氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展课件.ppt

1、氯霉素类药物在兽医临床上应用氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展及其残留研究进展于文刚于文刚氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展1氯霉素类抗生素的介绍及应用氯霉素类抗生素的介绍及应用氯霉素的残留标准氯霉素的残留标准氯霉素残留检测方法氯霉素残留检测方法氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展2氯霉素类抗生素的介绍及应用氯霉素类抗生素的介绍及应用氯霉素类氯霉素类(Chloramphenicols，简称，简称CAPs)包括氯霉素及其包括氯霉素及其衍生物衍生物，又称为酰胺醇类，又称为酰胺醇类（Amphemicols）。兽医临床应用的主要有）。兽医临床应用的主要有氯霉素氯霉素（Chl

2、oramphenicol），），甲砜霉素甲砜霉素（Thiamphnicol,TAP）、）、氟甲砜霉素氟甲砜霉素（Florfenicol,FF）氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展3氯霉素类抗生素的化学结构氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展4作用机制作用机制与与70s核蛋白体的核蛋白体的50s亚基上的亚基上的A位位紧密结合，紧密结合，阻碍了肽酰基转移酶的阻碍了肽酰基转移酶的转肽反应，使肽链转肽反应，使肽链不能延伸，而抑制不能延伸，而抑制蛋白质的合成。蛋白质的合成。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展5氯霉素（氯霉素（Chloramphenicol）理化性质理化性质为为左

3、旋体左旋体，在水中，在水中微微溶，在弱酸性和中性溶液中溶，在弱酸性和中性溶液中较稳定，能耐煮沸，较稳定，能耐煮沸，遇碱易失效遇碱易失效。为为广谱广谱抑菌剂抑菌剂,主要抑制细菌肽链形成主要抑制细菌肽链形成,使蛋白合成受阻使蛋白合成受阻,高浓度高浓度也能杀菌。一般对也能杀菌。一般对革兰氏阴性菌的作用比阳性菌革兰氏阴性菌的作用比阳性菌强强,对对厌氧菌厌氧菌也有相当作用也有相当作用,但对绿脓杆菌、结核但对绿脓杆菌、结核杆菌、病毒、真菌等无效杆菌、病毒、真菌等无效。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展6 内服易吸收内服易吸收(马、牛、羊例外马、牛、羊例外),肌肉注射吸收肌肉注射吸收缓慢缓慢(琥珀

4、氯霉素的水溶性强琥珀氯霉素的水溶性强,吸收也迅速吸收也迅速)。体内广泛分布体内广泛分布,肝、肾肝、肾中浓度最高中浓度最高,亦易透过血亦易透过血脑屏障进入脑脊液。在肝内大部分被失活脑屏障进入脑脊液。在肝内大部分被失活,仅仅10%原药从尿中排出。用于防治原药从尿中排出。用于防治畜禽的沙门畜禽的沙门氏菌病和大肠杆菌感染氏菌病和大肠杆菌感染。对。对牛巴氏杆菌病、牛巴氏杆菌病、禽霍乱及敏感菌引起的泌尿道、呼吸道感染禽霍乱及敏感菌引起的泌尿道、呼吸道感染也有效。也有效。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展7不良反应不良反应：抑制骨髓造血机能抑制骨髓造血机能可逆性地抑制骨髓可逆性地抑制骨髓(与使用剂

5、量和疗程有关与使用剂量和疗程有关)临床表现为使用剂量或频率依赖性的血细胞减少，一般临床表现为使用剂量或频率依赖性的血细胞减少，一般在停药后在停药后12d内恢复正常。内恢复正常。不可逆的再生障碍性贫血不可逆的再生障碍性贫血（与（与CAP的使用剂量和疗程的使用剂量和疗程无关，与个体特异性反应有关）无关，与个体特异性反应有关）即使与药物停止接触，骨髓抑制仍将长期存在，骨髓即使与药物停止接触，骨髓抑制仍将长期存在，骨髓造血功能极少恢复。临床表现为全血细胞下降，死亡造血功能极少恢复。临床表现为全血细胞下降，死亡率高达率高达5070，存活者也容易发生粒细胞性白血，存活者也容易发生粒细胞性白血病，发生病，发

6、生CAP再生障碍性贫血的几率为再生障碍性贫血的几率为1：30000，虽然几率不高，却是虽然几率不高，却是致命性致命性的。的。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展8不良反应不良反应由于氯霉素能够抑制记忆性的免疫应答反应，故由于氯霉素能够抑制记忆性的免疫应答反应，故动物接种疫苗期禁用。动物接种疫苗期禁用。氯霉素亦可产生胃肠道反应和四环素类相似的二氯霉素亦可产生胃肠道反应和四环素类相似的二重感染。重感染。氯霉素为肝微粒体药酶的抑制剂，能明显减慢其氯霉素为肝微粒体药酶的抑制剂，能明显减慢其他药物的代谢，从而延长其他药物的效果，或增他药物的代谢，从而延长其他药物的效果，或增强其毒性。强其毒性。氯

7、霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展9本品是第一个用于临床的广谱抗生素本品是第一个用于临床的广谱抗生素(1949年年),因因50年代发生致死性再生障碍性贫血和年代发生致死性再生障碍性贫血和灰婴综合征灰婴综合征,80年代又出现耐氯霉素菌株年代又出现耐氯霉素菌株,加加上其他广谱抗菌药的陆续出现上其他广谱抗菌药的陆续出现,使在国内外的使在国内外的应用普遍减少。应用普遍减少。1984年年FDA禁止氯霉素用于禁止氯霉素用于所有食品动物。所有食品动物。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展10甲砜霉素甲砜霉素thiamphenicol是是氯霉素的同类物氯霉素的同类物,水溶性略大于氯霉素水溶性略

8、大于氯霉素,性更稳定。性更稳定。抗菌谱与抗菌作用抗菌谱与抗菌作用近似近似氯霉素氯霉素,对多数肠杆菌科细菌、对多数肠杆菌科细菌、金葡菌及肺炎球菌的作用略逊于氯霉素。与氯霉素金葡菌及肺炎球菌的作用略逊于氯霉素。与氯霉素可完全交叉耐药。内服吸收迅速而完全可完全交叉耐药。内服吸收迅速而完全,体内广泛分体内广泛分布布,在肝内不被失活在肝内不被失活,组织中含量高于同剂量氯霉素组织中含量高于同剂量氯霉素(肾、肺、肝中约高肾、肺、肝中约高34倍倍),因而体内抗菌活性也较因而体内抗菌活性也较强。以原型经肾排泄。强。以原型经肾排泄。适应症同氯霉素适应症同氯霉素。在呼吸道、胆汁和尿液中含量高在呼吸道、胆汁和尿液中含

9、量高,故故主要用于呼吸道、主要用于呼吸道、肠道和尿路感染肠道和尿路感染。本品仍有血液系统毒性。本品仍有血液系统毒性(可逆性红可逆性红细胞生成抑制细胞生成抑制),对免疫也有较强的抑制作用对免疫也有较强的抑制作用(约比氯约比氯霉素霉素强强6倍倍)。但不产生再生性障碍性贫血但不产生再生性障碍性贫血。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展11氟苯尼考氟苯尼考 Florfenicol动物专用氯霉素类的广谱抗菌药动物专用氯霉素类的广谱抗菌药19901990年首次在日本上市，用于水产养殖业年首次在日本上市，用于水产养殖业19931993年挪威批准该药治疗鲑的疖病年挪威批准该药治疗鲑的疖病1995199

10、5年法国、英国、奥地利、墨西哥及西班牙批准用年法国、英国、奥地利、墨西哥及西班牙批准用于治疗牛呼吸系统细菌性疾病。于治疗牛呼吸系统细菌性疾病。在日本和墨西哥还批准用作猪的饲料添加剂，预防和在日本和墨西哥还批准用作猪的饲料添加剂，预防和治疗猪的细菌性疾病治疗猪的细菌性疾病.我国目前已通过了该药的审批。我国目前已通过了该药的审批。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展12氟苯尼考氟苯尼考 Florfenicol具有抗菌广谱，吸收好，体内分布广，安全高效等特点具有抗菌广谱，吸收好，体内分布广，安全高效等特点1.1.广谱广谱 对对革兰氏阳性菌及阴性菌皆有强大的杀灭作用革兰氏阳性菌及阴性菌皆有强大

11、的杀灭作用，对，对厌氧革兰氏阳性菌及阴性菌、立克次氏体、支原体均有较强厌氧革兰氏阳性菌及阴性菌、立克次氏体、支原体均有较强的抗菌作用的抗菌作用。2.2.速效速效 口服或肌注口服或肌注1 1小时后血液中可达治疗浓度。小时后血液中可达治疗浓度。1.51.53 3小小时即可达药峰浓度；有效血药浓度可维持时即可达药峰浓度；有效血药浓度可维持2020小时以上。小时以上。3.3.穿透力穿透力强强，组织药物浓度，组织药物浓度高高，可透过血脑屏障，特别适用于，可透过血脑屏障，特别适用于控制控制脑部和呼吸道感染脑部和呼吸道感染。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展134.毒性小毒性小 安全安全，在规定休

12、药期（，在规定休药期（28天天）停药无残留能）停药无残留能保证人，畜安全。保证人，畜安全。5.安全范围大安全范围大，用推荐剂量的十倍，不会产生不良反，用推荐剂量的十倍，不会产生不良反应和中毒。应和中毒。6.不易产生耐药性不易产生耐药性。F F原子取代了氯霉素、甲砜霉素中原子取代了氯霉素、甲砜霉素中丙烷链丙烷链3 3碳位置上的碳位置上的-OH-OH，阻止了细菌乙酰转移酶在，阻止了细菌乙酰转移酶在此位置上的乙酰化作用。此位置上的乙酰化作用。对氯霉素、喹诺酮类及其他抗菌药物耐药的细菌仍对氯霉素、喹诺酮类及其他抗菌药物耐药的细菌仍敏感敏感。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展14适应症适应症动

13、物专用广谱抗生素动物专用广谱抗生素特别适用于特别适用于对氯霉素、喹诺酮类及其他抗菌药物对氯霉素、喹诺酮类及其他抗菌药物有耐药性的细有耐药性的细菌感染菌感染主用于主用于牛、猪、鸡和鱼类牛、猪、鸡和鱼类的细菌性病，如的细菌性病，如牛牛：呼吸系统疾病、巴氏杆菌病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、葡萄球菌感染、链球：呼吸系统疾病、巴氏杆菌病、沙门氏菌病、大肠杆菌病、葡萄球菌感染、链球菌感染、乳房炎菌感染、乳房炎(干乳期干乳期)、棒状杆菌病等。、棒状杆菌病等。猪猪：传染性胸膜病、猪喘气病、沙门氏菌病、大肠杆菌性下痢、萎缩性鼻炎，猪丹：传染性胸膜病、猪喘气病、沙门氏菌病、大肠杆菌性下痢、萎缩性鼻炎，猪丹毒、猪肺疫

14、、无乳综合症等。毒、猪肺疫、无乳综合症等。鸡鸡：大肠杆菌病、沙门氏菌、传染性、：大肠杆菌病、沙门氏菌、传染性、慢性呼吸道病及葡萄球菌病等。慢性呼吸道病及葡萄球菌病等。注：注：有胚胎毒性，故妊娠动物禁用有胚胎毒性，故妊娠动物禁用。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展15用量用量：im/iv:20mk/kgim/iv:20mk/kg 鸡内服：鸡内服：20-30 mk/kg20-30 mk/kg 猪混饲猪混饲50ppm50ppm用法：用法：注射液：畜：每个注射部位不超过注射液：畜：每个注射部位不超过10ml10ml，1 1次次/48h/48h，连用，连用2 2次；禽：次；禽：1 1次次/日，

15、连用日，连用3 3次。次。溶液溶液/可溶性粉：饮水给药可溶性粉：饮水给药 预混剂（预混剂（500 ppm500 ppm）：拌料）：拌料氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展16氯霉素对人的危害氯霉素对人的危害1 1、骨髓造血机能紊乱骨髓造血机能紊乱:氯霉素对骨髓造血机能有抑制作用，可引起氯霉素对骨髓造血机能有抑制作用，可引起血小板血小板减少、粒细胞缺乏、再生障碍性贫血、溶血性减少、粒细胞缺乏、再生障碍性贫血、溶血性等，多数在长期或多次用等，多数在长期或多次用药的过程中发生。发生率约为药的过程中发生。发生率约为1/100000-1/50001/100000-1/5000。骨髓的毒性分为两类

16、：。骨髓的毒性分为两类：一是一是可逆性抑制可逆性抑制。主要影响红细胞、血小板和白细胞的形成。二是。主要影响红细胞、血小板和白细胞的形成。二是再生再生障碍性贫血障碍性贫血。前者与剂量有关，药物的血浓度超过。前者与剂量有关，药物的血浓度超过5ug/ml5ug/ml即可出现；后即可出现；后者少见，发生较晚而极为严重，与氯霉素的每日用量和总量均无直接关者少见，发生较晚而极为严重，与氯霉素的每日用量和总量均无直接关系。系。2 2、灰婴综合症灰婴综合症:在早产儿和新生儿肝内有些酶系统发育尚不完全，葡萄糖在早产儿和新生儿肝内有些酶系统发育尚不完全，葡萄糖醛酸结合的能力较差，因此影响氯霉素在肝中的醛酸结合的能

17、力较差，因此影响氯霉素在肝中的解毒解毒过程；此外，肾脏过程；此外，肾脏排泄能力亦较弱，能招致药物蓄积中毒。排泄能力亦较弱，能招致药物蓄积中毒。3 3、胃肠道症状、口部症状胃肠道症状、口部症状：胃肠道反应主要有腹胀、腹泻、食欲减退恶：胃肠道反应主要有腹胀、腹泻、食欲减退恶心、呕吐则少见。口部症状如口腔粘膜充血、疼痛、糜烂、口角炎和舌心、呕吐则少见。口部症状如口腔粘膜充血、疼痛、糜烂、口角炎和舌炎等。炎等。4 4、其它不良反应其它不良反应:可引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性可引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性耳聋以及严重失眠。有时发生中毒性精神病，主要表现为幻视、幻听、耳聋以

18、及严重失眠。有时发生中毒性精神病，主要表现为幻视、幻听、定向力丧失、精神失常等。定向力丧失、精神失常等。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展17氯霉素的残留标准氯霉素的残留标准氯霉素氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一种广谱抗生是一种广谱抗生素，虽然是国家规定的食品动物素，虽然是国家规定的食品动物禁用禁用药品，但是由药品，但是由于其具有于其具有疗效好、价格低廉疗效好、价格低廉等优点，目前仍有小部等优点，目前仍有小部分人不顾国家规定，将其应用于各类家禽、家畜及分人不顾国家规定，将其应用于各类家禽、家畜及水产品的各种传染性疾病的治疗。氯霉素有其严重水产品的各种传染性疾病的治

19、疗。氯霉素有其严重的副作用，它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引的副作用，它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。因此，近年来，起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。因此，近年来，世界各国特别是欧盟、美国等发达国家对动物性食世界各国特别是欧盟、美国等发达国家对动物性食品中氯霉素残留的品中氯霉素残留的检测要求日趋严格检测要求日趋严格，分析方法的，分析方法的检测限不得超过检测限不得超过0.1ug/kg氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展18部分国家检验检疫要求部分国家检验检疫要求 1999年年9月月13日中华人民共和国农业部发布了动物性食品中兽药最高日中华人民共和国农业部

20、发布了动物性食品中兽药最高残留限量的通知，规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中残留限量的通知，规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得不得检出。检出。中国农业部已将氯霉素从中国农业部已将氯霉素从2000年版中国兽药典中年版中国兽药典中删除删除列为禁药。列为禁药。2002年年1月，美国食品与药品管理局（月，美国食品与药品管理局（FDA）公布了禁止在进口动物源）公布了禁止在进口动物源性食品中性食品中使用使用氯霉素氯霉素 欧盟的进口食品卫生标准规定欧盟的进口食品卫生标准规定“氯霉素含量标准为氯霉素含量标准为不得检出不得检出。”其其“不不得检出得检出”的含义是氯霉素含量在的含义是氯霉素含量在1

21、ppb以下，即含量在十亿分之一以下。以下，即含量在十亿分之一以下。2002 年，欧盟提出氯霉素的最低检测限为0.3g/kg。德国部分州的特殊检测标准为德国部分州的特殊检测标准为0.2ppb。日本对中国的动物源性食品中氯霉素的检测最高限量为日本对中国的动物源性食品中氯霉素的检测最高限量为0.05mg/kg。我国方法检测限量值：我国方法检测限量值：牛奶牛奶 0.25ng/ml 肉类肉类1.5ng/g 尿液尿液1.0ng/ml 血清血清0.5ng/ml 蜂蜜蜂蜜(快快检检)1.5ng/g 蜂蜜蜂蜜(18柱柱)0.1ng/g 氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展19U.S.Residue Li

22、mits for Veterinary Drugs and Unavoidable Contaminates in Meat,Poultry,and Egg Products Appendix provides information on the residue limits(tolerances and action levels)for animal drugs,food additives,and unavoidable contaminants in meat,poultry,and egg products.The Food Safety and Inspection Servic

23、e in its regulatory programs apply chemical residue limits,which are set by the Food and Drug Administration(FDA).The official source of these tolerances is Title 21 of the Code of Federal Regulations(CFR).Those for animal drugs are found in CFR,Title 21,Part 556,those for food additives are found i

24、n Title 21,Part 172,Section 172.140,and those for unavoidable contaminants are found in,Title 21 Part 109,Section 109.30.In addition,FDA may establish action levels that are published in the Federal Register(FR).FSIS does not permit concentrations of chemical residues in meat,poultry,and egg product

25、s to exceed the tolerances or action levels published in the CFR or FR.氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展20Compound Production Class Fat(ppm)Meat(ppm)Meatbyproduct(ppm)Liver(ppm)Kidney(ppm)Edible Tissue(ppm)Chlorhexidine Cattle Goats Hogs Horses Poultry Sheep Eggs Reference:21 CFR 556.20(the Code of Federal Reg

26、ulations)氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展21Compound Production Class Fat(ppm)Meat(ppm)Meatbyproduct(ppm)Liver(ppm)Kidney(ppm)Edible Tissue(ppm)Florfenicol Cattle 0.33.7Goats Hogs 0.22.5Horses Poultry Sheep Eggs Reference:21 CFR 556.283(the Code of Federal Regulations)氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展22 CONSOLIDATED VERS

27、ION of the Annexes I to IV of Council Regulation n2377/90 Updated on 01.12.2000 List of pharmacologically active substances for which maximum residue limits have been fixed).氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展23Florfenicol Bovine 200 g/kg Muscle 3000 g/kg Liver 300 g/kg KidneyPorcine 300 g/kg Muscle 500 g/kg Ski

28、n+fat 2000 g/kg Liver 500 g/kg KidneyChicken 100 g/kg Muscle 200 g/kg Skin+fat 2500 g/kg Liver 750 g/kg KidneyNot for use in animals from whicheggs are produced for human氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展24Thiamphenicol Bovine 50 g/kg Muscle 50 g/kg Fat 50 g/kg Liver 50 g/kg Kidney 50 g/kg Milk Chicken 50 g/kg

29、Muscle 50 g/kg Skin+fat 50 g/kg Liver 50 g/kg KidneyNot for use in animals from whicheggs are produced for human氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展25List of pharmacologically active substances for which no maximum levels can be fixedPharmacologically active substance(s)Aristolochia spp.and preparations thereofCh

30、loramphenicolChloroform(氯仿）氯仿）Chlorpromazine（氯丙嗪）（氯丙嗪）Colchicine（秋水仙碱）DapsoneDimetridazole（地美硝唑）Metronidazole（甲硝唑）甲硝唑Nitrofurans(including furazolidone)（呋喃类药物）Ronidazole（洛硝哒唑）氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展26VETERINARY DRUGS DIRECTORATEFlorfenicol Cattle Muscle 0.2 Liver 2.0 Swine Muscle 0.25 Liver 1.4 Salmo

31、nids（鲑鱼）（鲑鱼）Muscle 0.8（The units are in ppm for tissues and ug/ml for milk unless otherwise noted in the table）氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展27氯霉素残留检测方法氯霉素残留检测方法 对于氯霉素残留，由于存在多种检测方法，对于氯霉素残留，由于存在多种检测方法，因此各种方法的检出限问题已成为关注的焦因此各种方法的检出限问题已成为关注的焦点。发达国家对检出限的要求越来越严格。点。发达国家对检出限的要求越来越严格。欧盟由原来的欧盟由原来的10g/kg改为改为1g/kg，继而又，

32、继而又降至降至0.1g/kg，比原标准要求提高了，比原标准要求提高了100倍；倍；美国美国FDA规定的检出限也由原来的规定的检出限也由原来的5g/kg降降为为0.3g/kg，且目前正在研究应用更为灵敏，且目前正在研究应用更为灵敏的方法，可使检出限值达的方法，可使检出限值达0.1g/kg。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展28氯霉素残留的检测方法氯霉素残留的检测方法氯霉素在动物性食品中残留分析方法的研究始于氯霉素在动物性食品中残留分析方法的研究始于20世纪世纪80年代，至今已建立起许多方法，主要以微生年代，至今已建立起许多方法，主要以微生物学、免疫学的方法作为物学、免疫学的方法作为筛选

33、法筛选法，液相色谱法，液相色谱法（Liquid Chromatographic Method,LC)和气相色和气相色谱法谱法(Gas Chromatographic Method,GC)进行进行定定量测定量测定,液相色谱液相色谱/质谱联用分析法质谱联用分析法(Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Method,LC/MS)或气相色谱或气相色谱/质谱联用分析法质谱联用分析法(Gas Chromatography/Mass Spectrometry Method,GC/MS)进行确证进行确证。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展29筛选法筛选法主要

34、包括以氯霉素抑菌作用为基础的主要包括以氯霉素抑菌作用为基础的微生物微生物学法学法，以氯霉素抗原抗体特异性免疫反应为，以氯霉素抗原抗体特异性免疫反应为基础的基础的免疫学法免疫学法，以氯霉素衍生偶合反应为，以氯霉素衍生偶合反应为基础的基础的化学显色法化学显色法，薄层色谱法薄层色谱法等（等（Thin Layer Chromatographic Method,TLC)其中其中微生物学法和免疫学法较为常用微生物学法和免疫学法较为常用。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展30微生物学法微生物学法微生物学法的原理是利用微生物学法的原理是利用特定菌株特定菌株与药物的与药物的作用来检测样品中作用来检测样

35、品中CAP的种类和含量。常用的种类和含量。常用方法有方法有棉签法棉签法(Swab Test On Premises，STOP)和和杯碟法杯碟法(Cylinder Plate Method，CPM)。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展31STOP 用棉签蘸取动物用棉签蘸取动物组织液组织液，置于涂满，置于涂满枯草杆菌枯草杆菌的培养的培养基中保存过夜，以棉签周围是否出现基中保存过夜，以棉签周围是否出现抑菌环抑菌环及其及其直径大小直径大小来来判断结果，判断结果，STOP以前在美国、加拿大等国家肉类兽药残留以前在美国、加拿大等国家肉类兽药残留筛选中广泛应用，检出限为筛选中广泛应用，检出限为1m

36、gkg，优点是设备简单，优点是设备简单，操作简便，缺点是特异性差，灵敏度低。操作简便，缺点是特异性差，灵敏度低。CPM 是将处理后的样品注入牛津杯，与含菌液的检测平板是将处理后的样品注入牛津杯，与含菌液的检测平板贴合，培养后根据贴合，培养后根据抑菌圈直径的大小抑菌圈直径的大小来判定结果，来判定结果，CPM 的的检出限为检出限为0.12mgkg，比，比STOP灵敏度高，并可在样品灵敏度高，并可在样品的处理中加入其他抗生素以的处理中加入其他抗生素以消除干扰影响消除干扰影响。微生物学法简便，。微生物学法简便，费用低，费用低，但敏感性和专一性低，易漏检但敏感性和专一性低，易漏检，也会出现，也会出现假阳

37、性假阳性，引起误判，但对于高残留样品进行残留筛选仍不失为一种好引起误判，但对于高残留样品进行残留筛选仍不失为一种好的方法。的方法。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展32免疫分析法免疫分析法氯霉素免疫测定法包括氯霉素免疫测定法包括放射免疫测定法放射免疫测定法（RIA）、）、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法（ELISA)。RIA 的基本原理是用的基本原理是用同位素同位素标记药物样品，和标记药物样品，和非标记待测药物与非标记待测药物与CAP抗体结合竞争，样品抗体结合竞争，样品中的被测物含量与测定的放射性活度成反比，中的被测物含量与测定的放射性活度成反比，常用的标记物是常用的标记物是同位

38、素同位素H、C、I等，等，RIA的优的优点在于点在于灵敏、特异、简便，灵敏、特异、简便，但但标记物易衰变标记物易衰变，影响了其准确性。影响了其准确性。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展33ELISA是基于抗原和抗体反应而建立的。由于氯霉是基于抗原和抗体反应而建立的。由于氯霉素是半抗原，不能刺激机体产生抗体。要使半抗原素是半抗原，不能刺激机体产生抗体。要使半抗原性物质具有免疫原性，就需使其与大分子载体物质性物质具有免疫原性，就需使其与大分子载体物质（蛋白质）相结合制备人工抗原，而后将其作为抗（蛋白质）相结合制备人工抗原，而后将其作为抗原进行使用，动物体内即可产生相应特异性的抗氯原进行使

39、用，动物体内即可产生相应特异性的抗氯霉素的抗体。在此基础上建立酶联免疫竞争法测定霉素的抗体。在此基础上建立酶联免疫竞争法测定氯霉素含量。氯霉素含量。ELISA避免了避免了RIA存在的存在的稳定性问题稳定性问题，更加简便、，更加简便、灵敏，检测限达到灵敏，检测限达到pg级，且级，且同时可检测多数样品同时可检测多数样品，是十分理想的快速筛选手段，是十分理想的快速筛选手段，缺点在于出现假阳性缺点在于出现假阳性的概率较大的概率较大，易引起误判。，易引起误判。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展34因因ELISA 具有具有快速、灵敏度高、专一性强快速、灵敏度高、专一性强的的优势，在肉制品、水产品

40、与环境中应用相当优势，在肉制品、水产品与环境中应用相当广泛。目前国内、外研制的广泛。目前国内、外研制的氯霉素氯霉素ELISA 检检测试剂盒测试剂盒，广泛用于氯霉素的检测。如，广泛用于氯霉素的检测。如Randox公司提供的氯霉素检测试剂盒对组公司提供的氯霉素检测试剂盒对组织中氯霉素的检测限可达织中氯霉素的检测限可达0.02ng/kg，尿液中，尿液中氯霉素的检测限可达氯霉素的检测限可达0.01ng/kg，回收率为，回收率为84%以下，且与四环素、庆大霉素，氨苄青以下，且与四环素、庆大霉素，氨苄青霉素无交叉反应，检测时间不到霉素无交叉反应，检测时间不到1.5 小时小时氯霉素类药物在兽医临床上应用及其

41、残留研究进展35定量测定法定量测定法目前国际公认的氯霉素的定量测定方法是气目前国际公认的氯霉素的定量测定方法是气相色谱法相色谱法(GC)和高效液相色谱法（和高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC)氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展36气相色谱法气相色谱法GC是是1974年在美国官方分析化学家协会年在美国官方分析化学家协会（AOAC）年会上提出的，原理是氯霉素均）年会上提出的，原理是氯霉素均含有电子亲和性强的化学基团，可用电子俘含有电子亲和性强的化学基团，可用电子俘获检测器进行测定。获检测器进行测定。GC 是定量测定氯霉素

42、是定量测定氯霉素残留较为经典成熟的方法，专一性强，灵敏残留较为经典成熟的方法，专一性强，灵敏可靠，检测限低（可靠，检测限低（小于小于1ug/kg),但由于受到但由于受到氯霉素挥发性和热稳定性的限制氯霉素挥发性和热稳定性的限制,需要衍生化需要衍生化程序程序,比较比较繁琐繁琐,一定程度上限制了一定程度上限制了GC 的应用。的应用。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展37高效液相色谱法高效液相色谱法原理：氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素都有原理：氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素都有很强的很强的紫外吸收紫外吸收，因此可直接用，因此可直接用HPLC/UVD 测定。测定。样品制备不样品制备不需要衍生化过程

43、需要衍生化过程，操作简单，但，操作简单，但UVD选择性较差，具有紫外吸收的杂质都会选择性较差，具有紫外吸收的杂质都会产生干扰产生干扰，因此，因此HPLCUVD的检测限比的检测限比GC高，一般在高，一般在5ugkg，样品前处理必须排除，样品前处理必须排除具有紫外吸收的内源性杂质的干扰具有紫外吸收的内源性杂质的干扰。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展38确证法气气质联用法质联用法 GCMS用于动物性食品中用于动物性食品中CAP的残留确证的残留确证已是较为成熟的方法，其原理是已是较为成熟的方法，其原理是CAPs硅烷硅烷化后都有几个丰度较大的化后都有几个丰度较大的电子轰击碎片离子电子轰击碎片

44、离子，便于进行定性鉴别，灵敏度高，在便于进行定性鉴别，灵敏度高，在ng级以下。级以下。气相色谱选择性离子监测质谱性气相色谱选择性离子监测质谱性(GCSIMNS)分析分析CAP残留，灵敏度更高，可达残留，灵敏度更高，可达到到pg氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展39液液质联用法质联用法 LCMS是一种新的确证方法，不需要衍生是一种新的确证方法，不需要衍生化处理，操作简便，灵敏度高。化处理，操作简便，灵敏度高。LCSIMMS的分析方法，回收率高，检测限低，达到的分析方法，回收率高，检测限低，达到2ngg以下，有很强的检测和确证能力，目以下，有很强的检测和确证能力，目前作为理想的残留确证方

45、法已进入实际应用前作为理想的残留确证方法已进入实际应用阶。阶。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展40 酶免疫测定法酶免疫测定法非常适合对氯霉素残留筛选的需要，它能在短非常适合对氯霉素残留筛选的需要，它能在短短的几个小时检测几十到上百个试样，也不需要复杂的仪器短的几个小时检测几十到上百个试样，也不需要复杂的仪器设备，并有设备，并有特异性强、灵敏度高、试样预处理简单特异性强、灵敏度高、试样预处理简单等优点，等优点，它在它在现场监控和基层现场监控和基层实际检测上有着广阔的应用前景。实际检测上有着广阔的应用前景。而高效液相色谱法和气相色谱法具有而高效液相色谱法和气相色谱法具有精确可靠、灵敏度

46、精确可靠、灵敏度高、重复性好以及假阳性少高、重复性好以及假阳性少等优点，只要选择出简单的前处等优点，只要选择出简单的前处理条件和色谱条件。在氯霉素残留确认工作中，理条件和色谱条件。在氯霉素残留确认工作中，GC/MS 和和LC/MS/MS 是首选的方法。是首选的方法。食品中氯霉素残留的检测方法，今后仍采取食品中氯霉素残留的检测方法，今后仍采取ELISA试剂试剂盒对样品进行初筛，对阳性或样品用盒对样品进行初筛，对阳性或样品用GC/MS 或或LC/MS 进行进行确证。一般来讲，确证。一般来讲，LC/MS 技术确证氯霉素比技术确证氯霉素比G C/M S 技术技术确证迅速，但由于确证迅速，但由于GC/MS 技术的灵敏度高技术的灵敏度高，可利用的碎片，可利用的碎片离子多，所以目前确证牛奶中氯霉素类残留主要用离子多，所以目前确证牛奶中氯霉素类残留主要用G C/M S 技术。技术。氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展41