肝衰竭机制及治疗进展课件.ppt

1、一、肝细胞死亡的发生机制一、肝细胞死亡的发生机制肝细胞死亡超过了肝脏的再生能力，即会发生肝衰竭肝细胞死亡超过了肝脏的再生能力，即会发生肝衰竭经典的肝细胞死亡模式分为两类，即坏死与凋亡经典的肝细胞死亡模式分为两类，即坏死与凋亡坏死往往继发于各种肝损伤所导致的坏死往往继发于各种肝损伤所导致的ATP 耗竭，细胞肿胀溶解，耗竭，细胞肿胀溶解，导致胞内容物的释放和继发性炎症反应的发生导致胞内容物的释放和继发性炎症反应的发生凋亡为凋亡为ATP 依赖的程序性细胞死亡方式，其细胞因皱缩而独立出依赖的程序性细胞死亡方式，其细胞因皱缩而独立出来，染色质固缩，来，染色质固缩，DNA 断裂成规律性片段，并被胞膜包绕形

2、成断裂成规律性片段，并被胞膜包绕形成凋亡小体，后者可由邻近巨噬细胞吞噬，以最大限度的减轻细胞凋亡小体，后者可由邻近巨噬细胞吞噬，以最大限度的减轻细胞内容物的渗漏和炎症反应内容物的渗漏和炎症反应肝脏病理中我们可以观察到肝细胞的坏死与凋亡是并存的。研究肝脏病理中我们可以观察到肝细胞的坏死与凋亡是并存的。研究证据提出新的观点，坏死与凋亡是源于相同启动因素和信号转导证据提出新的观点，坏死与凋亡是源于相同启动因素和信号转导途径的不同的细胞死亡方式，这一过程被命名为坏死性凋亡。途径的不同的细胞死亡方式，这一过程被命名为坏死性凋亡。细胞肿胀是坏死早期最为显著的特征细胞肿胀是坏死早期最为显著的特征 在在ATP

3、 耗竭后，肝细胞骨架蛋白的形态结构发生改变，耗竭后，肝细胞骨架蛋白的形态结构发生改变，促成浆膜大泡的形成。随即出现以线粒体去极化、溶促成浆膜大泡的形成。随即出现以线粒体去极化、溶酶体破裂、双向阴离子荧光团泄漏及浆膜大泡肿胀加酶体破裂、双向阴离子荧光团泄漏及浆膜大泡肿胀加剧为特征的亚稳态。该状态持续几分钟后浆膜大泡破剧为特征的亚稳态。该状态持续几分钟后浆膜大泡破裂，导致浆膜渗透压屏障不可逆的损伤，各种跨膜电裂，导致浆膜渗透压屏障不可逆的损伤，各种跨膜电子、离子梯度的断裂，以及溶质酶和代谢中间产物的子、离子梯度的断裂，以及溶质酶和代谢中间产物的渗漏，最终细胞失去活性渗漏，最终细胞失去活性0 00.

4、10.10.20.20.30.30.40.40.50.50.60.619981998199919992000200020012001200220022003200320042004治愈治愈好转好转未愈未愈死亡死亡其他其他 19982004年我科肝衰竭治疗效果情况年我科肝衰竭治疗效果情况 0.350.350.380.380.50.50.480.480.450.450.430.430.490.490 00.10.10.20.20.30.30.40.40.50.50.60.619981998199919992000200020012001200220022003200320042004 199820

5、04我科治疗肝衰竭的有效率（治愈率我科治疗肝衰竭的有效率（治愈率+好转率）好转率）肝肝 脏脏免疫指标检免疫指标检测测与干预治疗与干预治疗病情档案、随访病情档案、随访门诊、门诊、“三库三库”人工肝人工肝干细胞临干细胞临床研究床研究肠道微生态肠道微生态临床研究临床研究内毒素研究内毒素研究肝肝 外外 脏脏 器器对症支持对症支持抗病毒抗病毒肠道微生态、内肠道微生态、内毒素机制研究毒素机制研究动物模型动物模型（实验基础）（实验基础）本项目在国内外本项目在国内外:n首次宏观、全面首次宏观、全面的对乙肝肝衰竭的病程的对乙肝肝衰竭的病程 进行监控和处理。进行监控和处理。n从从观念上更新观念上更新乙肝治疗的策略

6、与方法。乙肝治疗的策略与方法。上升前期上升前期上升期上升期 平台期平台期终末期（肝移植终末期（肝移植/死亡）死亡）恢复期恢复期TBIL 时间时间抗病毒治疗抗病毒治疗干细胞治疗干细胞治疗免疫治疗免疫治疗 以以CTL为中心的细胞免疫为中心的细胞免疫：免疫效应细胞，免疫效应细胞，CD8+CTL；靶抗原，靶抗原，HBcAg、HBeAg、pre-S1、S2 I类类MHC分子。分子。肝细胞凋亡途径：肝细胞凋亡途径：穿孔素颗粒酶系统；穿孔素颗粒酶系统；Fas系统；系统；TNF系统；系统；TRAIL。尽管尽管TRAIL 介导的细胞凋亡途径已被阐明，但其是介导的细胞凋亡途径已被阐明，但其是否与否与Fas-L、T

7、NF-途径一样在急性肝衰竭的疾病途径一样在急性肝衰竭的疾病进程中发挥重要作用尚不明确进程中发挥重要作用尚不明确 体内外研究表明正常肝细胞对于体内外研究表明正常肝细胞对于TRAIL 介导的凋亡介导的凋亡反应耐受，而慢性病毒感染、脂肪变性及毒性物质反应耐受，而慢性病毒感染、脂肪变性及毒性物质的刺激却可上调肝细胞的刺激却可上调肝细胞TRAIL 的表达，进而通过的表达，进而通过TRAIL 配体配体/受体系统特异性清除病毒感染的肝细胞受体系统特异性清除病毒感染的肝细胞或肝癌细胞或肝癌细胞 TRAIL 配体配体/受体途径对于肝细胞选择性诱导凋亡的受体途径对于肝细胞选择性诱导凋亡的作用为病毒性肝炎与肝胆管系

8、统恶性肿瘤的治疗提作用为病毒性肝炎与肝胆管系统恶性肿瘤的治疗提供了潜在的治疗靶点。供了潜在的治疗靶点。l 持续的持续的HBVHBV复制严重损伤了病毒特异性复制严重损伤了病毒特异性T T细胞功能，包括细胞功能，包括 增殖和分泌细胞因子增殖和分泌细胞因子IL-2IL-2、IFN-rIFN-r和和INF-aINF-a的能力。的能力。l 这种这种T T细胞的功能损伤称之为功能耗竭细胞的功能损伤称之为功能耗竭(exhausition)(exhausition)，可能与抗原提呈细胞（主要是可能与抗原提呈细胞（主要是DCDC）功能低下、调节性）功能低下、调节性T T细细 胞（胞（Regulatory T c

9、ells Regulatory T cells，TregsTregs）增多以及抑制性受）增多以及抑制性受 体的高表达有关。体的高表达有关。l CD28CD28家族的程序性死亡受体家族的程序性死亡受体1 1（PD-1PD-1）分子可作为这些功）分子可作为这些功 能耗竭的能耗竭的T T细胞重要标志。细胞重要标志。Zhang Z et al.J Hepatol 2007，47：751-759Xu DP et al.J Immunol,2006,177(13):739-747Chen L et al.Nat Rev Immunol,2004,4(5):336-347l 缺乏缺乏PD-1PD-1表达将会

10、失去对表达将会失去对T T细胞反应过强的控制，从而诱细胞反应过强的控制，从而诱 发免疫病理损伤，促进急性肝衰竭的发生。发免疫病理损伤，促进急性肝衰竭的发生。Radziewicz H et al.Gastroenterology,2008,134(7):2168-2171l 当肝脏炎性反应轻微时，肝内当肝脏炎性反应轻微时，肝内T T细胞低表达细胞低表达PD-1PD-1，同时肝，同时肝 细胞也低表达细胞也低表达PD-L1PD-L1，这样，这样TCRTCR信号可诱导信号可诱导T T细胞发生正常细胞发生正常 的免疫应答。的免疫应答。l 当肝脏炎性反应增强时，肝内增强的当肝脏炎性反应增强时，肝内增强的P

11、D-1/PD-L1PD-1/PD-L1信号途径信号途径 就会抑制并损伤就会抑制并损伤T T细胞反应。细胞反应。l 当肝脏炎性反应进一步增强时，肝内的当肝脏炎性反应进一步增强时，肝内的PD-1/PD-L1PD-1/PD-L1信号途信号途 径就会提高反应性径就会提高反应性T T细胞凋亡敏感性，从而抑制免疫应答。细胞凋亡敏感性，从而抑制免疫应答。Radziewicz H et al.Gastroenterology,2008,134(7):2168-2171 PD-1/PD-L1结合可能通过两条途径来抑结合可能通过两条途径来抑制肝内制肝内T细胞反应：细胞反应：l 通过磷酸化接头蛋白减弱通过磷酸化接头

12、蛋白减弱TCR信号、降信号、降 低低T细胞功能；细胞功能；l 干扰细胞周期，提高细胞凋亡敏感性。干扰细胞周期，提高细胞凋亡敏感性。Radziewicz H et al.Gastroenterology,2008,134(7):2168-2171 肝细胞内病毒的复制诱导产生多种细胞因子肝细胞内病毒的复制诱导产生多种细胞因子，以以TNF-为核心的炎症反应，包括为核心的炎症反应，包括TGF-1对肝细胞再生的抑制作用，对肝细胞再生的抑制作用，TNF-、IFN-、IL-6、IL-8水平的升高。另外，水平的升高。另外，IL-15和和NK细胞也可能在重型肝炎发病中起一定的作用。细胞也可能在重型肝炎发病中起一

13、定的作用。与其它高需氧的组织器官类似，肝脏与其它高需氧的组织器官类似，肝脏对供血不足引起的损伤极为敏感。其对供血不足引起的损伤极为敏感。其中低流量性缺血，即血供被完全阻断中低流量性缺血，即血供被完全阻断时，整个肝脏将处于缺氧状态。而低时，整个肝脏将处于缺氧状态。而低流量性缺氧，即仍有血供但不足以满流量性缺氧，即仍有血供但不足以满足氧需时，肝小叶中央区域而非周边足氧需时，肝小叶中央区域而非周边区域将发生缺氧。由于肝脏具有双重区域将发生缺氧。由于肝脏具有双重血供系统，由低流量性缺氧造成的中血供系统，由低流量性缺氧造成的中央区域肝细胞的坏死是更为常见的现央区域肝细胞的坏死是更为常见的现象。象。缺氧条

14、件下肝脏微循环的紊乱导致肝脏缺氧条件下肝脏微循环的紊乱导致肝脏损伤一系列肝脏损伤的启动因素去除后，损伤一系列肝脏损伤的启动因素去除后，ALT/LDHALT/LDH指标持续低下预示肝脏缺血存在巨指标持续低下预示肝脏缺血存在巨噬细胞的过度激活在急性肝衰竭病人的进展噬细胞的过度激活在急性肝衰竭病人的进展中起关键性的作用，肝脏中活化和增殖的巨中起关键性的作用，肝脏中活化和增殖的巨噬细胞损伤内皮细胞，扰乱肝脏微循环。噬细胞损伤内皮细胞，扰乱肝脏微循环。Kazuhiro Kotoh,Hepatology 2008,7:6 Kazuhiro Kotoh等回顾性研究了日本等回顾性研究了日本33例急性肝脏例急性

15、肝脏损伤病人，分为存活组和死亡组损伤病人，分为存活组和死亡组病人入院后第三天病人入院后第三天ALT/LDH指标与指标与MELD评分评分ROC曲线下面积分别为曲线下面积分别为0.893、0.777存活组在存活组在LDH达到高峰之后，达到高峰之后，ALT/LDH指标迅速增指标迅速增高高死亡组死亡组LDH延迟降低，延迟降低，ALT/LDH指标低，由肝脏微指标低，由肝脏微循环紊乱引起循环紊乱引起Kazuhiro Kotoh,Hepatology 2008,7:6 Lorrie ALorrie A.等研究了细胞信号抑制因子的表等研究了细胞信号抑制因子的表达与小鼠肝脏缺血再灌注损伤严重性的关系达与小鼠肝脏

16、缺血再灌注损伤严重性的关系TNFTNF、IL-1IL-1、IL-6IL-6和和IFNIFN通过通过JAK-STATJAK-STAT通通路对缺血再灌注损伤有重要的作用路对缺血再灌注损伤有重要的作用Lorrie A.Journal of Hepatology 49(2008)198206.这项研究第一次揭示了肝脏缺血再灌注损这项研究第一次揭示了肝脏缺血再灌注损伤进展之间的关系，前炎症介质的诱导及伤进展之间的关系，前炎症介质的诱导及负信号调节机制的活化负信号调节机制的活化 GPT的清除，仅仅表示肝细胞很少继续坏的清除，仅仅表示肝细胞很少继续坏死，不能预示恢复死，不能预示恢复 细胞因子在不同时间的表达

17、支持动态调控细胞因子在不同时间的表达支持动态调控机制的出现机制的出现 SOCS3在肝脏缺血再灌注中参与急性调节，在肝脏缺血再灌注中参与急性调节，轻微的损伤轻微的损伤SOCS3能够控制细胞因子的表能够控制细胞因子的表达达 SOCS1的诱导是一种辅助的调控机制的诱导是一种辅助的调控机制肝脏缺血再灌注后，肝脏缺血再灌注后，IL-6是SOCS1、SOCS3的主要诱导物的主要诱导物 在外伤和多器官功能衰竭的病人中，在外伤和多器官功能衰竭的病人中，IL-6 作为损伤严重性和死亡率的潜在性标记作为损伤严重性和死亡率的潜在性标记 高高IL-6水平与预后差存在相关性，标志着负水平与预后差存在相关性，标志着负调节

18、机制不足调节机制不足 多器官功能衰竭时，负调节机制在局部或多器官功能衰竭时，负调节机制在局部或偏远损伤时诱导不充分，阻碍内环境的稳偏远损伤时诱导不充分，阻碍内环境的稳定及抑制炎症的进展定及抑制炎症的进展激活枯否细胞激活枯否细胞细胞因子细胞因子（TNF）炎性介质炎性介质（PAF）NO，内皮素，内皮素，自由基，自由基，etc微循环障碍微循环障碍肝损害肝损害Han DW et al.World J Gastroenterol,2002,12,(8);961-966内毒素内毒素 肝脏肝脏内毒素内毒素肠道菌群失调肠道菌群失调 肠道屏障肠道屏障 肝脏解毒功能肝脏解毒功能 门脉高压门脉高压内毒素内毒素经典途

19、径：经典途径：classical CD14 dependent pathway旁路途径：旁路途径：other pathway-sCD14 LBP：LPS binding protein Grace LS,et al.Hepatology 2000;31:932-936枯否细胞枯否细胞 经典途径经典途径旁路途径旁路途径LBPUesugi T,et al.Role of Lipopolysaccharide-Binding Protein in Early Alcohol-Induced Liver Injury in Mice J.J Immunol.2002;168(6):2963-9 SCH

20、FER C,et al,2002,37,(1),:8186.Uesugi T,et al.J Immunol.2002;168(6):2963-9 LBP KO:LBP knockout mice.LPS刺激肝组织后分泌刺激肝组织后分泌TNF,IL-1增多增多P.Olinga,et.Journal of Hepatoloty.2001(35:187-194)-P.Olinga,et Journal of Hepatoloty.2001(35:187-194)-Knolle P,et al.J Hepatol.1995;22(2):226-9 LPS刺激肝组织后分泌刺激肝组织后分泌IL-6,IL

21、-10增多增多 TNF导致肝细胞调亡导致肝细胞调亡/坏死坏死Qing Zang G,et al.World J Gastroentero,2000;6(5):688-692 6 hours after GalN/TNF-,a greatnumber of apoptotic liver cells are found Apoptotic cells(a),apoptotic bodies(b),leukocytes(l)and necrosis(n).9 hours after GalN/ET,further increase of apoptotic liver cells and piec

22、es of liver cell necrosis and bleeding with leukocytes infiltration appear.Qing Zang G,et al.Effect of hepatocyte apoptosis induced by TNF-on acute severe hepatitis in mouse models J.World J Gastroentero,2000;6(5):688-692TNF抗体可阻断抗体可阻断内毒素内毒素所引起的肝损害所引起的肝损害Analysis of DNA ladder from liver cell extract

23、.Marker ET 6h TNF 9h ET 9hMarker TNF 6 hAnti-TNF-/ET 9hTNF 一种适用于慢加急性肝衰竭预后评估一种适用于慢加急性肝衰竭预后评估并且优于并且优于MELD的评分系统的评分系统 研究目的研究目的：试图建立一种适用于慢加急性肝衰竭试图建立一种适用于慢加急性肝衰竭预后评估并且优于终末期肝病模型预后评估并且优于终末期肝病模型(MELD)的评分系统。的评分系统。研究背景：研究背景：全国慢性乙型肝炎病人约全国慢性乙型肝炎病人约2800万万 约约1病人在病程中发生慢加急性肝衰竭病人在病程中发生慢加急性肝衰竭 晚期慢加急性肝衰竭死亡率大于晚期慢加急性肝衰竭死

24、亡率大于80 直到目前为止，对乙型肝炎慢加急性肝衰竭包括核苷类直到目前为止，对乙型肝炎慢加急性肝衰竭包括核苷类似物抗乙型肝炎病毒的内科综合治疗或加上人工肝支持似物抗乙型肝炎病毒的内科综合治疗或加上人工肝支持系统治疗，仅对于有足够肝再生能力的病人才能奏效；系统治疗，仅对于有足够肝再生能力的病人才能奏效；而无足够肝再生能力的病人只能进行肝移植治疗才能挽而无足够肝再生能力的病人只能进行肝移植治疗才能挽救生命。然而，供肝缺乏，术后长期抗排斥和抗乙型肝救生命。然而，供肝缺乏，术后长期抗排斥和抗乙型肝炎病毒治疗，以及手术费用高昂等因素限制了肝移植治炎病毒治疗，以及手术费用高昂等因素限制了肝移植治疗的临床应

25、用范围。疗的临床应用范围。因此，临床上迫切需要建立一种客观，简便和敏感的评因此，临床上迫切需要建立一种客观，简便和敏感的评分方法来帮助临床医生评估乙型肝炎慢加急性肝衰竭病分方法来帮助临床医生评估乙型肝炎慢加急性肝衰竭病人是选择内科综合治疗或人是选择内科综合治疗或/加上人工肝支持系统治疗，还加上人工肝支持系统治疗，还是进行肝移植治疗。是进行肝移植治疗。研究方法研究方法：对死亡组对死亡组196例和存活组例和存活组203例慢加急性例慢加急性肝衰竭进行肝衰竭进行MELD评分，同时选择凝血酶评分，同时选择凝血酶原活动度、肌酐、肝性脑病、并发感染、原活动度、肌酐、肝性脑病、并发感染、血清总血清胆红素、肝脏

26、大小和腹水等血清总血清胆红素、肝脏大小和腹水等7个肝衰竭相关的临床指标，按照严重性给个肝衰竭相关的临床指标，按照严重性给以以14分并合计总分，然后比较这两种评分并合计总分，然后比较这两种评分系统的异同。分系统的异同。注：感染的评分：13分均以白细胞（WBC）计数或中性粒细胞（N）的百分比，先达到者为准计分。4分的标准为：凡有肺部炎症的影像学改变，无论其白细胞和中性粒细胞的值为多少，均计为4分。表表2.本评分系统与本评分系统与MELD评分结果评分结果本评分系统本评分系统t值值26.13大于大于MELD评分评分t值值16.57；ROC曲线下面曲线下面积分析表明本评分系统比积分析表明本评分系统比ME

27、LD能更准确地预测预后。能更准确地预测预后。80%好转组病人好转组病人4.0212.12分分80死亡组病人死亡组病人12.2421.380396121518212427图图1.80 存活组与死亡组病人本评分系统评分的存活组与死亡组病人本评分系统评分的不重叠不重叠分布图分布图80好转组病人好转组病人19.2333.62分分80死亡组病人死亡组病人26.9853.34分分1020153255206303535401845215024505527图图2.80存活组与死亡组病人存活组与死亡组病人MELD分值分值重叠重叠分布图分布图 用用ROC曲线比较曲线比较MELD和本评分系统的预测能和本评分系统的预

28、测能力：力：两者的分值均能够非常好的预测慢性乙型重型两者的分值均能够非常好的预测慢性乙型重型肝炎患者的死亡率肝炎患者的死亡率 MELD和简易评分系统的曲线下面积（和简易评分系统的曲线下面积（c-statistic）分别为）分别为0.886(95 C值可信区间为值可信区间为0.852-0.920)和和0.960(95 C值可信区间为值可信区间为0.944-0.977)，两者的，两者的95可信区间无重叠，有可信区间无重叠，有统计学意义统计学意义 本评分系统对慢性乙型重型肝炎预后的预测能本评分系统对慢性乙型重型肝炎预后的预测能力明显优于力明显优于MELD系统系统(图图3)。图图3.MELD与本评分与

29、本评分ROC曲线图曲线图 结论结论 与与MELD评分相比较本研究增加了肝脏缩评分相比较本研究增加了肝脏缩小，腹水，肝性脑病和感染小，腹水，肝性脑病和感染4个临床指标个临床指标参与慢加急性肝衰竭的评估，提高本评分参与慢加急性肝衰竭的评估，提高本评分系统的敏感性，更适用于慢加急性肝衰竭系统的敏感性，更适用于慢加急性肝衰竭预后评估。预后评估。本评分系统是一种敏感性优于本评分系统是一种敏感性优于MEID评分评分的客观，简易的评分系统。的客观，简易的评分系统。慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化第慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化第1期到期到4期血清期血清HBV DNA水平逐渐下降，而水平逐渐下降，而由相同肝

30、实质体积分摊后没有变化由相同肝实质体积分摊后没有变化 研究背景研究背景 在慢性乙型肝炎的初期，血清在慢性乙型肝炎的初期，血清HBV DNA水平处于高水平；相反，在肝纤维化，肝水平处于高水平；相反，在肝纤维化，肝硬化和肝细胞癌时血清硬化和肝细胞癌时血清HBV DNA的水平处的水平处于较低水平。于较低水平。研究目的研究目的 弄清慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化弄清慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化1期期4期血清期血清HBV DNA水平的变化动态，以水平的变化动态，以及不同肝纤维化分期用相同肝实质体积分摊后及不同肝纤维化分期用相同肝实质体积分摊后的变化动态。的变化动态。研究方法研究方法 从从1期期4期

31、肝纤维化的面积，推算肝纤维化期肝纤维化的面积，推算肝纤维化1期期4期的肝实质体积比例见示意图期的肝实质体积比例见示意图1。研究结果研究结果 1慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化1期期4期的血清期的血清HBV DNA水平变化动态，以及用相同肝实质体积分摊后水平变化动态，以及用相同肝实质体积分摊后的变化动态见表的变化动态见表1：2慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化慢性乙型肝炎自然病程中从肝纤维化1期期4期的血清期的血清HBV DNA水平变化动态，以及用相同肝实质体积分摊后水平变化动态，以及用相同肝实质体积分摊后的变化动态的统计学分析见表的变化动态的统计学分析见表2：表表

32、2可见：从肝纤维化可见：从肝纤维化1期期4期血清期血清HBV DNA逐渐下降逐渐下降有统计学差异，但是，用相同肝实质体积分摊后，有统计学差异，但是，用相同肝实质体积分摊后，4期之期之间没有存在差异。间没有存在差异。结论结论 在慢性乙型肝炎的自然病程中，从肝纤在慢性乙型肝炎的自然病程中，从肝纤维化维化1期期4期血清期血清HBV DNA水平逐渐下水平逐渐下降与肝实质体积的逐渐缩少造成提供给降与肝实质体积的逐渐缩少造成提供给HBV复制的场所减少有关。复制的场所减少有关。方法方法 84例治疗组乙型病毒性肝炎慢加急性肝例治疗组乙型病毒性肝炎慢加急性肝功能衰竭患者在常规内科治疗基础上加用恩替功能衰竭患者在

33、常规内科治疗基础上加用恩替卡韦卡韦0.5mg/天治疗，天治疗，99例对照组患者采用常规例对照组患者采用常规内科治疗，观察患者存活情况、肝功能生化学内科治疗，观察患者存活情况、肝功能生化学指标、指标、HBVDNA定量、凝血酶原时间，比较两定量、凝血酶原时间，比较两组患者在早期、中期、晚期各期肝功能衰竭生组患者在早期、中期、晚期各期肝功能衰竭生存率的差异。存率的差异。恩替卡韦治疗乙型肝炎早期慢加急性肝功能衰竭患者的生存分析恩替卡韦治疗乙型肝炎早期慢加急性肝功能衰竭患者的生存分析 结论结论干细胞干细胞(stem cell)是目前医学、生物组织工程是目前医学、生物组织工程学等领域研究的热点之一学等领域

34、研究的热点之一;间充质干细胞间充质干细胞(MSCs)具有多向分化潜能和体具有多向分化潜能和体外稳定扩增能力外稳定扩增能力,广泛应用于心血管、骨骼、广泛应用于心血管、骨骼、神经、造血及肾脏系统疾病的治疗神经、造血及肾脏系统疾病的治疗;Heydarkhan-HS,et al.Cell Tissues Organs,2008;187(4):263.Sabrina C,et al.Cell Biol Int,2007;31(8):845.Perin L,et al.Pediatr Res,2008 Jan 24 Pai M,et al.Am J Gastroenterol,2008 Jun 30.Ku

35、o T K.et al.Gastroenterology.2008;134(7):2111-21 Banas A etal.J Gastroenterol Hepatol.2008 Jun 25.Poll D v et al.Hepatology.2008;47(5):1634-43 Waseda(Waseda(l 自体自体MSCsMSCs避免避免:免疫排斥反应和伦理学限制免疫排斥反应和伦理学限制,具有具有良好应用前景良好应用前景.l 英国伦敦帝国医学院应用自体英国伦敦帝国医学院应用自体MSCsMSCs对慢性肝病的临对慢性肝病的临床治疗显示床治疗显示:1.1.该方法是安全的该方法是安全的,有效

36、的有效的,未见任何并发症未见任何并发症;2.2.临床症状明显改善临床症状明显改善,随访随访1212个月个月1818个月未个月未见肿瘤形成见肿瘤形成.Levicar N.et al.Cell Prolif.2008;41 Suppl 1:115-25 印度印度HyderabadHyderabad医院通过肝动脉注入自体医院通过肝动脉注入自体MSCsMSCs治治疗慢性肝衰竭和肝硬化临床研究显示疗慢性肝衰竭和肝硬化临床研究显示:自体自体MSCsMSCs是安全和有效的是安全和有效的A.A.Khan etal.Transplantation Proceedings,40,1140441.1.正常成人正常成

37、人MSCsMSCs 2.2.肝衰竭患者肝衰竭患者MSCsMSCs 3.3.羊水干细胞羊水干细胞 4.4.肝衰竭肝匀浆蛋白对肝衰竭肝匀浆蛋白对MSCsMSCs肝细胞分化肝细胞分化 影响影响正常正常MSC的分离，纯化，扩增的分离，纯化，扩增P1P5P15P0Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32MSC向肝细胞分化技术成熟向肝细胞分化技术成熟 BUN(mmol/L)Day Day ALB(ng/ug.d)Day12Day18Chan xie,Zhi

38、 Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40Chan xie,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40 MSC向肝细胞分化诱导向肝细胞分化诱导Chan xie,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40Chan xie,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40免疫组化检测免疫组化检测HBsAg、HBcAg表达表达巢式巢式PCR检测检测HBV DNA及及cccDNAMSCs尚未受到尚未受到HBV感染，感染，并与乙肝病毒复制活跃程度无关并与乙肝病毒复制活跃程度无关 体外以体外以HBV DNA

39、阳性血清培养，阳性血清培养，MSCs亦不易受到亦不易受到HBV感染感染乙肝肝衰竭患者乙肝肝衰竭患者MSCs的的HBV感染状况研究感染状况研究 对乙肝患者的对乙肝患者的BMSCs安全性检测安全性检测(免疫组化免疫组化)HepG2HepG2215HepG2HBV P3 P5 Day18HBsAgHBcAgHBsAgHBcAgChan xie,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40Chan xie,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,40羊水羊水MSCs与骨髓与骨髓MSCsOct-4基因表达水平的比较基因表达水平的比较Yu Bao Zhe

40、ng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32羊水羊水MSCs与骨髓与骨髓MSCs向肝细胞诱导分化能力的比较向肝细胞诱导分化能力的比较Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32羊水羊水MSCs与骨髓与骨髓MSCs细胞遗传学部分研究细胞遗传学部分研究Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol I

41、nt.2008,32Yu Bao Zheng,Zhi Liang Gao.Cell Biol Int.2008,32肝衰竭模型血清和肝匀浆诱导大鼠肝衰竭模型血清和肝匀浆诱导大鼠骨髓骨髓MSCs向肝细胞分化向肝细胞分化ALBALB血清组(400)肝匀浆组(400)肝衰竭模型血清和肝匀浆对大鼠骨髓肝衰竭模型血清和肝匀浆对大鼠骨髓MSCs体外增殖的影响体外增殖的影响凝胶层析法分离纯化正常大鼠与肝衰竭肝匀浆蛋白凝胶层析法分离纯化正常大鼠与肝衰竭肝匀浆蛋白123 456654 3 21凝胶层析法分离纯化正常大鼠与肝衰竭血清蛋白凝胶层析法分离纯化正常大鼠与肝衰竭血清蛋白4 3 21123 4肝衰竭肝匀浆蛋

42、白成分聚丙酰胺凝胶电泳l 第1波峰:集中在260KD50KD；l 第2波峰蛋白主要集中在220KD50KD;l 第3波峰蛋白主要集中在85KD15KD；l 第4波峰蛋白主要集中在85KD12KD;l 第5、第6波峰的蛋白在电泳中没有蛋白条带聚丙酰胺凝胶电泳蛋白条带大致分布对大鼠骨对大鼠骨髓髓MSCs体外增殖的影响体外增殖的影响对大鼠骨对大鼠骨髓髓MSCs体外肝细胞分化诱导体外肝细胞分化诱导分离纯化后肝匀浆蛋白对分离纯化后肝匀浆蛋白对MSCs作用发现作用发现:(已整理成文待发表)l进一步分离血清及肝匀浆中促进进一步分离血清及肝匀浆中促进MSC向向肝细胞分化的蛋白和对增殖抑制的蛋白肝细胞分化的蛋白

43、和对增殖抑制的蛋白;l寻找具体的目的蛋白质，并进行蛋白测寻找具体的目的蛋白质，并进行蛋白测序和鉴定序和鉴定;l分离纯化后蛋白应用于人工肝和临床治分离纯化后蛋白应用于人工肝和临床治疗疗.术后一到四周功能和凝血功能的平均改善情况对照术后一到四周功能和凝血功能的平均改善情况对照 P P=0.03=0.03 P P=0.04=0.04P P=0.03=0.03P P=0.03=0.03 P P=0.04=0.04 P P=0.01=0.01术后一到四周术后一到四周ALTALT上升患者比例对照上升患者比例对照术后一到四周术后一到四周TBIL下降下降患者比例对照患者比例对照术后一到四周术后一到四周ALB上

44、升上升患者比例对照患者比例对照术后一到四周术后一到四周PTA上升上升患者比例对照患者比例对照自觉症状改善情况（移植组优于对照组）自觉症状改善情况（移植组优于对照组）（P P=0.397=0.397）出院时转归（移植组优于对照组）出院时转归（移植组优于对照组）远期预后的比较（移植组优于对照组）远期预后的比较（移植组优于对照组）人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。