兽用抗菌药物耐药性风险评估课件.ppt

1、兽用抗菌药物耐药性风险评估兽用抗菌药物耐药性风险评估沈建忠沈建忠 吴聪明吴聪明中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院报告内容报告内容一、开展耐药性风险评估的必要性一、开展耐药性风险评估的必要性二、耐药性风险评估程序和方法二、耐药性风险评估程序和方法三、国外耐药性风险评估开展情况三、国外耐药性风险评估开展情况四、我国耐药性风险评估开展情况及四、我国耐药性风险评估开展情况及 未来工作建议未来工作建议养殖业的持续发展离不开抗菌养殖业的持续发展离不开抗菌药物药物!但广泛使用抗菌药物不仅带来但广泛使用抗菌药物不仅带来了兽药残留问题，也带来了耐了兽药残留问题，也带来了耐药性问题，严重威胁食品安全药性

2、问题，严重威胁食品安全及人类健康。及人类健康。抗菌药物抗菌药物残留残留耐药菌耐药菌耐药基因耐药基因毒性作用毒性作用微生物影响微生物影响?转移扩散风险转移扩散风险?耐药菌和耐药基因的生态网络耐药菌和耐药基因的生态网络(Wolfgang Witte(Wolfgang Witte，Science,vol279Science,vol279，1998)1998)食品食品动物动物住院住院病人病人社区社区居民居民肉产品粪便动物饲料种植作物粪便选择压力主要宿主污水地表水泥浆食品促生长预防治疗用抗生素预防治疗用抗生素 n阿伏帕星在1974被欧盟批准用于促生长剂后，导致猪、鸡体内广泛流行携带vanA基因的耐万古霉

3、素肠球菌，而且耐药肠球菌可通过接触感染养殖人员及屠宰加工人员，也可通过肉品污染传递给社区健康人群。n丹麦和英国90年代爆发的耐氟喹诺酮类沙门氏菌DT104感染，调查表明耐药菌分别来源于猪场和奶牛场。nKassenborg等调查美国的氟喹诺酮类耐药弯曲杆菌感染，发现感染者多食用过鸡肉或火鸡肉，且这些鸡场都有使用恩诺沙星的经历。n台湾2002年采用分子亚型方法调查人耐氟喹诺酮沙门氏菌感染，发现猪是感染源。进一步调查证明，猪用氟喹诺酮后，其体内病原菌产生了对氟喹诺酮的耐药性。n美国Donabedian等2003年从人和超市鸡肉分离到PFGE图谱完全一致的庆大霉素耐药肠球菌，说明耐药菌可通过食物链传递

4、到人。WHO、OIE等国际组织高度关注动物使用抗菌药物对食品安全和人类健康的影响，多次召开专家讨论会，制定了“关于控制食用动物抗生素耐药性的全球导则”、“动物源耐药菌对公共卫生潜在影响的风险评估方法”等系列文件和指南，倡导对食品动物谨慎使用抗菌药物，建议成员国开展动物源病原菌耐药性监测，开展风险评估。nThe Medical Impact of Antimicrobial Use in Food Animals.Report of a WHO Meeting(Berlin,Germany,13-17 October 1997)nUse of Quinolones in Food Animals

5、 and Potential Impact on Human Health.Report of a WHO Meeting(Geneva,Switzerland 2-5 June 1998)nWHO Global Principles for the Containment of Antimicrobial Resistance in Animals Intended for Food（Geneva,Switzerland 5-9 June 2000）nMonitoring antimicrobial usage in food animals for the protection of hu

6、man health.Report of a WHO consultation(Oslo,Norway 10-13 September 2001)nJoint First FAO/OIE/WHO Expert Workshop on Non-human Antimicrobial Usage and Antimicrobial Resistance:Scientific assessment(Geneva,Switzerland 1-5 December 2003)nSecond Joint FAO/OIE/WHO Expert Workshop on Non-Human Antimicrob

7、ial Usage and Antimicrobial Resistance:Management options(Oslo,Norway 1518 March 2004)n基于预防原则，欧盟自2006年1月1日起，全面禁止食品动物使用抗生素促生长剂。n美国虽不主张食品动物全面禁用抗菌药物添加剂，但也加强了食品动物使用抗菌药物对食品安全和人类健康的风险评估。其对养禽业使用恩诺沙星引起人氟喹诺酮类耐药弯曲杆菌感染的高风评价结果，促使FDA于2000年撤消了恩诺沙星的使用。n欧盟、美国、澳大利亚、加拿大、日本等已建立了动物源病原菌耐药性监测国家系统，获得了大量科学数据并进行风险评估。2003-20

8、05年国家食品污染监测网数据显示：我国动物性产品中沙门氏菌耐药率已高达58%，多重耐药达33%，耐10种以上药物的菌株达5.6%。严重威胁人体健康。2005年鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药率已超过80%。n近年来人医和兽医耐药性调查结果表明，我国已成为世界上耐药性最严重的国家之一。n严重的耐药性局面是否与我国养殖业长期广泛应用抗菌药物尤其是亚治疗剂量抗菌促生长剂有关？动物源耐药菌/耐药基因的广泛流行是否给食品安全和人类健康带来风险？这些问题，均需通过耐药性的广泛调查研究及风险评估来回答。n但至今我国尚缺乏完善的动物源病原菌耐药性监测网，没有充分、可靠的数据支撑耐药性风险评估的开展。n抗菌药物

9、是我国规模化养殖不可或缺的物质。在缺乏充分风险评估的前题下，我们不可能采取欧盟全面禁用的做法。n加强耐药性基础研究，完善监测网络调查动物源病原菌抗菌药物耐药性，建立规程开展兽用抗菌药物风险评估，成为了目前亟待解决的问题。n开展耐药性风险评估，权衡风险和利益，科学管理和使用兽用抗菌药物。不仅可促进畜牧业的持续健康发展，而且可保障食品安全和人类健康。风险分析是当前广泛应用的食品安全和公共卫生安全宏观管理方法。风险分析风险分析Risk Analysis风险评估风险评估Risk Assessment风险管理风险管理Risk Management风险交流风险交流Risk Communication释放评

10、估释放评估Release Assessment暴露评估暴露评估Exposure Assessment后果评估后果评估Consequence Assessment兽用抗菌药物耐药性风险评估是利用风险分析技术和原理，对养殖业使用抗菌药物产生耐药性/耐药基因通过食物链暴露于人产生负面影响和潜在不良作用的科学评价。就兽用抗菌药物耐药性风险评估问题，WHO、CAC和OIE多次召开专家讨论会，并制定了风险分析框架性文件。nJoint FAO/OIE/WHO Expert Workshop on Non-Human Antimicrobial Usage and Antimicrobial Resistan

11、ce:Scientific assessment.Geneva,December 1 5,2003 nOIE International Standards on Antimicrobial Resistance,2003.Guideline on Risk Analysis Methodology for the Potential Impact on Public Health of Antimicrobial Resistant Bacteria of Animal Origin.释放评估释放评估描述动物应用抗菌药物导致耐药菌/耐药基因出现的概率暴露评估暴露评估描述人体通过特定途径暴露于

12、耐药菌/耐药基因的概率后果评估后果评估描述人体暴露于特定耐药菌/耐药基因后引起不良后果的概率综合风险估计综合风险估计释放、暴露和后果评估结果整合危害鉴定危害鉴定 (特征描述特征描述)风风险险评评价价耐药性风险评估程序危害识别 对动物应用特定抗菌药物诱导的耐药菌的识别。对动物应用特定抗菌药物产生耐药因子（耐药基因及其载体）的识别。危害识别必须考虑抗菌药物的类型以及病原菌的亚型和血清型。动物动物饲料饲料肉肉直接直接接触接触医院医院人类人类屠宰加工厂屠宰加工厂加工加工食品食品动物动物羊羊奶牛奶牛猪猪家禽家禽肉牛肉牛残渣残渣伴侣伴侣动物动物植被植被,作物作物,水果水果污水污水养殖污水及粪便排放养殖污水

13、及粪便排放动物饮用水动物饮用水人饮用水人饮用水海洋海洋/湖泊湖泊游泳游泳水产水产河流河流/溪水溪水企业企业/家用家用抗菌药物抗菌药物其他家畜其他家畜社区社区-城市城市-农村农村野生动物野生动物土壤土壤烹饪制作烹饪制作消费消费 储存储存释放评估释放评估描述动物应用抗菌药物导致耐药菌/耐药基因出现的概率暴露评估暴露评估描述人体通过特定途径暴露于耐药菌/耐药基因的概率后果评估后果评估描述人体暴露于特定耐药菌/耐药基因后引起不良后果的概率耐药性给人类健康带来危害的途径及风险评估耐药性给人类健康带来危害的途径及风险评估危害危害治疗无效抗菌药物治疗耐药菌感染抗菌药物用于动物筛选出耐药菌/耐药基因耐药菌/耐

14、药基因扩散屠宰加工过程耐药菌污染零售食品中存在耐药菌耐药菌被人体摄入的概率释放评估 应用抗菌药物的动物种类、数量及其地理分布；应用抗菌药物数量、给药途径和方法；抗菌药物药效学/药动学；应用抗菌药诱导的耐药菌种类；耐药性的产生机制及传递机制；和其他抗菌药的交叉耐药性和/或协同耐药性；对动物、动物性产品以及排泄物中是否存在耐药菌的监控；描述动物应用某种抗菌药物后向特定环境释放耐药性菌或耐药因子的生物学途径，并定性或定量评价全过程发生的概率。可能需要的资料包括：暴露评估描述人暴露于使用某兽用抗菌药物诱导产生的特定耐药菌或耐药因子的生物学途径，并用定性或定量方法对暴露发生的概率进行评估。可能需要的信息

15、：人口学及包括传统和习俗在内的食物消费方式；被耐药菌污染的动物及其产品的流通；被耐药菌污染的动物饲料的流通；动物产品处理过程（包括屠宰，加工，储存，运输和销售）中耐药菌的存活能力及重新分布；被耐药菌污染食品中微生物的生长；对动物排泄物处理及人类暴露于排泄物中耐药菌或耐药因子的机会；耐药菌在人体肠道菌群中存活的能力；耐药菌在人与人之间的不自觉传播；耐药菌向其他共生菌转移耐药因子的能力；用于治疗人类疾病的抗菌药种类和数量；人类疾病治疗时间的长短及给药途径、剂量；药物(代谢)动力学因素（新陈代谢、生物利用率、能否作用于肠丛菌）。后果评估描述特定人群暴露于特定耐药菌或耐药因子及其暴露后果之间关系的，并

16、对其发生的可能性进行评估。评估可以是定性的，也可以是定量的。耐药菌/耐药因子及其危害之间的量-效关系；人群易感性的变化；由于抗菌药失效而导致的人体健康效应的变化和发生频率；由于抗菌药可信度的降低而导致了人类医药实践的改变；由于对食品信任度的丧失以及相关联的次要风险，人们的饮食方式发生的改变；与上述后果相关的各种消费；与人类经典抗菌药治疗发生的冲突；可预测的药物未来状况（与时间相关）；风险估计 患病人数及感染耐药菌株的比例；感染疾病和严重性及病程；感染死亡数量（每年死亡总数；每年的可能死亡数；随机人口的寿命或对耐药菌暴露较多的特定人群的寿命）；靶微生物感染病理学的重要变化；在人体内观察到的耐药性

17、水平；其他抗菌素治疗的缺乏情况；对于不同风险效应的权重加的某些随机的影响范围（例如：疾病和就医）；三、国外耐药性风险评估开展情况欧盟：Guideline on pre-authorization studies to assess the potential for resistance resulting from use of antimicrobial veterinary medicinal products EMEA/CVMP/244/01,European Agency for the Evaluation of Medicinal Products日本：Guideline for

18、 the Risk Assessment Methodology for the Impact on Food Safety by the Antimicrobial Resistant Organisms Derived from Food Animals.Japan,Food Safety Commission,September 30th,2004 澳大利亚：Part 10 of Veterinary Requirement Series:Submission to Working Party on Antibiotics,National Registration Authority

19、for Agricultural and Veterinary Chemicals.June 2000 美国：Guidance for industry#152 Evaluating the Safety of Antimicrobial New Animal Drugs with Regard to Their Microbiological Effects on Bacteria of Human Health Concern.U.S.DHHS,FDA,CVM October 30,2003 加拿大：Guidance for Industry Preparation of Veterina

20、ry New Drug Submissions.Veterinary Drugs Directorate Health Canada.March 2007.已制定耐药性风险评估规程或指南的国家VDD 2.1Guidance 152CVMP 644Part 10FSC Guideline全球耐药性风险评估OIE已开展的针对特定病原菌耐药性风险评估的抗菌药物 阿伏帕星（avoparcin）-肠球菌（Enterococcus）(欧盟，肯定性结果）氟喹诺酮类（fluoroquinolone）-弯曲菌（Campylobacter）（美国，肯定性结果）链阳菌素类（Streptogramin）-屎肠球菌 （

21、美国，否定性结果）大环内酯类（Macrolides）-弯曲菌和肠球菌 （美国，否定性结果）四、我国耐药性风险评估开展情况 及未来工作建议n发达国家兽用抗菌药物耐药性风险评估方兴未艾，国内这方面的研究刚刚起步。n近几年在国家自然科学基金、国家科技攻关计划、国家科技支撑计划资助下，中国农业大学、中国兽药监察所、华南农业大学、解放军农牧大学、四川农业大学等多家单位在耐药分子机制、耐药菌/耐药基因流行病学等方面开展了广泛研究，为耐药性风险评估工作的开展奠定了一定的基础。不同年代动物源大肠杆菌耐药性的调查 70年代（63株）80年代（28株）90年代（69株）2000年（36株）青霉素类氨苄西林（AMP

22、）19.0%25.0%60.9%52.8%阿莫西林（AMO）19.0%25.0%58.0%55.6%头孢菌素类头孢氨苄（CX）0.0%0.0%0.0%-头孢呋辛（CXM）0.0%0.0%0.0%-头孢曲松（CRO）0.0%0.0%0.0%0.0%头孢噻呋（EFT）0.0%0.0%2.9%13.9%四环素类四环素（TET）63.5%57.1%85.5%97.2%多西环素（DOX）61.9%57.1%66.7%-土霉素（OYX）63.5%57.1%88.4%-氨基糖苷类链霉素（STP）9.5%35.7%62.3%61.1%庆大霉素（GEM）0.0%21.4%36.2%19.4%卡那霉素（KAN）6

23、.3%17.9%29.0%25.0%安普霉素（APR）0.0%0.0%0.0%-氯霉素类氯霉素（CHL）39.7%28.6%55.1%44.4%氟本尼考（FFN）0.0%0.0%1.4%2.8%氟喹诺酮类环丙沙星（CIP）0.0%0.0%7.2%44.4%诺氟沙星（NOR）0.0%0.0%7.2%41.7%氧氟沙星（OFL）0.0%0.0%10.1%44.4%磺胺类磺胺异恶唑（SMZ）57.1%50.0%81.2%77.8%甲氧苄啶（WD）11.1%14.3%75.4%-不同年代大肠杆菌耐药率的变化趋势动物源病原菌耐药流行病学研究不同年代大肠杆菌多重耐药的变化趋势年份耐 药 谱菌株百分比%70

24、年代TET15.9TET SMZ 19.0TET SMZ CHL11.1TET SMZ CHL AMP 9.5其它15.980年代TET10.7TET SMZ14.3TET SMZ STP 7.1TET SMZ CHL AMP 7.1TET SMZ CHL AMP GEN 7.1其它28.590年代TET 5.8TET SMZ10.1TET SMZ STP/CHL/AMP17.4AMP TET SMZ STP/CHL 11.6AMP TET SMZ STP GEN/CHL 23.8AMP TET SMZ STP CHL CIP 5.8其它19.52000年TET 5.6TET SMZ 8.3T

25、ET SMZ STP/GEN11.1TET SMZ STP AMP 16.7AMP TET SMZ CIP STP/CHL 27.8AMP TET SMZ STP CHL GEN/CIP13.9AMP TET SMZ STP CHL GEN CIP 8.3其它 5.6 不同年代大肠杆菌耐药谱CIP(环丙沙星)；NOR(诺氟沙星)；LMF(罗美沙星)；AMP(氨苄西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(头孢噻吩)；TET(四环素)；CRO(头孢曲松)；STP(链霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(庆大霉素)；EFX(恩诺沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考

26、)；OFL(氧氟沙星)；SXT(复方新诺明)；SMZ(磺胺异甲基恶唑)；DAN(达氟沙星)；DOX(多西环素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(头孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺对甲氧嘧啶)。我国部分地区分离动物源大肠杆菌的耐药性监测抗菌药物北京（42株）河南（108株）抗菌药物内蒙（58株）R%I%S%R%I%S%R%I%S%AMP11.9 7.1 81.0 75.0 2.8 22.2 AMP77.593.4518.97AMO9.5 19.0 71.4 75.0 2.8 22.2 AMO65.5210.3424.13AMK0.0 2.4 97.6 2

27、.8 0.0 97.2 AMK1.72098.28CHL7.1 0.0 90.5 49.1 8.3 42.6 CHL22.411.7275.86CIP0.0 0.0 100.0 23.1 5.6 71.3 CIP22.413.4574.14CEF4.8 7.1 88.1 9.3 15.7 75.0 CEF6.9093.1CRO0.0 16.7 83.3 4.6 3.7 91.7 DAN22.41077.59EFX2.4 11.9 85.7 27.8 23.1 39.8 DOX46.5512.0741.4FFN4.8 9.5 83.3 35.2 9.3 59.3 FFN5.1794.83GEN2

28、.4 0.0 97.6 25.9 7.4 66.7 GEN18.97081.03KAN4.8 14.3 81.0 30.6 8.3 61.1 KAN17.24089.66LMF4.8 4.8 90.0 28.7 17.6 53.7 LOM22.416.970.69NAL0.0 0.0 100.0 59.3 20.4 20.4 OXY55.178.6236.2NOR0.0 2.4 95.2 24.1 1.9 74.1 NOR22.41077.59OFL0.0 0.0 100.0 22.2 1.9 75.9 OFL22.41077.59STP16.7 11.9 47.6 55.6 16.7 27.

29、8 STP48.2851.27SMZ11.9 0.0 88.1 86.1 0.0 13.9 CFZ56.913.7929.31SXT16.7 0.0 83.3 84.3 0.9 13.0 COL1.7298.28TET73.8 2.4 23.8 95.4 0.9 3.7 SD1000SMD1000CIP(环丙沙星)；NOR(诺氟沙星)；LMF(罗美沙星)；AMP(氨苄西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(头孢噻吩)；TET(四环素)；CRO(头孢曲松)；STP(链霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(庆大霉素)；EFX(恩诺沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟

30、苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(复方新诺明)；SMZ(磺胺异甲基恶唑)；DAN(达氟沙星)；DOX(多西环素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(头孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺对甲氧嘧啶)。我国部分地区离大肠杆菌体外药敏试验结果 北京、河南地区大肠杆菌多重耐药情况内蒙呼和浩特地区乳源大肠杆菌多重耐药情况抗菌药物SIR耐药率抗菌药物SIR耐药率青霉素G1015399.35克林霉素8047045.45氨苄西林00154100杆菌肽152200阿莫西林52010266.23庆大霉素11483220.78苯唑西林1390159.74卡那霉素103348

31、31.17头孢唑啉13251711.04阿米卡星10744327.92头孢噻呋1355149.09磺胺嘧啶2015298.70恩诺沙星11833321.43甲氧苄啶00154100环丙沙星10783925.32氯霉素1232742.60氧氟沙星11743321.43氟苯尼考1143285.19诺氟沙星10064831.17土霉素13002415.58红霉素4314795.45多西环素143295.84替米考星8546542.21万古霉素154000林可霉素6098555.19内蒙呼和浩特地区154 株乳源金葡菌的药敏试验结果 金黄色葡萄球菌流行病学调查研究内蒙古呼和浩特地区154株乳源金葡菌多

32、药耐药情况 大肠杆菌耐药性分子流行病学调查研究 北京地区牛源大肠杆菌流行的型整合子及携带的耐药基因盒 型整合子类型大小(bp)插入的耐药基因盒 编码产物 A1318dfrA1二氢叶酸还原酶 orf功能未知 B1740dfrA17二氢叶酸还原酶aadA5氨基糖-3-腺苷酰基转移酶 C3225aadB氨基糖-2-腺苷酰基转移酶aadA1氨基糖腺苷酰基转移酶cmlA氯霉素泵D3075aadB氨基糖-2-腺苷酰基转移酶orf功能未知cmlA氯霉素泵北京地区牛源大肠杆菌型整合子的各种流行形式细菌分离株intI1 PCR产物的大小 插入的基因盒形式 C2603.2kb,1.3kbA+CC2613.0kb,

33、1.3kbA+DC2621.8kb,1.3kbA+BC2863.0kb,1.3kbA+DC2873.0kb,1.3kbA+DC2881.8kbBC2073.0kb,1.3kbA+DC2093.0kb,1.3kbA+DC3061.3kbAC3071.8kb,1.3kbA+BC3121.3kbAC9143.0kb,1.3kbA+DC9163.0kb,1.3kbA+D 型整合子类型可变区大小（bps）基因盒A1088aadA21B1662dhfrIaadA1C1740dhfrA17aadA5D1991dhfraadA2E2710sataadA2F4084blaP1aaadA2ereA华南地区某猪场大

34、肠杆菌流行的各种型整合子及携带的耐药基因盒 华南地区某猪场大肠杆菌型整合子的8种流行组合 1-4泳道：鸡分离大肠杆菌；5-9泳道：饲养员分离大肠杆菌；10-20泳道：环境分离大肠杆菌；Marker：Lambda ladder DNA standard华南地区某鸡场人源、鸡源及环境源多重耐药大肠杆菌的PFGE图谱分析 调查鸡源大肠杆菌耐药性过程中从120株菌中筛选出17株喹诺酮类耐药株，以qnr基因引物PCR扩增，获得3株阳性菌。序列测定结果显示3株菌的qnr基因同源性为100%，与GenBank注册qnr基因序列（AY655485）同源性为95.3%。3株qnr阳性菌对1619种抗菌药物呈高水

35、平多重耐药。我国鸡源大肠杆菌喹诺酮耐药株中qnr基因的发现qnr基因序列同源性比较 大肠杆菌对氟苯尼考耐药机制的研究 耐药菌株C260()、C262()和敏感菌株C305()、ATCC 25922()对氟苯尼考的积聚量 基因工程菌株JM109()和JM109-R()对氟苯尼考的积聚量动物源病原菌耐药机理的研究抗体对细菌内药物蓄积量的影响 鸡毒支原体大环内酯类抗生素耐药分子机理研究 大肠杆菌GenBank登录号为J01695；*随机挑取的3株BG44T-EMr，2株的 r r n A 发 生 了A2058G突变，但rrnB未发生任何突变；1株的rrnA未发生任何突变，而 r r n B 发 生

36、了G2057A、A2059G突变。鸡毒支原体红霉素、替米考星、泰乐菌素诱导耐药株23S rRNA 基因V 域部分核苷酸序列分析比较鸡毒支原体MIC(g/ml)23S rRNA V 区域突变位点EMTLTMLMrrn Arrn BS60.0320.0160.0084-S6-EMr256-5121-24-8512A2058Ga(3)b-S6-TMr51216-32256512-A2058G(3);A2503T(3)S6-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128-BG44T0.0630.0080.0048-BG44T-EMr2562-648-128512A2058G(2)G2

37、057A(1);A2059G(1)BG44T-TMr51216-32256-512512-A2058G(3);A2503T(3)BG44T-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128-鸡毒支原体诱导耐药株MIC及其23S rRNA基因V域碱基突变 a 按大肠杆菌23S rRNA核苷酸序列编号；b 括号内数字为在该位置发生碱基替换突变的突变数。101000.20.30.40.50.60.70.80.9OD-logCy=-0.1744Ln(x)+1.1563 R2=0.9979-logC vs OD reading 检测FloR1蛋白的间接竞争ELISA 标准曲线 用间接竞争

38、ELISA 法建立检测FloR1蛋白的标准曲线，标准曲线在6.25ng/ml 200ng/ml 之间，呈良好的线性相关，OD值与浓度（Log C，母液为1mg/ml）之间的线性回归方程为：y=-0.1744Ln(x)+1.1563，相关系数R2=0.9979。临床氟苯尼考耐药大肠杆菌ELISA检测及细菌体内FloR1蛋白含量的测定E.coli strainMIC(g/mL)floR geneELISAFloR1 concentrationUntreatedAntibodytreated OD*(ng/mL)JM109 221.1470.0091.0530.058T/JM109221.1190.

39、0411.2380.324CVM1841128320.3300.058113.98345.381JM109-R64320.4190.02768.42411.620C83260128640.2870.048145.85445.762C83261221.1660.0130.9460.075C8326232160.6410.04619.1965.804C832863280.5570.05231.13310.713C83287221.1000.0661.3480.635C83302440.9730.0282.8660.496C83305221.1470.0341.0550.131C8391412832

40、0.4330.02063.3887.718C8391664320.4990.04043.41611.088图a MICs和FloR1蛋白量的线性关系图图b MICs和OD值的线性关系图 发表的相关论文1.Wu B,Xia C,Du X,Cao X,Shen J.Influence of anti-FloR antibody on florfenicol accumulation in florfenicol-resistant Escherichia coli and enzyme-linked immunosorbent assay for detection of florfenicol-

41、resistant E.coli isolates.J Clin Microbiol.2006 Feb;44(2):378-82.2.Wang Z,Shen J,Suo X,Zhao S,Cao X.Experimentally induced monensin-resistant Eimeria tenella and membrane fluidity of sporozoites.Vet Parasitol.2006 Jun 15;138(3-4):186-93.Epub 2006 Mar 9.3.Wu CM,Wu H,Ning Y,Wang J,Du X,Shen J.Inductio

42、n of macrolide resistance in Mycoplasma gallisepticum in vitro and its resistance-related mutations within domain V of 23S rRNA.FEMS Microbiol Lett.2005 Jun 15;247(2):199-205.4.Du X,Shen Z,Wu B,Xia S,Shen J.Characterization of class 1 integrons-mediated antibiotic resistance among calf pathogenic Es

43、cherichia coli.FEMS Microbiol Lett.2005 Apr 15;245(2):295-8.5.Du X,Xia C,Shen J,Wu B,Shen Z.Characterization of florfenicol resistance among calf pathogenic Escherichia coli.FEMS Microbiol Lett.2004 Jul 15;236(2):183-9.6.Wang Z,Suo X,Xia X,Shen J.Influence of monensin on cation influx and Na+-K+-ATP

44、ase activity of Eimeria tenella sporozoites in vitro.（Journal of Parasitology，in press）7.Wang GQ,Wu CM,Du XD,Shen ZQ,Song LH,Chen X,Shen JZ.Characterization of integrons-mediated antimicrobial resistance among Escherichia coli strains isolated from bovine mastitis.(Vet Microbiol.2007,in press)n开展动物源

45、病原菌耐药性基础研究，阐明耐药性产生及扩散的分子机制，分析饲养模式、用药模式及养殖环境等对耐药菌/耐药基因发生和扩散的影响，探索耐药菌/耐药基因的迁移、演化规律，为耐药性风险评估奠定理论基础。n开展耐药性检测技术方法研究，制定方法标准及判定标准，构建我国动物源病原菌耐药性检测技术体系。n加强兽药的购销和使用管理，建立完整的兽药购销和使用记录，为耐药性风险评估提供可靠的兽用抗菌药物使用种类、使用量数据。n针对我国重点养殖区主要食品动物及其产品开展重要病原菌（大肠杆菌、沙门氏菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等）耐药性调查研究，建立动物源病原菌耐药性动态数据库，为耐药性风险释放评估提供科学依据。