第六章微生物的遗传和变异课件.ppt

1、第六章第六章 微生物的遗传和变异微生物的遗传和变异 微生物将其生长发育所需要的营养类型和环境条件，微生物将其生长发育所需要的营养类型和环境条件，以及对这些营养和外界环境条件产生的一定反应，或出以及对这些营养和外界环境条件产生的一定反应，或出现的一定性状传给后代，并相对稳定地一代一代传下去现的一定性状传给后代，并相对稳定地一代一代传下去这就是这就是微生物的遗传。微生物的遗传。遗传有保守性，遗传有保守性，是在微生物的系统发育过程中形成的。是在微生物的系统发育过程中形成的。个体发育年龄越老，保守程度越大（个体发育年龄越老，保守程度越大（高等生物比低等生高等生物比低等生物保守程度大物保守程度大）。）。

2、当微生物改变生存环境时，微生物改变自己对营养和当微生物改变生存环境时，微生物改变自己对营养和外界环境条件的要求，产生适应新环境的酶，以适应新外界环境条件的要求，产生适应新环境的酶，以适应新环境并生长良好这就是环境并生长良好这就是变异变异。微生物的变异很普遍。变异了的微生物成为变种。微生物的变异很普遍。变异了的微生物成为变种。第一节第一节 微生物的遗传微生物的遗传 1 1、DNA的存在形式。的存在形式。（1 1）DNA作为遗传物质的证明：作为遗传物质的证明：肺炎球菌转化实验肺炎球菌转化实验（1944年，年，O.T.Avery）大肠杆菌大肠杆菌 T2 T2 噬菌体的感染实验噬菌体的感染实验（195

3、2 年，年，A.Hershey和和M.Chase)）烟草花叶病毒的拆开与重组实验烟草花叶病毒的拆开与重组实验（1956年，年，H.Fraenkel-Conrat）（2 2）存在形式）存在形式 真核生物真核生物的的DNA和组蛋白等组成染色体。和组蛋白等组成染色体。原核微生物原核微生物的的DNA只与很少量的蛋白质结合，没有核膜包围，单纯只与很少量的蛋白质结合，没有核膜包围，单纯由一条由一条DNA细丝构成环状的染色体，位于细胞中央，折叠形成具有空细丝构成环状的染色体，位于细胞中央，折叠形成具有空间结构的一个核区。带有很高的负电荷。间结构的一个核区。带有很高的负电荷。被被MgMg2+2+和精胺、亚精胺

4、和腐胺等中和（原核微生物）。和精胺、亚精胺和腐胺等中和（原核微生物）。被碱性蛋白质被碱性蛋白质(组蛋白和鱼精蛋白中和）组蛋白和鱼精蛋白中和）2 2、基因、基因 基因基因是是DNA分子上一个具有特定碱基顺序的片断。分子上一个具有特定碱基顺序的片断。是具有固定的起点和终点的核苷酸或密码的线性序列。是具有固定的起点和终点的核苷酸或密码的线性序列。分类：分类：（1 1）编码蛋白质的基因。）编码蛋白质的基因。包括编码酶和结构蛋白的结构基因以及包括编码酶和结构蛋白的结构基因以及编码作用于结构基因的阻遏蛋白或激活蛋白的调节基因。编码作用于结构基因的阻遏蛋白或激活蛋白的调节基因。（2 2）没有翻译产物的基因。

5、）没有翻译产物的基因。转录成为转录成为RNA以后不再翻译成为蛋以后不再翻译成为蛋白质的白质的转移核糖核酸转移核糖核酸 (tRNA)基因和基因和核糖体核糖体核酸（核酸（rRNA）基因。）基因。（3 3）不转录的）不转录的DNA区段。区段。如启动区、操纵基因等。前者是转录如启动区、操纵基因等。前者是转录时时RNA多聚酶开始和多聚酶开始和DNA结合的部位；后者是阻遏蛋白或激活蛋白结合的部位；后者是阻遏蛋白或激活蛋白和和DNA结合的部位。结合的部位。外显子：外显子：基因组基因组DNADNA中出现在成熟中出现在成熟RNARNA分子上的序列。外显子分子上的序列。外显子被内含子隔开，转录后经过加工被连接在一

6、起，生成成熟的被内含子隔开，转录后经过加工被连接在一起，生成成熟的RNARNA分子。信使核糖核酸分子。信使核糖核酸(mRNA)(mRNA)所携带的信息参与指定蛋白质产物的所携带的信息参与指定蛋白质产物的氨基酸排列。氨基酸排列。内含子：内含子：真核生物细胞真核生物细胞DNADNA中的间插序列。这些序列被转录在中的间插序列。这些序列被转录在前体前体RNARNA中，经过剪接被去除，最终不存在于成熟中，经过剪接被去除，最终不存在于成熟RNARNA分子中。分子中。内含子和外显子的交替排列构成了割裂基因。在前体内含子和外显子的交替排列构成了割裂基因。在前体RNARNA中的中的内含子常被称作内含子常被称作“

7、间插序列间插序列”。从染色质到染色体的四级结构示意图从染色质到染色体的四级结构示意图1、DNA蛋白纤丝蛋白纤丝 2、螺旋管、螺旋管 3、超级螺旋管、超级螺旋管 4、染色体、染色体 组蛋白组蛋白DNA 1 2 3 4原核生物（细菌、古生菌）的基因组原核生物（细菌、古生菌）的基因组结构的特点结构的特点1）染色体为染色体为双链环状的双链环状的DNA分子（单倍体）；分子（单倍体）；2）基因组上遗传信息具有连续性；基因组上遗传信息具有连续性；基因数基本接近由它的基因组大小所估计的基因数基因数基本接近由它的基因组大小所估计的基因数一般不含内含子，遗传信息是连续的而不是中断的。一般不含内含子，遗传信息是连续

8、的而不是中断的。3）功能相关的结构基因组成功能相关的结构基因组成操纵子操纵子结构；结构；4）结构基因的单拷贝及结构基因的单拷贝及rRNA基因的多拷贝；基因的多拷贝；5）基因组的重复序列少而短；基因组的重复序列少而短；个别细菌个别细菌(鼠伤寒沙门氏菌和犬螺杆菌鼠伤寒沙门氏菌和犬螺杆菌)和古生菌的和古生菌的rRNA和和tRNA中也发现有内含子或间插序列。中也发现有内含子或间插序列。真核微生物（啤酒酵母）的基因组真核微生物（啤酒酵母）的基因组结构的特点结构的特点1 1）典型的真核染色体结构；典型的真核染色体结构；啤酒酵母基因组大小为啤酒酵母基因组大小为13.513.510106 6bpbp，分布在，

9、分布在1616条染色体中。条染色体中。2 2）没有明显的操纵子结构；没有明显的操纵子结构；3 3）有间隔区（即非编码区）和内含子列；有间隔区（即非编码区）和内含子列；4 4）重复序列多；重复序列多；3 3、DNA的复制的复制 DNA的复制时在环上的的一个点开始，从复制点以恒定速率沿着的复制时在环上的的一个点开始，从复制点以恒定速率沿着DNA环移动。环移动。在正常速率和慢速率生长的细胞中合成在正常速率和慢速率生长的细胞中合成DNA所用时间约为物种世所用时间约为物种世代时间的代时间的2/32/3。快速生长的微生物，快速生长的微生物，DNA的第一轮复制还没有完成，的第一轮复制还没有完成，就开始第二轮

10、复制。在同一时间里，有许多复制点出现在细胞中，就开始第二轮复制。在同一时间里，有许多复制点出现在细胞中，在每个生长周期末，在每个生长周期末，DNA的副本总是生长周期开始时的两倍，当的副本总是生长周期开始时的两倍，当DNA的副本被分配到子细胞时，它们在新一轮复制前，已有部分复的副本被分配到子细胞时，它们在新一轮复制前，已有部分复制了。制了。真核微生物的真核微生物的DNA复制同时在各染色体中进行，每个染色体中有复制同时在各染色体中进行，每个染色体中有许多分立的位点，各位点上许多分立的位点，各位点上DNA的复制同时进行。的复制同时进行。DNA的滚环复制模式的滚环复制模式 切口切口55333模板模板新

11、生链新生链新链连续复制新链连续复制互补链合成互补链合成 4 4、反义、反义RNA 从从DNA的无义链上与的无义链上与mRNA同时转录下来的同时转录下来的RNA ，能与能与DNA的碱基互补，的碱基互补，并能阻止、干扰复制转录和翻并能阻止、干扰复制转录和翻译的短小译的短小RNA。它在。它在DNADNA复制、复制、RNARNA转录和翻译及传递转录和翻译及传递氨基酸氨基酸过程中均有过程中均有调节（抑制）调节（抑制）作用。作用。19811981年科学家在研究年科学家在研究ColE1质粒的复制时发现。质粒的复制时发现。5 5、微生物生长与蛋白质合成、微生物生长与蛋白质合成 （1 1）微生物的生长的主要活动

12、是蛋白质的合成，同）微生物的生长的主要活动是蛋白质的合成，同化的碳和消耗的能量有化的碳和消耗的能量有4/54/59/109/10直接或间接与蛋白质直接或间接与蛋白质的合成有关。的合成有关。（2 2）蛋白质的合成与）蛋白质的合成与RNA、DNA的复制（合成）有的复制（合成）有关。以细菌为例：在停滞期细胞内所有成分出现一个关。以细菌为例：在停滞期细胞内所有成分出现一个不平衡的生长状态。不平衡的生长状态。进入对数期细胞内所有成分都以相同的速率生长，叫进入对数期细胞内所有成分都以相同的速率生长，叫平衡生长。平衡生长。将平衡生长的细菌移入丰富的培养基中，生长速率加快，此时将平衡生长的细菌移入丰富的培养基

13、中，生长速率加快，此时RNA的合成速率首先增加，稍后的合成速率首先增加，稍后DNA和蛋白质的合成速率随之增加。和蛋白质的合成速率随之增加。较长一段时间后，细胞分裂的速度也上升，最后全部成分的合成速度较长一段时间后，细胞分裂的速度也上升，最后全部成分的合成速度再达平衡。再达平衡。若作下降实验，若作下降实验，RNA的合成速率首先减小，的合成速率首先减小，DNA和蛋白质的合成和蛋白质的合成速率随之减小。速率随之减小。这说明这说明RNA的合成速率是控制生长速率的关键因素。的合成速率是控制生长速率的关键因素。（3 3）蛋白质的合成过程）蛋白质的合成过程 A A DNA复制复制 B B 转录转录mRNA

14、C C 翻译翻译 D D 蛋白质合成蛋白质合成第二节第二节 微生物的变异微生物的变异一、突变类型一、突变类型 1 1、自发突变、自发突变 多因素低剂量的诱变效应多因素低剂量的诱变效应 ：原因不详的低剂量诱变因素长期作：原因不详的低剂量诱变因素长期作用的综合效应用的综合效应 。互变异构效应互变异构效应：碱基的配对错误。：碱基的配对错误。突变概率低，细菌为突变概率低，细菌为1 11010-4-4 1 11010-10-10 。2 2、诱发突变、诱发突变 （1 1）物理（）物理（UVUV）诱变及修复）诱变及修复 机制机制：断链、交联，：断链、交联，A A、C C的水合作用，的水合作用，T-TT-T。

15、修复修复：A A 光复活、暗复活（光复活、暗复活（19491949年年KelnerKelner发现）发现）光复活光复活：经：经UVUV照射损伤的照射损伤的DNA在蓝色可见光在蓝色可见光 （尤其是（尤其是510nm510nm）照射时）照射时DNA修复酶将受损区修复酶将受损区域两端的磷酸二酯键水解，切割低凹并插入新域两端的磷酸二酯键水解，切割低凹并插入新的核苷酸，修复的核苷酸，修复DNADNA。（光激活酶与。（光激活酶与T-T结合，结合，光照时分解，释放出来，光照时分解，释放出来，T-T解体）解体）暗复活：暗复活：无光条件下的修复，又称切除修复无光条件下的修复，又称切除修复作用。内切核酸酶从作用。

16、内切核酸酶从T-T的的55端切开一个端切开一个3OH和和5P的单链缺口；的单链缺口；外切核酸酶从外切核酸酶从5P至至3OH方向切除方向切除T-T，扩大缺口（，扩大缺口（12-12-1313个核苷酸；个核苷酸；DNA聚合酶合成新的聚合酶合成新的DDNA；连；连接酶连接。接酶连接。紫外线对紫外线对DNA的损伤及其修复的损伤及其修复嘧啶嘧啶嘧啶二聚体嘧啶二聚体UV光复活作用光复活作用嘧啶二聚体嘧啶二聚体嘧啶嘧啶光解酶光解酶B B、切除修复、切除修复 C C 重组修复重组修复：受损伤的：受损伤的DNA先经复制，先经复制，染色体染色体交换，使子链上的空隙部分面对正常的单链再经交换，使子链上的空隙部分面对

17、正常的单链再经DNA聚合酶修复。聚合酶修复。D D SOSSOS修复修复：在：在DNADNA受到大范围的重大损伤时诱导受到大范围的重大损伤时诱导产生的一种应急反应，使细胞内所有的修复酶增产生的一种应急反应，使细胞内所有的修复酶增加合成量，提高酶活性。或诱导产生新的加合成量，提高酶活性。或诱导产生新的修复酶修复酶（DNA多聚酶）多聚酶）修复修复DNA受损伤的部分。受损伤的部分。E E 适应性修复适应性修复：细菌由于长期接触低剂量的诱变剂如硝：细菌由于长期接触低剂量的诱变剂如硝基胍会产生修复蛋白（酶），修复基胍会产生修复蛋白（酶），修复DNA上因甲基化而遭上因甲基化而遭受的损伤。这种在适应期间产生

18、的修复蛋白的修复作用受的损伤。这种在适应期间产生的修复蛋白的修复作用称为适应性修复。称为适应性修复。（2 2）化学诱变化学诱变 化学诱变因素对化学诱变因素对DNA的作用形式：碱基变化；碱基类的作用形式：碱基变化；碱基类似物；移码突变。似物；移码突变。3 3、复合处理及协同效应、复合处理及协同效应 诱变剂的复合处理的协同效应，分为如下几类：诱变剂的复合处理的协同效应，分为如下几类：两种或两种或多种诱变剂先后使用；同一种诱变剂的重复使用；两种或多种诱变剂先后使用；同一种诱变剂的重复使用；两种或多种诱变剂同时使用。多种诱变剂同时使用。4 4、定向培育和驯化、定向培育和驯化 人为用某一特定环境条件长期

19、处理某一微生物群体，同人为用某一特定环境条件长期处理某一微生物群体，同时不断将它们进行移种传代，以达到累积和选择合适的自时不断将它们进行移种传代，以达到累积和选择合适的自发突变体的一种育种方法。发突变体的一种育种方法。18811881年，巴斯德用年，巴斯德用4242去培养炭疽杆菌，去培养炭疽杆菌，2020天后天后失去产芽孢能力，失去产芽孢能力，2-32-3月后失去致病力，可作灭活疫月后失去致病力，可作灭活疫苗苗 。CalmetteCalmette和和GuerinGuerin把牛型结核杆菌接种在牛胆汁、把牛型结核杆菌接种在牛胆汁、甘油、马铃薯培养基上，移种了甘油、马铃薯培养基上，移种了23023

20、0多代，用了多代，用了1313年年到到19231923年获得了年获得了BCG（卡介苗）。（卡介苗）。第第三三节节 基因重组基因重组 概念概念 ：两个不同性状的个体细胞的两个不同性状的个体细胞的DNA融合，使基因重新融合，使基因重新组合，从而发生遗传变异，产生新品种，这个过程称为基因重组合，从而发生遗传变异，产生新品种，这个过程称为基因重组。组。1 1、杂交（结合、接合）、杂交（结合、接合）通过双亲细胞的融合，使整套染色体的基因重组，或是通过通过双亲细胞的融合，使整套染色体的基因重组，或是通过双亲细胞的沟通，使部分染色体基因重组。双亲细胞的沟通，使部分染色体基因重组。传递大段传递大段DNA。中间

21、平板上长出的原养型菌落中间平板上长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致！和重组所致！1946年，年，Joshua Lederberg 和和Edward L.Taturm细菌的多重营养细菌的多重营养缺陷型杂交实验缺陷型杂交实验 实验证据实验证据2 2、转化、转化 受体细胞直接吸收来自供体细胞的受体细胞直接吸收来自供体细胞的DNA片断（来自片断（来自研碎物），并把它整合到自己的基因组里，从而获得研碎物），并把它整合到自己的基因组里，从而获得了供体细胞的部分遗传性状的现象。了供体细胞的部分遗传性状的现象。转化过程可分为以下几步：感受态细胞的出现；转化过程可分为

22、以下几步：感受态细胞的出现；DNA的吸附的吸附(细胞表面的的特定位点细胞表面的的特定位点)；酶促分解（；酶促分解（4-4-5 5*10106 6）；）；DNA进入细胞内；进入细胞内；DNADNA解链；形成解链；形成DNA-DNA-供体供体DNA复合物；复合物；DNA的复制和分离形成转化子等的复制和分离形成转化子等 。供体菌供体菌DNA片段片段受体菌受体菌 感受态细胞：能吸收外来感受态细胞：能吸收外来DNADNA（1 1*10107 7，占染色体组，占染色体组0.3%0.3%）片断（比一般细胞大）片断（比一般细胞大10001000倍），并能把它整合到倍），并能把它整合到自己染色体组上以实现转化的

23、细胞。自己染色体组上以实现转化的细胞。1928年，年，Griffith发现发现肺炎链球菌（肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的转化现象的转化现象用用CaCl2处理细胞，处理细胞，使其成为能摄取外源使其成为能摄取外源DNA的感受态状态。的感受态状态。电穿孔电穿孔等是常用的人工转化手段：等是常用的人工转化手段：用高压脉冲电流击破细胞用高压脉冲电流击破细胞膜，或击成小孔，使各种大分子（包括膜，或击成小孔，使各种大分子（包括DNA）能通过这些小）能通过这些小孔进入细胞。孔进入细胞。转化过程（革兰氏阳性菌的转化模型）转化过程（革兰氏阳性菌的转化模型）以以S.Pneumonia

24、 strrS.Pneumonia strr（肺炎链球菌抗链霉素菌株）为例，大致可分为六阶段：（肺炎链球菌抗链霉素菌株）为例，大致可分为六阶段：吸附：吸附：双链双链DNADNA片段与细胞表面的特定位点（主要在新形成细胞壁的赤道区）结片段与细胞表面的特定位点（主要在新形成细胞壁的赤道区）结合，此时，细胞膜上的胆碱可促进这一过程。在吸附过程的前阶段，如外界加合，此时，细胞膜上的胆碱可促进这一过程。在吸附过程的前阶段，如外界加入入DNADNA酶，就会减少转化子的产生。稍后，酶，就会减少转化子的产生。稍后，DNADNA酶即无影响，说明此时该转化因酶即无影响，说明此时该转化因子已进入细胞；子已进入细胞；切

25、割：切割：在吸附位点上的在吸附位点上的DNADNA被核酸内切酶分解，形成平均分子量为被核酸内切酶分解，形成平均分子量为4545106106的的DNADNA片段；片段；入胞：入胞：DNADNA双链中的一条单链被膜上的另一种核酸酶切除，另一条单链逐步进入双链中的一条单链被膜上的另一种核酸酶切除，另一条单链逐步进入细胞，这是一个耗能的过程。分子量小于细胞，这是一个耗能的过程。分子量小于5 5105105的的DNADNA片段不能进入细胞。这时片段不能进入细胞。这时如用低浓度溶菌酶处理，因它提高了细胞壁的通透性，故可提高转化频率；如用低浓度溶菌酶处理，因它提高了细胞壁的通透性，故可提高转化频率；重组：重

26、组：来自供体菌的单链来自供体菌的单链DNADNA片段在细胞内与受体细胞核染色体组上的同源区配片段在细胞内与受体细胞核染色体组上的同源区配对，接着受体染色体组上的相应单链片段被切除，并被外来的单链对，接着受体染色体组上的相应单链片段被切除，并被外来的单链DNADNA交换、整交换、整合和取代，于是形成了一个杂合合和取代，于是形成了一个杂合DNADNA区段（区段（heterozygous regionheterozygous region）。在这一过）。在这一过程中，有核酸酶、程中，有核酸酶、DNADNA聚合酶和聚合酶和DNADNA连接酶的参与；连接酶的参与；复制复制：受体菌的染色体组进行复制，杂合

27、区段分离成两个，其中之一获得了供：受体菌的染色体组进行复制，杂合区段分离成两个，其中之一获得了供体菌的转化基因，另一个未获供体基因；体菌的转化基因，另一个未获供体基因；转化子形成：转化子形成：当细胞发生分裂后，一个子细胞含供体基因，这就是转化子；另当细胞发生分裂后，一个子细胞含供体基因，这就是转化子；另一个细胞与原始受体菌一样。一个细胞与原始受体菌一样。3 3、转导、转导 通过温和噬菌体的媒介作用，把供体细胞内特定的通过温和噬菌体的媒介作用，把供体细胞内特定的基因（基因（DNADNA片断）携带至受体细胞中，使后者获得前片断）携带至受体细胞中，使后者获得前者部分遗传性状的现象。者部分遗传性状的现

28、象。细菌转导的类型细菌转导的类型普通普通转导转导局限局限转导转导安全普遍转导安全普遍转导流产普遍转导流产普遍转导低频转导低频转导高频转导高频转导局限转导与普遍转导的主要区别：局限转导与普遍转导的主要区别：溶源转变溶源转变细菌的转导（细菌的转导（transduction）普遍转导普遍转导噬菌体可误包供体菌中的任何基因，并使受噬菌体可误包供体菌中的任何基因，并使受体菌实现各种性状的转导。（完全、流产）体菌实现各种性状的转导。（完全、流产）根据噬菌体转导的供体细胞根据噬菌体转导的供体细胞DNA是否整合到受体细胞染是否整合到受体细胞染色体上，又可将普遍性转导分为完全转导和流产转导。色体上，又可将普遍性

29、转导分为完全转导和流产转导。局限转导局限转导通过某些部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的通过某些部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因转移到受体菌。（低频、高频）少数特定基因转移到受体菌。（低频、高频）根据转导的效率区分。根据转导的效率区分。大肠杆菌大肠杆菌l l噬菌体介导的转导噬菌体介导的转导 (a)(a)普遍性转导普遍性转导 (b)(b)特异性转导特异性转导 第第四四节节 遗传工程技术在环境保护中的应用遗传工程技术在环境保护中的应用一、遗传工程技术在环境保护中的应用一、遗传工程技术在环境保护中的应用 新污染新污染 新菌种新菌种 1 1、质粒育种（作为运载工具质粒育种（作为运载工具-载体）载体

30、）质粒质粒较小的、携带少量遗传基因的环状较小的、携带少量遗传基因的环状DNA分子，分子，也称染色体外也称染色体外DNA，它们在细胞分裂过程中能复制，它们在细胞分裂过程中能复制，传递给后代。有的独立存在于细胞质中，有的和染色传递给后代。有的独立存在于细胞质中，有的和染色体结合称为附加体。体结合称为附加体。质粒可因某种外界因素而丢失或转移，某种细菌一质粒可因某种外界因素而丢失或转移，某种细菌一旦丧失质粒，就会失去该质粒决定的某些性状，但菌旦丧失质粒，就会失去该质粒决定的某些性状，但菌体不死亡。体不死亡。可从供体菌转移到受体菌，使受体得到某些性状，可从供体菌转移到受体菌，使受体得到某些性状，也可携带

31、一部分供体的染色体转移，使受体同时得到也可携带一部分供体的染色体转移，使受体同时得到供体的某些性状供体的某些性状。2 2、质粒育种举例、质粒育种举例 质粒育种是将两种或多种微生物通过细胞结合或融合技质粒育种是将两种或多种微生物通过细胞结合或融合技术，使供体菌的质粒转移到受体菌体内，使受体菌保留自术，使供体菌的质粒转移到受体菌体内，使受体菌保留自身的功能质粒，同时获得供体菌的功能质粒，即培养出具身的功能质粒，同时获得供体菌的功能质粒，即培养出具有两种功能质粒的新品种。有两种功能质粒的新品种。如：如：多功能超级细菌的构建多功能超级细菌的构建 解烷抗贡质粒菌的构建解烷抗贡质粒菌的构建 脱色工程菌的构建脱色工程菌的构建 Q5T工程菌工程菌 3.PCR技术（技术（DNA多聚酶链式反应）多聚酶链式反应）1985年由美国人年由美国人Millus创立，是一种创立，是一种DNA扩增技术。扩增技术。操作步骤：操作步骤：1）、加热变性）、加热变性 2）、退火）、退火 3）、延伸）、延伸