肾活检组织光镜和免疫荧光标本的制备及检查课件.ppt

1、光镜、免疫荧光、电镜观察肾活检组织结构对光镜、免疫荧光、电镜观察肾活检组织结构对诊断各种类型的肾小球疾病有重要意义诊断各种类型的肾小球疾病有重要意义标本处理及制片质量的好坏，与诊断的难易及标本处理及制片质量的好坏，与诊断的难易及准确与否有着极为密切的关系准确与否有着极为密切的关系必须重视标本制备中的每个细小环节必须重视标本制备中的每个细小环节n生理盐水浸透纱布（潮湿拧不出水）生理盐水浸透纱布（潮湿拧不出水）n纱布及编号的胶布置培养皿备用纱布及编号的胶布置培养皿备用n清洁清洁5ml小瓶，加光镜固定液小瓶，加光镜固定液3ml（10的中性福尔马林溶液的中性福尔马林溶液），盖塞），盖塞紧后备用紧后备用

2、n清洁清洁5ml小瓶内加冷电镜固定液小瓶内加冷电镜固定液3ml置冰瓶（置冰瓶（4%戊二醛戊二醛）n皮质组织皮质组织n皮髓交界组织皮髓交界组织n皮质皮质-髓质髓质-皮质组织皮质组织n仅取得髓质组织则为取材不成功仅取得髓质组织则为取材不成功n判断已取组织：肾组织，肌肉、脂肪、结缔组织等判断已取组织：肾组织，肌肉、脂肪、结缔组织等n用解剖显微镜或放大镜判断肾组织部位（皮质和髓质，用解剖显微镜或放大镜判断肾组织部位（皮质和髓质，有无肾小球），及时与术者联系有无肾小球），及时与术者联系 n肾皮质色淡，见分布不规则，朦胧的红色小点（肾小肾皮质色淡，见分布不规则，朦胧的红色小点（肾小球）。随经验积累，可肉眼

3、判定球）。随经验积累，可肉眼判定 n立即置肾组织于蜡板上，迅速测量其长度（立即置肾组织于蜡板上，迅速测量其长度（cm），记），记录录、分割，、分割，迅速固定迅速固定 n取标本部位、量重要。如无肾小球或皮质取标本部位、量重要。如无肾小球或皮质10个）个）肾活检穿刺组织的分取肾活检穿刺组织的分取肾活检穿刺组织的分取LM：光镜；：光镜；IF：免疫荧光；：免疫荧光；EM：电镜：电镜n光镜光镜 n分切后的组织平放蜡板上（勿扭曲）分切后的组织平放蜡板上（勿扭曲）n小镊子沾少许光镜固定液于组织表面，约小镊子沾少许光镜固定液于组织表面，约30n组织稍硬后，再将整条组织放入固定液内（这组织稍硬后，再将整条组织放

4、入固定液内（这样固定的组织平整、不易弯曲，便于切出完整样固定的组织平整、不易弯曲，便于切出完整的切片）的切片）n免疫荧光及免疫酶标免疫荧光及免疫酶标 n分切后的组织迅速置预冷的培养皿内的湿纱分切后的组织迅速置预冷的培养皿内的湿纱布中布中n置冰瓶即送至恒温冷冻切片机内（置冰瓶即送至恒温冷冻切片机内（2d n短时完成观察和分切标本，注意保持肾组织湿短时完成观察和分切标本，注意保持肾组织湿润，切勿使其干涸润，切勿使其干涸 n解剖显微镜光源不宜太强，否则观察组织易干解剖显微镜光源不宜太强，否则观察组织易干涸，不易看清肾小球涸，不易看清肾小球n免疫荧光用的肾组织必须避免接触固定液，尤免疫荧光用的肾组织必

5、须避免接触固定液，尤其含酒精固定液（避免影响冰冻切片结果）；其含酒精固定液（避免影响冰冻切片结果）；电镜和光镜固定液不得互相混淆电镜和光镜固定液不得互相混淆n动作轻柔夹取未固定组织，勿牵扯组织，避免动作轻柔夹取未固定组织，勿牵扯组织，避免人为因素造成组织细胞变形人为因素造成组织细胞变形 HEPASPASMMassonMN-IgG IgAN-IgALN-IgM免疫荧光免疫荧光 电电 镜镜常用染色常用染色HEPASMassonPAM-Masson刚果红刚果红油红油红“O O”光光 镜镜IgAIgGn按指南要求安全开展肾活检按指南要求安全开展肾活检n确保取材符合要求确保取材符合要求n技术工作是正确诊断的保证技术工作是正确诊断的保证