李晓红侵袭性真菌感染的形态学诊断课件.ppt

1、1侵袭性真菌感染的形态学诊断第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断及第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断及临床治疗新进展研讨会汇报临床治疗新进展研讨会汇报 李晓红李晓红真菌室封闭式实验室 脚感开门器生物安全柜涂片（10%KOH、棉酚兰）丝状菌压片228和35恒温恒湿培养箱真菌常规培养28、真菌药敏35（检测双相真菌必备）3显微镜观察形态学10%KOH压片快速鉴定非常重要的步骤真菌小培养真菌乳酸酚棉蓝染色4培养基、试剂、鉴定药敏lllllllllll沙保弱琼脂斜面科玛嘉显色培养基（CHROM agar）沙保弱琼脂（Sabouraud agar，SDA）平皿土豆培养基（Potato agar,PDA）脑心浸

2、液培基（BHI）乳酸棉酚蓝真菌KOH压片API 20C试剂盒VITEK 2 YST鉴定卡ATB FUNGUS 3酵母菌药敏试验真菌 Etest 药敏试验常见引起侵袭性感染的真菌有那几种？ll引起侵袭性感染的真菌是指侵袭深部组织和内脏，引起全身性感染的病原真菌或条件致病真菌主要包括念珠菌属、隐球菌菌属、曲霉属、毛霉属和双相型真菌等，常见双相型真菌有组织胞浆菌、马尔尼菲青霉菌等6显微镜观察形态学是非常重要的步骤l某些真菌特异性结构是在感染病症，是显微镜直接检查确诊如：卡氏肺孢子虫菌孢囊的检测（六胺银染色)13p0681 痰 ，感染内科憋气（HIV+)13p0854 肺泡灌洗液，ICU感染性休克呼吸

3、衰竭9CSF新型隐球菌09W7612儿科发热待查革兰染色CSF墨汁染色（+）13W1998神经科门诊(20倍低倍镜、40倍高倍镜）墨汁染色1013R588痰 呼吸科 诊断：间质性肺炎涂片：有隔菌丝45高度可疑曲菌（报危急！）培养：烟曲霉1110W8601 胸水 革兰染色-低倍镜-油镜（诊断：肺癌 痰培养克柔、白念、热带）1213R3268消化内科病房 痰 革兰染色：酵母样孢子假菌丝培养：白念、鲍曼痰、支气管吸取物、便均培养：白念、光滑1313z6088 分泌物（急诊内科-消化科）诊断：溃疡性结肠炎涂片：酵母样孢子假菌丝大量、培养：白念1412R12739 痰 血液科 诊断：浆细胞白血病涂片：关

4、节孢子、芽生孢子、菌丝及断裂后形成的孢子培养：阿萨希毛孢子菌1513R330 痰 诊断：卵巢癌复发涂片：有隔菌丝 培养：地霉属（长方形关节孢子有角部发芽、没有芽孢）1613r2231痰国际医疗部诊断：不明原因发热需氧血培养1次 痰培养+涂片1次培养（-)涂片提示：可疑努卡菌建议复查1713xr750痰涂片（未做努卡检查）免疫内科病房诊断：皮肌炎、支气管扩张弱抗酸（+)报危急！培养+药敏：圣乔治教堂努卡菌（Nocadia cvriacigeorgica）18采血及无菌部位标本送检(需氧、厌氧、儿童瓶、分支杆菌快速/真菌）检验中报警2014-8-28PUMCH xxl19PDF 文件使用 pdfF

5、actory 试用版本创建 需氧瓶12.24h报警涂片找到孢子加种显色培养基白念珠菌纯培养涂片血培养阳性瓶直接涂片显色培养基20血培养 35.38h报警近平滑念珠菌B07K04681API20C AUX鉴定显色培养基2113B15620 外周血 56h报警 支气管扩张直接革兰染色有隔真菌丝土豆培养基2天,大分生孢子紡锤形2213B15620 外周血土豆琼脂8天菌落正反面呈橘红色半裸镰刀菌？23细菌室在此患者诊治过程中与临床沟通对后续的诊治有所提示lllllllll病例特点:咳黄色痰10余年，间断有发热。陈旧性肺结核35年，2012年出现活动后气短CT影像诊断：印象：双肺多发斑片影伴支气管扩张考

6、虑感染性改变可能痰培养绿脓杆菌，特治星泰能可乐必妥PCT(-)9月26日 G实验：60pg/ml正常TB细胞亚群：B细胞比例降低，NF细胞比例升高，CD8+T细胞比例稍低，纯真CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞有异常激活10月12日 抽外周血需氧瓶56小时报警，直接涂片大量有隔菌丝10月13日 发热38 ，患者自动要求出院10月22日 外周血培养镰刀菌属24真菌室培养阳性率最高的丝状真菌lll曲霉菌属：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉和构巢曲霉等是常见的致病菌可从痰、支气管灌洗液、肺组织、血、外耳道、鼻窦、腹膜液等标本中分离到如果镜检看到菌丝有隔，呈二叉型，45度角分枝，高度可疑曲霉菌25

7、常见曲霉菌镜下形态（1）26常见曲霉菌镜下形态（2）27丝状真菌沙氏土豆平皿点种非常重要观察菌落形态取分纯菌压片黄曲霉烟曲霉2813XR2689 痰 烟曲霉烟曲霉菌绒状或絮状边缘为白色烟绿色分生孢子头、分生孢子梗、顶囊倒烧瓶状、瓶梗单层、分生孢子29肺组织 13Z14598 黄曲霉诊断：咳血、左上肺占位粗毛毯状或放射状皱纹黄色-黄绿色-棕绿分生孢子头疏松放射状、分生孢子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、小分生孢子30肺活检标本真菌检测的意义llllllll咳血8个月，2013.8.1胸外科诊断:左肺上叶真菌感染手术:左开胸，左肺上叶切除术痰培养:绿脓、肺克痰真菌培养:丝状真菌肺活检真菌培养:黄曲霉两性霉

8、素B:0.38g/ml,伊曲康唑0.5g/ml，伏立康唑0.125g/mlCT检查:左肺上叶尖后段见气囊状影，支气管扩张及高密度致密影，周边可见磨玻璃密度影病理冰冻结果:左上肺考虑为真菌菌团，PAS（+）六胺银（+）粘卡（-）3113R2854 痰神经科诊断：复发性多发血管母细胞瘤涂片：有隔菌丝、顶囊？培养：黑曲霉32黑曲霉菌分生孢子头、分生孢子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、分生孢子表面粗糙厚绒状白色-黄色区域-黑色痰 诊断：肺肿物3313R08506 构巢曲霉（壳细胞）内科ICU、鼻前庭拭子34CAP F-14：PDA培养6天乳酸酚棉蓝压片：分生孢子梗短、壳细胞13Z11959 痰 棒曲霉诊断：肺

9、炎、肺间质纤维化36肺组织组织胞浆菌(双相真菌)28C SDA培养，镜下典型大分生孢子表面有指状突起37显示37C培养呈酵母镜下圆形橢 显示25C侧支分生孢子梗和分生圆形长形（酵母样菌体）孢子链马纳菲青霉菌（丝状菌菌落）38毛霉属直接镜检及培养lllll组织标本鼻窦抽吸物肺支气管冲洗液（离心）可见宽大（7-15mm）透明极少分隔，分支呈直角的菌丝有诊断意义毛霉属 菌落生长迅速疏松呈灰或褐灰色大型孢子囊,无囊托,无匍匐菌丝及假根39孢子囊、包囊梗从菌丝长出、9 0 度角分枝菌丝毛霉属涂片 08z09969 sp孢囊梗、囊轴、孢子囊孢子4013Z14339 痰诊断：肺部阴影根霉属：白色-灰褐色至黑

10、色 匍匐菌丝，菌丝由假根长出，假根,孢囊梗,孢子囊,孢子囊孢子41帚狀枝真菌标本中不常见条件致病菌或环境中污染菌区别青霉菌属（Aspergillus）或透明丝孢霉和暗色丝孢霉病的病原体（瓶霉、外瓶霉、枝孢霉）绒状灰绿色青霉属42红色毛癣菌13z14691脓标本诊断：慢性粒-单核细胞白血病43CAPF-16:脱发部位皮损标本须癣毛癣菌SDA培养6天，棒状大分生孢子，螺旋状菌丝结节状器官44CAP F-16:脱发部位皮损标本须癣毛癣菌SDA培养5天，白色绒毛状菌落，扁平圆盘状，背面黄色45须癣毛癣菌与红色毛癣菌区别红色毛癣菌菌落背面典型酒红色诊断：慢性粒-单核细胞白血病46细菌室可为临床医师做的细菌、真菌、分枝杆菌ll及时报告血培养报警瓶/无菌部位标本危急报告结果，严格按照三级报告/危急报告制度及时与临床主管医生联系融入临床，了解临床，学习临床，因为在患者诊治过程中我们和临床医师有着共同的责任！谢谢！47