半抗原免疫分析课件.ppt
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1、半抗原免疫分析半抗原免疫分析ABCABC2020/11/31内容内容l一、基本概念一、基本概念l抗原抗原l抗体抗体l二、免疫分析方法二、免疫分析方法l分类分类lELISAELISA原理与方法原理与方法l方法建立方法建立-苏丹红为例苏丹红为例2020/11/32 抗原抗原 antigen,Agantigen,Ag2020/11/33(一一)抗原的概念抗原的概念 抗原抗原(Antigen,Ag(Antigen,Ag)是一类能是一类能刺激刺激机体免疫系统产机体免疫系统产生特异性免疫应答生特异性免疫应答,并能与相应的免疫应答产物在体内并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生或体外发生特异性结合特异性结
2、合的物质的物质.2020/11/34(二二)完全抗原与半抗原完全抗原与半抗原1.1.完全抗原(完全抗原(complex antigen):complex antigen):既具免疫原性又有免疫反应性的物质既具免疫原性又有免疫反应性的物质.如如:大多数蛋白质大多数蛋白质.2.2.半抗原半抗原(hapten):(hapten):仅有免疫反应性而无免疫原性的物质仅有免疫反应性而无免疫原性的物质.如如:大多数多糖、类脂、某些药物大多数多糖、类脂、某些药物.半抗原半抗原+载体载体(蛋白质蛋白质)完全抗原完全抗原2020/11/352020/11/362020/11/37 1.1.共同抗原共同抗原(Com
3、mon antigens)Common antigens):存在于两种不同的抗原之间的相同或相似的抗存在于两种不同的抗原之间的相同或相似的抗原决定簇,称为共同抗原。原决定簇,称为共同抗原。2.2.交叉反应交叉反应(Cross-reaction)Cross-reaction):由于存在共同抗原造成抗体对具有相同或相似决由于存在共同抗原造成抗体对具有相同或相似决定簇的不同抗原发生反应,此称为交叉反应。定簇的不同抗原发生反应,此称为交叉反应。检测检测2020/11/382020/11/39农药、兽药、生物毒素、重金属、维生素、防农药、兽药、生物毒素、重金属、维生素、防腐剂、植物激素等半抗原腐剂、植物
4、激素等半抗原 在食品安全、植物学、环境检测在食品安全、植物学、环境检测等领域,主要是半抗原类物质。等领域,主要是半抗原类物质。2020/11/310 抗体抗体 antibody,Ab抗原与抗体是天生的一对,谁也离不了谁;抗原与抗体是天生的一对,谁也离不了谁;两者既是好朋友,又是一对冤家。两者既是好朋友,又是一对冤家。2020/11/311一、基本概念一、基本概念 1.1.抗体(抗体(AntibodyAntibody,AbAb)指指B B淋巴细胞受抗原刺激后活化、增殖、分化淋巴细胞受抗原刺激后活化、增殖、分化成为浆细胞,产生的能与相应抗原发生特异性结成为浆细胞,产生的能与相应抗原发生特异性结合的
5、免疫球蛋白。合的免疫球蛋白。存在形式:存在形式:膜型膜型(membrane immunoglobulin,mIgmembrane immunoglobulin,mIg)B B细胞膜上的抗原受体细胞膜上的抗原受体;分泌型分泌型(secreted immunoglobulin,sIgsecreted immunoglobulin,sIg)分泌进入体液分泌进入体液,介导体液免疫应答。介导体液免疫应答。2020/11/312(一)免疫球蛋白的基本结构:(一)免疫球蛋白的基本结构:由四条多肽链组成,呈由四条多肽链组成,呈“Y”Y”或或“T”T”型型 1.1.组成:组成:2 2条长链,又称重链(条长链,又
6、称重链(Heavy chainHeavy chain,H H链):链):含含450-550aa450-550aa,分子量为,分子量为55-75KD55-75KD。2 2条短链,又称轻链(条短链,又称轻链(Light chainLight chain,L L链):链):含含214aa214aa,分子量为,分子量为25KD25KD。2020/11/3132020/11/3142020/11/315l2.2.分类、分型:分类、分型:(1 1)根据重链氨基酸组成、序列及结构的差异,将)根据重链氨基酸组成、序列及结构的差异,将Ig Ig 分为分为五类:五类:2020/11/3162020/11/317抗
7、体的制备方法2020/11/3182020/11/319l3.3.基因工程抗体基因工程抗体(GeAb):(GeAb):第三代抗体第三代抗体 由基因重组技术制备的抗体由基因重组技术制备的抗体,称为基因工程抗体称为基因工程抗体。嵌合抗体嵌合抗体(chimeric Ab)人源抗体(人源抗体(humanized Ab)双特异性抗体(双特异性抗体(bispecific Ab)Fab/ScFV(single chain FV fragment)单域抗体(单域抗体(single chain Ab)2020/11/320抗体的结构与功能的关系,抗体的结构与功能的关系,所展现出的生物学功能是其结构的完所展现出的
8、生物学功能是其结构的完美表演者。美表演者。2020/11/321免疫分析技术免疫分析技术内内 容容l分析方法分类分析方法分类l几种常用免疫分析技术几种常用免疫分析技术lELISAELISAl侧流免疫层析侧流免疫层析l分析方法的建立分析方法的建立l分析数据的拟合分析数据的拟合2020/11/322常用的免疫标记物质常用的免疫标记物质类别类别 标记物标记物 用途用途荧光素荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化免疫组化 镧系元素螯合物镧系元素螯合物 免疫分析测定免疫分析测定放射性核素放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定免疫分析测定 125I、131I酶酶 HRP、AP
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