实验三消毒灭菌及药敏试验22课件.ppt

1、实验三 消毒灭菌和药敏试验 第一部分 消毒灭菌1.掌握常用的消毒与灭菌技术2.熟悉紫外线杀菌试验的原理3.了解细菌L型的诱导和菌落类型擦拭法擦拭法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法常用消毒灭菌的方法常用消毒灭菌的方法物理法物理法 化学法化学法浸泡法浸泡法熏蒸法熏蒸法喷雾法喷雾法热力消毒法热力消毒法生物生物净化法净化法辐射消毒法辐射消毒法燃烧法燃烧法烤箱法烤箱法煮沸法煮沸法干热法干热法湿热法湿热法日光曝晒法日光曝晒法紫外线灯照射法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电子灭菌灯法电离辐射法电离辐射法滤过除菌法 杀菌机理：含有微细小孔0.22m,只允许液体或气体及孔径0.22m的颗粒通过，细菌不能滤过。不能除病毒、

2、支原体 适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。第二部分 药敏试验 1.掌握药敏试验的原理、步骤、结果及 意义常用抗菌药物敏感性试验 纸片扩散法纸片扩散法（Kirby-Bauer test）稀释法稀释法（dilution test）E试验法（E test）联合药物敏感试验 特殊耐药菌及耐药酶的表型检测 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测-内酰胺酶、超广谱-内酰胺酶检测等1、纸片扩散法（K-B法）原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度在纸片周围抑菌浓度范围

3、内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度 方法：菌液制备菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60，最后沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；孵育孵育：35C 16-18h，量取抑菌圈直径

4、。注意事项注意事项1 纸片应分布均匀，中心距离不小于24mm。2 含菌平板必须避免过浓或过稀。3 纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于37度温箱中。4 纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5 要注意无菌操作。结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）标准判读结果；报告：细菌对该抗生素是 敏感（susceptible，S）；耐药（resistant，R）；还是中介（intermediate，I）。18六、如何理解MIC值及药敏结果？每种药物均提供定性和定量两种结果。定性：敏感（敏感（S S）表示

5、该药物对该细菌有抑制或杀灭作用。使用常规剂 量可以达到有效的治疗效果。中介（中度敏感，中介（中度敏感，I I）表示细菌对该药物治疗的敏感性低于敏感 菌株，必须加大剂量以达到更高的血药浓度才能在特定的生理部 位获得有效的临床效力；对于使用剂量有严格限制的药物则必须 重复测试以确定敏感还是耐药。耐药（耐药（R R）表示药物常规剂量所达到的药物浓度不能抑制或杀死 细菌，即使加大剂量也不能达到治疗效果或者超过了人体的正常 耐受水平。定量：MICMIC（最低抑菌浓度）（最低抑菌浓度）表示在体外达到抑制细菌生长所需要的最 低的药物浓度。临床治疗要求的血药浓度一般为临床治疗要求的血药浓度一般为MICMIC值

6、（值（g/mlg/ml）的的4-84-8倍。倍。对于不同部位的不同药物，其浓度可能更高或更低。应具体情况具体分析，不可一概而论。19长期使用抗生素的病人应该怎样做药敏试验？对于ICUICU病房病房的病人，可能每天都要做细菌学检查。因为这些病人多数免疫力免疫力较差，容易受条件致病菌条件致病菌的侵犯，而且反复发作。此外病原菌常呈多重耐药性其感染有以下几个特点；1.长期使用抗生素的病人，不同时期（即使在很短的时间内）感染的病原菌种类可能不同，耐药性因此也不相同。2、同一株细菌，在长时间用药时，仅需要3-4天就可以从对某种药物敏感发展为耐药。3.长期使用抗生素容易诱发细菌产生长期使用抗生素容易诱发细菌产生L L型变异。型变异。常规培养阴性时，进行L型细菌培养能够提高检出率。形成条件：形成条件：生物学特性生物学特性：与医学关系：与医学关系：细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物因素的直接破坏或合成抑制而形成。形态多形性；染色革兰阴性；培养高渗培养基；菌落油煎蛋样 仍有一定致病性细菌L型细胞壁缺陷细菌临床分离葡萄临床分离葡萄球菌球菌L L型型葡萄球菌葡萄球菌L L型型回复后回复后本次实验课结束本次实验课结束明天看试验结果，值日同学留下明天看试验结果，值日同学留下实验四实验四 化脓性球菌和化脓性球菌和肠道杆菌的病原学检测（肠道杆菌的病原学检测（1）再见！再见！