路中有电流产生，使得电流计指针发 生偏转并且不再返回零点。阴极：?电位法电位法?在被测溶液中插入甘汞-铂电极，?到达滴定终点时，溶液中稍过量的NaNO2使电位产生突跃，从而指示终点。?USP采用这个方法指示终点。?外指示剂法外指示剂法?淀粉-KI糊剂或试纸 OH2NaCl2KCl2INOHCl4KI2NaNO22 22?遇淀粉显蓝色?原理：当达到滴定终点时，溶液中稍过量 的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2，I2遇淀粉显蓝色。?使用方法：使用方法：?滴定时，把淀粉-K

16、I试液滴在白磁板上，用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液，在白磁板上划，如果立即出现蓝色即已到滴定终点。?外指示剂法的缺点外指示剂法的缺点：?由于滴定的溶液是强酸性，KI遇光能被空气氧化析出碘，所以，在没有达到终点时，就有可能呈现蓝色，而造成误判。?由于经常蘸取溶液进行试验，可造成滴定液的损失而带来误差。?方法难掌握。?内指示剂法内指示剂法?内指示剂法指示终点，操作简便，但生成重氮盐一般都带有颜色，干扰指示剂颜色变化的观察，尤其是颜色很深时，更是这样。?在重氮化滴定法中，内指示剂法应用不是很广泛。(二)非水溶液滴定法（盐酸丁卡因、盐酸利多卡因的含量测定 (三)分光光度法（对乙酰氨基酚的测定，吸收系数法

17、）(四)高效液相色谱法（盐酸普鲁卡因注射液主成分及其降解产物的测定）第二节第二节 苯乙胺类药物分析苯乙胺类药物分析?一结构特点 HOHOCHOHCH2NHR?具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。?多数在苯环上有12个羟基取代基。?如在苯环3、4位上有羟基取代，则为儿茶 酚胺类药物。?代表药物 HOHOCH CH2NHCH3OHHOHOCHOHCH2NH2肾上腺素 去甲肾上腺素?二性质二性质：?1.易被氧化?邻苯二酚或苯酚结构，易被氧化呈色。?3.具有旋光性 具有手性碳原子，具有光学活性。?2.显碱性 具有烃胺侧链，显弱碱性。能与酸成盐。?三鉴别试验 1.氧化反应 )(222OIor OH棕色聚合聚

18、合物放置肾上腺素红肾上腺素?极微红色无色同样条件下去甲肾上腺素反应速度极慢or?区别肾上腺素和去甲肾上腺素。2、三氯化铁反应：酚羟基+Fe3+显色（绿色）+Fe3+碱性 紫色或紫红色 例：肾上腺素在 0.1mol/L 盐酸中与 Fe3+显翠绿色，加氨试液后，显紫色或紫红色 3、与甲醛-硫酸反应:生成醌式结构显色（红色）4、紫外与红外吸收光谱:5、与亚硝基铁氰化钠反应 重酒石酸间羟胺（伯氨基）+亚硝基铁氰化钠试液+丙酮+碳酸氢钠 加热 显红紫色 四、特殊杂质检查（一）酮体检查 杂质引入：酮体氢化不完全 检查方法：紫外分光光度法 原理：利用肾上腺素等药物在310nm处无 紫外吸收，而酮体在310n

19、m处有吸收的特点，通过控制药物在310nm处的吸收度来控制药物中酮体的含量。（二）有关物质检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇 检查方法：薄层色谱法 五、含量测定?（一）非水溶液滴定法?（二）溴量法?(三)高效液相色谱法 第四节 丙胺类药物 一、结构与性质（一）结构 R1 CH3 CHCH2CH2N R2 CH3 典型药物：马来酸氯苯那敏（扑尔敏）（二）性质 1、结构中具有顺丁烯二酸结构，为较强的有机酸，Ka=1.210-2，水溶液显酸性。2、分子中具有叔胺结构，发生叔胺特有的显色反应。二、鉴别试验（一）顺丁烯二酸的还原反应 使高锰酸钾退色（二）枸橼酸-醋酐试验（叔胺显色反应）本品+枸橼酸-醋酐 水浴加热 红紫色 3、紫外特征吸收和红外吸收光谱 三、含量测定（一）非水溶液滴定法（二）紫外分光光度法