12-2基因表达载体的构建课件.pptx

1、目的基因的获取 方法目的基因的获取可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。1.从基因文库中获取2.利用PCR技术扩增目的基因3.化学方法直接人工合成第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构建（核心步骤）构建（核心步骤）1.基因表达载体构建的使目的基因在受体细胞中 ，并且可以遗传给下一代使目的基因能够_和 。稳定存在表达发挥作用第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构建（核心步骤）构建（核心步骤）2.基因表达载体的启动子目的基因终止子标记基因复制原点启动子目的基因终止子标记基因复制原点启动子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位

2、，驱动基因转录。终止子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的尾端，使转录终止。标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因，鉴别受体细胞中是否导入目的基因。第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构建（核心步骤）构建（核心步骤）3.基因表达载体构建的用产生互补末端的 酶分别切割和含有片段，再用 酶把两者连接(如图)。限制DNA连接第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构建（核心步骤）构建（核心步骤）3.基因表达载体的构建质粒重新环化质粒与目的基因反向连接目的基因自身环化产生质粒与质粒的连接产物以及目的基因与目的基因的连接产物。的缺点的缺点第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构

3、建（核心步骤）构建（核心步骤）3.基因表达载体的构建双酶切双酶切(a(a酶和酶和b b酶）优点酶）优点防止质粒重新环化防止质粒与目的基因反向连接防目的基因自身环化避免质粒与质粒以及目的基因与目的基因的自身大量连接,提高正确连接的效率。获取获取目的基因目的基因构建构建表达载体表达载体导入导入受体细胞受体细胞目的基因目的基因检测检测鉴定鉴定 基因组文基因组文库库 cDNAcDNA文文库库基因文基因文库库 变变性性复性复性延伸延伸 模板模板、引引物、物、Ta aq酶、酶、4种种dN NTP PPCR 基因基因小小 序序列列已知已知人人工合成工合成1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课

4、件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别项目启动子终止子起始密码子终止密码子化学化学成分成分DNA片段片段DNA片段片段mRNA上三上三个相邻碱基个相邻碱基mRNA上三上三个相邻碱基个相邻碱基位置位置目的基因首端目的基因首端目的基因尾端目的基因尾端mRNA首端首端mRNA尾端尾端作用作用RNA聚合酶识别和聚合酶识别和结合的部位，驱动结合的部位，驱动基因转录出基因转录出RNA决定转录决定转录的结束的结束翻译的翻译的起始信号起始信号决定翻译过决定翻译过程的结束程的结束知识归类知识归类1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优

5、秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）A.切割含抗虫基因的DNA片段和载体必须用同一种限制酶B.抗虫基因表达载体中要有启动子和终止密码子C.抗虫基因表达载体必须具备标记基因，其作用是筛选含有目的基因的受体细胞D.抗虫基因的表达启动于复制原点C C 1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】2.以下为形成cDNA(图中的单链DNA)过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是()B BA.催化过程的酶是RNA聚合酶B.过程发生的变化是引物

6、与单链DNA结合C.催化过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温D.如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】3.如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中Pst、Sma、EcoR、Apa为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来C.除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构D.表达载体

7、构建时需要用到限制酶SmaD D1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】4.4.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌回答下列问题：(1）质粒载体

8、作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。能自我复制、具有标记基因能自我复制、具有标记基因1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】4.4.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化

9、，有的被转化被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌回答下列问题：（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的，其原因是：二者均不含有氨苄青霉素抗二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长性基因，在该培养基上均不生长。含有质粒载体含有质粒载体含有含有重组质粒重组质粒_二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的

10、基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_的固体培养基四环素四环素1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】第二步：第二步：基因表达载体的基因表达载体的构建（核心步骤）构建（核心步骤）如何筛选出插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落？在含有氨苄青霉素的培养基上进行培养，产生一些菌落，然后将这些菌落按照原来的位置转移到含有四环素的培养基上进行培养，一段时间后，某些菌落将会出现停止增殖的现象，这些菌落的位置在含氨苄青霉素的培养基中对应的位置的菌落即为插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落。1.2-2基因表达载体

11、的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1 1.日日本那本那些再现曲水宴些再现曲水宴的表的表演演，有，有着不少着不少“中中国元国元素素”，但但是是由由于于现代年轻人对古代现代年轻人对古代中中国国文化文化了解甚少了解甚少，并不知道哪些元并不知道哪些元素来自中素来自中国国。2 2.本本着保证校车安全着保证校车安全的原的原则则，公安机关公安机关将将会同教会同教育育行政行政等部等部门对校车驾驶人进行逐门对校车驾驶人进行逐一一审查审查，坚坚决决清退不符清退不符合合安全规安全规定的定的校车驾驶人校车驾驶人。3 3.山寨山寨文化是一种文化是一种平民平民文

12、化、文化、草根草根文化，自文化，自然然有其存在的意有其存在的意义义和和价值价值，但山寨但山寨产产品品的的泛滥则泛滥则是中是中国知国知识产识产权权意识意识不足不足的的揭露揭露与与讽刺讽刺。4.神舟神舟7号号宇宙飞船宇宙飞船载载着着三位三位航天英雄胜航天英雄胜利利返回地球返回地球，这艘宇宙飞船这艘宇宙飞船是是我们国家我们国家自自行研行研制的，制的，每每一个中一个中国人不能不国人不能不为为之骄傲之骄傲。5.这家这家工工厂虽然规模不厂虽然规模不大，大，但曾两次荣获省科但曾两次荣获省科学大学大会奖会奖，三，三次被授予省次被授予省优质产优质产品称品称号，产号，产品远销全国各地品远销全国各地和和东南亚地区东南亚地区。6.杭州湾跨海杭州湾跨海大大桥桥是一是一座由我国座由我国自自行行建建造造、自、自行设计行设计、自、自行管理行管理、自、自行投资行投资的特大的特大型交通型交通基基础设施础设施，是，是我国跨海我国跨海大大桥桥建建设史设史上的一个重要上的一个重要里里程程碑碑。7、为防止为防止东南亚地区发东南亚地区发生的生的禽流感传禽流感传入入我国我国，国家国家质质检总局检总局和和农业农业部部今天联今天联合合发发出出通知通知，自，自即日暂行禁即日暂行禁止止进口进口来自疫来自疫区区的的禽类禽类及其产及其产品品。