第十一章多肽与蛋白质类药物课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《第十一章多肽与蛋白质类药物课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 第十一 多肽 蛋白质 类药物 课件
- 资源描述:
-
1、2023-1-10第十一章多肽与蛋白质类药物第十一章多肽与蛋白质第十一章多肽与蛋白质类药物类药物第十一章多肽与蛋白质类药物11.1 概述生物技术在该类药物中的应用2基本概念1第十一章多肽与蛋白质类药物11.1.1 基本概念 多肽类生化药物是以多肽激素和多肽细胞生长调节因子为主的一大类内源性活性成分。蛋白质生化药物包括蛋白质类激素、蛋白质细胞生长调节因子、血浆蛋白质类、黏蛋白、胶原蛋白及蛋白酶抑制剂等,其作用方式从对机体各系统和细胞生长的调节,扩展到被动免疫、替代疗法和抗凝血等。见P154 表11-1细胞生长刺激因子第十一章多肽与蛋白质类药物11.1.2 生物技术在该类药物中的应用 活性多肽和蛋
2、白是生化药物中非常活跃的一个领域,20世纪70年代以后,随着基因工程技术的兴起和发展,人们首先把目标集中在应用基因工程技术制造重要的多肽和蛋白质药物上,已实现工业化的产品有胰岛素、干扰素、白细胞介素、生长素、EPO、tPA、TNF等,现正从微生物和动物细胞的表达向转基因动、植物方向发展。见P115 表11-2用DNA重组技术生产的人类蛋白药物 见P156 表11-3欧美已批准上市的重组人类多肽和蛋白药物第十一章多肽与蛋白质类药物11.1.2 生物技术在该类药物中的应用第十一章多肽与蛋白质类药物11.2 多肽类药物的制备多肽药物的制备2多肽类药物1第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.1 多肽类药
3、物 多肽激素 多肽类细胞生长调节因子 含有多肽成分的组织制剂第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备1.降钙素(1)结构与性质 降钙素是由32个氨基酸残基组成的单链多肽,相对分子质量约3500,N端为半胱氨酸,它与7位上的半胱氨酸间形成二硫键,C端为脯氨酸。降钙素溶于水和碱性溶液,不溶于丙酮、乙醇、氯仿、乙醚、苯、异丙醇及四氯化碳等,难溶于有机酸。25以下避光保存可稳定存放两年,水溶液于210可保存7天。降钙素的活性可被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、多酚氧化酶、H2O2氧化、光氧化及N溴代琥珀酰亚胺所破坏。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(2)生产工艺
4、工艺流程第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备工艺过程及控制要点 猪甲状腺经绞碎,丙酮脱脂,制成脱脂甲状腺粉27kg,加入01mol/L盐酸1540L,加热至60搅拌1h。加水1620L混匀,搅拌1h,离心,沉淀用水洗涤,合并上清液和洗液再搅拌2h后离心。收集上清液,加入15L异戊醇-醋酸-水(203248)的混合液,搅匀,加热至50,用硅藻土作助滤剂过滤,收集沉淀。沉淀溶于8L 0.3mol/L氯化钠溶液中,用10%盐酸调节pH=2.5,离心除去不溶物。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 收集离心液,溶液用10倍水稀释后,通过CMC(5cm50cm)柱,柱
5、先用0.02mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5)平衡。收集含有降钙素的溶液,冻干或用2mol/L的氯化钠盐析,制得降钙素粉末,含量为3.6U/mg。在此基础上还可进一步纯化。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备生物活性测定 样品用经过0.1mol/L醋酸钠溶液稀释过的0.1%白蛋白溶液溶解,取0.2mL样品按倍比稀释法配制,选用雄性大白鼠,静脉注射后1h收集血液。血样品的血清钙值采用原子吸收光谱法测定,对照采用从猪甲状腺中提取的MRC标准品。将标准品稀释至所需要的稀释度2.5MRCmU/0.2mL、5MRCmU/0.2mL、10MRCmU/0.2mL和20MRCmU/0.2
6、mL,然后用同样方法给大鼠注射,1h后测定血清钙值。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备2.胸腺激素第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 临床用于以下方面:原发性和继发性免疫缺陷病,如反复上呼吸道感染等 自身免疫病,如肝炎、肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力等 变态反应性疾病,如支气管哮喘等 细胞免疫功能减退的中年人和老年人疾病,并可抗衰老 肿瘤的辅助治疗。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(1)结构与性质 胸腺素组分5是由在80热稳定的4050种多肽组成的混合物,相对分子质量在100015000之间,等电点在3.59.5之间。为了
7、便于不同实验室对这些多肽的鉴别和比较,根据它们的等电点以及在等电聚焦分离时的顺序而命名,共分三个区域:区包括等电点低于5.0的组分,区包括等电点在5.07.0之间的组分,区则指其等电点在7.0以上者(此区内组分很少)。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 对分离的多肽进行免疫活性测定,有活性的称为胸腺素,如胸腺素1,无活性者则称之为多肽,如多肽1。现已清楚,胸腺素组分5中,胸腺素1、5、7等是具有调节胸腺依赖性淋巴细胞分化和体内外免疫反应的活性组分。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(2)生产工艺工艺流程第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制
8、备工艺过程及控制要点 将新鲜或冷冻胸腺除脂肪并绞碎后,加3倍量生理盐水,于组织捣碎机中制成匀浆,14000g离心,得提取液(组分1)。提取液80加热15min,以沉淀对热不稳定部分。离心去掉沉淀,得上清液(组分2)。上清液冷至4,加入5倍体积的-10丙酮,过滤收集沉淀,干燥后得丙酮粉(组分3)。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 将丙酮粉溶于pH=7.0磷酸盐缓冲溶液中,加硫酸铵至饱和度为0.25,离心去除沉淀,上清液(组分4)调pH值为4.0,加硫酸铵至饱和度为0.50,得盐析物。将盐析物溶于pH=8.0的10mmol/L trisHCl缓冲液中,超滤,取相对分子质量在1
9、5000以下的超滤液。超滤液经Sephadex G-25脱盐后,冷冻干燥得胸腺素(组分5).(3)活力测定E-玫瑰花结升高百分数不得低于10%;相对分子质量15000以下。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备3.胸腺肽(1)结构与性质 胸腺肽是从冷的小牛(或猪、羊)胸腺中,经提取、部分热变性、超滤等工艺过程制备出的一种具有高活力的混合肽类药物制剂。凝胶电泳分析表明,胸腺肽中主要是相对分子质量9600和7000左右的两类蛋白质或肽类,氨基酸组成达15种,必需氨基酸含量高,还含有0.20.3mg/mgRNA、0.120.18mg/mgDNA。对热较稳定,加温80生物活性不降低。经
10、蛋白水解酶作用,生物活性消失。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(2)生产工艺 工艺流程第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备工艺过程及控制要点 取-20冷藏小牛胸腺,用无菌的剪刀剪去脂肪、筋膜等非胸腺组织,再用冷无菌蒸馏水冲洗,置于灭菌绞肉机中绞碎。将绞碎胸腺与冷重蒸馏水按11的比例混合,置于10000r/min的高速组织捣碎机中捣碎1min,制成胸腺匀浆。浸渍提取,温度应在10以下,并放置-20冰冻贮藏48h。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 将冻结的胸腺匀浆融化后,置水浴上搅拌加温至80,保持5min,迅速降温,放置-20以下冷藏
11、23天。然后取出融化,5000r/min离心40min,温度2,收集上清液,除去沉渣,用滤纸浆或微孔滤膜(0.22m)减压抽滤,得澄清滤液。将滤液用相对分子质量截流值为10000以下的超滤膜进行超滤,收取相对分子质量10000以下的活性多肽,得精制液,置-20冷藏。经检验合格,加入3%甘露醇作赋形剂,用微孔滤膜除菌,分装,冷冻干燥即得注射用胸腺肽。(3)活力测定:同胸腺素。相对分子质量10000以下。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备4.促皮质素第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(1)结构与性质 ACTH为39个氨基酸组成的直链多肽,种属差异仅仅表现在第
12、2533位上。ACTH的24肽即124位的片段(ACTH 124)具有全部活性。ACTH的第24位氨基酸之后的部分,不参与同受体的作用,它仅维持整个多肽结构的稳定性。ACTH可被胃蛋白酶部分水解,水解物因存在着活性片段故仍有活力。ACTH在溶液中存在着高度的-螺旋。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(2)生产工艺 工艺流程第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备工艺过程及控制要点 垂体前叶干粉加0.5mol/L醋酸20倍,用硫酸调节pH=2.02.4,7075保温10min,过滤,得提取液。提取液调pH=3.1,加投料量20%的CMC(2.2mg),3搅拌吸附
13、12h,过滤。CMC用0.15mol/L盐酸解吸,解吸液用717阴离子交换树脂处理,过滤,调节pH=3.1,冷藏。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备 在洗脱滤液中再加入CMC二次吸附,15搅拌吸附12h,过滤,CMC用0.1 mol/L醋酸、蒸馏水、0.01mol/L醋酸铵(pH=4.6)及0.1mol/L醋酸铵(pH=6.7)分别洗涤,最后用0.15mol/L盐酸解吸。解吸液分别用717阴离子交换树脂及732阳离子交换树脂处理,pH值调到3.0左右,冷冻干燥得ACTH,效价在45U/mg以上。第十一章多肽与蛋白质类药物11.2.2 多肽药物的制备(3)检验 ACTH粗品用
14、小白鼠胸腺萎缩法测定,每1mg相当于1U以上;ACTH精品用去垂体大白鼠的肾上腺维生素C降低法测定,每1mg相当于45U以上。第十一章多肽与蛋白质类药物11.3 蛋白质类药物的制备主要蛋白质类药物的制备2蛋白质类药物1第十一章多肽与蛋白质类药物11.3.1 蛋白质类药物 蛋白质类激素 血浆蛋白 蛋白质类细胞生长调节因子 黏蛋白 胶原蛋白 碱性蛋白 蛋白酶抑制第十一章多肽与蛋白质类药物11.3.2 主要蛋白质类药物的制备1.白蛋白及人血丙种球蛋白(1)结构和性质第十一章多肽与蛋白质类药物11.3.2 主要蛋白质类药物的制备(2)白蛋白及人丙种球蛋白的生产工艺 工艺流程第十一章多肽与蛋白质类药物1
展开阅读全文