微生物检验在儿科临床应用课件.ppt
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- 微生物 检验 儿科 临床 应用 课件
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1、细菌的耐药性监测细菌的耐药性监测实验中心微生物检验检验在儿儿科临临床的应应用1穿过细菌外膜、肽聚糖或细胞膜,到达作用部位,并与作用靶位接合2经受住细菌产生的各种灭活酶的攻击3与参与细菌基本功能的结构相互作用,并充分地抑制该功能抗菌药物抑制细菌生长,必须具备的条件:抗菌药物抑制细菌生长,必须具备的条件:细菌耐药性的概念细菌耐药性的概念致病微生物对于抗菌药物作用的耐受性或对抗性概念概念是抗菌药物、细菌本身及环境共同作用的结果1 1:按遗传物质分类:按遗传物质分类固有耐药固有耐药获得性耐药获得性耐药2 2:按耐药现象分类:按耐药现象分类交叉耐药交叉耐药多重耐药多重耐药细菌耐药性的分类:细菌耐药性的分
2、类:细菌耐药性的产生机制细菌耐药性的产生机制 分子遗传遗传机制 生化机制 细菌耐药的遗传性变异是基因结构发生改变。结构改变主要通过基因突变和基因的转移与重组。分子遗传机制:分子遗传机制:一、细菌的抗菌药物作用靶位的改变一、细菌的抗菌药物作用靶位的改变二、细菌产生灭活酶(水解酶或修饰二、细菌产生灭活酶(水解酶或修饰 酶)酶)三、药物累计不足三、药物累计不足生化机制:生化机制:细菌产生诱导酶对抗生素的细菌产生诱导酶对抗生素的作用靶位进行化学修饰作用靶位进行化学修饰基因突变造成靶位变异使抗基因突变造成靶位变异使抗菌药物不易或不能与靶位结合菌药物不易或不能与靶位结合一、抗菌药物作用靶位的改变一、抗菌药
3、物作用靶位的改变产生耐药产生耐药细菌的生理功能正常细菌的生理功能正常l青霉素结合蛋白的改变青霉素结合蛋白的改变l核糖体靶位酶亲和力的下降核糖体靶位酶亲和力的下降:导致细菌对氨基糖苷类、导致细菌对氨基糖苷类、l 磺胺类、红霉素类、四环素类、氟喹诺酮类抗菌药物磺胺类、红霉素类、四环素类、氟喹诺酮类抗菌药物耐药。耐药。l型拓扑异构酶或型拓扑异构酶或DNADNA解旋酶的改变解旋酶的改变:导致金黄色葡萄球导致金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠杆菌科细菌和假单胞菌等对氟喹菌、表皮葡萄球菌、肠杆菌科细菌和假单胞菌等对氟喹诺酮类抗生素耐药。诺酮类抗生素耐药。l二氢叶酸代谢酶的改变:细菌改变二氢叶酸合成酶构型二氢
4、叶酸代谢酶的改变:细菌改变二氢叶酸合成酶构型,可使该酶与磺胺类抗菌药物的亲和力大为降低,导致,可使该酶与磺胺类抗菌药物的亲和力大为降低,导致细菌对磺胺药耐药。细菌对磺胺药耐药。l肠球菌对万古霉素的耐药机制:主要是其作用靶位,细肠球菌对万古霉素的耐药机制:主要是其作用靶位,细胞壁五肽末端的胞壁五肽末端的D-D-丙氨酰丙氨酰-D-D-丙氨酸突变为丙氨酸突变为D-D-丙氨酰丙氨酰-D-D乳酸或乳酸或D-D-丙氨酸而导致耐药。丙氨酸而导致耐药。PBP:是是内酰胺类抗生素的作用靶位蛋白内酰胺类抗生素的作用靶位蛋白 具有转肽酶或羧肽酶活性具有转肽酶或羧肽酶活性 位于细胞膜上,参与细胞壁合成位于细胞膜上,参
5、与细胞壁合成 在正常情况下:在正常情况下:内酰胺类抗生素与内酰胺类抗生素与PBP结合,可干扰细菌肽聚糖的正常结合,可干扰细菌肽聚糖的正常合成。合成。在异常情况下:当某些细菌获得外源性在异常情况下:当某些细菌获得外源性DNA时,编码产生新的低亲和力的时,编码产生新的低亲和力的PBP或或PBP本身发生修饰改变,对抗菌药物亲和力降低,从而导致该细本身发生修饰改变,对抗菌药物亲和力降低,从而导致该细菌对菌对内酰胺类抗生素产生耐药。内酰胺类抗生素产生耐药。如:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌如:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌:(MRSA)产生一种新的低分子量的产生一种新的低分子量的PBP2a,当有,当有内酰胺类抗生素
6、存在时,内酰胺类抗生素存在时,细菌表面细菌表面5种正常的种正常的PBP被抑制,不能发挥正常生理功能,而被抑制,不能发挥正常生理功能,而PBP2a不被不被抑制,可作为转肽酶完成细胞壁的合成,使抑制,可作为转肽酶完成细胞壁的合成,使MRSA对所有对所有内酰胺类抗内酰胺类抗生素产生耐药。生素产生耐药。例如:青霉素结合蛋白(例如:青霉素结合蛋白(PBP)的改变的改变l 内酰胺酶l 氨基糖苷类钝化酶l 氯霉素乙酰转移酶l 红霉素酯化酶二、细菌产生的灭活酶(水解酶或二、细菌产生的灭活酶(水解酶或修饰酶)修饰酶)内酰胺酶内酰胺酶:细菌产生的以细菌产生的以内酰胺类抗菌药内酰胺类抗菌药物为水解产物的多种不同类型
7、的降解酶,可使物为水解产物的多种不同类型的降解酶,可使内酰胺键断裂造成内酰胺键断裂造成内酰胺类药物失去活性。内酰胺类药物失去活性。目前已知的目前已知的内酰胺酶有内酰胺酶有200200多种。多种。内酰胺酶类抗菌药物内酰胺酶类抗菌药物:包括青霉素与头孢菌素包括青霉素与头孢菌素类等类等,为临床最常用的抗菌药物之一。这类药物为临床最常用的抗菌药物之一。这类药物的化学结构中均有的化学结构中均有内酰胺环内酰胺环,可抑制细菌细可抑制细菌细胞壁的合成胞壁的合成,此环与他们的抗菌作用密切相关此环与他们的抗菌作用密切相关,当当环被打开环被打开,则抗菌活性消失。则抗菌活性消失。内酰胺酶的分类l超广谱超广谱内酰胺酶(
8、内酰胺酶(ESBLsESBLs)主要由大肠杆菌和肺炎克)主要由大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的广谱酶雷伯菌的广谱酶TEM-1TEM-1、TEM-2TEM-2和和SHV-1SHV-1突变形成。使细菌突变形成。使细菌的耐药谱从青霉素和一、二代头孢菌素扩大到青霉素和一、的耐药谱从青霉素和一、二代头孢菌素扩大到青霉素和一、二、三代头孢菌素及单环类,但对头霉素、碳青酶烯类及二、三代头孢菌素及单环类,但对头霉素、碳青酶烯类及酶抑制剂敏感。酶抑制剂敏感。lAmpCAmpC酶为染色体介导的头孢菌素酶,几乎所有肠杆菌科细酶为染色体介导的头孢菌素酶,几乎所有肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌都产生此酶。当此酶大量表达时,可导菌和
9、铜绿假单胞菌都产生此酶。当此酶大量表达时,可导致细菌对除第四代头孢菌素、碳青酶烯类之外的所有致细菌对除第四代头孢菌素、碳青酶烯类之外的所有内酰胺类抗生素耐药。且对内酰胺类抗生素耐药。且对内酰胺酶抑制剂及内酰胺酶抑制剂及EDTAEDTA均均不敏感。不敏感。l金属金属内酰胺酶是一群能水解碳青酶烯类抗生素的酶,内酰胺酶是一群能水解碳青酶烯类抗生素的酶,能被金属螯合剂螯合,不被酶抑制剂抑制。到目前为止至能被金属螯合剂螯合,不被酶抑制剂抑制。到目前为止至少发现了少发现了2828种。种。药物吸收减少药物吸收减少由于细胞壁的有效屏障或细胞膜通透性的改变,阻止药物吸收,使抗生素无法进入体内发挥作用主动外排泵作
10、用主动外排泵作用在某些细菌外膜上存在特殊的能量依赖性的药物泵系统,能将进入菌体内的药物不断泵出,使菌体内的药物浓度不足以发挥抗菌作用而导致耐药三、药药物累计计不足临床常见细菌对常见抗菌药物的主要耐药机制临床常见细菌对常见抗菌药物的主要耐药机制供临床选择治疗药物疗效差,考虑更换抗菌药了解病原菌耐药性的变迁评价新药抗菌谱及抗菌活性抗菌谱有助于某些菌种鉴定药敏试验的目的药敏试验的目的细菌耐药性监测细菌耐药性监测 以临床细菌标本的药敏试验为基础,分析所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁。2008年我院细菌耐药性监测2008年年7-9月月G-杆菌耐药率杆菌耐药率2008年抗生素使用排名年抗生素使用排名2
11、008年年1-6月月G+球菌耐药率球菌耐药率2008年年1-6月月G-杆菌耐药率杆菌耐药率2008年年10-12月细菌耐药性监测月细菌耐药性监测注:注:超广谱超广谱内酰胺酶(内酰胺酶(ESBLs)检测)检测19株株G肠杆菌,肠杆菌,14株阳性,阳性率为株阳性,阳性率为73.7。培养出的细菌种类培养出的细菌种类特殊细菌的耐药菌株检测试验特殊细菌的耐药菌株检测试验耐甲氧西林葡萄球菌检测耐甲氧西林葡萄球菌检测1超广谱超广谱内酰胺酶检测内酰胺酶检测2AmpC酶的检测酶的检测3 耐万古霉素肠球菌检测耐万古霉素肠球菌检测41.耐甲氧西林葡萄球菌检测耐甲氧西林葡萄球菌检测(MRSA)l由染色体由染色体mec
12、AmecA基因介导产生对苯唑青霉素等基因介导产生对苯唑青霉素等内酰内酰胺类抗生素亲和力很低的青霉素结合蛋白(胺类抗生素亲和力很低的青霉素结合蛋白(PBP2aPBP2a)。)。包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSAMRSA)和耐甲氧西)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNSMRCNS)。)。l苯唑西林纸片法:苯唑西林纸片法:MRSA13mmMRSA13mm,MRCNS18mmMRCNS18mmlMRSAMRSA阳性结果应注意:该菌对所有青霉素类、头孢菌阳性结果应注意:该菌对所有青霉素类、头孢菌素类、碳青酶烯类、氨基糖苷类、大环内酯类和含酶素
13、类、碳青酶烯类、氨基糖苷类、大环内酯类和含酶抑制剂的复合剂为耐药,不论检验报告的结果是否敏抑制剂的复合剂为耐药,不论检验报告的结果是否敏感。感。2.超广谱超广谱内酰胺酶检测(内酰胺酶检测(ESBLs)lESBLsESBLs可与可与内酰胺环的羧基共价结合,使其酰胺键水内酰胺环的羧基共价结合,使其酰胺键水解。解。l主要由大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的广谱酶主要由大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的广谱酶TEM-1TEM-1、TEM-2TEM-2和和SHV-1SHV-1突变形成。使细菌的耐药谱从青霉素和一、二代头突变形成。使细菌的耐药谱从青霉素和一、二代头孢菌素扩大到青霉素和一、二、三代头孢菌素及单环类,孢菌素扩大到
14、青霉素和一、二、三代头孢菌素及单环类,但对头霉素、碳青酶烯类及酶抑制剂敏感。但对头霉素、碳青酶烯类及酶抑制剂敏感。l采用双纸片扩散法,即头孢他啶与头孢他啶采用双纸片扩散法,即头孢他啶与头孢他啶/棒酸,头孢棒酸,头孢噻肟与头孢噻肟噻肟与头孢噻肟/棒酸组合,任何一组药物的抑菌直径之棒酸组合,任何一组药物的抑菌直径之差差5mm5mm时判断时判断ESBLsESBLs阳性。阳性。3.AmpC酶的检测酶的检测lAmpCAmpC酶为染色体介导的头孢菌素酶,优先作用酶为染色体介导的头孢菌素酶,优先作用底物是头孢菌素。底物是头孢菌素。l几乎所有肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌都产生几乎所有肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌都
15、产生此酶。当此酶大量表达时,可导致细菌对除第此酶。当此酶大量表达时,可导致细菌对除第四代头孢菌素、碳青酶烯类之外的所有四代头孢菌素、碳青酶烯类之外的所有内内酰胺类抗生素耐药。且对酰胺类抗生素耐药。且对内酰胺酶抑制剂内酰胺酶抑制剂及及EDTAEDTA均不敏感。均不敏感。l5 5种纸片初筛试验:头孢他啶、头孢他啶种纸片初筛试验:头孢他啶、头孢他啶/棒酸、棒酸、头孢西丁、亚胺培南和头孢吡肟,前三种耐药,头孢西丁、亚胺培南和头孢吡肟,前三种耐药,后两种敏感。后两种敏感。4.耐万古霉素肠球菌检测(耐万古霉素肠球菌检测(VRE):):耐万古霉素肠球菌(耐万古霉素肠球菌(VRE)可分为)可分为VanA、Va
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