第七章微生物的生长和遗传变异课件讲义.ppt
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- 第七 微生物 生长 遗传 变异 课件 讲义
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1、第七章第七章 微生物的生长和遗传变异微生物的生长和遗传变异n主要教学内容:主要教学内容:第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性第二节第二节 微生物的遗传微生物的遗传第三节第三节 微生物的变异微生物的变异第四节第四节 遗传工程遗传工程第五节第五节 微生物的驯化与保藏微生物的驯化与保藏n教学目的要求:教学目的要求:掌握掌握:1 1、微生物生长的常用测定方法。、微生物生长的常用测定方法。2 2、微生物间歇培养时的生长曲线。、微生物间歇培养时的生长曲线。3 3、微生物年龄段的划分及决定微生物生长处、微生物年龄段的划分及决定微生物生长处于哪一个阶段或时期的主要因素。于哪一个阶段或时期的主
2、要因素。4 4、微生物的世代时间及世代时间的测定时期。、微生物的世代时间及世代时间的测定时期。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性5 5、微生物生长阶段(或时期)与污水生物、微生物生长阶段(或时期)与污水生物处理效果的关系及稳定期在废水处理过处理效果的关系及稳定期在废水处理过程中的具体应用。程中的具体应用。6 6、生物膜的定义。、生物膜的定义。7 7、生物膜的生长特性。、生物膜的生长特性。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性一、生长与繁殖的基本概念一、生长与繁殖的基本概念n微生物体积小,相对面积较大,物质吸收快,转化微生物体积小,相对面积较大,物质吸收快,转
3、化快。微生物(如细菌)的生长与繁殖迅速,适应性快。微生物(如细菌)的生长与繁殖迅速,适应性强。强。(一)、微生物的生长(一)、微生物的生长n微生物的生长微生物的生长指微生物在适宜的环境条件下,指微生物在适宜的环境条件下,不断地吸收营养物质,并按照自已的代谢方式进行不断地吸收营养物质,并按照自已的代谢方式进行代谢活动,如果同化作用大于异化作用,则细胞质代谢活动,如果同化作用大于异化作用,则细胞质量不断增加,体积得以增大,表现在细胞自身就是量不断增加,体积得以增大,表现在细胞自身就是体积或重量的不断增加,这种现象叫生长。体积或重量的不断增加,这种现象叫生长。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物
4、的生长及其特性(二)、微生物的繁殖(二)、微生物的繁殖n微生物的繁殖微生物的繁殖微生物生长到一定阶段,便分微生物生长到一定阶段,便分裂成子细胞(细菌主要是以二分裂的方式),子裂成子细胞(细菌主要是以二分裂的方式),子细胞重复以上过程,这就是繁殖。细胞重复以上过程,这就是繁殖。微生物繁殖很快,多数在微生物繁殖很快,多数在2030min繁殖一代(大繁殖一代(大肠杆菌肠杆菌3737,18min18min;硝化细菌,;硝化细菌,824小时;只有小时;只有少数可以长达几十小时,甚至几天。)少数可以长达几十小时,甚至几天。)(三)、(三)、微生物生长指标的确定微生物生长指标的确定n微生物生长量法;微生物生
5、长量法;n微生物计数法。微生物计数法。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性二、微生物生长的测定方法微生物生长的测定方法n微生物生长的测定方法主要有计数法、测生长量微生物生长的测定方法主要有计数法、测生长量法、其它生理生化指标法。法、其它生理生化指标法。n为什么要测定微生物的生长?为什么要测定微生物的生长?原因:原因:评价特定废水处理时污泥驯化效果的好坏;评价特定废水处理时污泥驯化效果的好坏;评价特定细菌培养条件是否合适;评价特定细菌培养条件是否合适;评价水处理构筑物(如曝气池)是否正常运转等。评价水处理构筑物(如曝气池)是否正常运转等。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物
6、的生长及其特性(一)、(一)、计数法计数法n计数法有计数法有显微镜直接显微镜直接计数法、荧光染色计数法、活计数法、荧光染色计数法、活菌计数法、特定微生物计数法等。目前普遍采用的菌计数法、特定微生物计数法等。目前普遍采用的是是显微镜直接显微镜直接计数法、计数法、活菌计数法。活菌计数法。1 1、显微镜直接、显微镜直接计数法计数法n显微镜直接显微镜直接计数法计数法是常用的是常用的微生物微生物生长测定方法,生长测定方法,特点是测定过程迅速,但不能确定特点是测定过程迅速,但不能确定微生物微生物的死活。的死活。(微生物微生物的死活不分)的死活不分)第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性n显
7、微镜直接显微镜直接计数法有涂片染色法、计数法有涂片染色法、计数器测定计数器测定法、比例计数法等,目前普遍采用的是计数器法、比例计数法等,目前普遍采用的是计数器测定法。测定法。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性*(1 1)、计数器测定法)、计数器测定法n计数器测定法采用特殊的微生物或血球计数板计数器测定法采用特殊的微生物或血球计数板(器)进行测定。操作过程是取一定体积的待(器)进行测定。操作过程是取一定体积的待测样品放于计数器的测定小室与盖玻片之间,测样品放于计数器的测定小室与盖玻片之间,在显微镜的高倍镜下直接计数。由于测定小室在显微镜的高倍镜下直接计数。由于测定小室的体积是
8、已知的,因此根据得到的计数值就可的体积是已知的,因此根据得到的计数值就可以计算出微生物或细菌的数量。以计算出微生物或细菌的数量。n血球计数板上的计数室体积为血球计数板上的计数室体积为0.10.1mmmm3 3,通过简,通过简单的数学换算可以计算出细菌或微生物的含量。单的数学换算可以计算出细菌或微生物的含量。(个个/mL)mL)。n计数器构造见下图。计数器构造见下图。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性图图7-1 7-1 血球计数板示意图血球计数板示意图槽槽槽槽槽槽槽槽第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性n记数室内微生物或细菌的分布见下图。记数室内微生物或细菌
9、的分布见下图。图图7-2 7-2 记数室内微生物或细菌的分布记数室内微生物或细菌的分布第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性2 2、活菌计数法、活菌计数法n特点:不含死的细菌细胞,但测定所需的时特点:不含死的细菌细胞,但测定所需的时间较长。间较长。n活菌计数法有活菌计数法有平板计数法、液体计数法、平板计数法、液体计数法、薄薄膜计数法。其中以膜计数法。其中以平板计数法最为常用。平板计数法最为常用。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性*(1 1)、平板计数法)、平板计数法n将样品作一系列将样品作一系列1010倍梯度稀释倍梯度稀释,然后将相应稀释然后将相应稀释度的样
10、品(如度的样品(如1mL1mL,平行做,平行做23次)涂布到平板次)涂布到平板中,或与已经融化好的固体培养基混合、摇匀、中,或与已经融化好的固体培养基混合、摇匀、凝固。将待培养的平板凝固。将待培养的平板倒置于倒置于培养箱中培养,一培养箱中培养,一定时间后观察并计数生长的微生物的菌落数,最定时间后观察并计数生长的微生物的菌落数,最终根据微生物的菌落数、取样量、稀释度并经过终根据微生物的菌落数、取样量、稀释度并经过简单的换算得出样品微生物的浓度。简单的换算得出样品微生物的浓度。n平板计数法具体做法见下图。平板计数法具体做法见下图。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性图图 7-3
11、平板计数法具体做法平板计数法具体做法9ml无菌水无菌水第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性图图7-4皿底皿底皿盖皿盖第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性7-5 细菌固体培养基上的典型群体特征细菌固体培养基上的典型群体特征n平板计数法的主要注意事项:平板计数法的主要注意事项:一般取菌落数在一般取菌落数在30300个的平板进行计数。过多个的平板进行计数。过多或过少均不采用。或过少均不采用。原因:菌落数太多,计数费时费力;菌落数太少,原因:菌落数太多,计数费时费力;菌落数太少,计数误差太大。计数误差太大。培养皿
12、倒置于培养箱中培养。培养皿倒置于培养箱中培养。原因:为了防止培养基内水分蒸发到皿盖上而使原因:为了防止培养基内水分蒸发到皿盖上而使培养基变干,影响微生物的培养。培养基变干,影响微生物的培养。限用于能够在培养基上形成菌落的微生物。限用于能够在培养基上形成菌落的微生物。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性稀释度稀释度菌液菌液(mLmL)菌落数菌落数细菌浓度细菌浓度(个个/mLmL)1010-4-41 11 142.042.0444410104 4或或4.44.410105 52 246.046.0平均平均44.044.0n平板计数法试验实例平板计数法试验实例第一节第一节 微生物的
13、生长及其特性微生物的生长及其特性表表7-1(2 2)、液体计数法(如三管法或五管法)、液体计数法(如三管法或五管法)n液体计数法主要用于不能在平板培养基上形成菌液体计数法主要用于不能在平板培养基上形成菌落的微生物。落的微生物。n具体做法是:将待测样品作具体做法是:将待测样品作1010倍梯度稀释,取相倍梯度稀释,取相应稀释度的样品(应稀释度的样品(1mL1mL)分别接种到)分别接种到3 3管或管或5 5管一管一组的数组液体培养基中,培养一定时间后,观察组的数组液体培养基中,培养一定时间后,观察各管及各组中细菌是否生长,记录结果,根据读各管及各组中细菌是否生长,记录结果,根据读数规则,查已专门处理
14、好的最可能数表,得出细数规则,查已专门处理好的最可能数表,得出细菌的最终含量。菌的最终含量。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性n试验结果举例试验结果举例n根据试验结果及读数规则,查表得出微生物或细根据试验结果及读数规则,查表得出微生物或细菌的含量。菌的含量。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性(3 3)、薄膜计数法)、薄膜计数法n对于某些细菌含量较低的测定样品(如空气或对于某些细菌含量较低的测定样品(如空气或饮用水),可以采用薄膜计数法。饮用水),可以采用薄膜计数法。该方法是将一定体积的待测样品通过带有许多该方法是将一定体积的待测样品通过带有许多小孔但又不
15、让细菌流出的微孔滤膜,借助膜的小孔但又不让细菌流出的微孔滤膜,借助膜的作用将微生物截留,再将膜(有细菌的一面向作用将微生物截留,再将膜(有细菌的一面向上)放于固体培养基表面培养,然后类似平板上)放于固体培养基表面培养,然后类似平板计数法计算结果。计数法计算结果。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性图图7-6 7-6 滤器装置滤器装置第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性n上述活菌计数法所用的样品必须成分散的上述活菌计数法所用的样品必须成分散的悬浮状态,否则要强化分散。悬浮状态,否则要强化分散。(二)、测生长量法(二)、测生长量法n测生长量法有测重量法、光密度法
16、、测元素法、测生长量法有测重量法、光密度法、测元素法、测其它生理生化指标法法等。目前普遍采用的是测其它生理生化指标法法等。目前普遍采用的是测重量法、光密度法、测其它生理生化指标法。测重量法、光密度法、测其它生理生化指标法。*1 1、重量法(测定细胞干重)、重量法(测定细胞干重)n过程:取经过培养一段时间的待测微生物样品,过程:取经过培养一段时间的待测微生物样品,用离心机离心后收集生长后的微生物细胞,或用用离心机离心后收集生长后的微生物细胞,或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的微生物细胞,然后滤纸、滤膜过滤截取生长后的微生物细胞,然后在在105105110110下进行干燥(恒重),称取干燥后下进行干燥
17、(恒重),称取干燥后的重量,以此代表微生物生长量的多少。的重量,以此代表微生物生长量的多少。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性活性污泥水处理构筑物内微生物生长量通常用这活性污泥水处理构筑物内微生物生长量通常用这种细胞干重测定法。活性污泥法中微生物的生长种细胞干重测定法。活性污泥法中微生物的生长量指标是混合液悬浮固体浓度量指标是混合液悬浮固体浓度MLSSMLSS或混合液挥发或混合液挥发性悬浮固体浓度(性悬浮固体浓度(MLVSSMLVSS)。)。测定测定MLSSMLSS具体做法具体做法1 1:取一定体积的待测活性污泥:取一定体积的待测活性污泥样品,放于蒸发皿中干燥,然后称重。样
18、品,放于蒸发皿中干燥,然后称重。(恒重)(恒重)测定测定MLSSMLSS具体做法具体做法2 2:取一定体积的待测活性污泥:取一定体积的待测活性污泥样品(一般用量筒量取样品(一般用量筒量取100mL100mL),经过滤),经过滤干燥干燥(105110左右)左右)称重。称重。(恒重)(恒重)第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性nMLSSMLSS不仅包括细菌或微生物,还包括无机颗粒等。不仅包括细菌或微生物,还包括无机颗粒等。因此因此MLVSSMLVSS能更精确地表示细菌或微生物的生长能更精确地表示细菌或微生物的生长量量。MLVSSMLVSS测定过程是:将已测得干重的污泥样品,测定过
19、程是:将已测得干重的污泥样品,放于马福炉内放于马福炉内550550下灼烧下灼烧2 2h h,微生物中含有的微生物中含有的各种有机物就被分解成为各种有机物就被分解成为COCO2 2和和H H2 2O O 并蒸发掉。因并蒸发掉。因此烧掉的部分就是挥发性悬浮固体重量。此烧掉的部分就是挥发性悬浮固体重量。实际水处理中,实际水处理中,MLSSMLSS用的较多(原因:测定方便、用的较多(原因:测定方便、迅速)。迅速)。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性*2 2、光密度法(比浊计数法)、光密度法(比浊计数法)n光密度法是测定悬浮细胞的快速方法。原光密度法是测定悬浮细胞的快速方法。原理是:
20、溶液的吸光度与溶液的混浊度即微理是:溶液的吸光度与溶液的混浊度即微生物悬浮细胞浓度正比。根据悬浮溶液的生物悬浮细胞浓度正比。根据悬浮溶液的吸光度吸光度,查已经绘制好的标准曲线,(吸,查已经绘制好的标准曲线,(吸光度与微生物浓度的关系曲线),可以得光度与微生物浓度的关系曲线),可以得到溶液中微生物的浓度。到溶液中微生物的浓度。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性*3 3、其它生理生化指标法、其它生理生化指标法n微生物生长过程中,要吸收和消耗一些物质,微生物生长过程中,要吸收和消耗一些物质,同时产生和分泌另外一些物质。通过测定这同时产生和分泌另外一些物质。通过测定这些物质的变化,
21、可以间接表示或估计微生物些物质的变化,可以间接表示或估计微生物的生长情况。的生长情况。如测定待测样品中营养物质(如测定待测样品中营养物质(CODCOD)的消耗,的消耗,溶解氧的消耗,有机酸的产生,溶解氧的消耗,有机酸的产生,H H2 2和和CHCH4 4的产的产生(厌氧微生物的生长及活性测定)。生(厌氧微生物的生长及活性测定)。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性(三)、其它(三)、其它n元素法(如测细胞含氮量、蛋白质、元素法(如测细胞含氮量、蛋白质、DNADNA含含量等)、荧光染色计数法等。量等)、荧光染色计数法等。n以上测定法均需要按照实验指导书进行。以上测定法均需要按照
22、实验指导书进行。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性三、微生物的生长特性三、微生物的生长特性(一)、间歇培养(一)、间歇培养n间歇培养的特点:营养物质一次性投加。间歇培养的特点:营养物质一次性投加。*1 1、间歇培养生长曲线、间歇培养生长曲线n间歇培养的方法:将少量微生物接种于一定量间歇培养的方法:将少量微生物接种于一定量的液体培养基内,在适宜的温度下培养,在培的液体培养基内,在适宜的温度下培养,在培养过程中不加入也不取出培养基和微生物。养过程中不加入也不取出培养基和微生物。n微生物间歇培养模式见下图。微生物间歇培养模式见下图。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及
23、其特性图图7-7 7-7 微生物间歇培养模式微生物间歇培养模式菌种和液体培养基菌种和液体培养基一次性加入。一次性加入。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性n间歇培养生长曲线的测定:在间歇培养过程中间歇培养生长曲线的测定:在间歇培养过程中定时取样测定活微生物数目或重量的变化,以定时取样测定活微生物数目或重量的变化,以活微生物个数或微生物重量为纵坐标,培养时活微生物个数或微生物重量为纵坐标,培养时间为横坐标,即可绘制出一曲线,此曲线称为间为横坐标,即可绘制出一曲线,此曲线称为微生物的生长曲线。微生物的生长曲线。n微生物的生长曲线分为:按活微生物重量绘制微生物的生长曲线分为:按活微
24、生物重量绘制和按微生物数目的对数绘制两种。和按微生物数目的对数绘制两种。n按活微生物重量绘制的曲线见下图。按活微生物重量绘制的曲线见下图。第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性图图7-8 7-8 微生物生长曲线(按活微生物重量绘制)微生物生长曲线(按活微生物重量绘制)第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性曲线特点:将微生物或细菌的生长分为曲线特点:将微生物或细菌的生长分为3 3个阶段:个阶段:生长率上升阶段,生长率下降阶段,内源呼吸阶段。生长率上升阶段,生长率下降阶段,内源呼吸阶段。生长率上升阶段:上升阶段初期,食料充足,微生生长率上升阶段:上升阶段初期,食料充
25、足,微生物或细菌是在适应新的环境,一般不进行分裂,菌物或细菌是在适应新的环境,一般不进行分裂,菌数不增加,但菌体逐渐增大,以后很快进入迅速繁数不增加,但菌体逐渐增大,以后很快进入迅速繁殖的阶段,到上升阶段后期,生长率达到最高,此殖的阶段,到上升阶段后期,生长率达到最高,此时分解培养基中有机物的速率也最高。(生长率上时分解培养基中有机物的速率也最高。(生长率上升阶段,微生物数目的对数同培养时间呈直线关系,升阶段,微生物数目的对数同培养时间呈直线关系,所以生长率上升阶段又称为对数生长阶段。)所以生长率上升阶段又称为对数生长阶段。)第一节第一节 微生物的生长及其特性微生物的生长及其特性生长率下降阶段
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