医学微生物学绪论（）课件.ppt

1、Introduction of microbiology病原生物学教研室病原生物学教研室 吕吕 厚厚 东东 （一）（一）定义定义：微生物微生物(Microorganism)是存在于自然界中是存在于自然界中的一的一 群形体积小，结构简单，肉眼看不到，必群形体积小，结构简单，肉眼看不到，必须借助显微镜放大数百倍、微数千倍甚至数万倍须借助显微镜放大数百倍、微数千倍甚至数万倍后，才能观察到的低等生物体。后，才能观察到的低等生物体。一、微生物（一、微生物（Microorganism）（二）微生物与人类的关系（二）微生物与人类的关系1.维系自然界的生物链和新陈代谢；维系自然界的生物链和新陈代谢；2.农业方

2、面：根瘤菌；农业方面：根瘤菌；3.工业方面：食品酿造、皮革、纺织、石油和化工；工业方面：食品酿造、皮革、纺织、石油和化工；4.医药卫生方面：抗生素和维生素的生产，基因工程医药卫生方面：抗生素和维生素的生产，基因工程中基因重组，污水处理无害化；中基因重组，污水处理无害化；5.人和动物体内共生微生物，条件致病性微生物及病人和动物体内共生微生物，条件致病性微生物及病 原微生物。原微生物。l1.个体小个体小：个体直径以微米（m）或纳米（nm）为测量单位；l2.形体简形体简：为简单多细胞、单细胞、原核细胞或非细胞型微生物；非细胞型微生物；l3.种类多种类多：至少有10万多种，主要分为非细胞型微生物，原核

3、细胞型微生物和真核细胞型微生物；l4.“食谱广食谱广”：动植物不能利用的物质甚至动植物不能利用的物质甚至剧毒物质，微生物均可作为营养物质；剧毒物质，微生物均可作为营养物质；l5.易变异：易变异：微生物的形态结构微生物的形态结构,营养代谢，营养代谢，抗原性，耐药性及对外界环境的抵抗力等，抗原性，耐药性及对外界环境的抵抗力等，均可发生变异，变异率均可发生变异，变异率10-5-10-10；l6.起源早：起源早：地球形成于地球形成于46亿年前，微生物亿年前，微生物产生于产生于35亿年前，人类的形成仅在亿年前，人类的形成仅在300万万年前。年前。l7.繁殖快繁殖快：在生物界以微生物繁殖最快，细：在生物界

4、以微生物繁殖最快，细菌仅需菌仅需20分钟即可分裂繁殖一次；分钟即可分裂繁殖一次；l8.数量多数量多：每克泥土中微生物可达数亿至数：每克泥土中微生物可达数亿至数十亿个，人的肠道内正常菌群含十亿个，人的肠道内正常菌群含100 400种种微生物，数量达微生物，数量达100万亿个之多；万亿个之多；l9.分布广分布广：在地球上地壳内、大气层、水和：在地球上地壳内、大气层、水和动植物内，微生物无处不在；动植物内，微生物无处不在；l10.“胃口大胃口大”：1个大肠杆菌每小时消耗自身个大肠杆菌每小时消耗自身重量重量2 000倍的糖，折合一个成人为倍的糖，折合一个成人为500年所年所消耗的粮食。消耗的粮食。（四

5、）三大类微生物特点比较（四）三大类微生物特点比较特点特点 真核细胞型真核细胞型 原核细胞型原核细胞型 非细胞型非细胞型 直径（m）615 0.25 0.020.30细胞结构 分化程度高，有 仅有核质，内含双链DNA 病毒体的核心为 核膜、核仁及细 和RNA，细胞器有核蛋白体 DNA or RNA 胞器、组蛋白和 （70s）核蛋白体体外培养 培养基 支原体、立克次体及衣原 有些可在活细胞 体需在活细胞或鸡胚中培 中增殖，有些可 养，其他可用培养基培养 在动物体内复制 传代真菌真菌细菌、支原体、立克次体、细菌、支原体、立克次体、衣原体、螺旋体、放线菌衣原体、螺旋体、放线菌病毒、朊毒体病毒、朊毒体(

6、朊病毒朊病毒)微生物学是研究微生物的分类、增殖微生物学是研究微生物的分类、增殖 代谢、遗传变异、在自然界的分布及与环代谢、遗传变异、在自然界的分布及与环 境之间的作用，并利用和控制它们的一门境之间的作用，并利用和控制它们的一门 科学。科学。三、医学微生物学三、医学微生物学Medical Microbiology 医学微生物学属于生命科学医学微生物学属于生命科学（life science），主），主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学性状，要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学性状，对人体感染和致病的机制，特异性诊断方法以及预对人体感染和致病的机制，特异性诊断方法以及预防与治疗感染性疾病的

7、策略和措施，以便控制甚至防与治疗感染性疾病的策略和措施，以便控制甚至消消灭此类疾病的一门科学。灭此类疾病的一门科学。（一）新发现（一）新发现3030余种病原微生物余种病原微生物1.1967-19711.1967-1971年相继从年相继从C-JC-J病，病，G-SG-S病，病，FFIFFI病，羊骚痒病，病，羊骚痒病，KURUKURU病及疯牛病体内分离到类病毒（病及疯牛病体内分离到类病毒（ViroidViroid），拟病），拟病 毒（毒（VirusoidVirusoid）和朊毒体（）和朊毒体（prionprion或朊病毒或朊病毒,virino,virino），），19831983年国际会议上正式统

8、称为亚病毒（年国际会议上正式统称为亚病毒（subvirussubvirus）。）。2.19732.1973年发现人类不明原因腹泻（秋季腹泻）的轮状病年发现人类不明原因腹泻（秋季腹泻）的轮状病 毒（毒（RotavirusRotavirus）。）。3.19653.1965年我国学者首次从新疆巴慧县农村患者中分离出年我国学者首次从新疆巴慧县农村患者中分离出 新疆出血热病毒（病毒直径新疆出血热病毒（病毒直径9292105nm105nm的的RNARNA病毒），病毒），19781978年韩国首次分离到肾综合征（年韩国首次分离到肾综合征（HFRSHFRS）的病原体汉）的病原体汉 坦病毒（坦病毒（Hantaa

9、n virusHantaan virus）后将上述出血热病毒同归）后将上述出血热病毒同归 为布尼亚病毒科（为布尼亚病毒科（BunyaviridaeBunyaviridae）4.19744.1974年从莱姆（年从莱姆（LymeLyme）病患者的硬蜱体内分离到伯氏）病患者的硬蜱体内分离到伯氏 疏螺旋体（疏螺旋体（Borrelia burgdorfiriBorrelia burgdorfiri，BBBB）。）。5.19825.1982年从慢性胃炎患者体内分离到幽门螺杆菌年从慢性胃炎患者体内分离到幽门螺杆菌(Heli-(Heli-cobacter pylori)cobacter pylori)后证明他

10、与溃疡病有关后证明他与溃疡病有关.6.19826.198219831983年法国人及美国人相继从年法国人及美国人相继从AIDSAIDS患者体内分患者体内分 离出离出HIV-1HIV-1型病毒型病毒,其后又在西非分离到其后又在西非分离到 HIV-2HIV-2型病毒型病毒7.1989 7.1989 年年9 9月正式将非甲非乙型肝炎病毒分为丙型肝炎月正式将非甲非乙型肝炎病毒分为丙型肝炎 病毒病毒(HCV)(HCV)和戊型肝炎病毒和戊型肝炎病毒(HEV)(HEV)。19951995年以来又重新年以来又重新 认识庚型肝炎病毒（认识庚型肝炎病毒（HGVHGV或或GBV-CGBV-C）。）。8.19928.

11、1992年年1010月从印度、孟加拉、泰国等地霍乱患者粪便中分月从印度、孟加拉、泰国等地霍乱患者粪便中分离到非离到非0-10-1群霍乱流行株群霍乱流行株0 0139139群，已成为目前优势流行株。群，已成为目前优势流行株。9.9.近年来致病性艾希氏大肠菌近年来致病性艾希氏大肠菌0 0157157血清型血清型(0(0157157:H:H7 7)可引起出可引起出血性结肠炎。血性结肠炎。10.197610.1976年年6 6月月在非洲扎伊尔及苏丹发现埃博拉病毒月月在非洲扎伊尔及苏丹发现埃博拉病毒（Ebola virusEbola virus）引起的埃博拉出血热（）引起的埃博拉出血热（EBOHFEBO

12、HF）。）。11.SARS11.SARS冠状病毒冠状病毒 是是2002.11-2003.62002.11-2003.6世界流行的严重急性呼世界流行的严重急性呼吸综合征。吸综合征。12.H5N112.H5N1型流感病毒于型流感病毒于20042004发现不但能感染禽类还可感染人。发现不但能感染禽类还可感染人。近近20年来，另有年来，另有20种原已被控制的感染病种原已被控制的感染病,包括包括9种细菌病、种细菌病、3种病毒病和种病毒病和8种寄生虫病种寄生虫病，如结核病、白喉、登革热、霍乱。，如结核病、白喉、登革热、霍乱。（二）致病机制的深入研究（二）致病机制的深入研究 病原微生物的致病物质（如细菌的内

13、毒素病原微生物的致病物质（如细菌的内毒素与外毒素的致病性），病毒吸附、侵入细胞的与外毒素的致病性），病毒吸附、侵入细胞的机制，机体对感染的细胞免疫及体液免疫，病机制，机体对感染的细胞免疫及体液免疫，病原微生物的遗传变异等，均有新的发现和进展。原微生物的遗传变异等，均有新的发现和进展。（三）诊断手段和方法的创新与改进（三）诊断手段和方法的创新与改进 1.细菌学检验的微量化、自动化，诊断试剂细菌学检验的微量化、自动化，诊断试剂盒系列化。盒系列化。2.免疫荧光（免疫荧光（IF）、放射免疫（）、放射免疫（RIA）和酶）和酶联免疫吸附试验（联免疫吸附试验（EIA）技术，被称为抗原抗）技术，被称为抗原抗体

14、系统检测的革命。体系统检测的革命。3.核酸杂交技术，包括斑点杂交（核酸杂交技术，包括斑点杂交（dot blot）、）、原位杂交（原位杂交（in situ hybridization）、）、Southern blotting、Northern blotting、Western blotting等。等。四、学习医学微生物学的目的四、学习医学微生物学的目的和要求和要求1.医学微生物学是基础医学的主干学科,它为学好其他基础医学,临床医学和预防医学的专业基础课和专业课打下基础;2.为防制和消灭感染性疾病提供理论知识和技能；3.为医学开展深入研究,尤其在人类遗传学免疫学疫苗的研制,抗病毒抗肿瘤药物研制等方

15、面,微生物分子生物学是不可缺少的研究手段。1.温故知新,在学习医学微生物学中,要联系并运用已学过的生物遗传学,免疫学,生物化学等学科的理论知识和技能；2.医学微生物学包括细菌学总论,细菌及其它细胞型微生物各论,病毒学总论和病毒学各论共四个部分,在学习中要学会自己归纳总结,从对比联系中学习；3.医学微生物学是偏重于形态学和实验操作技能的课程,要重视实验课的学习。细菌以微米（细菌以微米（m）为测量单位。）为测量单位。细菌形态：球菌、杆菌、螺形菌。细菌形态：球菌、杆菌、螺形菌。多数球菌其直径多数球菌其直径 在在1m。l双球菌双球菌(diplococci)l链球菌链球菌(streptococci)l葡

16、萄球菌葡萄球菌(staphylococci)l四联球菌四联球菌(tetrads)l八叠球菌八叠球菌(sarcina)双球菌双球菌四联球菌四联球菌八叠球菌八叠球菌葡萄球菌葡萄球菌链球菌链球菌l大小范围大小范围(0.310 m)(0.2 1.3 m)。l球杆菌(coccobacillus)l分枝杆菌(mycobacterium)l弯曲杆菌(campylobacter)l棒状杆菌(coryneform bacillus)l梭形杆菌(shuttle)l链杆菌(streptobacillus)球杆菌球杆菌棒状杆菌棒状杆菌 链杆菌链杆菌分枝杆菌分枝杆菌弧菌弧菌(Vibrio,vibrios)l只有一个弯曲

17、，呈逗点状只有一个弯曲，呈逗点状(2 5 m)0.3 m。如霍乱弧菌。如霍乱弧菌。螺螺(旋旋)菌菌(Spirllum,Spirlla)l 有有34个弯曲个弯曲,(310m)(0.30.6m)如如鼠咬热螺菌鼠咬热螺菌,梅毒螺旋菌。梅毒螺旋菌。弧菌弧菌螺杆菌螺杆菌菌毛菌毛鞭毛鞭毛核质核质DNA荚膜荚膜细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜核糖体核糖体胞质颗粒胞质颗粒细胞质细胞质中介体中介体（一）细胞壁：（一）细胞壁：是细菌的最外层，坚韧而富有弹性。是细菌的最外层，坚韧而富有弹性。革兰阳性（革兰阳性（G+）菌：由肽聚糖与磷壁酸组成。）菌：由肽聚糖与磷壁酸组成。革兰阴性（革兰阴性（G-）菌：由外膜（脂蛋白、脂质双层

18、）菌：由外膜（脂蛋白、脂质双层 与脂多糖）和肽聚糖组成。与脂多糖）和肽聚糖组成。细胞壁的功能：细胞壁的功能：1、维持细菌固有的形态；、维持细菌固有的形态；2、与细胞膜共同参与细菌内外物质的交换；、与细胞膜共同参与细菌内外物质的交换；3、表面携带多种决定细菌抗原性的抗原决定簇。、表面携带多种决定细菌抗原性的抗原决定簇。4、与细菌的致病性有关。、与细菌的致病性有关。细胞壁、细胞膜、细胞质、核质。细胞壁、细胞膜、细胞质、核质。N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺四肽侧链四肽侧链-1.4-1.4糖苷键糖苷键五肽交联桥五肽交联桥溶菌酶作用点溶菌酶作用点青霉素作用点青霉素作用点N-乙酰胞壁

19、酸乙酰胞壁酸N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺-1.4-1.4糖苷键糖苷键四肽侧链四肽侧链脂蛋白脂蛋白G+菌细胞壁菌细胞壁G菌细胞壁菌细胞壁细胞膜细胞膜肽聚糖肽聚糖外外膜膜磷壁酸磷壁酸脂多糖脂多糖 区别要点区别要点 革兰阳性菌革兰阳性菌 革兰阴性菌革兰阴性菌 肽聚糖组成肽聚糖组成 聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥 聚糖骨架、四肽侧链聚糖骨架、四肽侧链 肽聚糖层数肽聚糖层数 可多达可多达50层层 仅仅1-2层层 肽聚糖含量肽聚糖含量 占细胞壁干重占细胞壁干重50%-80%占细胞壁干重占细胞壁干重5%-10%强度强度 较坚韧，三维立体结构较坚韧，三维立体结构 较疏松，二维平面

20、结构较疏松，二维平面结构 磷壁酸磷壁酸 有有 无无 外膜外膜 无无 有有 青霉素、溶菌酶青霉素、溶菌酶 敏感敏感 不敏感不敏感l概念：某些药物作用于细菌，可抑制的肽聚糖的合成或破坏细胞壁的结构，在高渗环境下，细菌仍可存活，成为细胞壁缺陷型。l形成条件：溶菌酶、青霉素、胆汁、溶葡萄球菌素、抗体、补体等。生物学特性：多形性、革兰阴性、高渗培养、生长缓慢、多形性、革兰阴性、高渗培养、生长缓慢、荷包蛋样菌落、可回复。荷包蛋样菌落、可回复。与医学的关系：致病性，常引起慢性和反复发作的感染。（二）细胞膜：（二）细胞膜：紧贴细胞壁内侧，包绕于细胞质紧贴细胞壁内侧，包绕于细胞质 外的一层结构。为脂质双层蛋白外

21、的一层结构。为脂质双层蛋白 质嵌镶结构。质嵌镶结构。细胞膜主要功能：细胞膜主要功能：1、参与细菌内外物质交换；、参与细菌内外物质交换；2、与细菌的能量间生和利用有关；、与细菌的能量间生和利用有关；3、与细菌的生物合成有关；、与细菌的生物合成有关；4、中介体参与细菌的呼吸及生物合成。、中介体参与细菌的呼吸及生物合成。（三）细胞质（三）细胞质（cytoplasm）细胞膜包裹的溶胶状物细胞膜包裹的溶胶状物质，或称原生质（质，或称原生质（protoplasm），由水、蛋白质、），由水、蛋白质、脂类、核酸及少量糖和无机盐组成，其中含有许脂类、核酸及少量糖和无机盐组成，其中含有许多重要结构。多重要结构。l

22、核糖体（核糖体（ribosome）RNA和蛋白质。和蛋白质。沉降系数沉降系数 70s 50s+30s（真核（真核80s 60s+40s）链霉素链霉素红霉素l质粒（质粒（plasmid）：）：染色体外的遗传物质，为闭合环状的双链DNA，带有遗传信息，控制着细菌的某些特定的遗传性状。l胞质颗粒：胞质颗粒：异染颗粒 RNA、多偏磷酸盐 嗜碱，着色深 诊断价值（白喉棒状杆菌）（四）核质：四）核质：是细菌的是细菌的 遗传物质。决定细菌的遗传物质。决定细菌的 遗传性状，是细菌遗传遗传性状，是细菌遗传 变异的物质基础。变异的物质基础。（一）荚膜：（一）荚膜：是某些细菌合成并分泌到细是某些细菌合成并分泌到细胞

23、壁外的一层粘液性物质。化胞壁外的一层粘液性物质。化学成分为多糖或多肽。学成分为多糖或多肽。荚膜的功能：荚膜的功能：1、抵抗吞噬细胞吞噬和保、抵抗吞噬细胞吞噬和保护菌体，是细菌致病的重要因护菌体，是细菌致病的重要因素之一。素之一。2、有免疫原性，可作为细、有免疫原性，可作为细菌鉴别和分型的依据。菌鉴别和分型的依据。3、荚膜多糖具有粘附作用，、荚膜多糖具有粘附作用，是引起感染的重要因素。是引起感染的重要因素。荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。（二）鞭毛：（二）鞭毛：鞭毛是细菌的运动器官。可用于鉴别和分型细菌，鞭毛是细菌的运动器官。可用于鉴别和分型细菌，有些鞭毛与致病性有关。有些鞭毛与

24、致病性有关。特殊结构运动（三）菌毛：（三）菌毛：是一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物。是一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物。必须用电子显微镜才能观察。必须用电子显微镜才能观察。1、普通菌毛：有很强的粘附性，与细、普通菌毛：有很强的粘附性，与细 菌的致病性有关。菌的致病性有关。2、性菌毛：比普通菌毛长而细，一、性菌毛：比普通菌毛长而细，一 个细菌只有个细菌只有1-4根，为中根，为中 空管状结构。可传递细空管状结构。可传递细 菌耐药性质粒等。菌耐药性质粒等。（四）芽胞：（四）芽胞：是某些细菌在一定条件下，细胞质脱水浓缩，是某些细菌在一定条件下，细胞质脱水浓缩，在菌体内形成的圆形或椭圆形的小体。在菌

25、体内形成的圆形或椭圆形的小体。芽胞外衣芽胞外衣芽胞壳芽胞壳芽胞外膜芽胞外膜 皮质皮质芽胞壁芽胞壁内膜内膜核心核心 芽胞抵抗力强，常以杀灭芽胞抵抗力强，常以杀灭芽胞作为灭菌是否彻底的标芽胞作为灭菌是否彻底的标准；也有助于细菌鉴别。准；也有助于细菌鉴别。一、显微镜放大法：一、显微镜放大法：1、普通光学显微镜：、普通光学显微镜：2、电子显微镜：、电子显微镜：二、二、染染 色色1、染料：、染料：2、染色方法：、染色方法：3、革兰染色：、革兰染色：第三节第三节 细菌形态与结构检查法细菌形态与结构检查法 革兰染色法示意革兰染色法示意革兰染色阳性球菌革兰染色阳性球菌革兰染色阴性杆菌革兰染色阴性杆菌WkSgO

26、cK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRf

27、NbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYlThP

28、dL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSg

29、OcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjR

30、fNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1z)v%rZnVjRfNbJ7F2A-w&s#oWkSgOcK8G4C0y(u$qYmThPdL9H5D1C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXl

31、ThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnV

32、jRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYmUiQeMaI6E2A-w%rZnVjRfNbJ7F3B+x*t!pXlThPdK8G4C0y(u$qYm

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