第三节培养基的配制课件.ppt

1、第三节第三节 培养基的配制培养基的配制包括水和药品的准备、器皿和用具的准备、母 液的配制和保存等。一、水和药品的准备 配制培养基用的水最好用纯水，一般用蒸馏水 即可，但精细的试验须用重蒸馏水。化学药品 须用分析纯或化学纯，称量要准确，每称一种 药品都必须准确记载，以便事后查对。n n二、器皿和用具的准备 n种类：不同型号的烧杯、容量瓶、移液管、滴管、玻璃棒、三角瓶、试管、培养瓶、培养基分装器等。n洗涤：三角瓶、试管、培养瓶先用清水清洗，然后用碱洗（即泡入热的洗衣粉水液中，洗刷玻璃器皿的内外壁），再用清水反复冲洗干净，直至冲水后瓶壁不挂水珠，最后用蒸馏水淋一遍，晾干或烘干备用。n移液管、容量瓶等

2、由于口小，不便碱洗，需用酸洗，较脏的其它玻璃器皿液要用酸洗，酸洗可用40g工业用重铬酸钾经少量水溶化，然后缓缓加入粗制浓硫酸至1000ml，制成铬酸硫酸混合液，来清洗。三、母液的配制和保存三、母液的配制和保存 经常使用的培养基，可先将各种药品配成 浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释。母液要根据药剂的化 学性质分别配制。一般配成大量元素、微 量元素、铁盐、维生素、氨基酸等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也 可以混在一起。配制成的母液，放入冰箱 内保存。1.大量元素 原则上可以混在一起，但硫酸镁（MgSO42H2O）和氯化钙（CaCl22H2O）要分别单独配制，因为高浓度

3、的Ca2+和Mg2+与磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。Ca2+和 PO43-一起混合易发生沉淀。但定容后，沉淀即会消失。2.铁盐也容易发生沉淀，需要单独配制。一般硫酸亚铁（FeSO47H2O）和乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)配成100倍浓度的铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀。3.微量元素可配成50或100倍浓度的混合 母液。KI可以单独配成母液。4.氨基酸可以和维生素一起配成100或200倍液，也可将它们中的几种有机成分分别配制，以便配制不同培养基时使用方便。一般配制浓度为甘氨酸1-2mg/ml，维生素B10.5-1 mg/ml，维生素B60.5-1 mg/ml，烟酸0.5-1 mg/ml，肌

4、醇20mg/l。5.植物生长调节物质 也可以分别配制成溶液，储存于冰箱。一般浓度为0.5-1 mg/ml。IAA、NAA、IBA、2,4-D之类生长素，可先用少量0.1N氢氧化钠或乙醇溶解，然后再定容到所需要的体积。KT、BA等细胞分裂素则可用少量0.1N盐酸加热溶解，然后加水定容。四、培养基的配制及其灭菌1培养基的配制方法（1）将配制好的母液按顺序排列。（2）然后依次用专用的移液管按需要量吸取预先配制好的各种母液及激素等，并混合在一起。（3）再将琼脂和糖加入其中。（4）最后加蒸馏水定容至所需体积。（5）随即用0.1N-1.0N的氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）将pH调至所需的数值（一般通

5、过高压灭菌，pH值会向酸性一则偏移0.1-0.5），然后分装到培养瓶中。大多数植物都要求在pH5.6-5.8的条件下进行组织培养。2.培养基的分装与灭菌 培养基合成后要趁热分装，100ml的容器约装入30-40ml培养基，即1L培养基约装35瓶左右。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热。灭菌结束后，等气压回“0

6、”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。注意事项 在灭菌后应尽快地转移培养瓶使其冷却。一般应将培养基储藏于30C以下的室内。某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能和其它培养基一起高压消毒，而要进行过滤消毒。液体培养基的配制方法，除不加琼脂外，其它与固体培养基相同。3玻璃器皿的灭菌湿热灭菌法，即将玻璃器皿包扎后置入蒸汽灭菌锅中进行高温高压灭菌，灭菌时间可延长达25-30分钟；干热灭菌法，即将玻璃器皿置入电热烘箱中进行灭菌；煮沸灭菌法，即将玻璃器皿放入水中煮沸。4.金属器械的灭菌金属器械一般用火焰灭菌法，即把金属

7、器械放在 95%的酒精中浸一下，然后放在火焰上燃烧灭菌。这一步骤应当在无菌操作过程中反复进行。金属 器械也可以用干热灭菌法灭菌，即将拭净或烘干 的金属器械用纸包好，盛在金属盒内，放在烘箱 中灭菌。培养基的制备：称量融解Agar加Suc溶解加入母液定容、调 PH分装、封口灭菌、标记储存例1：配制1L以下培养基 MSBA2NAA0.2Suc3.0Agar0.8 MS：I 50ml ，II 5ml，III 5ml，IV 5ml BA：20ml NAA：2ml Suc：30g Agar：8g例2：N6GA3 0.1 Suc5.0Agar0.8 过滤灭菌 灭菌转入无菌区 无菌水定容乘热分装分装用试管等例3：1/2MSNAA0.1 Suc3.0Agar0.8 MS母液：25，2.5，2.5，2.5 （注意：工作中常为25，5，5，5）例3：Heller无White有KT0.1BA2IAA0.5椰乳10%+Ac 0.5%肌醇100mg例4：配制MS0 只有MS基础物质，无激素 返回MS无White有KT0.1BA2IAA0.5GA30.2椰乳10%+Ac 0.5%KNO3400mgGly200mg要点：1、基本培养基：MS无机盐White有机物 2、激素使用水平：mg/L 贮备浓度：1mg/10ml 3、椰乳10%V/V 液/液 Ac0.5%W/V 固/液 4、IAA、GA3、椰乳 需过滤灭菌