生化分析仪的基础与应用课件完整版.pptx

1、0005ABS趋向：+/0.采用非仪器配套的试剂及校准品体系时，参数修改要慎重。(3）偏离线性期：随着反应时间的延长，反应体系中的底物不断消耗，酶不能被其饱和，以及可逆反应、产物抑制、酶变性失活等原因，致酶促反应速度下降，产物或底物的变化曲线渐趋平坦，这一时期称为偏离线性期，亦称一级反应期。如果初始阶段不稳定的话，复位线就是将外部点除去49%至100%计算得来的。此种多色辐射是使测定中吸光度的变化偏离Beer定律（常为负偏离）的主要光学影响因素。反应总是在两个阶段产生：第一阶段（样本空白）仪器从第一种试剂和样本（R1+S）所产生反应的中读出最后的吸光率（A1），从第二种试剂和样本（R2+S）所

2、产生反应的中读出最后的吸光率（A2）。由IFCC/IUPAC/WHO/三机构于1999年在瑞典斯德哥尔摩举办的“建立全球检验医学质量规范的策略会议”上提出的一致性声明（草案），即本次大会达成一致的主要结论是：抗原抗体比例合适时，复合物生成量达到峰值；(四)酶促反应的特点：在一些特定情况下产生一立方添加以解0005ABS/小时光径：7毫米光源：卤素灯功率：35W电源：12V 直流电持续时间:2000小时如HITACHI7170在P1至P34周期为10分钟具体工作流程如图2-2所示胶乳增强免疫浊度法（latex enhanced turhidimetric immunoassay）由于采用颗粒较大

3、、折光性强的胶乳，将抗体经吸附或共价交联反应固定于胶乳表面，增加抗原抗体凝聚体积，减少透过光，使灵敏度提高到近1ngml水平。采用非仪器配套的试剂及校准品体系时，参数修改要慎重。散射光强度与悬浮液或胶体溶液中的颗粒质点大小、入射光波长大小及二者的比例有关。离心式生化仪读数间隔时间短，监测时间也短。在单试剂测定中，样品与试剂的总体积不得少于此参数。这种是双试剂终点法反应。在反应中选择吸光率变化来检测。在仪器光度读数要用于结果计算时，反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。第二阶段反应产生于第一种试剂和样本和第二种试剂（R1+S+R2）之间。二根据临床观察制定的标准来考察总误差概念：在常规测定中

4、每个标本测定结果均有误差，这个误差包括了对方法学评价时的各种类型的随机误差和系统误差，因此测定结果与真值的差异是随机误差RE和系统误差SE的总和，即总误差TE。胶乳增强免疫浊度法（latex enhanced turhidimetric immunoassay）由于采用颗粒较大、折光性强的胶乳，将抗体经吸附或共价交联反应固定于胶乳表面，增加抗原抗体凝聚体积，减少透过光，使灵敏度提高到近1ngml水平。四根据实验室技能状态制定的标准来考察在有的仪器中，它以反应体积的下限表示，有的则专门标明最小反应体积。在计算中所使用的最后吸光率是从两个阶段的吸光率数值差中得到：反之，产物从无到有，只要测定方法灵

5、敏，准确度可以很高。多数仪器为 10分钟左右，这对试剂提出了较高要求。自动预编程序 自动执行相关预编程序或按指令根据反应物的污染力设置所需的清洗次数=因数x（A3 A2）（A3 A2）=A/分钟目前，由于技术发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，故透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。另外，在酶偶联反应中，指示酶的反应必须有一定量测定酶的产物堆积才能进行；采用两点法或速率法可减少干扰，但具体取多长的延迟时间，应根据试剂和仪器读数特点来评价决定。操作模式 “任选式”二根据临床观察制定的标准来考察如-谷氨酰转移酶（GGT）设定 30 60秒

6、。=因数x（A3 A2）（A3 A2）=A/分钟如-谷氨酰转移酶（GGT）设定 30 60秒。=因数x（A3 A2）（A3 A2）=A/分钟试剂中的酶活性（浓度）在反应过程中始终不变。克隆酶供体免疫分析（cloned enzy。（l）试剂组成：在酶活性的连续监测法时，若试剂含工具酶数量多、偶联反应多，则激活反应时间一般较长，延迟时间也较长，如肌酸激酶（NAC法）延迟时间常设置120180秒；目前，由于技术发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，故透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。（1）延滞期（lag phase）：底物与酶混合、反应启

7、动后的一段短时间内，产物从零开始逐渐生成，处于较低水平，反应速度较低，未达到待测酶最大反应速度；1反应时间（reactfon time）2Beer定律一般适用于稀溶液的测定 有两层含义：被测物的浓度不宜过大，其吸光度应在相对测量误差较小的区域；“最小平方法”：在非线性反应中使用，产生一个最小平方近似值以在等待时间 孵育时间 读数时间方法 临床化学和免疫化学测试（1）基于生物变异分量的数据;了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。在单试剂测定中，样品与试剂的总体积不得少于此参数。（3）校准的检查：要充分利用仪器设置的功能检测校正曲线图形、各校准点吸

8、光度值（不能忽略试剂空白值及空白速率值）计算K值等的波动情况，以及以往的比较。在单试剂测定中，样品与试剂的总体积不得少于此参数。重点关注比色杯空白读数点（CB）、加样品点（S）、各试剂加液点（R、R2、）、试剂空白读数点（RB）、各测定读数点（P）、各点时间间隔及周期总时间等。1一般工作流程工作流程可以通过仪器的测定周期来考察。自动预编程序 自动执行相关预编程序或按指令单色光源是用分光光度计由单色器或滤光片从连续光谱的多色光中选择的、最大吸收波长max在内的一小段波长范围的复合光。流动式生化仪读数间隔时间一般较长。采用非仪器配套的试剂及校准品体系时，参数修改要慎重。比浊法的精密度相近，变异系数

9、为155。3样品试剂比例样品与试剂的比例（SV：RV），也可表示为样品体积分数-样品体积与反应液总体积的比值（SVTV），是方法学基本参数。操作快捷、便于携带是它的优点。分析过程监控和数据处理及输出能力的半自动或全自动仪器。对于不同仪器、不同类型的反应分析程序，所显示的人机对话分析参数的信息有所不同。三、自动生化分析仪的基本参数及应用它的设置与加样点、加试剂点（包括R1、R2）、监测时间（读数点）、读数间隔时间及试剂样品比例等有关，要结合方法学兼顾权衡。但在实际测定中，入射光常常并非严格的单色光，常有不同波长的辐射同时存在。任一测定点试剂空白（RBX）=该点吸光度一比色杯水空白（WB）。因此，

10、吸入体积不能任意降低，必要时应加大反应液量和吸入量。散射比浊时，较大的散射光角度适用于35100nrn大小的微粒，较小的散射光角度适用于100800nrn间的微粒。指仪器的一个分析周期中，试剂和样品混合到最末一点测定读数的时间。“测试方法学”：在这个领域测试所使用的反应原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。由于自然的延迟，会产生仪器完全定时且测试项目根据所设置的参数在不同的时期读数。最后的值减去孵育阶段的吸光率读数：每天：每个工作日第一次分析时检测试剂的空白它可被用做读已（手工）准备好的溶解液。在计算中所使用的最后吸光率是从两个阶段的数值差中得到：-LOG-LOGIT 4和LOG

11、-LOGIT 5：在非线性反应中使用，它是一个在四点采用非仪器配套的试剂及校准品体系时，参数修改要慎重。了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。在均相酶免疫分析中，最常用的是酶放大免疫分析（enzyme multiplied immunoassay，EMIT）。但是，配套系统的原装分析参数不宜更改；重点关注比色杯空白读数点（CB）、加样品点（S）、各试剂加液点（R、R2、）、试剂空白读数点（RB）、各测定读数点（P）、各点时间间隔及周期总时间等。在有的仪器中，它以反应体积的下限表示，有的则专门标明最小反应体积。基于当前技术水平的目标：（5）伪浊度

12、的影响：即不是特异性抗原抗体反应产生的免疫复合物形成的浊度。=因数x（A3 A2）（A3 A2）=A/分钟颗粒直径接近或大于光源波长时，常呈透射光和光路上的向前散射光，其散射光强度与入射光强度的关系遵从Mie散射理论，光散射随波长的变化小。对于不同仪器、不同类型的反应分析程序，所显示的人机对话分析参数的信息有所不同。（3）非特异性光散射的影响：免疫浊度法常受内源性光散射的干扰。二根据临床观察制定的标准来考察抗原或抗体过剩使免疫复合物部分或全部解离的现象，称为带现象。定进行外推数学数据。=因数x（A3 试剂空白）因此，吸入体积不能任意降低，必要时应加大反应液量和吸入量。总误差概念：在常规测定中每

13、个标本测定结果均有误差，这个误差包括了对方法学评价时的各种类型的随机误差和系统误差，因此测定结果与真值的差异是随机误差RE和系统误差SE的总和，即总误差TE。四根据实验室技能状态制定的标准来考察有的仪器有多个反应时间可选（如 HITACHI 7170），须预先选定。酶标抗原抗体复合物与游离酶标抗原同处一相，不需分离步骤就可测定酶活性，计算出被检抗原（半抗原）的含量。(2)基于临床医生观点分析的数据。（1）来源于国家和国际专家团体的推荐仪器在各个吸光度读数点读取的吸光度数据，并不一定都纳入浓度计算。例：BT3000 性能指标肌酐Jaffe氏法监测时间短，吸光度值较低，样品试剂比例多为1：10。等

14、待时间 孵育时间 读数时间 等待时间 孵育时间 读数时间 延迟时间 孵育时间 读数时间 延迟时间 孵育时间 读数时间n分析过程监控和数据处理及输出能力的半自动或全自动仪器。在开始酶反应（即待测样品与基质混合）之前，应有一个预孵育期（preIncubation period），让所有可能干扰测定的反应充分进行，避免干扰待测酶活性。四根据实验室技能状态制定的标准来考察0005ABS趋向：+/0.（5）伪浊度的影响：即不是特异性抗原抗体反应产生的免疫复合物形成的浊度。总误差概念：在常规测定中每个标本测定结果均有误差，这个误差包括了对方法学评价时的各种类型的随机误差和系统误差，因此测定结果与真值的差异

15、是随机误差RE和系统误差SE的总和，即总误差TE。但是，配套系统的原装分析参数不宜更改；由酶催化的反应称为酶促反应。条形码扫描 随机配置样本条码和试剂条码离心式生化仪读数间隔时间短，监测时间也短。因此分析仪就不能使取样和读数阶段最优化，这样就不可避免地减少所执行的每小时测试数目。如果使用单试剂，正常血清样品延迟时间60秒即可；任一测定点试剂空白（RBX）=该点吸光度一比色杯水空白（WB）。340nm,380nm,405nm,436nm,480nm,510nm,546nm,578nm,630nm,700nm等。等待时间 孵育时间 读数时间此种多色辐射是使测定中吸光度的变化偏离Beer定律（常为负

16、偏离）的主要光学影响因素。一般比浊法的灵敏度不如可见、紫外吸收光谱法，但免疫浊度法的敏感度约为50ngrnl。三根据生物学变异制定的不精密度的标准来考察更换试剂批号时也必须重新校准曲线。胶乳增强免疫浊度法（latex enhanced turhidimetric immunoassay）由于采用颗粒较大、折光性强的胶乳，将抗体经吸附或共价交联反应固定于胶乳表面，增加抗原抗体凝聚体积，减少透过光，使灵敏度提高到近1ngml水平。常采用酶标抗原与未知抗原对特异性抗体的竞争反应：抗原与标记酶结合使酶的活性抑制或激活，再与相应抗体结合后其酶活性被激活或抑制，未知抗原和酶标抗原与抗体形成竞争体系。因此除

17、按分钟计算外，这种计算方法与动力法反应的计算方法一样。这种方法与样本空白（A）法十分相似。（4）病人结果的检查：除了目测观察或用血清指数了解标本性状、注意和了解临床及诊断外，学会分析反应时间进程曲线及数据是重要的基本功。条形码扫描 随机配置样本条码和试剂条码其原理为：用基因工程技术制备称为酶供体（ED）和酶受体（EA）的两肽段。即当一束强度为L的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质、厚度为L的吸收他时，光的一部分被吸收，光强度从IO减小至It。-多项式：在非线性反应中使用。每一：仪器按“小时”和“分钟”栏所设定的时间跨度检测试剂的空白吸光度。一般应以试剂说明为准，不宜轻易改动。有的仪器有多

18、个反应时间可选（如 HITACHI 7170），须预先选定。一般应以试剂说明为准，不宜轻易改动。但是，配套系统的原装分析参数不宜更改；允许总误差：用TEa表示，它被规定为95%样品的允许误差限度，即95%的患者样品其误差应小于这个限度。流动式生化仪读数间隔时间一般较长。3团体专家的专业性推荐：如果初始阶段不稳定的话，复位线就是将外部点除去49%至100%计算得来的。=因数x（A3 试剂空白）目前，由于技术发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，故透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。在极远的点间缺乏无穷大近似值时产生而且，呈现给用户的反应

19、图也非总是线性，但总是分段地产生线性。“最小平方法”：在非线性反应中使用，产生一个最小平方近似值以在其中包括双试剂终点法反应。散射比浊时，较大的散射光角度适用于35100nrn大小的微粒，较小的散射光角度适用于100800nrn间的微粒。-多 点 法：一些标准浓度的线性添加函数最大值为6；采用双试剂时，加 R2点决定 R1与样品的反应时间，也决定 R2与R1及样品的反应时间。1评价在特定临床情况下分析性能对临床决定的影响。在计算中所使用的最后吸光率是从两个阶段的数值差中得到：这种方法只在样本加入试剂空白的终点法反应读数时使用。比浊法与可见、紫外吸收光谱法不同，它们不是测定澄清溶液而是测定悬浮液

20、或胶体溶液中物质的浓度，分析的光学基础是分散颗粒对光的反射、折射、散射和吸收等多种作用。分析过程监控和数据处理及输出能力的半自动或全自动仪器。在机分析项目 80冷冻试剂+相关分析项目C溶液的浓度；通常，吸光率（A）是从样本孵育的第一点读数。立方栓：在非线性反应中使用。这种反应和计算是在两种截然不同的阶段执行的：第一阶段（样本空白）是在第一种试剂和样本（R1+S）中产生反应的；（5）伪浊度的影响：即不是特异性抗原抗体反应产生的免疫复合物形成的浊度。四根据实验室技能状态制定的标准来考察以酶作为试剂来进行分析测定，或通过酶促反应测定待测酶的活性，具有高效、专一、温和、灵敏的特点，广泛用于生化分析。带

21、宽：最大+/5nm光测精度：+/1%从0至2.（1）基于生物变异分量的数据;例：BT3000 性能指标由于混合、反应和检测几乎同时完成，它的分析效率较高。试剂空白检测时间”这个参数用作自动测定试剂的空白吸光度。它可被用做读已（手工）准备好的溶解液。目前，由于技术发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，故透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。这种方法只在样本加入试剂空白的终点法反应读数时使用。条形码扫描 随机配置样本条码和试剂条码样本盘容量 52个常规急诊样本位，26个标准和质控位采用双试剂时，加 R2点决定 R1与样品的反应时间，也决定

22、R2与R1及样品的反应时间。“测试方法学”：在这个领域测试所使用的反应原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。实验证明，单色光经过有色溶液时，透过溶液的光强度不仅与溶液的浓度有关，而且还与溶液的厚度以及溶液本身对光的吸收性能有关。这种方法（只用在单试剂测试中）是在需要清除反应中由于血清的干扰中使用的。反应总是在两个阶段产生：第一阶段（样本空白）仪器从第一种试剂和样本（R1+S）所产生反应的中读出最后的吸光率（A1），从第二种试剂和样本（R2+S）所产生反应的中读出最后的吸光率（A2）。酶标抗原抗体复合物与游离酶标抗原同处一相，不需分离步骤就可测定酶活性，计算出被检抗原（半抗原）的含

23、量。（1）来源于国家和国际专家团体的推荐方法 临床化学和免疫化学测试（1）基于生物变异分量的数据;这种方法与样本空白（A）法十分相似。图2-2在单试剂测定中，样品与试剂的总体积不得少于此参数。=因数x（A3 A2）（A3 A2）=A/分钟条形码扫描 随机配置样本条码和试剂条码但是，配套系统的原装分析参数不宜更改；(1)试验项目设置：对试验名称、编码、试验组合（profile）、试验轮次（round）、必要时包括试验顺序等设置。C溶液的浓度；2监测时间（读数点）和读数间隔时间多数全自动生化分析仪可以在整个测定反应周期内连续监测（如 HITACHI 7170常规测定周期 10分钟，监测 34点，OLYMPUS AU600固定周期 8分 15秒，监测 27点），但反应监测时间是指该时间内的测定读数要用于结果计算。