生物工程分析的基础知识解析课件.ppt

1、（三）采用的一般程序（三）采用的一般程序采样工具2.2.3 样品的保存样品的保存 防吸水或失水、霉变、高温分解、失活、细菌等1.1.鲜样如不能立即测定，则须放在冰箱中鲜样如不能立即测定，则须放在冰箱中(-5)(-5)短期冷短期冷藏保存，以抑制其生理变化。藏保存，以抑制其生理变化。2.2.新鲜的动物样品取样后，一般采取冷冻保存（新鲜的动物样品取样后，一般采取冷冻保存（2020），或采用超低温保存（），或采用超低温保存（7070），或采用液氮冷），或采用液氮冷冻保存，以防止蛋白质及脂肪发生变化。冻保存，以防止蛋白质及脂肪发生变化。(一）蒸馏法一）蒸馏法利用液体混合物中各组分挥发度的不同分离为纯组分

2、利用液体混合物中各组分挥发度的不同分离为纯组分的方法叫蒸馏。的方法叫蒸馏。（1 1）常压蒸馏）常压蒸馏当被蒸馏的物质受热后不发生分解或在沸点不太高的当被蒸馏的物质受热后不发生分解或在沸点不太高的情况下，可在常压进行蒸馏。情况下，可在常压进行蒸馏。（2）减压蒸馏当常压蒸馏容易使蒸馏物质分解，或其沸点太高时，可以采用减压蒸馏。减压装置可用水泵或真空泵。（3）水蒸汽蒸馏将水和与水互不相溶的液体一起蒸馏，这种蒸馏的方法就成为水蒸汽蒸馏。（4）分馏分馏是蒸馏的一种，是将液体混合物在一个设备内同时进行多次部分汽化和部分冷凝，将液体混合物分离为各组分的蒸馏过程。这种蒸馏方法用于这种混合液体，即它的两种或两种

3、以上组分是可以互溶而且沸点相差很小的。在高温或强氧化条件下，使样品中有机物质分解，并在加在高温或强氧化条件下，使样品中有机物质分解，并在加热过程中成气态而逸散掉。可分为热过程中成气态而逸散掉。可分为干法灰化干法灰化和和湿法消化湿法消化两大类。两大类。2.3.3.1 2.3.3.1 干法灰化干法灰化:是一种用高温灼烧的方式破坏样品中的有是一种用高温灼烧的方式破坏样品中的有机物的方法，又称灼烧法。样品在灰化炉中（一般机物的方法，又称灼烧法。样品在灰化炉中（一般550550摄氏度）摄氏度）被充分氧化。为了避免测定物质的散失，往往加入少量碱性或被充分氧化。为了避免测定物质的散失，往往加入少量碱性或酸性

4、物质（固定剂），通常称为碱性干法灰化或酸性干法灰化。酸性物质（固定剂），通常称为碱性干法灰化或酸性干法灰化。（二）有机物破坏法（二）有机物破坏法具体预处理方法干法灰化干法灰化（三）溶剂提取法在任一溶剂中，不同的物质具有不同的溶解度，利用混合物中各物质的溶解度的不同，将混合物组分完全或部分地分离，此过程叫萃取，也称提取。（1）溶剂分层法（2）浸泡法从固体混合物或有机体中提取某种物质时，一般采用浸泡法，所以这种方法称为浸提。常用的是索克斯特式提取器（简称索氏提取器）。（3）盐析法向溶液中加入某一物质，使溶质溶解在原溶剂中的溶解度大大降低，从而从溶液中沉淀出来，这个方法叫作盐析。（四）色层分离法柱层

5、析法是净化抽提液中杂质的最通用的方法。在使用此法时调整吸附剂的活性及选用极性强弱适宜的溶剂是净化成败的关键。柱层析法有吸附柱层析法和分配柱层析法。吸附柱层析法常用氧化铝、活性碳和硅胶等作吸附剂；分配柱层析法常用硅藻土和弗罗里矽土等做担体。薄层层析1.1.精密度精密度：是指对同一样品多次测定，每是指对同一样品多次测定，每次测定结果与均值的符合程度。次测定结果与均值的符合程度。是表示测是表示测定结果中定结果中随机误差随机误差大小的指标。表示精密大小的指标。表示精密度的指标有标准偏差（度的指标有标准偏差（S S）、变异系数）、变异系数（CVCV）、平均偏差等。评价精密度的方法）、平均偏差等。评价精密

6、度的方法有有平行试验平行试验和和重复性重复性试验。试验。2.2.准确度准确度：指测定值与真值之间的符合程指测定值与真值之间的符合程度。度。往往以不准确度来衡量，即重复测定往往以不准确度来衡量，即重复测定的均值与真值之差。准确度主要受的均值与真值之差。准确度主要受系统误系统误差差支配，也受支配，也受随机误差随机误差的影响。评价准确的影响。评价准确度的方法有度的方法有回收试验、干扰实验、对比试回收试验、干扰实验、对比试验验。3.3.灵敏度：灵敏度：是指分析方法所能是指分析方法所能检出的最低量。检出的最低量。4.4.特异性：指分析测定中对某一成分起反应，其特异性：指分析测定中对某一成分起反应，其他物

7、质对反应无影响或基本无影响。他物质对反应无影响或基本无影响。评价特异性评价特异性的方法有干扰试验。的方法有干扰试验。5.5.线性范围：是指能达到一定精密度、准确度和线性范围：是指能达到一定精密度、准确度和线性前提下，测试方法所适应的高、低浓度或量线性前提下，测试方法所适应的高、低浓度或量的区间。的区间。通过线性试验确定。通过线性试验确定。6.6.耐用性耐用性:指在测定条件下有小的变动时指在测定条件下有小的变动时,分析相分析相同的样品所测得试验结果的重现程度。同的样品所测得试验结果的重现程度。1100%100%100%iniiiirXXXXXnEXXEr-相对偏差d平均偏差d绝对误差相对误差二.

8、实验误差的表示方法(1)（3 3）变异系数（）变异系数（CVCV）(相对标准偏差相对标准偏差):是样本标准偏差与是样本标准偏差与样本均数的百分比值。样本均数的百分比值。用于比较各组数据间的变异情况，用于比较各组数据间的变异情况，不受单位影响，不受单位影响，CVCV值越大，说明测定值离散度越大，精密值越大，说明测定值离散度越大，精密度越差。度越差。100XS%CV（2）标准偏差(均方根偏差)，用S表示。是表示精密度的较好指标。2211iXXdSnn-2-3+3+2回归曲线回归曲线yaxbab为直线的斜率,与方法的灵敏度有关;为直线的截距,与系统误差大小有关.22111()()()()iinnii

9、iixxyyxxyyni=1但这个方程是否有意义得由相关系数r来确定当r=1时,两变量完全线性相关;当r=0时,两变量毫无相关关系;0 r时,两变量有一定的相关性.r=continue3.对照实验:标样与测样结果对照;不同人员检验结果对照 可检测方法的系统误差4.空白试验：不加入待测样品，其它的测定过程、方法和试剂均与测定样品相同的试验。可抵消由于试剂中杂质的干扰等因素造成的系统误差。回收试验回收试验:目的是目的是衡量分析方法的准确度。衡量分析方法的准确度。1.1.方法方法:在样品中加入一定量被测物质，然在样品中加入一定量被测物质，然后用同样方法测定，测得值与理论值之比乘后用同样方法测定，测得值与理论值之比乘以以100%100%即为回收率即为回收率，合格的回收率应为，合格的回收率应为100%100%5%5%。2.2.计算计算回收浓度分析标本测得浓度基础标本测得浓度回收浓度分析标本测得浓度基础标本测得浓度加入浓度加入浓度标准液量（标准液量（mlml）标准液浓标准液浓样品量标准液量（样品量标准液量（mlml）回收率（回收率（%）回收浓度回收浓度加入浓度加入浓度100%5.5.回收实验回收实验back