临床常用血清酶课件.ppt

1、临床常用血清酶 由于酶广泛分布于全身各器官、组织，在由于酶广泛分布于全身各器官、组织，在血清中升高的机制又不尽相同，因此单凭某一血清中升高的机制又不尽相同，因此单凭某一酶的活性变化，很难做出独立诊断。若同时测酶的活性变化，很难做出独立诊断。若同时测定一组性质不同的酶，比较各酶活性的变化，定一组性质不同的酶，比较各酶活性的变化，就能根据酶增高或减少的就能根据酶增高或减少的“谱型谱型”做出诊断，做出诊断，此种同时检测一组酶，称为酶谱。此种同时检测一组酶，称为酶谱。(5)胰酶谱胰酶谱：主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断。可供选择的有诊断。可供选择的有AMY及其同工酶、及

2、其同工酶、LPS、弹力蛋白酶、弹力蛋白酶-1、磷脂酶、磷脂酶A2、尿胰、尿胰蛋白酶原蛋白酶原-2等。等。一、转氨酶及其同工酶一、转氨酶及其同工酶(一一)生物化学特性生物化学特性 转氨酶是一组催化氨基在氨基酸与转氨酶是一组催化氨基在氨基酸与-酮酸间转移的酶类，丙氨酸氨基转移酶酮酸间转移的酶类，丙氨酸氨基转移酶(ALT)(ALT)和和(天天)门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶(AST)(AST)是其中最是其中最重要的两种。重要的两种。AST广泛存在于多种器官中，按含量多少顺序广泛存在于多种器官中，按含量多少顺序为心、肝、骨骼肌和肾等，肝中为心、肝、骨骼肌和肾等，肝中70存在于肝细胞线存在于肝细胞

3、线粒体中。粒体中。AST有两种同工酶有两种同工酶ASTs和和ASTm，ASTs存在存在于可溶性的细胞质中于可溶性的细胞质中,ASTm存在于存在于线粒体中线粒体中。细胞。细胞轻度损伤时轻度损伤时ASTs升高显著升高显著，而严重损伤时，则而严重损伤时，则ASTm大量出现于血清中大量出现于血清中。正常血清所含。正常血清所含AST的同工酶主要的同工酶主要为为ASTs，但在病理状态下，如细胞坏死，则血清中，但在病理状态下，如细胞坏死，则血清中以以ASTm为主。为主。血清血清AST活性升高，多来自心肌或肝脏损伤；肾活性升高，多来自心肌或肝脏损伤；肾脏或胰腺细胞损伤时，也可出现很高的脏或胰腺细胞损伤时，也可

4、出现很高的AST活性。活性。ALT ALT大量存在于肝脏组织中，其次为肾、大量存在于肝脏组织中，其次为肾、心、骨骼肌等。血清心、骨骼肌等。血清ALTALT活性升高，通常表示活性升高，通常表示肝脏损伤。肝脏损伤。ALTALT有两种不同活性的同工酶有两种不同活性的同工酶(ALTs)(ALTs)、(ALTm)(ALTm)，分别存在于细胞质及线，分别存在于细胞质及线粒体，后者的活性为前者的粒体，后者的活性为前者的1616倍。肝细胞坏死倍。肝细胞坏死血清中以血清中以ALTmALTm为主。为主。(二二)测定方法测定方法 转氨酶的测定多用比色法，以赖氏法最常用。转氨酶的测定多用比色法，以赖氏法最常用。目前，

5、国内外实验室多采用连续监测法进行测定。目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。ALTALT速率法测定中酶偶联反应式为：速率法测定中酶偶联反应式为：ALTL-L-丙氨酸丙氨酸+-+-酮戊二酸酮戊二酸 L-L-谷氨酸谷氨酸 +L-+L-丙酮酸丙酮酸 LDLD丙酮酸丙酮酸 +NADH+H+NADH+H+L-L-乳酸乳酸 +NAD+NAD+AST速率法测定中酶偶联反应式为：速率法测定中酶偶联反应式为：ASTL-门冬氨酸门冬氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸+L-谷氨酸谷氨酸 MD 草酰乙酸草酰乙酸+NADH+H+L-苹果酸苹果酸+NAD+上述偶联反应中，上述偶联反应中，NADH的氧化速率与

6、标本中酶的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在活性呈正比，可在340nm检测吸光度下降速率。根据检测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率线性反应期吸光度下降速率(-Amin)，计算出，计算出ALT、AST的活性浓度。的活性浓度。(三三)临床意义临床意义 ALTALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临床上主要用于肝脏疾病的诊断。床上主要用于肝脏疾病的诊断。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起的急性肝损害时，血清的急性肝损害时，血清ALTALT水平可在临床症状水平可在临床症状(如如黄疸黄疸)出现之前就急剧升高且出现之前

7、就急剧升高且ALTASTALTAST。急性肝炎时血清急性肝炎时血清ALTALT高低与临床病情轻重相高低与临床病情轻重相平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如能同时测定能同时测定ASTAST，并计算，并计算ASTASTALTALT之比，则对于之比，则对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也特别有价值。急性肝炎时比值特别有价值。急性肝炎时比值1ALTASTALT。二、二、-谷氨酰转移酶及其同工酶谷氨酰转移酶及其同工酶(一一

8、)生物化学特征生物化学特征 谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶(-GT(-GT或或GGT)GGT)又称又称-谷谷氨酰转肽酶，是一种线粒体酶。组织分布以肾脏氨酰转肽酶，是一种线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。含量最多，其次为胰、肺、肝等。血清中的血清中的-GT-GT则主要来自肝胆，红细胞中则主要来自肝胆，红细胞中几乎无几乎无-GT-GT，因此溶血对其测定影响不大。，因此溶血对其测定影响不大。-GTGT催化催化-谷氨酰基从谷胱甘肽谷氨酰基从谷胱甘肽(GSH)(GSH)或其他含或其他含-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上。上。(二二)测定方法测定

9、方法 -GT-GT的测定方法有数种，目前国内外的测定方法有数种，目前国内外多采用连续监测法测定血清多采用连续监测法测定血清-GT-GT活性。活性。IFCCIFCC参考方法采用参考方法采用L-L-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧羧基基对硝基苯胺作为底物，以甘氨酰甘氨酸对硝基苯胺作为底物，以甘氨酰甘氨酸(双甘肽双甘肽)作为作为-谷氨酰基的受体。在谷氨酰基的受体。在pH7.7pH7.7的条件下，的条件下，-GT-GT催化底物生成催化底物生成-谷氨酰双谷氨酰双甘肽和黄色的甘肽和黄色的22硝基硝基-5-5-氨基苯甲酸，在氨基苯甲酸，在410nm410nm波长处直接连续监测，吸光度的增高波长处直接连续监测，吸光度

10、的增高速率与速率与-GT-GT活性成正比关系。活性成正比关系。(三三)临床意义临床意义 -GT-GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。胆道是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。胆道疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时，疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时，-GT-GT不不仅阳性率高，而且升高明显。肝实质疾病如肝炎、仅阳性率高，而且升高明显。肝实质疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化时脂肪肝、肝硬化时-GT-GT一般只是中度升高一般只是中度升高(ULN(ULN的的2 25 5倍倍)，这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断。，这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断。若若ALPALP升高而升高而-GT-GT正常可完全排除正常可完全排除ALPAL

11、P的肝来的肝来源，若源，若ALPALP和和-GT-GT均增加，则应先排除肝外引起均增加，则应先排除肝外引起-GT-GT增加的原因，一旦排除，则增加的原因，一旦排除，则-GT-GT增高即为增高即为肝病所致。肝病所致。-GT -GT还可用于判断恶性肿瘤有无肝转还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移，肿瘤患者如有移，肿瘤患者如有-GT-GT的升高，常说明有的升高，常说明有肝转移。肝转移。-GT-GT与乙醇的摄取量有关，饮酒时，与乙醇的摄取量有关，饮酒时，由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致-GT-GT活性升高，故对乙醇性中毒的判定有相当活性升高，故对乙醇性中毒的判定有相当的价值。

12、长期接受巴比妥类药物、含雌激的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有素的避孕药者常有-GT-GT升高。升高。用醋纤膜电泳可将用醋纤膜电泳可将-GT同工酶分为同工酶分为-GTl、-GT2、-GT3和和-GT4 四种，正常四种，正常人只见人只见-GT2和和-GT3。重症肝胆疾病和肝。重症肝胆疾病和肝癌时常有癌时常有-GTl出现，乙醇性肝坏死和胆总出现，乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有管结石时常有-GT2增加，胆总管结石及胰增加，胆总管结石及胰腺炎时腺炎时-GT2也增加。也增加。-GT4与胆红素增高与胆红素增高密切相关。密切相关。三、肌酸激酶及其同工酶和亚型三、肌酸激酶及其同工酶和亚型 (

13、一一)生物化学特性生物化学特性 肌酸激酶肌酸激酶(CK)(CK)催化肌酸和催化肌酸和ATPATP或磷酸肌酸和或磷酸肌酸和ADPADP之间的磷酸转移的可逆性反应，所产生的磷酸肌酸之间的磷酸转移的可逆性反应，所产生的磷酸肌酸含高能磷酸键，是肌肉收缩时能量的直接来源。含高能磷酸键，是肌肉收缩时能量的直接来源。CKCK广泛分布于全身，广泛分布于全身，在骨骼肌含量最高在骨骼肌含量最高，其次是心肌，其次是心肌和脑。和脑。CKCK是由是由M M和和B B两类亚基组成的二聚体。在细胞质两类亚基组成的二聚体。在细胞质内存在内存在3 3种同工酶，即种同工酶，即CK-BBCK-BB(CK1)(CK1)，CK-MBC

14、K-MB(CK2)(CK2)和和CK-MMCK-MM(CK3)(CK3)。在细胞线粒体内还存在另一。在细胞线粒体内还存在另一CKCK同工酶，同工酶，即所谓线粒体即所谓线粒体CK(CK-Mt)CK(CK-Mt)，也称，也称CK4CK4。各种各种CK同工酶同工酶还可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不还可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不等的亚型。等的亚型。(二二)测定方法测定方法 CKCK的测定方法以的测定方法以酶偶联法酶偶联法最常用，最常用，是是CK的参考的参考方法方法.有两种工具酶及指示酶参与反应。原理如下：有两种工具酶及指示酶参与反应。原理如下：CKCK磷酸肌酸磷酸肌酸 +ADP

15、+ADP 肌酸肌酸 +ATP+ATP HK HKATP+ATP+葡萄糖葡萄糖 6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 +ADP+ADP G6PD6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖+NADP+6-磷酸葡萄糖酸盐磷酸葡萄糖酸盐 +NADPH+H+可在可在340nm波长下测定波长下测定NADPH生成速率而生成速率而计算计算CK活性浓度。活性浓度。临床常规测定临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制同工酶多用电泳和免疫抑制法，但两法均会受溶血和巨法，但两法均会受溶血和巨CK的干扰，免疫抑的干扰，免疫抑制法还会受到制法还会受到CK-BB的干扰。因此现在推荐用的干扰。因此现在推荐用免疫化学方法直接测定免疫化学方法直接测定CK

16、MBmass，可不受，可不受溶血和巨溶血和巨CK的干扰。的干扰。CK同工酶亚型同工酶亚型(CK-MM 型和型和CK-MB 型型)多用琼脂糖凝胶高压电泳和等多用琼脂糖凝胶高压电泳和等电聚焦电泳等。电聚焦电泳等。(三三)临床意义临床意义 CKCK及其同工酶和亚型是目前临床上测定次及其同工酶和亚型是目前临床上测定次数最多的酶之一，主要用于心肌、骨骼肌和脑数最多的酶之一，主要用于心肌、骨骼肌和脑疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断。疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断。AMIAMI时总时总CKCK活性升高显著，约在梗死后活性升高显著，约在梗死后3 38h8h即升高，即升高，101024h24h达峰值，达峰值，3

17、34d4d恢复正常。恢复正常。CKCK极度升高极度升高(3000U(3000UL)L)主要见于全身疾病，主要见于全身疾病，特别是肌肉疾病，此时特别是肌肉疾病，此时CKCK测定有助于肌萎缩病测定有助于肌萎缩病因的鉴别，如进行性肌萎缩时可见因的鉴别，如进行性肌萎缩时可见CKCK显著升高。显著升高。此外，病毒、细菌、寄生虫感染引起的肌肉感染此外，病毒、细菌、寄生虫感染引起的肌肉感染性疾病性疾病(如心肌炎、皮肌炎等如心肌炎、皮肌炎等)，都能引起，都能引起CK升高。但升高。但神经疾病引起的肌萎缩，神经疾病引起的肌萎缩，CK活性一般正常。活性一般正常。CK-MM亚型测定对早期亚型测定对早期AMI的检出更为

18、敏感，的检出更为敏感，一般以一般以 CK-MM3CK-MM11.0作为诊断作为诊断AMI的标的标准，但必须排除急性骨骼肌损伤。准，但必须排除急性骨骼肌损伤。AMI发病发病24h CK-MM3CK-MM1 即开始升高，即开始升高，812h达峰值。达峰值。CK-MB2亚型在亚型在AMI早期诊断和判断有无再灌注上有早期诊断和判断有无再灌注上有很高的灵敏度和特异性。一般很高的灵敏度和特异性。一般CK-MB21.9UL或或CK-MB2CK-MBl1.5可作为可作为AMI的诊断标准之一。的诊断标准之一。四、乳酸脱氢酶及其同工酶四、乳酸脱氢酶及其同工酶（一）生物化学特征（一）生物化学特征 乳酸脱氢酶乳酸脱氢

19、酶(LD(LD或或LDH)LDH)催化乳酸氧化成丙催化乳酸氧化成丙酮酸，同时将氢转移给辅酶而成为酮酸，同时将氢转移给辅酶而成为NADHNADH，依，依条件不同而有可逆性。反应式如下：条件不同而有可逆性。反应式如下：L-L-乳酸乳酸 +NAD+NAD+丙酮酸丙酮酸 +NADH+H+NADH+H+LD LD是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于人体各组织中，以肝、心肌、肾、肌肉、红人体各组织中，以肝、心肌、肾、肌肉、红细胞含量较多。细胞含量较多。LD是由两种不同亚基是由两种不同亚基(M和和H)组成的四聚组成的四聚体，形成体，形成5种结构不同的同工酶，即种结构不同的同工酶，

20、即LD1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和和LD5(M4)。这这5种同工酶大致可分为三类：种同工酶大致可分为三类：一类以一类以LD1为主，主要在心肌为主，主要在心肌，可占总，可占总LD活性活性50以上，也存在于红细胞内；以上，也存在于红细胞内；另一类以另一类以LD5为主，以横纹肌为代表，肝为主，以横纹肌为代表，肝脏脏中也有；中也有；第三类以第三类以LD3为主，存在于脾、肺为主，存在于脾、肺。(二二)测定方法测定方法 目前根据目前根据LDLD催化反应方向的不同，有两大类催化反应方向的不同，有两大类测测LDLD方法，一大类为以丙酮酸为底物的逆向反应方法，一大类为以丙

21、酮酸为底物的逆向反应(称称LD-PLD-P法法)；另一大类以乳酸为底物的顺向反应；另一大类以乳酸为底物的顺向反应(称称LD-LLD-L法法)。我国多采用目前。我国多采用目前IFCCIFCC参考方法参考方法LD-LLD-L法，用连续监测法进行测定。法，用连续监测法进行测定。LDLD同工酶测定以琼脂糖凝胶电泳法更多用。同工酶测定以琼脂糖凝胶电泳法更多用。一般成年人血中一般成年人血中LDLD同工酶存在如下规律：同工酶存在如下规律：LD2LDlLD3LD4LD5LD2LDlLD3LD4LD5，部分正常儿童血中可见，部分正常儿童血中可见LDlLD2LDlLD2。(三三)临床意义临床意义 临床上测定临床上

22、测定LDLD及其同工酶常用于诊断和鉴别诊及其同工酶常用于诊断和鉴别诊断心、肝和骨骼肌的疾病。断心、肝和骨骼肌的疾病。AMIAMI时，时，LDLD由于分子量较大，在常用心肌酶中由于分子量较大，在常用心肌酶中升高最迟，通常在梗死升高最迟，通常在梗死8 818h18h升高，升高，4848144h144h达峰达峰值，可显著升高值，可显著升高(5ULN)(5ULN)，因其半寿期较长，增高，因其半寿期较长，增高持续时间可达持续时间可达5 510d10d，此时其他酶已恢复正常，在，此时其他酶已恢复正常，在亚急性心肌梗死诊断上有一定价值。但其诊断亚急性心肌梗死诊断上有一定价值。但其诊断AMIAMI特特异性差，

23、运动后、肾病综合征等可呈现轻度升高异性差，运动后、肾病综合征等可呈现轻度升高(3ULN)(0.6、腹水、腹水LD血清血清LD0.4为渗出液，反之为漏出液。为渗出液，反之为漏出液。临床上测定临床上测定LDLD同工酶同工酶有助于相应组织病变的诊有助于相应组织病变的诊断。心肌梗死和心肌炎时断。心肌梗死和心肌炎时以以LD1LD1和和LD2LD2升高为主，且升高为主，且绝大多数的绝大多数的AMIAMI患者血中患者血中LDLD同工酶都出现同工酶都出现LDlLDlLD21LD21，即所谓，即所谓“反转比率反转比率”现象，且持续的时间长。现象，且持续的时间长。骨骼肌和肝细胞损伤时骨骼肌和肝细胞损伤时常出现常出

24、现LD5LD4LD5LD4。肺、胰、脾、淋巴结坏肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时死和炎症及各种恶性疾病时LD2LD2、LD3LD3、LD4LD4升高；升高；溶血性疾病时溶血性疾病时LD1LD1和和LD2LD2升高，但仍为升高，但仍为LD2LD1LD2LD1；恶性；恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有肿瘤如转移到肝脏往往伴有LD4LD4、LD5LD5升高。升高。五、碱性磷酸酶及其同工酶五、碱性磷酸酶及其同工酶 (一一)生物化学特征生物化学特征 碱性磷酸酶碱性磷酸酶(ALP)(ALP)广泛存在于各器官组织中，广泛存在于各器官组织中，其含量以肝脏为最多，其次为肾脏、胎盘、小肠、其含量以肝脏为最多

25、，其次为肾脏、胎盘、小肠、骨骼等。血清中骨骼等。血清中ALPALP主要来自肝脏和骨骼。生长期主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内儿童血清内ALPALP大多数来自成骨母细胞和生长中的大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。尿中骨软骨细胞，少量来自肝。尿中ALPALP并非来自血液，并非来自血液，而是直接来自肾小管细胞。人体各组织而是直接来自肾小管细胞。人体各组织ALPALP同工酶同工酶可分为可分为3 3大类，即胎盘大类，即胎盘ALPALP、肠、肠ALPALP和肝骨肾和肝骨肾ALPALP同工酶。同工酶。(二二)测定方法测定方法 ALPALP的测定方法有多种，目前国内应用较多的测定方法有

26、多种，目前国内应用较多的方法为连续监测法，以磷酸对硝基酚的方法为连续监测法，以磷酸对硝基酚(4-NPP)(4-NPP)为底物，为底物，2-2-氨基氨基-2-2-甲基甲基-1-1-丙醇丙醇(AMP)(AMP)或二乙醇或二乙醇胺胺(DEA)(DEA)激活型缓冲液为磷酸酰基的受体。激活型缓冲液为磷酸酰基的受体。4-4-NPPNPP在碱性溶液中为五色，在在碱性溶液中为五色，在ALPALP催化下，催化下，4-NPP4-NPP分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚。后分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚。后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长黄色。在波

27、长405nm405nm处连续监测吸光度增高速率，处连续监测吸光度增高速率，计算计算ALPALP活性。活性。(三三)临床意义临床意义 在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后分泌等生理情况下，分泌等生理情况下，ALPALP活性可增高。除外上述活性可增高。除外上述生理性增高，临床上测定生理性增高，临床上测定ALPALP主要用于骨骼、肝主要用于骨骼、肝胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于原因不明的高的鉴别诊断。对于原因不明的高ALPALP血清水平，血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。可测定同工酶以协助

28、明确其器官来源。急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎，急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎，ALP增高达增高达25ULN，而肝硬化、胆石症和，而肝硬化、胆石症和肿瘤引起的胆汁淤积，肿瘤引起的胆汁淤积，ALP增高达增高达ULN的的520倍。倍。90以上的肝外胆道阻塞患者血清以上的肝外胆道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。如果血清中正比。如果血清中ALP持续低值，则阻塞性黄持续低值，则阻塞性黄疸的可能性很小。若血清胆红素逐渐升高，而疸的可能性很小。若血清胆红素逐渐升高，而ALP不断下降表示病情恶化。不断下降表示病情恶化。肝外阻塞性黄疸、转移

29、性肝癌、肝脓肿和肝外阻塞性黄疸、转移性肝癌、肝脓肿和胆石症时胆汁胆石症时胆汁ALPALP检出率很高，并伴有肝检出率很高，并伴有肝ALPALP增加，而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝增加，而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝癌等主要表现为肝癌等主要表现为肝ALPALP增多，大多数不出现胆增多，大多数不出现胆汁汁ALPALP。各种疾病所致骨损伤等，均引起各种疾病所致骨损伤等，均引起ALPALP活性活性升高，尤其是骨升高，尤其是骨ALPALP同工酶增高。同工酶增高。六、酸性磷酸酶及其同工酶六、酸性磷酸酶及其同工酶 (一一)生物化学特征生物化学特征 酸性磷酸酶酸性磷酸酶(ACP)(ACP)存在于人体不同

30、组织，如前列存在于人体不同组织，如前列腺、红细胞等，主要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺、红细胞等，主要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺含量最多。腺含量最多。正常男性血清中正常男性血清中ACPACP约主要来自前列腺，其余部分约主要来自前列腺，其余部分及女子血清中的及女子血清中的ACPACP可能来自血小板、红细胞、白细胞可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等。及破骨细胞等。ACPACP同工酶分前列腺同工酶分前列腺ACP(PAP)ACP(PAP)和非前列腺和非前列腺ACP(ACP(如红如红细胞细胞ACPACP、溶酶体、溶酶体ACPACP、破骨细胞或吞噬细胞、破骨细胞或吞噬细胞ACPACP等等)两两

31、大类，在前列腺中含有丰富的大类，在前列腺中含有丰富的PAPPAP，比其他组织约多，比其他组织约多100100倍。测定标本应及时分离血清倍。测定标本应及时分离血清(浆浆)并尽早测定。并尽早测定。(二二)测定方法测定方法 ACPACP的测定底物、原理和方法与的测定底物、原理和方法与ALPALP相相似，只是反应似，只是反应pHpH为酸性。国外多推荐使用为酸性。国外多推荐使用磷酸百里酚酞为底物的比色法，因为磷酸百里酚酞为底物的比色法，因为PAPPAP对此底物亲和力高，测定结果基本能反映对此底物亲和力高，测定结果基本能反映ACPACP含量高低。此外还可通过用含量高低。此外还可通过用L-L-酒石酸酒石酸这

32、类抑制剂鉴别和估量这类抑制剂鉴别和估量PAPPAP活性。由于活性。由于ACPACP不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定些免疫学方法特异而灵敏地测定ACP(ACP(特别特别是是PAP)PAP)。(三三)临床意义临床意义 ACPACP及其同工酶测定主要用于诊断前列及其同工酶测定主要用于诊断前列腺癌。前列腺癌时血清腺癌。前列腺癌时血清ACPACP活性显著升高，活性显著升高，前列腺癌患者血清前列腺癌患者血清PAPPAP也明显增高，其中肿也明显增高，其中肿瘤分化较好者增高尤为显著。瘤分化较好者增高尤为显著。急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移

33、急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时及甲亢时ACPACP可轻度升高。是否为抗酒石酸可轻度升高。是否为抗酒石酸盐的非盐的非PAPPAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴增高为毛细胞性白血病的重要鉴别要点。别要点。七、淀粉酶及其同工酶七、淀粉酶及其同工酶 (一一)生物化学特征生物化学特征 淀粉酶淀粉酶(AMY)(AMY)：人和动物只含：人和动物只含-AMY-AMY。人体中。人体中胰腺含胰腺含AMYAMY最多，由胰泡细胞合成后通过胰管分泌最多，由胰泡细胞合成后通过胰管分泌人小肠，唾液腺也分泌大量人小肠，唾液腺也分泌大量AMYAMY入口腔开始消化多入口腔开始消化多糖化合物。糖化合物。AMYAMY是一种

34、需钙的金属酶，其最适是一种需钙的金属酶，其最适pHpH在在6.56.57.57.5之间，卤素和其他阴离子有激活作用。之间，卤素和其他阴离子有激活作用。AMYAMY分子分子量较小，易由肾脏排出，半寿期很短，约量较小，易由肾脏排出，半寿期很短，约2h2h，所以，所以病变时血清病变时血清AMYAMY增高持续时间很短。除肝素外，其增高持续时间很短。除肝素外，其他抗凝剂如枸橼酸、草酸盐及他抗凝剂如枸橼酸、草酸盐及EDTAEDTA等都有抑制作用，等都有抑制作用，故故不宜用去钙血浆测定不宜用去钙血浆测定AMYAMY。(二二)测定方法测定方法 国内外目前测定国内外目前测定AMYAMY应用较多的是以麦应用较多的

35、是以麦芽多糖为底物的方法，如芽多糖为底物的方法，如2-2-氯氯-对硝基苯麦芽对硝基苯麦芽三糖苷三糖苷(CNP-G3)(CNP-G3)和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽庚糖苷庚糖苷(4NP-C7)(4NP-C7)法法(亦称亦称EPSEPS法法)，以后者最常，以后者最常用，也是用，也是IFCCIFCC的推荐方法。反应最后生成对硝的推荐方法。反应最后生成对硝基苯酚，其生成量在一定范围内与基苯酚，其生成量在一定范围内与AMYAMY活性成活性成比，在比，在405nm405nm可以进行连续监测即可测出可以进行连续监测即可测出AMYAMY的的活性。活性。(三三)临床意义临床意义 长时间以来

36、，长时间以来，AMYAMY水平一直作为评价胰腺水平一直作为评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。人体胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。人体胰腺和腮腺组织损伤时，血清和尿中的总和腮腺组织损伤时，血清和尿中的总AMYAMY可显可显著增高，肾功能不全患者也有部分著增高，肾功能不全患者也有部分AMYAMY增高。增高。在急性胰腺炎发病后在急性胰腺炎发病后2 23h AMY3h AMY开始升高，多在开始升高，多在121224h24h达峰值，达峰值，2 25d5d下降至正常。如持续性升高达下降至正常。如持续性升高达数周，常提示胰腺炎有反复，或有并发症发生。数周，常提示胰腺炎有反复，或有并发症发生。而尿而尿A

37、MYAMY约于发病后约于发病后121224h24h开始升高，下降也比开始升高，下降也比血清血清AMYAMY慢，因此在急性胰腺炎后期测定尿慢，因此在急性胰腺炎后期测定尿AMYAMY更有价更有价值。值。临床上检测临床上检测AMYAMY用于胰腺炎诊断时，应注意用于胰腺炎诊断时，应注意AMYAMY增增高幅度与病情不成比例，如原高幅度与病情不成比例，如原AMYAMY已升高却发生与症已升高却发生与症状不相应的降低时，常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆。状不相应的降低时，常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆。AMYAMY水平正常也不能完全排除急性胰腺炎。水平正常也不能完全排除急性胰腺炎。八、脂八、脂 肪肪 酶酶 (一一)

38、生物化学特征生物化学特征 脂肪酶脂肪酶(Lipase(Lipase，LPSLPS或或LlP)LlP)是胰腺外是胰腺外分泌酶。分泌酶。LPSLPS可被巯基化合物、胆汁酸、可被巯基化合物、胆汁酸、CaCa2+2+及辅脂肪酶等激活剂激活，而被重金属、丝及辅脂肪酶等激活剂激活，而被重金属、丝氨酸所抑制。血清中氨酸所抑制。血清中LPSLPS主要来自胰腺，少主要来自胰腺，少量来自胃肠粘膜。量来自胃肠粘膜。(二二)测定方法测定方法 迄今测定迄今测定LPSLPS的方法可分为的方法可分为3 3类：测定产物类：测定产物(游离脂肪酸游离脂肪酸)的增加的增加(如滴定法、比色法、分如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和

39、光光度法、荧光法和pHpH电极法等电极法等)；测定底物；测定底物的减少量的减少量(如比浊法、扩散法等如比浊法、扩散法等)；测定；测定LPSLPS的的实际质量实际质量(双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集法法)。目前在国内大多实验室主要以滴定法、。目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主。比浊法和分光光度法为主。比浊法以橄榄油悬液为底物，其与水混合常呈比浊法以橄榄油悬液为底物，其与水混合常呈乳糜状，血清中的乳糜状，血清中的LPSLPS分解橄榄油乳剂生成水溶性的分解橄榄油乳剂生成水溶性的甘油和脂肪酸，浊度随之下降，根据浊度降低的程甘油和脂肪酸，浊度随之下降，

40、根据浊度降低的程度，可计算出度，可计算出LPSLPS活性浓度。此类方法可在活性浓度。此类方法可在400nm400nm波波长下比浊，测出因橄榄油乳剂的变化吸光度的变化。长下比浊，测出因橄榄油乳剂的变化吸光度的变化。或者以或者以340nm340nm波长连续监测浊度的变化。以连续监测波长连续监测浊度的变化。以连续监测法为常用。法为常用。分光光度法目前有两类比较常用：分光光度法目前有两类比较常用：一类为酶偶联显色比色法，多用一类为酶偶联显色比色法，多用1 1，2-2-甘甘油二酯为底物，在油二酯为底物，在LPSLPS和单酸甘油酯脂肪酶的和单酸甘油酯脂肪酶的催化下，水解生成甘油和脂肪酸，甘油通过甘催化下，

41、水解生成甘油和脂肪酸，甘油通过甘油激酶作用生成油激酶作用生成3-3-磷酸甘油，再通过甘油磷酸磷酸甘油，再通过甘油磷酸氧化酶过氧化物酶体系和氧化酶过氧化物酶体系和4-AAP4-AAP色素原体系色素原体系产生紫红色。于产生紫红色。于550nm550nm波长连续监测吸光度的波长连续监测吸光度的变化即可计算变化即可计算LPSLPS活性浓度。此类方法特异性活性浓度。此类方法特异性高，通过双试剂也基本可解决内源性甘油的干高，通过双试剂也基本可解决内源性甘油的干扰问题扰问题。另一类采用人工合成底物另一类采用人工合成底物1,2-1,2-二月桂基二月桂基-rac-rac-丙三氧基丙三氧基-3-3-戊二酸试灵酯设

42、计的连续监戊二酸试灵酯设计的连续监测法。该底物在碱性环境中，在测法。该底物在碱性环境中，在LPSLPS和辅脂肪和辅脂肪酶作用下，水解生成酶作用下，水解生成1,2-1,2-二月桂基甘油和戊二月桂基甘油和戊二酸二酸-6-6-甲基试卤灵。后者不稳定，可自发甲基试卤灵。后者不稳定，可自发分解生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵分解生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵在在577nm577nm波长附近有吸收峰，连续监测其吸光波长附近有吸收峰，连续监测其吸光度变化可定量测定度变化可定量测定LPSLPS活性浓度。此法具有简活性浓度。此法具有简便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强等特便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强

43、等特点。点。(三三)临床意义临床意义 正常人血清正常人血清LPSLPS含量极少，但在急性胰腺炎时，含量极少，但在急性胰腺炎时，2 212h12h血清血清LPSLPS显著升高，显著升高，24h24h至峰值，可达至峰值，可达10ULN10ULN，甚至甚至505060ULN60ULN，至，至 48-72h48-72h可能恢复正常，但随后又可能恢复正常，但随后又可持续升高可持续升高8 815d15d。由于血清由于血清LPSLPS在急性胰腺炎时活在急性胰腺炎时活性升高的时间早，上升的幅度的大，持续的时间长，性升高的时间早，上升的幅度的大，持续的时间长，故其诊断价值优于故其诊断价值优于AMYAMY。临床观

44、察发现，凡血清。临床观察发现，凡血清AMYAMY升升高的病例，其高的病例，其LPSLPS均升高；而均升高；而LPSLPS升高者升高者AMYAMY不一定升不一定升高，约有高，约有2 23AMY3AMY正常的胰腺炎病人，其正常的胰腺炎病人，其LPSLPS正常；非正常；非胰腺炎的急腹症有血清胰腺炎的急腹症有血清AMYAMY升高而升高而LPSLPS不升高。酗酒、不升高。酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血清清LPSLPS可有不同程度的升高。可有不同程度的升高。九、胆碱酯酶九、胆碱酯酶 (一一)生物化学特征生物化学特征 胆碱酯酶胆碱酯酶(Ch

45、E)(ChE)是一类催化酰基胆碱水解的是一类催化酰基胆碱水解的酶类。人体主要有两种，即乙酰胆碱酯酶酶类。人体主要有两种，即乙酰胆碱酯酶(AChE)(AChE)又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶、丁酰胆碱酯、丁酰胆碱酯酶酶(BuChE)(BuChE)又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰胆碱酯又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰胆碱酯酶酶(PChE)(PChE)或胆碱酯酶或胆碱酯酶。临床常规检查的胆碱。临床常规检查的胆碱酯酶酯酶(SChE)(SChE)即指后者，通常简称为即指后者，通常简称为ChEChE。AChEAChE主要分布于神经组织、肌肉、红细胞、主要分布于神经组织、肌肉、红细胞、肺等处，其生

46、理功能是催化水解乙酰胆碱，能肺等处，其生理功能是催化水解乙酰胆碱，能使神经细胞反复除极。使神经细胞反复除极。ChEChEBuChEBuChE主要在肝脏主要在肝脏合成，也分布于胰脏、心脏、小肠粘膜、大脑合成，也分布于胰脏、心脏、小肠粘膜、大脑灰质、血浆及淋巴液等处。灰质、血浆及淋巴液等处。ChEChE的真正生理功能的真正生理功能至今尚未阐明。许多抑制剂对两种至今尚未阐明。许多抑制剂对两种ChEChE有抑制作有抑制作用，如生物碱用，如生物碱(吗啡、毒扁豆碱吗啡、毒扁豆碱)、枸橼酸盐、枸橼酸盐、氟化物、有机磷杀虫剂等氟化物、有机磷杀虫剂等 (二二)测定方法测定方法 主要有两类方法用于临床常规主要有两

47、类方法用于临床常规ChEChE测定，一测定，一类以乙酰胆碱为底物，测定水解反应生成的酸。类以乙酰胆碱为底物，测定水解反应生成的酸。常用指示剂常用指示剂(如间如间-硝基酚或溴百里酚蓝硝基酚或溴百里酚蓝)测测pHpH法。法。特别是纸片法简便快速，适用于急诊有机磷中毒特别是纸片法简便快速，适用于急诊有机磷中毒的快速筛查。但此类方法准确度较差。另一类以的快速筛查。但此类方法准确度较差。另一类以人工合成底物测定胆碱衍生物的生成。人工合成底物测定胆碱衍生物的生成。丁酸硫代胆碱 ChE丁酰硫代胆碱法是目前测定血清丁酰硫代胆碱法是目前测定血清ChEChE最常最常用的方法。测定原理如下：用的方法。测定原理如下：

48、丁酰硫代胆碱+H2O *又称又称EllmanEllman试剂或简称试剂或简称DTNBDTNB 在在405nm405nm波长连续监测测定吸光度值的变化，即波长连续监测测定吸光度值的变化，即可计算血清可计算血清ChEChE的活性浓度。的活性浓度。本法简便、快速，易于自动化。但只能测定血清本法简便、快速，易于自动化。但只能测定血清ChEChE，而不能测定红细胞，而不能测定红细胞AChEAChE。硝基苯甲酸（黄色）巯基硝基苯甲酸巯代硫代胆碱25*25,5-(三三)临床意义临床意义 血浆或血清中血浆或血清中AChE的含量甚微，临床上测定红细的含量甚微，临床上测定红细胞中的胞中的AChE用于有机磷中毒的诊

49、断。用于有机磷中毒的诊断。由于由于ChE在肝脏合成后立即释放到血浆中，故是评在肝脏合成后立即释放到血浆中，故是评价肝细胞合成功能的灵敏指标，与清蛋白生成有密切关价肝细胞合成功能的灵敏指标，与清蛋白生成有密切关系，故测定血清系，故测定血清ChE一般用作肝功能试验。肝、胆疾病一般用作肝功能试验。肝、胆疾病时时ALT、-GT均升高，往往难以鉴别，如增加血清均升高，往往难以鉴别，如增加血清ChE测定，可发现测定，可发现ChE降低者均为肝脏疾患，而正常者多为降低者均为肝脏疾患，而正常者多为胆道疾患。胆道疾患。血清血清ChE减少主要见于肝病和有机磷中毒，增加主减少主要见于肝病和有机磷中毒，增加主要见于肾病

50、综合征。要见于肾病综合征。小小 结结 酶是能催化生物体内化学反应的一类特殊酶是能催化生物体内化学反应的一类特殊蛋白质。体内大多数酶为结合酶，除含酶蛋白蛋白质。体内大多数酶为结合酶，除含酶蛋白外，还含有辅因子外，还含有辅因子(辅酶和辅基辅酶和辅基)。酶可分为氧。酶可分为氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶、化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶、异构酶类和合成酶类等六大类。酶促反应具有异构酶类和合成酶类等六大类。酶促反应具有高效、高度特异性和可调节性等特点，影响因高效、高度特异性和可调节性等特点，影响因素主要有酶浓度、底物浓度、素主要有酶浓度、底物浓度、pHpH、温度、电解、温度、电解质及辅