多发性骨髓瘤实验室诊断课件.ppt
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1、多发性骨髓瘤的实验室诊断多发性骨髓瘤的实验室诊断 李李 新新朝阳医院京西院区血液科朝阳医院京西院区血液科MMMM的实验室诊断的实验室诊断 常规检查常规检查 生化检查生化检查 骨髓检查骨髓检查 M M蛋白鉴定蛋白鉴定 分型诊断分型诊断 免疫分型免疫分型 浆细胞标记指数浆细胞标记指数 染色体测定染色体测定 基因异常检测基因异常检测 IL-6IL-6检测检测 影像学检查影像学检查血常规:血常规:WbcWbc 减少、贫血、减少、贫血、PltPlt 减低减低血沉:血沉:加快加快 红细胞呈缗钱样排列红细胞呈缗钱样排列常规检查常规检查1 1.血清钙磷和碱性磷酸酶:增高血清钙磷和碱性磷酸酶:增高2.2.血清血
2、清2 2微球蛋白:增高微球蛋白:增高3.3.肾功能:肾功能:BUNBUN、CrCr升高升高4.4.血液流变学检查:血清粘滞度增加血液流变学检查:血清粘滞度增加5.CRP5.CRP:升高:升高6.6.高尿酸血症高尿酸血症7.7.血清总蛋白、白蛋白血清总蛋白、白蛋白8.LDH8.LDH增高增高血液生化检查血液生化检查骨髓检查骨髓检查骨穿:骨髓原、幼浆细胞(骨髓瘤细胞)明显增多。骨髓瘤细骨穿:骨髓原、幼浆细胞(骨髓瘤细胞)明显增多。骨髓瘤细 胞在骨髓内呈弥漫性分布,或灶性、斑片状分布。需要多次胞在骨髓内呈弥漫性分布,或灶性、斑片状分布。需要多次多部位穿刺,多部位穿刺,多发性骨髓瘤血象多发性骨髓瘤血象
3、 多发性骨髓瘤骨髓象多发性骨髓瘤骨髓象(浆细胞样骨髓瘤细胞)(浆细胞样骨髓瘤细胞)多发性骨髓瘤骨髓多发性骨髓瘤骨髓象象 更早期、更准确显示骨髓内瘤细胞的分布及细胞类型。更早期、更准确显示骨髓内瘤细胞的分布及细胞类型。病变始于红骨髓,瘤细胞常聚集成堆。病变始于红骨髓,瘤细胞常聚集成堆。骨髓活检骨髓活检皮肤软组织肿块皮肤软组织肿块皮肤浆细胞瘤病理皮肤浆细胞瘤病理血血M M蛋白鉴定蛋白鉴定血单克隆免疫球蛋白(血单克隆免疫球蛋白(M M蛋白)蛋白)血血M M蛋白鉴定蛋白鉴定血清蛋白电泳血清蛋白电泳(SPEPSPEP):M M蛋白形成异常浓集带,位于蛋白形成异常浓集带,位于 区区内,或内,或 、2 2
4、区内可见一窄底的高峰。区内可见一窄底的高峰。由于尿液可以浓由于尿液可以浓缩许多倍,因此检查游离轻链时尿蛋白电泳(缩许多倍,因此检查游离轻链时尿蛋白电泳(UPEPUPEP)比)比SPEPSPEP灵敏。灵敏。80%80%的的MMMM患者可发现患者可发现M M蛋白蛋白AlbAlb1122白蛋白白蛋白11抗胰抗胰蛋白酶蛋白酶触珠蛋触珠蛋白白转铁蛋白转铁蛋白IgGIgG前白蛋前白蛋白白11酸性酸性糖蛋白糖蛋白铜蓝蛋铜蓝蛋白白C3aC3a、C3bC3bCRPCRP11脂脂蛋白蛋白抗糜蛋白抗糜蛋白酶酶22巨巨球蛋白球蛋白IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD、纤维、纤维蛋白原、蛋白原、11脂蛋白、脂蛋白、
5、血凝素血凝素血清蛋白电泳血清蛋白电泳血清蛋白电泳血清蛋白电泳M M蛋白的诊断标准蛋白的诊断标准IgG35g/LIgG35g/LIgA 20g/LIgA 20g/LIgM 15g/LIgM 15g/LIgDIgD 2.0g/L2.0g/LIgEIgE 2.0g/L2.0g/L本本-周蛋白阳性周蛋白阳性1.0g/24h 1.0g/24h 血清免疫球蛋白测定血清免疫球蛋白测定 免疫固定电泳免疫固定电泳l一种电泳加沉淀反应技术。一种电泳加沉淀反应技术。l可用于各种蛋白质的鉴定。可用于各种蛋白质的鉴定。l将血清直接加于电泳后蛋白质区带表面,将血清直接加于电泳后蛋白质区带表面,抗原与对应抗体直接发生沉淀反
6、应,形成抗原与对应抗体直接发生沉淀反应,形成的复合物嵌于固相支持物中。的复合物嵌于固相支持物中。尿蛋白检测尿蛋白检测 尿常规:蛋白尿、血尿、管型尿尿常规:蛋白尿、血尿、管型尿 尿蛋白:尿液中出现的自由轻链即本尿蛋白:尿液中出现的自由轻链即本-周蛋白周蛋白分型诊断分型诊断-2.0g/L2.0g/L1.1.是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高度敏感的方是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高度敏感的方法通过免疫比浊法分别测定出血清中的游离轻链法通过免疫比浊法分别测定出血清中的游离轻链和和的的比率。比率。2./2./正常范围为正常范围为0.26-1.650.26-1.65,比值低于,比值低于0.26
7、0.26或高于或高于1.651.65都说明都说明和和轻链量的异常。提示轻链量的异常。提示MMMM克隆性增殖。克隆性增殖。3.3.用于诊断并监测用于诊断并监测95%95%以上的各种类型的以上的各种类型的MMMM,淀粉样变、寡,淀粉样变、寡分泌型、不分泌型或轻链型分泌型、不分泌型或轻链型MMMM。是严格。是严格CRCR的标准之一。的标准之一。血清游离轻链(血清游离轻链(sFLCsFLC)的检)的检测测细胞免疫表型细胞免疫表型 正常浆细胞免疫表型为:正常浆细胞免疫表型为:CD38+CD38+、CD138+CD138+、CD19+CD19+、CD56-CD56-骨髓瘤细胞为:骨髓瘤细胞为:CD38+C
8、D38+、CD138+CD138+、CD19-CD19-、CD56+CD56+MMMM恶性浆细胞的表面抗原恶性浆细胞的表面抗原标志标志特征特征CD10CD10少数少数MMMM细胞表达,平均细胞表达,平均25%25%(10%-60%10%-60%),表达此抗原的),表达此抗原的瘤细胞恶性度低,但现在认为所有的恶性细胞都有少量瘤细胞恶性度低,但现在认为所有的恶性细胞都有少量表达,与疾病进展有关,进展期患者血中有表达,与疾病进展有关,进展期患者血中有CD10CD10表达的表达的肿瘤细胞肿瘤细胞CD19CD19极少表达,数量与预后成反比极少表达,数量与预后成反比CD20CD20极少表达,数量与预后成反
9、比极少表达,数量与预后成反比CD28CD28与疾病进展有关与疾病进展有关CD86CD86与疾病进展有关与疾病进展有关CD38CD38MMMM高表达,在高表达,在MGUSMGUS和反应性浆细胞增多症不表达或弱表和反应性浆细胞增多症不表达或弱表达达CD56CD56MMMM高表达,在高表达,在MGUSMGUS和反应性浆细胞增多症不表达或弱表和反应性浆细胞增多症不表达或弱表达,高表达与预后不良有关达,高表达与预后不良有关CD95CD95(FasFas抗抗原)原)不表达与突变有关,意义不明不表达与突变有关,意义不明浆细胞标记指数(浆细胞标记指数(PCLIPCLI)通过检测可掺入增殖浆细胞中的放射性核素氚
10、通过检测可掺入增殖浆细胞中的放射性核素氚标记的胸腺嘧啶脱氧核苷以测定浆细胞增殖活标记的胸腺嘧啶脱氧核苷以测定浆细胞增殖活性的方法,可反映性的方法,可反映MMMM患者恶性克隆的增殖程度。患者恶性克隆的增殖程度。PCLIPCLI是初诊是初诊MMMM患者一个重要预后因素患者一个重要预后因素 SteensmaSteensma报道报道162162例例MMMM患者患者 PCLIPCLI1%571%57例例 PCLIPCLI1%1051%105例例 两组患者两组患者CRPCRP、HbHb、肌酸、尿、肌酸、尿M M蛋白及微球蛋白蛋白及微球蛋白均无明显差异均无明显差异 高和低高和低PCLIPCLI两组比较,疾病
11、进展时间分别为两组比较,疾病进展时间分别为8 8和和3939个月(个月(P P 0.00010.0001)。生存期为)。生存期为2020和和5656个月。个月。浆细胞标记指数(浆细胞标记指数(PCLIPCLI)染色体测定染色体测定 染色体染色体G G显带技术,显带技术,FISHFISH,比较基因组杂交技,比较基因组杂交技术(术(CGHCGH)及光谱核型分析技术()及光谱核型分析技术(SKYSKY)使)使MMMM染染色体数量和结构异常的检出率高达色体数量和结构异常的检出率高达90%90%以上以上 预后相关的染色体改变:如预后相关的染色体改变:如t t(4 4;1414)、)、t t(1414;1
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